地西他滨联合三氧化二砷抑制急性髓系白血病细胞系增殖和促进凋亡

目的 探讨地西他滨(DAC)联合三氧化二砷(ATO)对急性髓系白血病(AML)细胞增殖、凋亡的影响及潜在分子机制。方法 DAC和ATO单药或联合处理AML细胞系,CCK8法检测细胞活力;Compusyn软件分析两药联合的协同效应;流式细胞术分析细胞凋亡率及细胞周期分布;Western blot检测凋亡相关蛋白多聚ADP核糖聚合酶(PARP)和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)蛋白表达。结果 DAC及ATO单药以浓度依赖的方式抑制AML细胞增殖,两药联合可协同抑制AML细胞增殖、诱导细胞凋亡和周期阻滞(P<0.05)。两药联合显著降低AML细胞PI3K及Akt的磷酸化水平(P<0.05)。结论 DAC联合ATO可能通过抑制PI3K/Akt通路发挥抗AML效应,为两药联合临床治疗AML提供一定理论依据。     

吉西他滨对人非小细胞肺癌HCC827 活性和凋亡的影响

目的:研究吉西他滨对人非小细胞肺癌HCC827 细胞活性以及凋亡的影响,以及与Bcl-2 表达的关系。方法:采用cell counting kit-8 法、细胞核Hochest33258 染色法、流式细胞仪Annexin V-FITC/ PI 双染法等多种方法,体外研究吉西他滨对人非小细胞肺癌HCC827 的活性、凋亡和细胞周期的影响;采用Western blot 法,观察药物作用后细胞中Bcl-2 蛋白表达的变化。结果:吉西他滨(0.郾1 ~1 000 ng/ ml)对人非小细胞肺癌HCC827 活性具有抑制作用,并有促凋亡效应。此外,可以将细胞阻滞在S 期。在吉西他滨诱导的细胞凋亡过程中,凋亡因子Bcl-2 蛋白的表达下调。结论:吉西他滨可以抑制人非小细胞肺癌HCC827 细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,S 期周期阻滞,其诱导的凋亡可能是其杀死肿瘤细胞的主要机制之一,此外,凋亡与相关基因Bcl-2 蛋白的表达具有一定关系。     

吉西他滨对胰腺癌细胞PANC-1活性和蛋白表达的影响

目的：研究吉西他滨（健择,Gemcitabine,GEM）对胰腺癌细胞PANC-1活性及蛋白表达的影响。方法：应用噻唑蓝（MTT）比色法检测吉西他滨在不同时间（12h、24h、36h、48h）下对胰腺癌细胞PANC-1存活率的影响,透射电镜观察吉西他滨对胰腺癌细胞PANC-1形态的影响,蛋白印迹法观察经吉西他滨作用前后蛋白的表达。结果：吉西他滨对PANC-1细胞生长的抑制有时间依赖性,透射电镜观察胰腺癌细胞发生核质疏松,核膜分层、起泡甚至破裂,核质溢出,胞浆也出现空泡,细胞膜和细胞器发生明显改变,随而质膜渗透性增加并细胞溶解,蛋白印迹法显示,GEM影响蛋白质表达。结论：吉西他滨对胰腺癌细胞PANC-1的生长具有显著抑制作用。药物敏感性降低和作用时间延长能导致蛋白的表达及改变。     

地西他滨抑制K562白血病细胞增殖和诱导分化的作用

目的:观察地西他滨(DAC)抑制白血病K562细胞生长和诱导分化的作用。方法:不同浓度的DAC处理K562细胞。MTT法和半固体集落生成实验检测K562细胞增殖能力;瑞氏染色观察细胞形态;流式细胞术检测分化相关抗原CD11b和CD42b阳性表达率;Western blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白E1(cyclin E1)、细胞周期负调控因子P27、红系分化核转录因子GATA-1及粒系分化核转录因子PU.1蛋白的表达水平。结果:DAC能够减少K562细胞集落形成的数量,降低细胞活力,减少核质比,抑制K562细胞进入S期,并阻滞在G_2/M期,提高分化相关抗原CD11b和CD42b阳性表达率,上调P27、GATA-1和PU.1蛋白表达,同时下调CDK2和cyclin E1蛋白表达。结论:DAC可能通过调控细胞周期抑制K562细胞增殖,同时诱导多向分化。     

青蒿琥酯对吉西他滨体外抗胰腺癌活性的作用

目的:探讨青蒿琥酯辅助治疗对吉西他滨抗胰腺癌活性的影响和机制。方法:分别采用分子克隆及RNA干扰方法于人胰腺癌细胞Capan-2中过表达和干扰鼠双微体蛋白2(MDM2),MTT实验检测p53野生型胰腺癌细胞系Capan-2的细胞活力。Western blot实验检测Capan-2细胞中MDM2、p53、Noxa和Puma的表达水平,细胞色素C和凋亡诱导因子的释放,以及caspase-9和caspase-3的活化。流式细胞术检测Capan-2细胞的线粒体膜电位和凋亡水平。结果:吉西他滨联合青蒿琥酯组Capan-2的相对细胞活力显著低于吉西他滨单处理组(P 0. 05)。青蒿琥酯处理显著抑制Capan-2细胞中MDM2的表达水平(P 0. 05)。吉西他滨联合青蒿琥酯组的p53、Noxa及Puma表达水平均明显高于吉西他滨单处理组(P 0. 05)。青蒿琥酯明显促进吉西他滨依赖的Capan-2细胞线粒体膜电位的下降,细胞色素C和凋亡诱导因子的释放,caspase-9和caspase-3的活化,以及凋亡的发生。转染MDM2表达质粒后,青蒿琥酯联合吉西他滨对Capan-2细胞的凋亡诱导途径受到显著抑制。结论:青蒿琥酯通过MDM2/p53途径提高吉西他滨的抗胰腺癌活性。     

羧胺三唑乳清酸盐抑制人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株增殖及线粒体能量代谢

目的 研究羧胺三唑乳清酸盐(CTO)对人胰腺癌耐吉西他滨细胞株(AG细胞)增殖、代谢和凋亡的影响.方法 体外培养AG细胞.将细胞分为对照组和不同浓度CTO组;用磺酰罗丹明B(SRB)检测细胞活力;用annexin V/PI双染色及流式细胞测量术检测细胞凋亡;用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)染色及流式细胞测量...     

槲皮素对U937细胞系抑制增殖和诱导凋亡作用的研究

目的 探讨黄酮类化合物槲皮素（Que）对人类单核细胞白血病U937细胞系的抑制增殖和诱导凋亡的作用。方法 应用MTT法检测不同浓度槲皮素对U937细胞的增殖抑制作用；AO／PI荧光染色后倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化；琼脂糖凝胶电泳测定细胞DNA的片段化；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布。结果槲皮素能明显抑制U937细胞增殖，并存在剂量-效应关系和时间-效应关系；诱导U937细胞出现凋亡所具有的形态学和生化特征；随着槲皮素浓度升高，凋亡细胞和坏死细胞比例增加；将细胞特异性地阻滞在S期，出现凋亡峰。结论 槲皮素能抑制U937细胞增殖，诱导细胞凋亡，并具有细胞周期特异性。     

急性髓系白血病干细胞NOD/SCID小鼠白血病模型的建立

目的探讨用非肥胖型糖尿病/严重联合免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠和经流式细胞仪分选出的KG1a中CD34＋CD38-的干细胞亚群建立白血病干细胞（LSCs）动物模型,为靶向治疗LSCs的药物筛选奠定体内实验基础。方法 18只雌性NOD/SCID小鼠,体质量18～20 g,鼠龄6～8周龄。实验组12只,应用流式细胞仪分选KG1a细胞中具有LSCs特性的CD34＋CD38-亚群,以2×106个/只尾静脉注射经全身X射线照射2Gy的NOD/SCID小鼠;正常对照组6只,只注射磷酸盐缓冲溶液。观察两组小鼠的一般情况和白血病发生情况,应用形态学、组织病理检查、流式细胞术、骨髓染色体检查等检测实验组小鼠的外周血、骨髓、肝脏、脾脏的白血病细胞标志。结果接种2周后实验组小鼠外周血可见白血病细胞,接种30 d实验组小鼠的白血病发病率为100%,无自发缓解;外周血、骨髓、肝、脾中均可发现大量的白血病细胞浸润;实验组小鼠骨髓细胞中CD13抗原阳性率15.47%～23.66%,并可见KG1a细胞的核型特征。结论尾静脉接种流式细胞仪分选后的CD34＋CD38-KG1a细胞于全身亚致死量X射线照射后的NOD/SCID小鼠,能成功建成全身播散的白血病模型,为进一步研究LSCs的靶向治疗药物奠定实验基础。     

槲皮素对U937细胞系抑制增殖和诱导凋亡作用的研究

目的探讨黄酮类化合物槲皮素(Que)对人类单核细胞白血病U937细胞系的抑制增殖和诱导凋亡的作用.方法应用MTT法检测不同浓度槲皮素对U937细胞的增殖抑制作用;AO/PI荧光染色后倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化;琼脂糖凝胶电泳测定细胞DNA的片段化;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布.结果槲皮素能明显抑制U937细胞增殖,并存在剂量-效应关系和时间-效应关系;诱导U937细胞出现凋亡所具有的形态学和生化特征;随着槲皮素浓度升高,凋亡细胞和坏死细胞比例增加;将细胞特异性地阻滞在S期,出现凋亡峰.结论槲皮素能抑制U937细胞增殖,诱导细胞凋亡,并具有细胞周期特异性.     

丹参酮ⅡA对C6胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的：探讨丹参酮ⅡA对大鼠胶质瘤细胞株C6的增殖抑制作用及其作用机理。 方法： 应用MTT比色法检测不同浓度丹参酮ⅡA对C6细胞的增殖抑制，应用流式细胞仪观察丹参酮ⅡA对C6细胞周期的影响，应用琼脂糖凝胶电泳观察C6细胞DNA的变化，应用RT-PCR观察相关基因c-myc表达的变化。 结果： 丹参酮ⅡA对C6细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性。细胞周期分析显示：用1.0 mg/L丹参酮ⅡA作用C6细胞，在作用72 h出现凋亡峰，凋亡细胞占细胞总数7.7%；用2.0 mg/L丹参酮ⅡA作用C6细胞，在作用72 h出现凋亡峰，凋亡细胞占细胞总数21.6%。琼脂糖凝胶电泳结果显示：一定剂量丹参酮ⅡA作用后，C6细胞具有明显的凋亡特征，细胞核DNA呈梯状降解。RT-PCR结果显示：随着丹参酮ⅡA作用剂量的增加，c-myc基因的表达被明显抑制。 结论： 丹参酮ⅡA对大鼠胶质瘤细胞系C6的增殖具有明显的抑制作用及诱导凋亡的作用，并对原癌基因c-myc的表达具有抑制作用。     

慢病毒介导的caspase-3沉默对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和凋亡的影响

 目的：探讨沉默caspase-3对大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法：构建靶向caspase-3的shRNA重组慢病毒并转染MSCs,通过real-time PCR和Western blotting 在mRNA及蛋白水平鉴定转染结果。采用MTS法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期。Real-time PCR检测bcl-2和bax mRNA的表达。Hoechst荧光染色法检测细胞的凋亡情况。结果：Real-time PCR和Western blotting结果均表明成功建立稳定转染shRNA-caspase-3的大鼠MSCs细胞株。沉默caspase-3使MSCs的增殖率明显提高（P＜0.05）,且S期细胞百分比明显增多,为（52.66±0.30）%。沉默caspase-3后bcl-2 mRNA表达上调,bax mRNA表达下调,bcl-2/bax比值升高（P＜0.05）。转染组的细胞凋亡率为（15.01±1.73）%,低于空载体组的（25.67±3.05）%和空白对照组的（23.67±1.16）%（P＜0.05）。结论: 沉默caspase-3能调控MSCs的细胞周期,促进细胞增殖,减少细胞凋亡。     

硫唑嘌呤对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的: 研究硫唑嘌呤(AZA)对SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖、凋亡和细胞周期的影响,为炎症性肠病的临床治疗提供实验依据。方法: 含10%FBS的低糖DMEM培养基培养大鼠MSCs,50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、300 mg/L的AZA分别作用于大鼠MSCs 24 h、48 h和72 h,用显微镜下直接计数法检测MSCs的增殖情况并绘制生长曲线,用流式细胞术检测MSCs凋亡和细胞周期。结果: MSCs经过3次传代后可纯化。在小于100 mg/L浓度下,AZA对MSCs的增殖、细胞周期与凋亡无显著影响(P>0.05),而AZA在大于200 mg/L浓度下作用72 h后,MSCs生长受到明显抑制,抑制率大于66%,凋亡率明显升高(P<0.05);在300 mg/L浓度下作用72 h时,MSCs的凋亡率则明显降低,而MSCs坏死率明显升高(P<0.05)。在大于200 mg/L的AZA作用下,随着作用时间延长,MSCs进入G₀/G₁期细胞增多,S期细胞减少(P<0.05)。结论: 一定浓度的AZA对大鼠MSCs的增殖、细胞凋亡和细胞周期均有明显的影响。大剂量的AZA会直接造成MSCs死亡。     

沉默JAG1基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

 目的:探究沉默Jagged 1 (JAG1)基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及其分子生物学机制。方法:
用已构建的pRS-JAG1重组质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞, 采用Western blotting方法检测重组质粒对JAG1蛋白表达的影响;MTT比色法测定沉默JAG1对细胞生长的抑制情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;蛋白印记分析细胞周期蛋白1(cyclin D1)、p21CIP1/WAF1、p27KIP1、p-Rb、Bcl-2、Bax、Bcl-xL和cleaved caspase-3蛋白水平的变化。结果:Western blotting结果证实重组质粒可在72h内有效抑制JAG1蛋白表达;人乳腺癌MDA-MB-231细胞JAG1被沉默后,细胞的生长速度明显减慢,细胞明显阻滞于G 0/G 1期,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),cyclin D1、p-Rb、Bcl-2和Bcl-xL蛋白水平被下调(P<0.05),而p21CIP1/WAF1、p27KIP1、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:沉默JAG1可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡。本研究为以JAG1为分子靶点的三阴乳腺癌治疗提供实验依据。     

p19ARF对白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的:克隆正常人p19ARF基因,探讨其对肿瘤细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响。方法:用流式细胞术、MTT测定及末端标记观察p19ARF基因对白血病细胞HEL和K562的作用。结果:将p19ARF导入HEL细胞后可明显抑制细胞繁殖,细胞周期被阻滞在G1期并可导致部分细胞凋亡。但是p19ARF对于p53基因突变的K562细胞的增殖和细胞周期没有明显的影响,也不能诱导其凋亡。结论:p19ARF可显著抑制人白血病细胞的增殖,其抑制作用依赖于p53基因的存在。     

唑来膦酸抑制U937细胞增殖及诱导凋亡

目的:研究唑来膦酸(ZOL)对人类急性髓系白血病细胞U937的增殖抑制及促凋亡作用。方法:CCK-8法检测不同时间ZOL对U937细胞的生长抑制率;流式细胞术检测ZOL对U937细胞周期的影响;Annexin V-PI法及Hoechst 33342法检测ZOL作用前后细胞凋亡情况变化,JC-1检测ZOL对U937细胞线粒体膜电位变化的影响;克隆形成实验检测U937细胞克隆形成能力;Western blot法检测ZOL对U937细胞周期和凋亡相关蛋白的变化。结果:CCK-8结果显示ZOL可以抑制U937细胞的活力,并呈时间-剂量依赖性;Annexin V-PI及Hoechst33342结果显示ZOL可以促进U937细胞凋亡,且呈时间-剂量依赖性;JC-1结果显示ZOL可以明显降低U937细胞线粒体膜电位;PI法证实ZOL将U937细胞周期阻滞在S期,克隆形成实验证实0.2 mmol/L ZOL可以完全抑制U937细胞的克隆形成能力;Western blot结果显示ZOL作用于U937细胞48 h后细胞周期相关蛋白p21表达显著增强,促凋亡蛋白Bax表达增强,抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显减弱。结论:ZOL抑制U937细胞的增殖和克隆形成主要是由于抑制了细胞周期相关蛋白表达,同时ZOL可以促进U937细胞凋亡,这种作用主要是通过调节线粒体凋亡途径相关蛋白来实现的。     

抑制肌球蛋白轻链激酶活性对内皮素-1诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及凋亡失衡的影响

目的:观察抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)对内皮素-1(ET-1)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖与凋亡失衡的影响。方法:细胞分成3组:对照组;内皮素-1组;内皮素-1+肌球蛋白轻链激酶抑制剂组(ET-1+M组)。干预72 h后,免疫印迹法测定细胞内MLCK表达水平;甘油凝胶电泳和免疫印迹法检测肌球蛋白轻链(MLC)的磷酸化水平,MTT比色法及[3H]-TdR掺入法检测PASMCs的增殖情况,流式细胞仪检测PASMCs的细胞周期变化及凋亡率。结果:同对照组比较,ET-1刺激后肺动脉平滑肌细胞MLCK蛋白表达显著增强、MLC磷酸化上调、增殖增多、凋亡率明显降低(均P0.05);加入MLCK抑制剂干预后,MLCK表达明显下降(P0.05)、MLC去磷酸化显著增强、逆转了ET-1对PASMCs增殖及凋亡的影响。结论:抑制MLCK能显著逆转内皮素-1诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的失衡。     

Soyasaponins inhibit the proliferation of Hela cells by inducing apoptosis

This research aimed at investigating the effect of soyasaponins on the proliferation of Hela cells. SS-II, the second fraction of soyasaponins, was separated by column chromatographic method with D101A macroporous resin from soybeans. SS-II could inhibit the proliferation of Hela cells by changing cell cycle distribution and inducing apoptosis. Furthermore, the loss of mitochondrial transmembrane potential was observed by flow cytometry and the increase of intracellular Ca(2+) concentration was detected by confocal laser scanning microscope in apoptotic cells. At the same time, the nitric oxide content, nitric oxide synthase (NOS) and inducible NOS activities were also increased. The above results suggested that the inhibitory effect of SS-II on Hela cell proliferation was caused by inducing apoptosis through the mitochondrial pathway.     

Molecular mechanism of SSFA2 deletion inhibiting cell proliferation and promoting cell apoptosis in glioma

Gliomas are the most common primary brain malignant tumors in humans. Glioblastoma multiforme(GBM) is the most malignant intracranial tumor with a relatively poor prognosis. There promote us to find effective anti-cancer therapies to reduce cancer mortality. By using bioinformatic analysis, we found SSFA2 as a gene with elevated expression in the glioma tissues. We detected the expression of SSFA2 in glioma tissues and in the glioma cell lines, as well as in normal brain tissues. SSFA2 expression was higher in glioma tissues, especially in glioblastoma multiforme than normal brain tissues. Subsequently, we found that down-regulate SSFA2 in glioma cell lines can regulate the cell cycle to reduce the proliferation ability and induce the early apoptosis rate in shSSFA2 cells relative to control cells. Moreover, we found that down-regulate SSFA2 in glioma cell line U87(shSSFA2-U87) inhibited the growth effectiveness compared to the control cell line U87. These result reveals us that SSFA2 may act as oncogene to promote the progression of glioma. For further research specific mechanisms of SSFA2 in gliomas, we used the gene chip to detect the downstream gene in U87. We found that 30 genes also may be as target gene of SSFA2, and we testify the protein expression by western-blot. The result reveal that IL1A, IL1B and CDK6 as target gene of SSFA2 to regulate the progression of glioma. These finding suggest that SSFA2 could be a new therapeutic target for gliomas.     

米托蒽醌对HL-60细胞的促凋亡效应

目的 :探索米托蒽醌 (MTN)促HL 6 0细胞凋亡效应及其机理。方法 :取对数生长期HL 6 0细胞 ,不同浓度MTN作用不同时间后 ,利用MTT法、透射电镜、DNA电泳、流式细胞术观察MTN对HL 6 0细胞的抑制效应、促凋亡效应及凋亡相关基因Bcl 2、Bax蛋白表达情况。结果 :(1)毫微克级的MTN对HL 6 0细胞有明显的抑制效应 ,且效应具有时间、剂量依赖关系。(2 )MTN作用后的HL 6 0细胞透射电镜观察胞膜完整、出现核碎裂、凋亡小体等形态学特征。DNA电泳出现 2 0 0bp左右的梯形条带。 (3)Bcl 2、Bax蛋白表达 :MTN作用于HL 6 0细胞相同时间 ,Bcl 2蛋白及Bcl 2蛋白与Bax蛋白比值 (Bcl 2 Bax)随MTN作用时间延长而下降。结论 :MTN具有诱导HL 6 0细胞凋亡作用 ,此过程中伴Bcl 2下调和Bcl 2 Bax的降低。提示MTN可能通过Bcl 2途径诱导HL 6 0细胞凋亡     

不同低氧浓度对神经干细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨不同的低氧浓度对离体培养胎鼠脑皮质神经干细胞( NSCs)的增殖与凋亡的影响.方法 体外不同低氧条件下(3％ O2、5％ O2、10％ O2)培养胎鼠皮质来源的细胞,实验组分别分为低氧1、3、5d组,常氧组为对照.免疫细胞化学染色鉴定NSCs,BrdU掺入法检测实验组NSCs的增殖:流式细胞仪检测实验组NSC...