异丹叶大黄素下调膀胱癌细胞中细胞周期蛋白D1表达的分子机制研究

 目的：探索异丹叶大黄素（ISO）下调肿瘤细胞中细胞周期蛋白D1表达的分子机制。方法：以ISO作用于人源性膀胱癌UMUC3、RT12和RT4细胞后用Western blotting法检测细胞周期蛋白D1表达水平;以RT-PCR法检测细胞周期蛋白D1 mRNA的表达水平。稳定转染细胞周期蛋白D1启动子萤光素酶报告基因至UMUC3细胞并筛选后,检测ISO预处理后萤光素酶活性。ISO预处理UMUC3细胞后,提取核蛋白检测核转录因子表达水平的变化。分别稳定转染GFP和GFP-细胞周期蛋白D1表达构建载体,筛选克隆;ISO预处理后,Western blotting法检测细胞周期蛋白D1的蛋白表达水平, 贴壁依赖性细胞生长实验法检测细胞生长能力的变化,流式细胞术检测细胞周期的变化。分别稳定转染人源性细胞周期蛋白D1野生型和-163位点突变型萤光素酶报告基因质粒载体至UMUC3细胞并筛选,ISO预处理后检测细胞的萤光素酶活性。最后利用染色质免疫沉淀的方法,以抗Sp1抗体检测ISO对Sp1与细胞周期蛋白D1启动子结合力的影响。结果：ISO可从mRNA和蛋白水平显著抑制肿瘤细胞的细胞周期蛋白D1水平,并且是从内源性转录水平来抑制细胞周期蛋白D1的转录。ISO可抑制、下调核转录因子Sp1的表达,并抑制Sp1与细胞周期蛋白D1启动子区域的结合力,该结合位点主要位于启动子-92到+27 bp的5’-非翻译区。结论：ISO可通过下调Sp1核转录因子表达及其与细胞周期蛋白D1启动子的结合,从内源性转录水平来抑制细胞周期蛋白D1的表达,从而诱导G 0/G 1细胞周期阻滞并抑制肿瘤细胞增殖。我们的研究将为临床中药单体ISO综合治疗肿瘤提供新的策略。     

异丹叶大黄素抑制HepG2细胞生长及诱导其凋亡的实验研究

目的通过异丹叶大黄素抑制HepG2细胞的生长及诱导其凋亡,探讨异丹叶大黄素抗肿瘤作用的分子机制。方法我们采用FACS、Hochest33258、MTT等方法来检测HepG2细胞生长及凋亡的情况。结果异丹叶大黄素药物组的细胞凋亡明显大于对照组,药物组的细胞生长情况明显受到抑制,P<0.05,且还呈浓度依赖和时间依赖性。结论异丹叶大黄素药物可抑制Hep62细胞的增殖及诱导的HepG2细胞凋亡,表明异丹叶大黄素药物具有抗肿瘤的药理作用。     

软组织平滑肌肉瘤中细胞周期蛋白D1基因扩增分析及蛋白表达检测

我们采用差异聚合酶链反应 (ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌＰＣＲ ,ＤＰＣＲ)检测软组织平滑肌肉瘤 (ＬＭＳ)中细胞周期蛋白Ｄ1(ｃｙｃｌｉｎＤ1)基因ＣＣＮＤ1的扩增情况 ,并应用免疫组织化学方法检测ｃｙｃｌｉｎＤ1表达 ,以期了解二者的关系。一、材料与方法1.标本 :38例ＬＭＳ、10例平滑肌瘤和 10例正常平滑肌组织取自本院病理科 1989～ 1998年存档蜡块 ,肿瘤发生部位包括躯干、四肢、腹腔和腹膜后 (胃肠道除外 )。2 .ＤＰＣＲ :多巴胺受体基因 (ｄｏｐａｍｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒＤ2 ,ＤＲＤ2 )与ＣＣＮＤ1基因同位于 11号染色体的长臂上 (…     

肝细胞癌细胞周期蛋白D1基因的扩增和表达

目的　探讨细胞周期蛋白 (cyclin)D1基因 (CCND1)扩增和cyclinD1在肝细胞癌 (HCC)中的表达情况及其与HCC发生发展的关系。方法　分别应用差异聚合酶链反应 (DPCR)、逆转录(RT) PCR和免疫组织化学法检测 2 0例HCC中cyclinD1基因扩增率、mRNA和蛋白表达状况 ,并分析其与HCC组织学分级的关系。结果　cyclinD1基因扩增结果为 6/ 2 0 ,其mRNA和蛋白过表达分别为9/ 2 0和 14 / 2 0。cyclinD1mRNA表达与基因扩增相关 (P <0 .0 5) ,也和蛋白表达水平相关 (P <0 .0 5)。cyclinD1蛋白表达与HCC组织学分级具有相关性 (P <0 .0 5)。结论　cyclinD1基因扩增在HCC中较常见 ,是引起cyclinD1mRNA和蛋白过表达的主要原因之一。cyclinD1蛋白过表达与HCC的组织学分级相关。cyclinD1基因扩增及过表达可能在肝癌的演进和分化中起重要作用     

喉鳞状细胞癌患者视网膜母细胞瘤蛋白和细胞周期调节蛋白D1异常表达

目的:探讨喉鳞状细胞癌(LSCC)患者视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)和细胞周期调节蛋白D1(Cyclin D1)的异常表达及其相关性。方法:选择36例喉部疾病手术患者,包括LSCC(LSCC组)、声带息肉(息肉组)和癌前病变(癌前组)各12例,各组均于手术后取病变组织,采用Western-blotting检测pRb和Cyclin D1蛋白表达水平,统计学分析各组两指标差异及相关性。结果:与息肉组比较,癌前组pRb表达水平降低(P0.01),Cyclin D1表达水平升高(P0.01);与癌前组比较,LSCC组pRb水平更低(P0.01),Cyclin D1水平更高(P0.01)。三组pRb与Cyclin D1蛋白水平均呈显著负相关(r分别为-0.94、-0.83和-0.92,P均0.01)。结论:LSCC的发生和发展与pRb表达降低和Cyclin D1表达增加有关。     

双肾上腺皮质激素样激酶-1与细胞周期蛋白D1在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨双肾上腺皮质激素样激酶-1(DCLK1)与细胞周期蛋白D1(cyclin D1)在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学S-ABC法检测59例结直肠癌组织和28例结直肠良性病变组织中DCLK1及cyclin D1的表达及分布。结果:DCLK1及cyclin D1在结直肠癌组织中的表达明显高于结直肠良性病变组织,平均光密度值(AOD)为0.423±0.021及0.386±0.042;而在结直肠良性病变组织中其阳性反应的平均光密度值为0.267±0.053及0.211±0.026,差异具有统计学意义。DCLK1及cyclin D1的阳性表达与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度和DUCKs分期无关,而与组织良性或恶性、肿瘤的大小及淋巴结转移相关。结论:结直肠癌组织中DCLK1及cyclin D1的高表达可能与结直肠癌的发生、发展、转移相关,可作为结直肠癌转移及预后监测的一项重要指标。     

蓝萼甲素通过cyclinB1/CDK1途径诱导DU145细胞G2/M期阻滞

目的:研究蓝萼甲素(GLA)调节DU145细胞周期信号通路的表达,探讨GLA阻滞DU145细胞周期的作用机制.方法:不同浓度(1、2.5、5μg/ml)GLA分别刺激培养DU145细胞24 h,CCK8检测细胞增殖;流式检测细胞周期与凋亡;qRT-PCR与Western blot分别检测细胞周期蛋白p21、cyclin...     

p15、细胞周期蛋白D1和转移生长因子β1在非小细胞肺癌中的表达及其意义

一、材料与方法1.材料 :实验材料取自内蒙古医学院病理教研室在1996～ 1998年间的病理组织存档蜡块 ,共 16 5份。按照 1980年ＷＨＯ肺癌分类标准进行组织学分类 ,并均经病理证实。其中鳞癌 80例 ,腺癌 49例 ,不典型增生 19例 ,鳞状上皮化生17例 ;在 12 9例非小细胞肺癌中 ,同一病例手术切取标本存档蜡块不仅有肺癌组织蜡块也有淋巴结组织蜡块 ;其中淋巴结组织经ＨＥ染色证实有淋巴结转移的 35例 ,无淋巴结转移的 2 8例。其余 6 6例中 ,或同一病例手术切取标本存档蜡块仅有肺癌组织而无淋巴结组织 ,或同一病例标本存档蜡块中虽有淋巴结组织 ,…     

细胞周期蛋白D1、p21WAF1蛋白和增殖细胞核抗原在乳腺癌的表达及与淋巴结转移和预后的关系

我们在以往研究的基础上，检测了乳腺癌组织中细胞周期蛋白(cyclin)D1、p21^WAF1蛋白及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达以及有cyclin D1过表达乳腺癌淋巴结转移灶中cyclin D1的表达，以探讨其特别是cyclin D1在乳腺癌发生发展中的作用及其与淋巴结转移关系和预后意义。     

β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1和c-myc表达与胰腺癌发生及生物学行为的关系

目的 研究β-连环蛋白(β-cat)的异常表达、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和 c-myc的高表达与胰腺癌发生、增殖、浸润、转移和预后的关系。方法 应用免疫组织化学PicTure~(TM)二步法,检测47例胰腺癌组织、12例胰腺导管上皮内肿瘤(上皮中度不典型增生)和10例正常胰腺组织中β-cat、cyclin D1和c-myc的表达。同时检测胰腺癌增殖细胞核抗原(PCNA),作为胰腺癌增殖状态的指标。结果 β-cat在10例正常胰腺组织均呈正常表达,而cyclin D1和c-myc均呈阴性。三者在胰腺导管上皮内肿瘤和胰腺癌中的表达率差异无显著性[分别为6/12和68.1％(3/47)、6/12和74.5％(35/47)、5/12和70.2％(33/47),均P>0.05]。β-cat异常表达率与胰腺癌的转移和1年生存率显著相关(均P<0.05),而与胰腺癌大小、分化程度、增殖活性及浸润无关(均P>0.05)。cyclin D1的表达率与胰腺癌的增殖和分化程度有关(均P0.05)。c-myc的表达率与胰腺癌的大小、分化程度、浸润、转移和1年生存率无关(均P>0.05),而与胰腺癌组织的增殖活性密切有关(P<0.05)。β-cat异常表达与cyclin D1和c-myc的高表达在胰腺导管上皮内肿瘤和胰腺癌中均有显著的正相关性(均P<0.05,r=1.000、0.845、0.437、0.452)。结论 β-cat     

小檗碱增强丝裂霉素C诱导的膀胱癌T24细胞周期阻滞及凋亡

目的:研究小檗碱(berberine,Ber)增强丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)诱导的人类膀胱癌T24细胞周期阻滞和细胞凋亡的作用及其相关机制。方法:将T24细胞分为4组:对照组、MMC组、MMC+Ber组和Ber组;采用CCK-8法检测不同药物处理后T24细胞的活力;采用流式细胞术分析不同药物处理后T24细胞周期的情况;Western blot检测细胞周期调控相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达;Annexin V-FITC/PI双染后用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果:CCK-8实验表明Ber能增强MMC抑制T24细胞活力的作用;流式细胞术检测细胞周期结果显示,MMC+Ber组T24细胞滞于G_0/G_1期(P0.05);与MMC组相比,MMC+Ber组p21和p27的蛋白表达上调(P0.05),cyclin D1、CDK2和CDK4的蛋白表达下调(P0.05),同时Ber促进MMC下调survivin的蛋白表达(P0.05);Annexin V-FITC/PI双染结果显示,Ber能促进MMC诱导的T24细胞凋亡(P0.05)。结论:Ber能显著增强MMC抑制T24细胞活力的作用,其机制可能是通过上调p21和p27,进而抑制cyclin D1、CDK2和CDK4表达;同时通过抑制survivin蛋白的表达,最终导致细胞被阻滞在G_0/G_1期,并促进细胞凋亡。     

碱性成纤维细胞生长因子对卵巢癌CAOV3细胞cyclin D1及GADDl53表达的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人卵巢癌CAOV3细胞细胞周期调节蛋白cyclinD1及GADD153表达的影响,探讨bFGF促进人卵巢癌CAOV3细胞增殖、抑制凋亡的信号机制。方法:利用无血清饥饿诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡。分为对照组、bFGF组。分别应用MTT、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳观察25、50、75μg/L bFGF对CAOV3细胞增殖率、细胞周期及细胞凋亡的影响。利用Western blotting检测bFGF对CA-OV3细胞cyclin D1、GADD153以及转录因子(c-Fos、c-Jun)表达的影响。结果:与对照组相比,bFGF呈剂量依赖性加速CAOV3细胞细胞周期进程,促进细胞增殖,抑制饥饿诱导的凋亡(P<0.01);呈时间依赖性促进cyclinD1、c-Fos、c-Jun,抑制GADD153蛋白表达(P<0.01)。结论:bFGF可能通过上调cyclin D1、c-Fos、c-Jun,下调GADD153表达促进细胞增殖,抑制饥饿诱导的卵巢癌CAOV3细胞凋亡。     

碱性成纤维细胞生长因子对卵巢癌CAOV3细胞cyclin D1及GADD153表达的影响

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人卵巢癌CAOV3细胞细胞周期调节蛋白cyclin D1 及GADD153表达的影响，探讨bFGF促进人卵巢癌CAOV3细胞增殖、抑制凋亡的信号机制。方法:利用无血清饥饿诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡。分为对照组、bFGF组。分别应用MTT、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳观察 25、50、75 μg/L bFGF对CAOV3细胞增殖率、细胞周期及细胞凋亡的影响。利用Western blotting检测bFGF对CAOV3细胞cyclin D1、GADD153以及转录因子（c-Fos、c-Jun）表达的影响。结果:与对照组相比，bFGF呈剂量依赖性加速CAOV3细胞细胞周期进程，促进细胞增殖，抑制饥饿诱导的凋亡（P＜0.01）；呈时间依赖性促进cyclin D1、c-Fos、c-Jun，抑制GADD153蛋白表达（P＜0.01）。结论:bFGF可能通过上调cyclin D1、c-Fos、c-Jun，下调GADD153表达促进细胞增殖，抑制饥饿诱导的卵巢癌CAOV3细胞凋亡。     

AEG-1表达下调对人宫颈癌细胞细胞周期和侵袭能力的影响及其机制

 目的：研究星形细胞上调基因1（astrocyte elevated gene-1,AEG-1）在人宫颈鳞癌细胞和组织中的表达,探讨AEG-1表达下调对宫颈癌SiHa细胞细胞周期和侵袭能力的影响,并分析其可能的分子机制。方法：采用Western blotting检测正常宫颈组织、宫颈鳞癌组织、HeLa、SiHa和CaSki细胞中AEG-1蛋白的表达。将对照siRNA和AEG-1 siRNA分别转染SiHa细胞,利用Western blotting检测SiHa细胞中AEG-1蛋白的表达,采用流式细胞术检测细胞周期分布的变化,采用Boyden小室检测细胞侵袭能力的变化,最后采用Western blotting检测cyclin D1、细胞周期素依赖性激酶 2（CDK2）和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达的变化。结果：宫颈鳞癌组织中AEG-1蛋白表达显著高于正常宫颈组织（P<0.05）,同时3株宫颈癌细胞中AEG-1蛋白表达均显著高于正常宫颈组织,其中SiHa细胞中AEG-1蛋白表达最高（P<0.05）。此外,AEG-1 siRNA能显著下调SiHa细胞中AEG-1蛋白的表达（P<0.05）,其表达下调能明显促使SiHa细胞在G0/G1期的比例增加和降低其侵袭能力。Western blotting结果表明,AEG-1 siRNA组中cyclin D1、CDK2和MMP-9蛋白的表达均显著低于未处理组和对照siRNA组（P<0.05）。结论：AEG-1在宫颈癌中的高表达可能与宫颈癌的发生发展密切相关,其表达下调介导的细胞周期静止和侵袭能力降低可能与cyclin D1、CDK2和MMP-9蛋白表达下调密切相关。     

The influence of arsenic trioxide on the cell cycle,apoptosis and expression of cyclin D1 in the Jurkat cell line

Cyclin D1 drives cell cycle progression at the G1/S transition and is believed to play a significant role in tumorigenesis, contributing to efficient proliferation of many cancer cells. Consequently, it is also recognized as an end-point biomarker of therapeutic outcome for different treatment modalities in cancer. In this study we aimed to evaluate the expression and localization of cyclin D1 in arsenic trioxide (ATO) treated Jurkat cells (lymphoblastic leukemia cell line) and to correlate these results with the extent of cell death and/or cell cycle alterations. Jurkat cells were incubated with increasing concentrations of ATO (0.2, 0.6 and 1.0 μM) for 24 h in standard cell culture conditions. To reach our goal we performed annexin V/PI labeling for detection of cell death and RNase/PI labeling for evaluation of cell cycle distribution, which were followed by the respective flow cytometric analyses of ATO-treated Jurkat cells. Transmission electron microscopy was applied for visualization of the cell ultrastructure. For cyclin D1 estimation a biparametric cyclinD1/cell cycle assay was done and localization of the protein was shown after immuno-labeling using light microscopy (ABC procedure) and confocal fluorescence microscopy. We found that there were no significant changes in the percentages of cyclin D1-positive cells after the treatment with ATO, but at the same time mean fluorescence intensity reflecting cyclin D1 content was gradually increasing along with the cell cycle progression, irrespective of the applied dose of the drug. On the other hand, we found a nuclear-cytoplasmic shift of this protein as a major treatment-related response, which was in good accord with an increased rate of cell death and suggested that cyclin D1 cytoplasmic degradation is an important determinant of the therapeutic efficiency of ATO in the Jurkat cell line.     

宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中cyclin D1、Ki-67的表达及其意义

目的： 检测细胞周期素D1（cyclin D1）、增殖细胞核抗原（Ki-67）在人乳头瘤病毒（HPV）感染患者宫颈上皮内瘤样病变（CIN）及宫颈鳞癌中的表达及其相关性,研究其在CIN及宫颈鳞癌发生及发展过程中的作用。方法: 研究组HPV阳性病理确诊CINⅠ17例、CINⅡ19例、CINⅢ23例、宫颈鳞癌23例,对照组HPV阳性病理确诊柱状上皮异位22例。应用免疫组化S-P法检测宫颈病变组织中cyclin D1、Ki-67蛋白的表达,杂交捕获二代检测宫颈分泌物中HPV感染的情况。结果: (1)Cyclin D1在5组宫颈组织细胞的细胞核内均有表达,CINⅢ组、宫颈鳞癌组与对照组比较差异显著（P<0.05）,CINⅢ组、宫颈鳞癌组与CINⅠ组比较差异显著（P<0.05）,宫颈鳞癌组与CINⅡ组比较差异显著（P<0.05）。(2)Ki-67在5组宫颈组织细胞的细胞核内均有表达,对照组与CINⅢ组比较差异显著（P<0.05）,对照组与宫颈鳞癌组比较差异显著（P<0.05）,CINⅠ组与宫颈鳞癌组比较差异显著（P<0.05）,CINⅡ组与宫颈鳞癌组比较差异显著（P<0.05）。(3)Cyclin D1、Ki-67在CIN及宫颈鳞癌中的表达强度呈正相关关系 （P<0.05）。结论: Cyclin D1和Ki-67在CIN和宫颈鳞癌发生发展及细胞增殖活动中起一定的作用;两者在CIN和宫颈鳞癌的发生发展中可能发挥协同作用。     

9-顺-维甲酸对肺腺癌细胞cyclin D1、cdk4转录的影响

目的:检测9-顺-维甲酸处理前后人肺腺癌细胞株PG、A_(549)、SPC-A_1的cyclinD1、cdk4转录水平的变化,探讨9-顺-维甲酸抑制肺腺癌细胞生长的分子机制。方法:采用相对定量逆转录PCR方法,分析细胞周期因子cyclinD1、cdk4转录的变化。结果:9-顺-维甲酸既可以降低PG、A_(549)的cyclinD1转录(P<0.01),又可以降低PG、SPC-A_1的cdk4的转录(P<0.01或P<0.05)。结论:9-顺-维甲酸对肺腺癌细胞的生长抑制作用,与其调控细胞周期因子cyclinD1、cdk4的表达密切相关。     

Correlation of cyclin D1 and E1 expression with bladder cancer presence, invasion, progression, and metastasis

The objective of this study was to determine the correlation of the expression of cyclin D1 and E1 with the expression of commonly altered cell cycle regulators and bladder cancer presence, staging, and clinical outcomes. We performed immunohistochemical staining for cyclin D1, cyclin E1, p53, p21, p27, and retinoblastoma protein (pRB) on serial cuts from normal urothelium from 9 controls, radical cystectomy specimens from 226 consecutive patients with advanced transitional cell carcinoma, and lymph nodes with metastasis from 50 of the 226 cystectomy patients. Cyclin D1 and E1 immunoreactivity were considered low when samples demonstrated less than 10% and 30% nuclear reactivity, respectively. Normal bladder urothelium from all 9 control patients showed uniformly intense expression of cyclin D1 and E1. Cyclin D1 expression was low in 99 (43.8%) of 226 cystectomy specimens and 25 (50.0%) of 50 metastatic lymph node specimens. Cyclin D1 immunoreactivity was not associated with any pathologic characteristics or clinical outcomes. Cyclin E1 expression was low in 125 (55.3%) of 226 cystectomy specimens and 22 (44.0%) of 50 metastatic lymph node specimens. Low cyclin E1 expression was significantly associated with advanced pathologic stage, lymphovascular invasion, and lymph node metastases. In multivariate analyses, low cyclin E1 expression was significantly associated with bladder cancer-specific mortality (P = .048), but not disease recurrence (P = .056). Low cyclin E1 expression was significantly associated with altered expression of pRB, p27, and cyclin D1. Low cyclin D1 expression was significantly associated with altered expression of pRB, p21, and cyclin E1. Cyclin E1 expression stratifies patients with bladder transitional cell carcinoma into those with more "indolent" behavior and those with features of biologically and clinically aggressive disease.