干燥脱水法长期保存角膜及角巩膜植片的组织活性研究

目的 研究干燥脱水法保存角膜及角巩膜植片的组织活性。方法 应用无水氯化钙－硅胶干燥脱水法保存角膜及角巩膜植片，根据现有保存资料统计共1287例，保存时间半年至15年，对不同保存时间的植片进行了组织结构，细胞活性和超微结构的研究。结果 干燥保存角膜片5，10，15年的组织切片报告其胶原纤维束清昕可见，各层纤维排列呈一定角度，成纤维细胞减少，细胞器存在，内皮细胞的核存在。保存后植片合格率分别为：半年98．8％，1年98．4％，5年98．9％，10年93．3％，15年96．7％。保存合格植片临床应用，术后植片透明率平均94．9％。结论 无水氯化钙－硅胶干燥脱水法长期保存的角膜及角巩膜植片，具有一定的组织活性，临床应用效果好，操作简便，费用低廉，值得推广。     

干燥法长期保存角膜板层移植1267例临床研究

目的：评价干燥脱水法长期保存角膜片在板层治疗性角膜移植术中的效果。方法：保存角膜片选自我院眼库干燥保存符合临床标准、复水透明的完整角膜片，临床病例选自我院角膜病组1976年8月～1999年12月期间行板层治疗性角膜移植患者1267例，从手术前后视力比较、原发病灶控制、植片存活情况进行临床效果综合分析。结果：保存角膜片复水透明合格率为94．9％，临床治愈率：感染性角膜溃疡／穿孔88．8％，血管翳性全角膜白斑98．3％。化学及热烧伤(穿孔，睑球角粘连等)92．1％，圆锥角膜及急性圆锥角膜99．5％，角膜变性(边缘性及前基质层)99．0％。其他88．9％，平均总治愈率93．5％。结论：1．对各种严重的角膜感染、药物治疗无法控制的病人，治疗性角膜移植术是唯一有效的方法。2．采用无水氯化钙一硅胶干燥脱水长期保存的供体角膜能为临床随时提供角膜材料，是一项简单易行、便于推广应用的成功率很高的保存方法。     

干燥法长期保存角膜片板层治疗性角膜移植1267例临床研究

目的：评价干燥脱水法长期保存角膜片在板层治疗性角膜移植术中的效果。方法：保存角膜片选自我院眼库干燥保存符合临床标准、复水透明的完整角膜片，临床病例选自我院角膜病组1976年8月-1999年12月期间行板层治疗性角膜移植患1267例，从手术前后视力比较、原发病灶控制、植片存活情况进行临床效果综合分析。结果：保存角膜片复水透明合格率为94.9％，临床治愈率：感染性角膜溃疡/穿孔88.8％，血管翳性全角膜白斑98.3％，化学及热烧伤（穿孔，睑球角膜粘连等）92.1％，圆锥角膜及急性圆锥角膜99.5％，角膜变性（边缘性及前基质层）99.0％，其他88.9％，平均总治愈率93.5％；结论：①对各种严重的角膜感染、药物治疗无法控制的患，治疗性角膜移植术是唯一有效的方法。②采用无水氯化钙-硅胶干燥脱水长期保存的供体角膜能为临床随时提供角膜材料，是一项简单易行、便于推广应用的成功率很高的保存方法。     

脱水保存角膜基质为载体培养角膜内皮细胞的实验研究

目的探讨以脱水保存角膜基质/后弹力层为载体培养角膜内皮细胞,构建组织工程化角膜内皮细胞移植膜的可行性及其机理。设计实验性研究。研究对象体外培养的兔角膜内皮细胞和脱水保存角膜基质/后弹力层。方法兔角膜经中性蛋白酶37°C孵育5min,去除内皮细胞保留后弹力层和角膜基质,无水氯化钙脱水后低温保存,使用前磷酸盐缓冲液复水。纯化的角膜内皮细胞接种于基质载体的后弹力层上进行体外培养,直至生长融合为细胞单层,倒置显微镜下观察细胞形态学变化。在不同时间点(1、2、4、6d)收集植片进行HE染色和电镜检测,分析组织结构的变化。主要指标角膜内皮细胞在脱水保存角膜基质/后弹力层载体上形成单层时间和生长特性,组织工程化角膜内皮细胞移植膜的三维结构和超微结构。结果角膜内皮细胞在载体上快速贴壁生长并增殖,体外培养6～7d即融合成单层,复合角膜内皮组织由基质/后弹力层和单层扁平内皮细胞组成,与生理状态下的角膜内皮组织相近。电镜下组织培养的兔角膜内皮细胞间连接紧密,细胞为多边形,胞核清晰,具有正常兔角膜内皮细胞的超微结构。结论角膜内皮细胞能够在干燥脱水保存基质/后弹力层载体上良好生长,并形成形态结构与正常角膜内皮组织相似的细胞单层,为角膜内皮细胞移植提供了新的载体选择。(眼科,2006,15:164-168)     

异种角膜基质作为生物角膜载体的免疫学研究

目的探讨异种(猪)角膜基质组织免疫原性,以评价其作为角膜重建载体材料的可行性。方法将新鲜、脱水2种猪角膜基质植片分别植入F344大鼠角膜基质层间,术后12d、90d抽取外周血,行抗CD25·FITC和抗CD4/CD8·PE双色免疫荧光标记,流式细胞仪测定分析。结果测得新鲜组、脱水组大鼠术后12d外周血T淋巴细胞表面抗原CD4 和CD25 、CD8 和CD25 双阳性表达率(1.53%±0.47%,2.13%±0.53%与0·57%±0.20%,0.67%±0.18%)及CD4 /CD8 比值(1.43±0.28,1.69±0.18)与同基因移植组(1.78%±0.36%,1.50±0.19)、阴性对照组(2.06%±0.52%,1.44±0.32)比较无显著性差异(P>0.05)。术后90d,新鲜组、脱水组大鼠外周血T淋巴细胞表面抗原CD4 和CD25 、CD8 和CD25 双阳性表达率(1.48%±0.39%,1.50%±0.46%与0·55%±0.15%,0·58%±0·11%)及CD4 /CD8 比值(1.43±0.51,1.36±0.59)与同基因移植组(1.32%±0·75%,1.31±0.29)、阴性对照组(1.34%±0.18%,1.44±0.42)比较,也无显著性差异(P>0.05)。结论异种(猪)角膜基质免疫原性低,是一种理想的角膜体外重建载体材料。     

干燥法长期保存角膜片板层治疗性角膜移植1267例临床研究

目的评价干燥脱水法长期保存角膜片在板层治疗性角膜移植术中的效果。方法保存角膜片选自我院眼库干燥保存符合临床标准、复水透明的完整角膜片,临床病例选自我院角膜病组1976年8月～1999年12月期间行板层治疗性角膜移植患者1267例,从手术前后观力比较、原发病灶控制、植片存活情况进行临床效果综合分析。结果保存角膜片复水透明合格率为94.9％,临床治愈率:感染性角膜溃疡/穿孔88.8％,血管翳性全角膜白班98.3％.化学及热烧伤(穿孔,睑球角粘连等)92.1％,圆锥角膜及急性圆锥角膜99.5%,角膜变性(边缘性及前基质层)99.0％,其他88.9%,平均总治愈率93.5％。结论①对各种严重的角膜感染、药物治疗无法控制的患者,治疗性角膜移植术是唯一有效的方法。②采用无水氯化钙-硅胶干燥脱水长期保存的供体角膜能为临床随时提供角膜材料,是一项简单易行、便于推广应用的成功率很高的保存方法。     

脱细胞角膜基质为支架构建组织工程角膜上皮组织的实验研究

目的 比较氯化钠(NaCl)-十二烷基硫酸钠(SDS)-胰蛋白酶与分散酶(Dispase)-聚乙二醇辛基苯基醚(Triton-X-100)两种角膜组织脱细胞方法的效果,探讨以脱细胞角膜基质为支架构建组织工程化角膜上皮组织的可行性.方法 实验研究.采用完全随机化设计的方法,分别用NaCl-SDS-胰蛋白酶和Dispase-Triton-X-100处理兔角膜组织,使用裂隙灯显微镜、光学显微镜及透射电镜观察经两种方法处理后的角膜基质特性和脱细胞效果.以兔角膜缘上皮细胞为种子细胞,Dispase-Triton-X-100处理的猪角膜前弹力层与基质为支架,体外重建兔角膜上皮细胞层,并进行形态学、组织病理学及免疫组织化学检测.结果 两种方法处理过的兔角膜基质大体形态相似,灰白色不透明,水肿明显,质地柔软.组织病理学和超微形态学观察显示两种方法处理的兔角膜基质胶原排列规整,NaCl-SDS-胰蛋白酶处理的角膜组织残留了部分基质细胞碎片,而Dispase-Triton-X-100处理的角膜组织未见基质细胞碎片.兔角膜缘上皮组织块接种于脱细胞猪角膜前弹力层与基质上,24 h角膜上皮细胞开始游出,3～4 d融合呈片状,7～8 d形成单细胞层.组织工程化角膜上皮细胞表达CK3.结论 Dispase-Triton-X-100处理方法的角膜组织脱细胞效果良好.以脱细胞猪角膜前弹力层与基质为支架.可在体外构建组织工程化兔角膜上皮组织.     

干燥保存角膜在感染性角膜溃疡治疗中的应用

目的:评价应用干燥保存角膜片对554例严重感染性角膜溃疡行治疗性角膜移植手术的效果。方法:选自我院角膜病组1976-08/2000-12期间应用干燥保存角膜片对严重感染性角膜溃疡行治疗性角膜移植手术共计554例,本组病例统计分类为真菌性(238例)、单疱病毒性(170例)、细菌性(70例)及混合感染性(76例角膜溃疡4种,分析临床应用效果。结果:本组手术治疗严重感染性角膜溃疡平均有效率88.8%,其中真菌性角膜溃疡81.5%,单疱病毒性角膜溃疡98.2%,细菌性角膜溃疡97.1%,混合感染性角膜溃疡82.9%。结论:无水氯化钙-硅胶干燥长期保存的角膜片为临床随时提供角膜材料,是一项简单易行、便于推广应用的方法;在临床治疗过程中尽快、尽早查明感染病原体,可避免盲目性;对严重感染性角膜溃疡,治疗性角膜移植可直接清除病灶、较快地控制炎症、缩短治疗过程,达到保存眼球及恢复部分有用视力,为下一步光学性角膜移植创造条件。     

干燥法长期保存角膜片板层治疗性角膜移植1267例临床研究

目的：评价干燥脱水法长期保存角膜片在板层治疗性角膜移植术中的效果。方法：保存角膜片选自我院眼库干燥保存符合临床标准、复水透明的完整角膜片，临床病例选自我院角膜病组1976年8月—1999年12月期间行板层治疗性角膜移植患者1267例，从手术前后视力比较、原发病灶控制、植片存活情况进行临床效果综合分析。结果：保存角膜片复水透明合格率为94．9％，临床治愈率：感染性角膜溃疡／穿孔88．8％，血管属性全角膜白斑98．3％，化学及热烧伤(穿孔，睑球角粘连等)92．1％，圆锥角膜及急性圆锥角膜99.5％，角膜变性(边缘性及前基质层)99.0％，其他88．9％，平均总治愈率：93．5％。结论：1．对各种严重的角膜感染、药物治疗无法控制的病人，治疗性角膜移植术是唯一有效的方法。2．采用无水氯化钙——硅胶干燥脱水长期保存的供体角膜能为临床随时提供角膜材料，是一项简单易行、便于推广应用的成功率很高的保存方法。眼科学报2003；19：110-113     

以异种角膜脱细胞基质为载体构建角膜上皮-载体-内皮复合物的实验研究

目的探讨以异种角膜脱细胞基质为载体,体外构建生物角膜的可能性和方法。方法应用去垢剂1％TritonX-100冷冻干燥处理制备猪角膜脱细胞基质载体,在其上皮面和内皮面分别接种兔角膜上皮细胞和内皮细胞,体外培养2周。将复合物制成组织切片,在光镜下观察组织形态（HE染色）,采用免疫组织化学方法检测角膜上皮特异性细胞角蛋白3（CK3）,使用锥虫蓝联合茜素红染色观察内皮细胞,在扫描电镜下观察上皮面和内皮面的超微结构。结果体外培养生物角膜获得上皮、无细胞基质和内皮三层复合结构。4或5层复层上皮中以扁平细胞为主,胞质内特异性CK3表达阳性;内皮层为一连续的单层扁平细胞,细胞活性良好,锥虫蓝联合茜素红染色显示组织呈典型的蜂巢样镶嵌结构。扫描电镜下观察,在载体的上皮面细胞呈复层样生长,形态近似扁平与梭形之间;内皮面为多边形单层细胞,表面具有微绒毛结构。结论构建的生物角膜为上皮一脱细胞基质载体一内皮复合物,初具角膜的雏形结构。异种角膜脱细胞基质提供了良好的细胞生长界面,有望成为体外构建角膜的载体材料。     

复方中药金芪滴眼剂对兔角膜上皮及基质细胞增殖的影响

目的：观察复方中药金芪滴眼剂对兔角膜上皮细胞及兔角膜基质层细胞增殖的影响。方法：建立体外培养兔角膜上皮细胞，兔角膜基质层细胞系，用MTT法检测不同浓度金芪滴眼剂对细胞增殖活性的影响。结果：金芪滴眼剂对兔角膜上皮细胞有显著的促进增殖作用。且随浓度的增加。增殖率加大，对兔角膜基质层细胞无促增殖作用。高浓度时有抑制作用。结论：复方中药金芪滴眼剂对兔角膜上皮细胞有较好的保护作用。