葡萄糖调节蛋白78在复合致病因素诱导的大鼠肝肺综合征中的作用

目的: 探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在大鼠肝肺综合征发病中的作用及其与肠源性内毒素血症的关系。方法: Wistar大鼠被随机分为4周组、6周组和8周组3个时点,采用复合致病因素法制备大鼠肝硬化合并肝肺综合征(HPS)模型,并设标准饮食的正常大鼠作为对照组。采用HE染色观察肺组织病理变化;测定血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、内毒素、TNF-α和肺组织匀浆中的TNF-α、丙二醛(MDA)的含量。Western blotting和RT-PCR法检测肺组织标本中GRP78蛋白和mRNA表达水平。结果: 模型组动物血浆内毒素含量随病程进展逐渐增高;肺组织中GRP78蛋白和mRNA的表达随HPS进展逐步增高,且各时点间的表达有显著差异(P<0.05);血浆内毒素与升高的GRP78蛋白水平间呈高度正相关(P<0.01)。血浆ALT和TNF-α含量以及肺组织匀浆中TNF-α和MDA含量随病程进展逐渐增高;血浆内毒素含量以及肺组织中GRP78蛋白分别与血浆TNF-α和肺组织中TNF-α、MDA的含量呈高度正相关(P<0.01)。在各时点,模型组动物血浆TNF-α含量、肺组织匀浆TNF-α、GRP78蛋白及mRNA均显著高于正常对照组(P<0.05)。在第6周和第8周,模型组动物血浆内毒素和ALT的含量以及肺组织匀浆中MDA的含量均显著高于正常对照组(P<0.05)。结论: 肝硬化时形成的肠源性内毒素血症作为内质网应激的重要应激原,通过氧化应激激活肺组织的内质网应激反应导致GRP78表达增高,很可能是HPS发病的重要机制。     

四氯化碳诱导性肝硬化大鼠肝组织葡萄糖调节蛋白78表达的研究

目的研究四氯化碳(CCl4)诱导性肝硬化大鼠肝组织内葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的变化。方法将健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=5)和肝硬化组(n=5),对照组皮下注射植物油0.12ml/100g体重,肝硬化组以0.3ml/100g体重皮下注射60%CCl4植物油。在实验第21周的第1d杀死鼠,右心室取血检测肝功能指标。鼠肝中叶取材,石蜡切片行苏木精-伊红(HE)染色和天狼猩红组织化学染色,光镜观察形态学改变,行GRP78免疫组织化学显色,无菌下取肝组织行Western blotting及RT-PCR检测肝组织GRP78的表达。结果肝硬化组的血清ALT含量(278.2±88.42)明显高于对照组(154.8±9.94,t=3.10,P<0.05);ALB含量(1.68±0.62)明显低于对照组(3.02±1.96,t=2.62,P<0.05)。对照组肝小叶结构和肝细胞状态正常,仅在中央静脉及汇管区可见少量胶原纤维。20周肝硬化组的肝细胞脂肪变性明显,胶原纤维大量增生,假小叶形成。GRP78免疫组织化学呈色显示,肝硬化组肝组织中阳性细胞数明显多于对照组,棕黄色着色定位于细胞质中。Western blotting和RT-PCR显示肝硬化组肝组织GRP78的表达明显增强。结论在CCl4诱导性肝硬化的肝组织中,GRP78表达明显增强,这可能与肝细胞的内质网应激有关。     

葡萄糖调节蛋白78促进肝硬化大鼠心肌细胞凋亡及其机制

 目的： 探讨葡萄糖调节蛋白78/免疫球蛋白重链结合蛋白(GRP78/BiP)是否促进肝硬化大鼠心肌细胞凋亡及其发生机制。方法： 采用复合致病因素法建立肝硬化大鼠模型,在4周、6周和8周分别取材。实验1：取心脏称重并测量左室壁厚度,计算左室壁厚度与心脏重量比值及心脏指数。实验2： TUNEL法观察心肌细胞凋亡情况;免疫组化方法检测心肌组织中GRP78/BiP蛋白以及凋亡相关蛋白CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白/生长停滞及DNA诱导蛋白153（CHOP/GADD153）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（caspase-12）、核转录因子κB p65（NF-κB p65）、B细胞淋巴瘤/白血病蛋白2（Bcl-2）的表达。结果： 随肝硬化病程进展,左室壁厚度与心脏重量比值以及心脏指数逐渐增加,8周组增加显著(P<0.05);心肌细胞凋亡指数、CHOP/GADD153和caspase-12阳性蛋白表达指数逐渐升高,8周组差异显著(P<0.05);NF-κB p65和Bcl-2阳性蛋白表达指数呈一致性变化,在4周组较其它组明显增高(P<0.05); GRP78/BiP蛋白阳性表达指数与心肌细胞凋亡指数、CHOP/GADD153、caspase-12蛋白阳性表达指数呈显著正相关,CHOP/GADD153与NF-κB p65、Bcl-2蛋白阳性表达指数呈显著负相关。结论： GRP78高表达在内质网应激介导的肝硬化心肌病发病中可能发挥重要作用。     

葡萄糖调节蛋白78在宫颈癌细胞衰老过程中的表达研究

目的探讨葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein，GRP78）在顺铂诱导宫颈癌细胞衰老过程中的表达变化情况及相关机制。方法亚凋亡剂量顺铂诱导宫颈癌细胞衰老；β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况；P1染色流式细胞仪检测细胞周期变化；Western blot检测GRP78蛋白表达情况；siRNA反义抑制GRP78表达，western blot检测DNA损伤修复基因ATM（ataxia—telangiectasia mutated）通路相关基因表达情况。结果亚凋亡计量顺铂能够成功诱导宫颈癌细胞衰老，细胞主要阻滞于G2／M期。Western blot检测表明在宫颈癌细胞衰老过程中GRP78蛋白表达明显降低。反义抑制GRP78蛋白表达后ATM通路相关蛋白P53及p-Cdc2表达明显升高，而Cdc2蛋白表达明显降低。结论GRP78蛋白在顺铂诱导宫颈癌细胞衰老过程中起抵抗作用，主要可能通过影响ATM通路相关基因的表达发挥作用。     

葡萄糖调节蛋白在肿瘤的表达和治疗中的作用

葡萄糖调节蛋白78 (glucose-regulated protein 78,GRP78)是内质网应激(endoplasmic reticulum stress)相关的重要分子伴侣,涉及到多种肿瘤的增殖、存活、转移等演化过程.作为一种应激蛋白,GRP78在机体正常组织中几乎不表达,而在处于缺氧应激状态下的肿瘤组织中高...     

葡萄糖调节蛋白78与肝脏应激损伤

葡萄糖调节蛋白78(GRP78),又称为免疫结合球蛋白(Bip),是细胞应激时产生的应激蛋白.作为热休克蛋白70家族的一员,在应激条件下,GPR78蛋白通过在内质网中协助多聚体蛋白质复合物的形成,起到保护和维持细胞正常代谢作用.肝脏是机体物质代谢的重要器官,各种酶和蛋白的生化加工厂,故应激反应下肝细胞GRP78/Bip的表达显得尤为重要.     

糖调节蛋白78在大鼠肠源性内毒素血症促进肝硬化形成中的作用

目的:探讨糖调节蛋白78(GRP78)在大鼠肠源性内毒素血症(IETM)促进肝硬化形成过程中的作用。方法:51只雄性Wistar大鼠随机分为肝硬化模型4周组、6周组、8周组及同期正常对照组。采用复合致病因素法诱导大鼠肝硬化,HE染色和VG染色分别观察肝损伤和肝纤维化情况;RT-PCR法和免疫组化法分别检测肝组织GRP78 mRNA及蛋白表达;同时测定血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、内毒素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、同型半胱氨酸(HCY)以及肝组织匀浆中TNF-α、丙二醛(MDA)、Ⅲ型前胶原(PⅢP)水平。结果:(1)随病程进展,各模型组血浆中ALT、内毒素、TNF-α、HCY以及肝组织中GRP78 mRNA、蛋白表达水平、MDA、TNF-α、PⅢP含量和肝组织纤维化指数均逐渐升高并显著高于正常对照组(P0.05)。(2)血浆中升高的内毒素水平分别与GRP78蛋白、血浆MDA和HCY水平以及肝纤维化指数呈显著正相关(P0.01);表达增高的GRP78蛋白分别与血浆MDA和HCY水平以及肝纤维化指数呈显著正相关(P0.01)。结论:GRP78可能在肝硬化形成过程中发挥重要作用;内质网应激很可能是IETM促进肝纤维化乃至肝硬化发生的重要机制。     

GRP78在肝硬化大鼠肠源性内毒素血症引发心脏病变中的作用

目的: 探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在肝硬化大鼠肠源性内毒素血症引发心脏病变中的作用。方法: 51只Wistar雄性大鼠随机分为肝硬化模型4周组、6周组、8周组和同期正常对照组。于第8周检测大鼠心功能;检测各组心肌组织匀浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和丙二醛(MDA)水平;甲苯胺蓝染色和van Giesan染色分别观察心肌细胞数量的变化和计算心肌胶原容积分数(CVF);免疫组化法检测心肌组织GRP78和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达情况。结果: 随肝硬化病程进展:(1)肝硬化8周组大鼠左室舒张末期压(LVEDP)及左室内压最大上升和下降速率(±LV dp/dt_max)均较对照组降低(P<0.05);(2)心肌组织中TNF-α、MDA、CVF、GRP78蛋白和HIF-1α蛋白水平均逐渐升高并显著高于正常对照组(P<0.05);(3)甲苯胺蓝染色显示模型各组心肌细胞数量逐渐减少并显著低于正常对照组(P<0.05);(4)血浆中内毒素水平分别与丙氨酸氨基转移酶(ALT)、同型半胱氨酸(Hcy)、TNF-α、GRP78和MDA呈显著正相关(P<0.05);(5)GRP78蛋白分别与HIF-1α、Hcy、MDA、ALT和CVF呈显著正相关(P<0.05)。结论: 肝硬化大鼠伴发的肠源性内毒素血症通过直接或间接作用引起内质网应激和GRP78表达增加,后者可能是引起心肌重构、导致心脏功能变化的关键分子。     

葡萄糖调节蛋白78在毛霉感染中的研究进展

毛霉病是一种具有血管侵袭性的感染性疾病, 表现为局部血管浸润, 血栓形成和组织坏死, 阻碍病变部位白细胞渗出和抗真菌药物分布。葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78, GRP78)是调节毛霉侵袭血管的关键蛋白。在各类应激条件下内质网GRP78过表达并转运至细胞膜, 成为毛霉进入血管内皮细胞的细胞表面受体。本综述回顾了GRP78介导毛霉感染的机制和病理生理学过程, 总结了相关靶向药物的研究进展, 为毛霉病的诊治提供参考。     

内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78及增强子结合蛋白同源蛋白在高血压大鼠全脑缺血海马区的表达变化

目的:观察血压正常大鼠和高血压大鼠全脑缺血再灌注后海马区CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达变化,探讨内质网应激在高血压增加脑缺血再灌注神经易损性中的作用.方法:60只雄性血压正常Wistar-Kyoto(WKY)大鼠随机分为假手术组(Sham)和全脑缺血再灌注组(I/R);另取30只雄性自发性高血压大鼠为高血压全脑缺血再灌注组(SHR+I/R).应用改良的Pulsineli 4血管阻断(4-VO)法制作全脑缺血再灌注模型.各组分别在术后6、24、48 h,H-E染色观察海马区神经细胞形态变化;免疫组织化学和免疫印迹检测海马区CHOP、GRP78的表达;48 h八臂迷宫检测动物行为学变化.结果:与Sham组比较,I/R组各时间点存活神经元数量降低;GRP78表达增高,24 h达高峰;CHOP表达增高,24 h达高峰,高表达持续至48 h;与I/R组比较,SHR+ IR组各时间点存活神经细胞数量降低;GPR78表达6h增高,24、48h显著减少;6、24 h CHOP表达增高,48 h明显减少;八臂迷宫结果显示SHR+I/R组与I/R组比较,各检测指标变化差异有统计学意义.结论:高血压可增加脑缺血再灌注神经易损性,与加重缺血再灌注后GRP78表达下降、CHOP活体表达增高有关.     

脂多糖在肝肺综合症发生中的作用

目的：探讨肠源性内毒素血症在肝肺综合征发生中的作用。 方法： 用复合因素复制大鼠肝硬化模型。腹腔内一次性注射小剂量内毒素以加重肝硬化动物的内毒素血症。另设正常动物注射内毒素组和甘氨酸拮抗内毒素组加以对照。 结果： 实验第8周末的肝硬化大鼠发生了肝肺综合征。小剂量内毒素一次性腹腔内注射后肝硬化动物肺脏的病理变化加剧；甘氨酸在在体和离体实验中均可明显拮抗内毒素的生物学效应，减轻肝肺综合征的各种病理变化。 结论： 肝硬化动物所伴之肠源性内毒素血症很可能在肝肺综合征发病机制中起重要作用；内毒素直接和其诱导产生的TNF-α等细胞因子在肝肺综合征发病机制中起作用。     

肝纤维化大鼠肝细胞内质网形态及GRP78表达的研究

目的: 观察四氯化碳(CCl₄)致大鼠肝纤维化过程中内质网形态及内质网应激标志性蛋白——葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达变化, 探讨内质网应激在肝纤维化发病机制中可能的作用。方法: 雄性Wistar大鼠皮下注射CCl₄制备肝纤维化模型,分别在4周及8周处死大鼠测定肝脏指数、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性, 观察肝组织病理改变和肝细胞内质网形态, 免疫组化和real-time PCR分别检测肝组织GRP78蛋白及mRNA表达变化。结果: 肝纤维化组大鼠肝脏指数、血清ALT和AST活性显著高于正常对照组(P<0.01),肝纤维化明显, 电镜下见肝细胞内质网扩张,数量明显减少; 肝细胞胞浆中GRP78蛋白表达量及mRNA表达量较正常组显著增加(P<0.01)。结论: 在CCl₄诱导的肝纤维化发生过程中肝细胞内质网形态有明显损伤性变化, 内质网应激蛋白GRP78蛋白及基因表达水平明显增加, 提示内质网应激参与肝纤维化发生发展。     

Glucose regulated protein 78 (GRP78) is overexpressed in colorectal carcinoma and regulates colorectal carcinoma cell growth and apoptosis

Glucose regulated protein 78 (GRP78) plays an important role in the development and progression of cancer. However, the role of GRP78 in colorectal carcinoma still remains unclear. In this study, using immunohistochemistry and RT-PCR, we explored the expression patterns of GRP78 in colorectal carcinoma. We knocked down GRP78 expression in RKO cells using shRNA-GRP78. Apoptosis and proliferation assay were performed. We found increased GRP78 expression with progression along the normal tissue–adenoma–carcinoma sequence, while there was no difference in the relative mRNA expression of GRP78 among normal, adenoma and colorectal carcinoma. The shRNA-GRP78 plasmid caused a significant reduction of GRP78 expression at both mRNA and protein levels. Furthermore, knockdown of GRP78 not only efficiently suppressed proliferation of RKO cells, but also induced early apoptosis of cells. In conclusion, our study demonstrated that GRP78 may play some important roles in the development and progression of colorectal carcinomas. The expression of GRP78 is associated with the enhanced proliferation of colorectal carcinoma cells and with their resistance to apoptosis.     

肝肺综合征大鼠模型肺组织巨噬细胞表型变化

目的　探讨复合因素诱导大鼠肝肺综合征（hepatopulmonary syndrome,HPS）发病过程中巨噬细胞的表型变化特点。 方法　制备肝硬化合并HPS大鼠模型,随机设立4周组、6周组、8周组3个时点,同期设置正常对照组。采用HE染色观察肝、肺组织病理变化;VG染色法对肝纤维化进行观察;免疫荧光法对巨噬细胞标志物CD68进行观察,RT-PCR检测肺组织标本中M1、M2巨噬细胞表型标记物CD86及CD206,Elisa检测iNOS、TNF-α、Arg-1及IL10。 结果　随病程进展,模型组大鼠CD86、iNOS及TNF-α在肺组织中表达逐渐增高,CD86及iNOS至6周达到高峰后有所回落,但仍明显高于正常对照组;CD206、Arg-1及IL-10的表达于第6周开始明显增加,第8周CD206及Arg-1亦有回落。上述指标在各时点的表达均有显著差异;其中,模型组大鼠肺组织iNOS与CD86呈正相关;Arg-1与CD206呈正相关;IL-10与CD206呈正相关。 结论　HPS的发病过程中,肺组织巨噬细胞经历了一系列的表型变化,6周前以M1为主,第8周以M2为主。     

特异性下调葡萄糖调节蛋白78降低人涎腺腺样囊性癌侵袭和转移的能力

目的 探讨特异性下调葡萄糖调节蛋白78（GRP78）对涎腺腺样囊性癌（ACC）侵袭和转移能力的影响; 方法 应用siRNA干扰技术,特异性下调ACC-2细胞内GRP78的表达,通过划痕实验、Transwell实验、四甲基偶氮唑盐（MTT）实验和细胞骨架染色,观察下调GRP78表达后细胞的变化,并应用免疫印迹法检测下调GRP78表达对基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP）-1和TIMP-2的影响。 结果 划痕实验显示,下调GRP78的表达能够抑制划痕愈合;Transwell实验发现,下调GRP78在ACC-2的表达明显降低穿过的细胞数;下调GRP78表达后细胞骨架染色发现,骨架纤维明显增粗;MTT实验显示,下调GRP78后细胞的增殖能力降低1/3;免疫印迹法检测结果发现,下调GRP78表达后ACC-2细胞的MMP-2、MMP-9的表达降低,TIMP-1、TIMP-2的表达增高。 结论 特异性下调GRP78的表达能够降低ACC的侵袭和转移能力,这与GRP78参与调节MMP和TIMP的表达有关。     

Increased expression of 78 kD glucose-regulated protein promotes cardiomyocyte apoptosis in a rat model of liver cirrhosis

Aims: This study was to investigate the role and underlying mechanism of 78 kD glucose-regulated protein (GRP78) in cardiomyocyte apoptosis in a rat model of liver cirrhosis. Methods: A rat model of liver cirrhosis was established with multiple pathogenic factors. A total of 42 male SD rats were randomly divided into the liver cirrhosis group and control group. Cardiac structure analysis was performed to assess alterations in cardiac structure. Cardiomyocytes apoptosis was detected by TdT-mediated dUTP nick end labeling method. Expression of GRP78, CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein (CHOP), caspase-12, nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells p65 subunit (NF-κB p65) and B cell lymphoma-2 (Bcl-2) was detected by immunohistochemical staining. Results: The ratios of left ventricular wall thickness to heart weight and heart weight to body weight were significantly increased with the progression of liver cirrhosis (P < 0.05). Apoptosis index of cardiomyocytes was significantly increased with the progression of liver cirrhosis (P < 0.05). The expression levels of GRP78, CHOP and caspase-12 were significantly increased in the progression of liver cirrhosis (P < 0.05). The expression levels of NF-κB p65 and Bcl-2 were highest in the 4-wk liver cirrhosis, and they were decreased in the 6-wk and 8-wk in the progression of liver cirrhosis. GRP78 expression levels were positively correlated with apoptosis index, CHOP and caspase-12 expression levels (P < 0.05). CHOP expression levels were negatively correlated with NF-κB p65 and Bcl-2 expression levels (P < 0.05). Conclusion: Increased expression of GRP78 promotes cardiomyocyte apoptosis in rats with cirrhotic cardiomyopathy.     

Improved severe hepatopulmonary syndrome after liver transplantation in an adolescent with end-stage liver disease secondary to biliary atresia

Hepatopulmonary syndrome (HPS) is a serious complication of end-stage liver disease, which is characterized by hypoxia, intrapulmonary vascular dilatation, and liver cirrhosis. Liver transplantation (LT) is the only curative treatment modality for patients with HPS. However, morbidity and mortality after LT, especially in cases of severe HPS, remain high. This case report describes a patient with typical findings of an extracardiac pulmonary arteriovenous shunt on contrast-enhanced transesophageal echocardiography (TEE), and clubbing fingers, who had complete correction of HPS by deceased donor LT. The patient was a 16-year-old female who was born with biliary atresia and underwent porto-enterostomy on the 55th day after birth. She had been suffered from progressive liver failure with dyspnea, clubbing fingers, and cyanosis. Preoperative arterial blood gas analysis revealed severe hypoxia (arterial O₂ tension of 54.5 mmHg and O₂ saturation of 84.2%). Contrast-enhanced TEE revealed an extracardiac right-to-left shunt, which suggested an intrapulmonary arteriovenous shunt. The patient recovered successfully after LT, not only with respect to physical parameters but also for pychosocial activity, including school performance, during the 30-month follow-up period.