DDAH2抑制低氧诱导大鼠心肌细胞H9c2(2-1)凋亡

 目的 探讨过表达二甲基精氨酸二甲胺水解酶-Ⅱ（DDAH2）对低氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用和是否通过内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活化来保护心肌细胞。方法 低氧诱导大鼠心肌细胞H9c2(2-1)36h从而诱导凋亡,同时转染DDAH2真核细胞表达质粒,用WST-1细胞毒试验和流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测eNOS磷酸化。结果 低氧组心肌细胞存活率显著性降低;过表达DDAH2基因使低氧下心肌细胞存活率明显地上升。DDAH2过表达组心肌细胞凋亡率为17.38%±1.52%,显著性低于低氧组（27.34%±1.33%）（P<0.05）。转染DDAH2基因可以显著上调低氧组心肌细胞的eNOS磷酸化水平;过表达DDAH2基因的低氧组用eNOS抑制剂L-NAME干预后,凋亡水平明显上升。结论 过表达DDAH2基因上调eNOS磷酸化抑制低氧所致的大鼠心肌细胞H9c2（2-1）凋亡。     

PI3K/AKT通路介导H_2O_2预处理减轻PC12细胞氧化损伤

目的探讨PI3K/AKT信号通路是否参与H2O2预处理诱导的适应性细胞保护作用。方法体外培养PC12细胞,建立H2O2预处理对抗高浓度H2O2诱导细胞损伤的实验模型。应用甲氮甲唑蓝(MTT)法测定细胞的存活率,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)的活性,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Westernblot)测定AKT的表达。结果 100μmol H2O2预处理PC12细胞90 min可显著地抑制300μmol H2O2引起的损伤,使细胞存活率从50.2%±4.6%升高至83.8%±3.5%,LDH活性由103%±10.2%下降至68.5%±5.3%,细胞凋亡率由65.5%±4.1%下降至37.1%±2.3%(P<0.01)。100μmol H2O2预处理诱导p-AKT的表达,PI3K抑制剂ly294002阻断了H2O2预处理引起的p-AKT表达。同时ly294002拮抗了H2O2预处理诱导的抗细胞损伤和凋亡作用。结论 H2O2预处理通过PI3K途径引起AKT的活化,PI3K/AKT通路的活化介导了H2O2预处理诱导的适应性细胞保护作用。     

凋亡素诱导HepG2细胞凋亡过程中Mcl-1 mRNA和蛋白水平的变化及意义

目的: 探讨凋亡素诱导肝癌细胞HepG2凋亡过程中Mcl-1 mRNA和蛋白水平的变化及其意义。方法: 经脂质体介导将pCDNA3.0-VP3转入HepG2细胞内,48 h后采用Western blotting检测凋亡素、Mcl-1和细胞色素C,实时定量RT-PCR检测细胞内的Mcl-1 mRNA。结果: VP3基因成功地转入HepG2细胞内并稳定表达凋亡素。与空白对照相比,表达凋亡素的细胞出现Mcl-1 mRNA含量减少(0.09%±0.00% vs 0.41%±0.14%, P<0.05),细胞内Mcl-1水平下降(0.43%±0.01% vs 0.90%±0.04%, P<0.01),线粒体释放细胞色素C增加(0.98%±0.02% vs 0.62%±0.03%, P<0.01)。结论: 凋亡素诱导HepG2细胞凋亡过程中存在细胞内Mcl-1 mRNA和蛋白水平的下降,以及线粒体细胞色素C的释放增加。凋亡素诱导的细胞凋亡可能与其下调细胞内Mcl-1 mRNA与蛋白水平有关。     

H2O2对大鼠骨骼肌卫星细胞凋亡和线粒体膜电位的影响及EPO的保护作用

目的: 探讨过氧化氢(H2O2)对大鼠骨骼肌卫星细胞(SMSC)凋亡和线粒体膜电位(MMP)的影响以及促红细胞生成素(EPO)的保护作用。方法: 取体外培养的骨骼肌卫星细胞,随机分为正常对照组、H2O2组、H2O2+EPO组,采用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率和MMP的平均荧光强度,Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学变化。结果: H2O2组凋亡发生率最高,为(22.13±1.79)%,经10、20、40 kU/L浓度的EPO预处理后凋亡率分别为(16.47±2.53)%、(4.97±0.55)%、(2.93±0.47)%;H2O2干预组MMP最低,为9.70±0.09,经10、20、40 kU/L浓度的EPO预处理后MMP分别为12.67±0.32、27.90±0.66、44.53±0.93,对照组凋亡率为(1.93±0.57)%,MMP为51.37±0.64;在H2O2干预组和低剂量EPO预干预组,Hoechst 33258染色呈现明显的凋亡征象。结论: EPO可抑制H2O2诱导的细胞凋亡并稳定线粒体膜电位。     

上调GDF-15 表达对H2O2 诱导的H9C2 心肌细胞生物学特性及PI3K/ AKT 信号通路的影响

目的：探讨上调生长分化因子-15（GDF-15）的表达对H₂O₂诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法：CCK8法检测不同浓度的H₂O₂处理H9C2心肌细胞后的细胞增殖情况;H9C2心肌细胞分为Control组、NC组、H₂O₂组、GDF-15+H₂O₂组,各组细胞处理24 h后收集细胞,RT-PCR及Western blot分别检测各组细胞中GDF-15的mRNA及蛋白表达;CCK8法及流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡情况;2′,7′-二氯二氢荧光素黄二乙酸酯（DCFH-DA）探针检测细胞活性氧簇（ROS）水平;Western blot检测Ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、PI3K、p-AKT蛋白表达。10 μmol/L的PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002处理H9C2心肌细胞,通过CCK8法及流式细胞术分别检测GDF-15+H₂O₂组及PI3K/AKT信号通路抑制剂组细胞活力及凋亡率,Western blot检测Ki67、Bcl-2、Bax、PI3K、p-AKT蛋白表达。结果：不同浓度H₂O₂处理H9C2心肌细胞后,细胞活力均受到抑制,且有浓度依赖性（P<0.05）,由于200 μmol/L的H₂O₂处理H9C2心肌细胞后可抑制将近一半的细胞增殖,选择200 μmol/L的H₂O2作为研究对象;与Control组比较,H2O2组GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高,细胞增殖显著降低,凋亡率增加,ROS水平升高,Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高（P<0.05）;与H₂O₂组比较,GDF-15+H₂O₂组细胞GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高,细胞增殖显著增加,凋亡率降低,ROS水平降低,Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低（P<0.05）。PI3K/AKT信号抑制剂组细胞活力及Bcl-2、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于GDF-15+H₂O₂组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于GDF-15+H₂O₂组（P<0.05）。结论：上调GDF-15表达可促进H₂O₂诱导的H9C2心肌细胞增殖,降低细胞凋亡,其机制可能与调节细胞中ROS水平,Ki67、Bcl-2、Bax表达及PI3K/AKT信号通路有关。     

树突状细胞激活的肿瘤浸润淋巴细胞对荷瘤小鼠免疫功能影响的研究

目的:探讨H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL体外抗小鼠肝癌活性;并将H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL(H22-DC-TIL)过继免疫荷瘤小鼠,研究其对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:从小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤全细胞性抗原致敏DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对H22细胞、Hepal-6细胞和B16细胞的杀伤活性;检测应用H22-DC-TIL后荷瘤小鼠的脾淋巴细胞的NK、LAK、CTL活性及血清TNF活性,并与对照组相比较。结果:(1)H22-DC-TIL具有很强的对H22细胞杀伤活性(杀伤率为71.31%±3.11%),明显高于其对Hepal-6和B16细胞的杀伤活性(杀伤率分别为50.11%±3.03%和30.31%±2.89%);也明显高于未经DC激活的TIL、H22-DC-小鼠脾淋巴细胞和未经DC激活的小鼠脾淋巴细胞对H22细胞杀伤活性(杀伤率分别为49.80%±3.21%、48.76%±3.60%和19.23%±2.71%)和对Hepal-6细胞杀伤活性(杀伤率分别为39.40%±3.21%、38.62%±2.87%和18.73%±2.40%)以及对B16细胞杀伤活性(杀伤率分别为26.38%±2.51%、25.82%±2.70%和18.34%±3.01%),同时B16-DC-TIL(TIL来源于H22瘤体)也可诱导相对较低的对B16细胞的特异性细胞杀伤活性。(2)H22-DC-TIL可明显诱导提高荷瘤小鼠脾淋巴细胞NK、LAK和CTL活性(活性分别为30.43%±1.35%、31.40%±1.80%和35.30%±1.20%),并可检测到血清TNF水平明显上升[血清TNF为(40.41±1.85)U/m l],它们均达正常对照组水平,与未经DC激活的TIL组、H22-DC-小鼠脾淋巴细胞组、未经DC激活的小鼠脾淋巴细胞组、生理盐水组分别对应比较,差异均有显著性(P<0.01)。结论:(1)H22-DC-TIL可产生很强的体外针对H22细胞的特异性杀伤活性。(2)H22-DC-TIL可明显诱导提高荷瘤小鼠特异性抗肿瘤免疫反应。     

内质网应激介导蜕皮甾酮对H2 O2 诱导的心肌细胞损伤的保护作用

目的:探讨蜕皮甾酮(EDS)如何通过调节内质网应激对过氧化氢(H2 O2 )诱导的心肌细胞损伤起保护作用。方法:大鼠H9c2 心肌细胞随机分为对照(Control)组,正常心肌细胞;H2 O2 组,不同浓度H2 O2(1*10-3 、1*10-4 、1*10-5 mol/ L)诱导损伤细胞;EDS 组,在H2 O2 组基础上,加入不同浓度的EDS(25、50、100 μmol/ L)处理。MTT 法和流式细胞术分别检测实验各组细胞活力及细胞凋亡率。Western blot 检测各组细胞中Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3、caspase-4、caspase-7、caspase-12、 GRP78 和CHOP 的蛋白水平,同时检测各组细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:与Control 组相比,H2 O2 组的细胞活力减弱,凋亡率升高,MOD 含量升高,SOD 活性降低,GRP78 和CHOP 的表达升高(均P<0.05)。H2 O2 组加入EDS 处理后,细胞活力提升,凋亡率下降,MOD 含量降低,SOD 活性升高,GRP78 和CHOP 的表达降低(均P<0.05)。结论:通过抑制内质网的应激过程,蜕皮甾酮能减轻H2 O2 诱导的心肌细胞损伤。     

NADPH氧化酶亚单位nox-1在心肌细胞急性缺氧复氧损伤时的变化及心肌营养素-1的作用

目的： 探讨心肌细胞急性缺氧复氧损伤时NADPH氧化酶亚单位nox-1的变化及心肌营养素-1的作用。方法: 用改良的方法培养出生1-３ d的乳鼠心肌细胞,分为6组：(1)对照组;(2)缺氧复氧组;(3)缺氧复氧+CT-1组;(4)缺氧复氧+CT-1+LY294002组 (PIK3/Akt 阻断剂);（5）缺氧复氧+CT-1+PD98059组（ERK 阻断剂）;（6）缺氧复氧+CT-1+助溶剂DMSO组。 CT-1 的浓度为10 μg/L。MTS法测定心肌细胞的存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物（JC1）检测心肌细胞线粒体膜电位(Δψm),二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-CA）检测细胞活性氧（ROS）,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率。Nox-1蛋白采用Western blotting检测。结果: 缺氧复氧培养后心肌细胞凋亡率及细胞内ROS较对照组明显增加,分别是(19.7%±1.4% vs 2.1%±0.5%, 14.07%±1.25% vs 3.54%±0.86%, P<0.05),而心肌细胞存活率显著降低,线粒体膜电位（Δψm）下降;nox-1表达明显升高。CT-1处理的心肌细胞,较缺氧复氧组心肌细胞存活率明显上升 (87.0%±7.3%),而心肌细胞凋亡率及细胞内ROS 显著减少,Δψm水平增加,nox-1蛋白表达下调。而CT-1的这些作用能被PIK3/Akt和ERK阻断剂抑制。结论: 心肌细胞急性缺氧复氧损伤时NADPH氧化酶亚单位nox-1表达上调,而心肌营养素-1能通过下调nox-1表达,发挥对心肌细胞保护作用。     

2型登革病毒诱导ED25细胞凋亡及死亡受体的表达变化

目的： 观察2型登革病毒（dengue virus type 2，DV2）感染ED25（人肝静脉内皮细胞）诱导细胞凋亡及胞膜死亡受体TRAILR、TNFR、Fas表达水平的改变，并探讨其意义。方法: 用 DV2感染ED25细胞，流式细胞技术检测ED25细胞感染前、后凋亡变化及胞膜死亡受体TRAILR1-4、TNFR1-2、Fas的表达。结果: 病毒感染后ED25细胞凋亡增加，感染前细胞凋亡数约5.7%±1.2%，而感染后细胞凋亡数约27.3%±1.6%，P<0.05；病毒感染后细胞Fas表达百分比增加，感染前为44.3%±2.2%,而感染后为63.0%±2.3%，P<0.05;而TRAILR1-4、TNFR1-2表达水平甚低，感染前后无明显改变。结论: 2型登革病毒感染可以诱导肝静脉内皮细胞ED25细胞凋亡，其中死亡受体Fas表达增高，提示DV2可能通过调节Fas/FasL的表达诱导细胞凋亡，有利于进一步研究登革病毒感染引起肝脏器官损伤。     

瘦素抑制H_2O_2诱导的大鼠心肌细胞凋亡

目的:观察瘦素(leptin)对H2O2诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:应用脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)法观察瘦素对H2O2诱导的大鼠心肌细胞H9c2凋亡的影响;应用Western blotting法观察瘦素、H2O2对caspase-3、胞外信号调控激酶(ERK)活性的影响。结果:(1)瘦素对H2O2诱导的H9c2细胞凋亡具有显著的抑制作用(与对照组比较P0.01),该作用可被ERK激酶抑制剂PD98059所阻断。(2)H2O2明显抑制ERK活性;而瘦素可激活ERK并部分阻断H2O2诱导的caspase-3激活。结论:瘦素对H2O2诱导的H9c2细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与其激活ERK信号途径有关。     

pEGFP-N2-BMP2转染诱导P19细胞分化为心肌样细胞

目的 探讨真核表达质粒pEGFP-N2-BMP2转染P19细胞后能否诱导其分化为心肌样细胞.方法 实验分转染组和对照组,转染组以真核表达质粒pEGFP-N2-BMP2转染P19细胞并使骨形态发生蛋白2(BMP2)基因稳定表达,然后结合细胞聚集培养,对照组为培养的P19细胞.两组细胞聚集培养4d,形成聚集体后贴壁培养,于贴壁培养的4d、8d、12d、16d,免疫细胞化学和Western blotting方法检测心肌标志物心肌肌钙蛋白T (cTnT)和心肌肌动蛋白α;半定量RT-PCR检测心脏早期转录因子GATA-4和NKx2.5基因的表达.结果 转染组心肌肌钙蛋白T和心肌肌动蛋白α两种蛋白形成聚集体贴壁4d时无表达,8d、12d、16d出现表达,其表达随时间延长逐渐增强.取材各时间点之间有显著差异(P＜0.01).在转染诱导后4d时GATA-4、NKx2.5两个基因即出现弱的表达,随着时间延长,8d、12d、16d两个基因的表达逐渐增强.取材各时间点之间有显著差异(P＜0.01).对照组未发现心肌肌钙蛋白T和心肌肌动蛋白α两种蛋白的表达,亦未发现GATA-4、NKx2.5两个基因的表达.结论稳定表达BMP2基因的P19细胞可以分化为心肌样细胞,BMP2可能通过调控转录因子GATA-4、NKx2.5进而影响心肌肌钙蛋白T和心肌肌动蛋白α的表达.     

The crosstalk between TLR2 and NOD2 in Aspergillus fumigatus keratitis

Innate immunity is considered to be critical in the pathogenesis of fungal keratitis. Pattern recognition receptors (PRRs) recognize conserved microbial structures called pathogen-associated molecular patterns (PAMPS), thereby initiating the innate immunity. Toll-like receptors (TLRs) and nucleotide-binding oligomerization domain (NOD)-like receptors (leucine-rich repeat-containing receptors, NLRs) are two major PRR families. The crosstalk between TLR2 and NOD2 is not completely understood, and their interrelationship in Aspergillus fumigates keratitis is still unclear. To our surprise, we found herein that NOD2 and TLR2 were increased by A. fumigatus conidia in immortalized human corneal epithelial cells (HCECs). In addition, NOD2 expression was up-regulated by its agonist muramyl dipeptide (MDP), along with receptor interacting protein 2 (RIP2), nuclear factor κB (NFκB)-p65, inhibitor of NFκB (IκB)-α, and multiple inflammatory cytokines, including interleukin-6 (IL-6), IL-8 and tumor necrosis factor α (TNF-α). Interestingly, zymosan, a TLR2 agonist, promoted the expression of NOD2 and RIP2 in a TLR2-dependent manner. Furthermore, we demonstrated that the increased expression of NOD2 and RIP2 caused by A. fumigatus conidia occurred in part through a TLR2-dependent pathway. However, zymosan pretreatment decreased NOD2 and RIP2 expression along with the MDP induced secretion of inflammatory cytokines in HCECs. In agreement, NOD2 knockdown by small interfering RNA (siRNA) reduced the release of IL-6, IL-8 and TNF-α induced by A. fumigatus conidia. These findings suggest the existence of complex interactions between TLR2 and NOD2 in HCECs inflammatory response against A. fumigatus infection.     

NDRG2对肝癌细胞HepG2凋亡的诱导作用

目的：探讨NDRG2对肝癌细胞HepG2凋亡的诱导作用。方法：用RT-PCR获取NDRG2基因。测序判断正确后，将其克隆入含绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pIRES2-EGFP中，并转染NDRG2表达阴性的HepG2细胞。用光镜观察转染细胞的形态变化；荧光显微镜观察NDRG2蛋白的定位；流式细胞仪分析细胞周期的改变；透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变。结果：获得了NDRG2基因，成功地构建了pIRES2-EGFP-NDRG2真核表达载体。转染HepG2细胞后，细胞生长受抑，结构破坏并死亡。荧光显微镜观察到NDRG2在胞质中表达，流式细胞仪检测出现G1期阻滞和凋亡峰，透射电镜观察到典型的细胞凋亡特征。结论：NDRG2基因具有诱导HepG2细胞凋亡的作用，其机制有待进一步研究。     

Functional involvement of Annexin-2 in cAMP induced AQP2 trafficking

Annexin-2 is required for the apical transport in epithelial cells. In this study, we investigated the involvement of annexin-2 in cAMP-induced aquaporin-2 (AQP2) translocation to the apical membrane in renal cells. We found that the cAMP-elevating agent forskolin increased annexin-2 abundance in the plasma membrane enriched fraction with a parallel decrease in the soluble fraction. Interestingly, forskolin stimulation resulted in annexin-2 enrichment in lipid rafts, suggesting that hormonal stimulation might be responsible for a new configuration of membrane interacting proteins involved in the fusion of AQP2 vesicles to the apical plasma membrane. To investigate the functional involvement of annexin-2 in AQP2 exocytosis, the fusion process between purified AQP2 membrane vesicles and plasma membranes was reconstructed in vitro and monitored by a fluorescence assay. An N-terminal peptide that comprises 14 residues of annexin-2 and that includes the binding site for the calcium binding protein p11 strongly inhibited the fusion process. Preincubation of cells with this annexin-2 peptide also failed to increase the osmotic water permeability in the presence of forskolin in intact cells. Altogether, these data demonstrate that annexin-2 is required for cAMP-induced AQP2 exocytosis in renal cells.     

BMP-2和FGF-2对小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响

目的:观察骨形成蛋白(BMP-2)和成纤维细胞生长因子2(FGF-2)对小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向成骨细胞分化的影响.方法:取3～18月雄性C57BL/6J小鼠(共50只)的骨髓细胞, 分离贴壁培养后, 用免疫磁珠法纯化, 并鉴定为MSCs后, 再进行贴壁培养24 h后, 分别在成骨细胞诱导培养液中加入100 μg/L BMP-2和0.5 nmol/L FGF-2持续诱导7、 14、 21 d后, 进行碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性检测, Vonkossa染色以及茜素红染色, 并用递转录荧光定量PCR法检测向成骨细胞分化的标志性基因(Runx2/cbfa1、 Alp、 collagen-1、 osteocalcin)的表达情况.结果:BMP-2刺激组的ALP活性以及钙化结节明显高于对照组, Runx2/cbfa1, ALP, collage-1, osteocalcin的mRNA呈高表达; FGF-2刺激组的ALP活性以及钙化结节也高于对照组, Runx2/cbfa1、 Alp、 collagen-1、 osteocalcin的mRNA表达量也高于对照组, 但不如BMP-2明显. 结论:BMP-2和 FGF-2在不同程度上促进体外培养的小鼠MSCs向成骨细胞方向分化.     

PTCH2基因

PTCH 2基因是新发现的与 Patched基因 (PTCH )有相似的结构和功能的基因 ,在胚胎发育和肿瘤形成中起作用。本文对国外关于 PTCH2基因的研究进展 ,特别对 PTCH2的基因定位、基因结构、功能及表达调控机制进行了综述     

Investigating the functional role of CD2BP2 in T cells

The adaptor protein CD2-binding protein 2 (CD2BP2) confers binding to proline-rich sequences (PRS) via its GYF domain. In addition to the cytoplasmic domain of CD2, several other proteins were identified as interaction partners of CD2BP2, but the in vivo significance of these findings is unclear. We now show that CD2BP2's nuclear localization is not changed when CD2 and CD2BP2 are co-expressed in HeLa cells, indicating that other PRS compete effectively for CD2BP2 binding in the nucleus. Since the CD2BP2-binding motifs of CD2 are known to be involved in cytokine signaling, we tested the effect of CD2BP2 knockdown in PBMCs on the expression of T-cell cytokines. No major difference in cytokine expression can be observed for primary cells transfected with CD2BP2-specific small interfering RNA. We conclude that CD2 signaling is at least partially independent of its in vitro binding partner CD2BP2.     

P2Y2受体激动剂2-硫代-UTP及拮抗剂苏拉明对Hela细胞活性影响

目的 研究P2Y2受体激动剂2-硫代-UTP及其拮抗剂苏拉明对Hela细胞活性的影响,从而在细胞水平探究P2Y2受体在人子宫颈癌病理生理过程中的作用.方法 应用CCK-8法检测不同时间点各处理组Hela细胞的活性;ELISA法分别检测细胞上清液中TNF-α和IL-6的水平;qPCR和Western blot法分别检测细胞P2Y2mRNA和蛋白的表达变化.结果 2-硫代-UTP可明显提高Hela细胞的增殖能力.且经2-硫代-UTP处理后的细胞IL-6的水平明显增加,P2Y2mRNA和蛋白表达水平均有所提高;苏拉明可明显抑制Hela细胞增殖,经其处理后的细胞TNF-α水平有所提高,P2Y2mRNA和蛋白表达水平无明显变化.结论2-硫代-UTP可通过激活P2Y2受体的活化细胞,引起细胞过表达P2Y2受体,从而促进Hela细胞增殖.苏拉明可通过阻断P2Y2受体及其下游活动,抑制Hela细胞增殖.以上结果表明,P2Y2受体可能成为治疗子宫颈癌等疾病的新靶点,这将为探索子宫颈癌新型治疗手段等方面提供新思路.     

Inhibitory role of peroxiredoxin 2 in LRRK2 kinase activity induced cellular pathogenesis

Parkinson's disease (PD) is a major neurodegenerative disease. One of the known genetic contributors to PD pathogenesis is leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2) whose mutations with elevated kinase activity could lead to both familial and sporadic PD. However, how the pathogenic kinase activity of LRRK2 is regulated remains largely unclear. Here we report that peroxiredoxin 2 (Prx2) was identified as a novel interacting protein to LRRK2 with preferential expression in dopaminergic neurons over other Prx proteins. We also confirmed that Prx2 interacted with LRRK2 through its COR domain and its overexpression significantly decreased the kinase activity of mutant LRRK2. Functionally, overexpressed Prx2 rescued the transfected cells from LRRK2 mutant induced apoptotic processes. Importantly, overexpressed Prx2 reversed the altered subcellular distribution of cation-independent mannose 6-phosphate receptor (CI-M6PR) induced by PD-mutant LRRK2. Our results suggest that, by interacting with LRRK2, Prx2 may play an inhibitory role in the LRRK2 mediated cellular toxicity in PD by inhibiting its kinase activity.