葛根素注射液致体内外溶血反应及其机制研究

目的:探讨葛根素注射液可能引起的溶血反应及其机制。方法:采用人红细胞进行体外溶血性实验;KM小鼠进行体内实验,设80、160mg/kg葛根素注射液和5%葡萄糖组,小鼠尾静脉给药7d/周期,停药5d,给药4个周期。于给药前、每周期末次给药后,进行溶血和血液指标检测,以确定发生溶血的小鼠。对发生溶血的小鼠测定其红细胞渗透脆性范围和膜胆固醇(Ch)、磷脂(Pl)含量,进行直接抗球蛋白试验(DAT),显微镜观察肝、肾组织结构。结果:所用葛根素注射液未引起人红细胞体外溶血反应;在动物第4个周期给药后,80mg/kg组有2只(6.67%)小鼠表现溶血反应,其粪隐血实验阳性,红细胞数、血红蛋白值降低,网织红细胞数增多;肝、肾组织结构发生病理改变。与5%葡萄糖组相比,溶血小鼠红细胞渗透脆性范围、膜Ch/Pl比值未见异常,DAT实验IgG(+)。160mg/kg组小鼠均未发生溶血反应。结论:所用葛根素注射液未引起人红细胞体外溶血;反复给药可致小鼠偶发溶血,但与剂量无关;其溶血发生机制与红细胞膜渗透脆性和流动性无关,与IgG型免疫应答有关。     

葛根素固体自乳化微丸的制备研究

目的 制备葛根素固体自乳化微丸.方法 考察葛根素在不同乳化剂、助乳化剂、油相的溶解度,利用伪三元相图法优化自微乳处方;制备含葛根素自微乳软材,采用挤出-滚圆法制备葛根素自乳化微丸;并对葛根素自微乳微丸的释放度及自乳化后的粒径进行考察.结果 葛根素自乳化微丸的处方确定为葛根素-吐温80-甘油-IPM-微晶纤维素-微粉硅胶的质量比为0.7∶4∶4∶2∶70∶30,自乳化微丸溶解乳化后平均粒径为43 nm,40 min时的溶出度约为80％.结论 制备的葛根素自乳化微丸体外溶出度较高,粒径分布较好.     

葛根素注射液浓度对红细胞溶血率的影响

目的 考察体外溶血实验葛根素注射液浓度对红细胞膜脆性的影响及与红细胞溶血率的相关性.方法 用热诱导法考察50℃时葛根素注射液对Beagle犬红细胞膜脆性的影响;将不同浓度的葛根素溶液分别与Beagle犬红细胞、豚鼠红细胞在温度为37℃的生化培养箱内孵育6 h,于不同时间点观察各样品管的溶血程度,并于6 h后通过紫外分光光度计测定各管在波长540 nm处的吸光率,计算溶血率.结果 高温条件下葛根素注射液可加剧Beagle犬红细胞溶血程度;葛根素注射液均能直接引起Beagle犬、豚鼠红细胞溶血,溶血率与葛根素浓度成明显的量效关系.结论 葛根素注射液在一定浓度下可引起红细胞膜脆性增加;随着浓度的升高葛根素注射液的溶血作用更明显.     

《中草药》杂志又获佳绩

目的 考察转相超声乳化技术制备的莪术油亚微乳理化性质,并与高压乳匀法制备的莪术油亚微乳进行比较.方法 分别采用转相超声乳化技术和高压乳匀法制备莪术油亚微乳,比较其形态和粒径分布,HPLC法测定了其含药量,并进行稳定性比较.结果 转相超声乳化技术和高压乳匀法制得的亚微乳平均粒径分别为188.14、277.78 nm,含药量分别为9.240 1、8.743 6 mg/mL.转相超声乳化技术制备的亚微乳的稳定性和粒径分布有了显著提高.结论 转相超声乳化技术制备的莪术油亚微乳平均粒径更小,粒径分布更窄,含药量更高,稳定性更好,而且制备工艺设备简便,对改进亚微乳生产工艺具有重大参考价值.     

转相超声乳化技术制备莪术油亚微乳的理化性质研究

目的 考察转相超声乳化技术制备的莪术油亚微乳理化性质,并与高压乳匀法制备的莪术油亚微乳进行比较.方法 分别采用转相超声乳化技术和高压乳匀法制备莪术油亚微乳,比较其形态和粒径分布,HPLC法测定了其含药量,并进行稳定性比较.结果 转相超声乳化技术和高压乳匀法制得的亚微乳平均粒径分别为188.14、277.78 nm,含药量分别为9.240 1、8.743 6 mg/mL.转相超声乳化技术制备的亚微乳的稳定性和粒径分布有了显著提高.结论 转相超声乳化技术制备的莪术油亚微乳平均粒径更小,粒径分布更窄,含药量更高,稳定性更好,而且制备工艺设备简便,对改进亚微乳生产工艺具有重大参考价值.     

葛根素自微乳给药系统的制备及其质量评价

目的研究葛根素自微乳给药系统的处方工艺。方法通过溶解度试验、油和表面活性剂配伍试验,以及伪三元相图的绘制,筛选葛根素自微乳的处方组成;通过粒径、载药量和自微乳化时间优化了葛根素自微乳处方;并对葛根素自微乳的理化性质和稳定性进行了考察。结果葛根素自微乳处方中油相为中链甘油三酯(19.0%)、油酸(19.0%),表面活性剂为聚山梨酯80(19.0%)、聚氧乙烯蓖麻油(19.0%),助表面活性剂为1,2-丙二醇(19.0%),葛根素(5.0%)。自微乳化后粒径为(17.28±0.24)nm,自微乳化时间小于120 s;室温留样6个月,该自微乳性状、质量分数、粒径和自微乳化时间均无明显变化。结论所制备的葛根素自微乳粒径小、稳定性好,符合良好自微乳制剂的要求。     

基于药辅合一的葛根素川芎油亚微乳的研究

依据葛根和川芎的配伍作用研究药辅合一的亚微乳制剂的制备工艺,并对其物理药剂学性质进行评价。固定川芎油为油相,以微乳区面积为指标,采用滴水法绘制伪三元相图,筛选合适的乳化剂及助乳化剂制备川芎油亚微乳;以载油量为指标,优选最大载油的处方;再以葛根素替代部分表面活性剂,构建药辅合一的亚微乳制剂。测定所得亚微乳剂的粒径、电位、离心稳定性及放置稳定性,同时采用透析袋法对所得亚微乳制剂的释药行为进行考察,从而综合评价制得乳剂的质量。通过此法成功制备川芎油亚微乳剂,确定以聚氧乙烯蓖麻油-40为乳化剂,不添加助乳化剂;最大载油处方为川芎油∶聚氧乙烯蓖麻油-40∶水3∶7∶90;并成功进行葛根素对亚微乳制剂中乳化剂的替换,最大替换率为10%,最终确定的载药处方为葛根素∶川芎油∶聚氧乙烯蓖麻油-40∶水7∶30∶63∶900。对所得亚微乳剂的质量进行评价,结果显示所得乳滴的平均粒径为333.9 nm, PDI为0.26,Zeta电位为-10.12 mV,且离心稳定性良好。所得亚微乳放置50 d未见分层及析出等现象,稳定性良好。对其体外释药行为进行评价,亚微乳剂可完全释药。通过此法制得的葛根素-川芎油亚微乳制剂质量稳定,该乳剂体系可在一定程度上增大葛根素的溶解度,并体现一定的缓释作用。     

葛根素自微乳在大鼠体内药代动力学分析

目的:考察葛根素自微乳在大鼠体内的血药浓度经时过程,评价葛根素自微乳的药代动力学及相对生物利用度。方法:单剂量给予大鼠葛根素自微乳和葛根素混悬液,采用HPLC测定血浆中葛根素质量浓度,检测波长250 nm,流动相甲醇(A)-0.1%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0~30 min,20%~25%A;30~40 min,25%~40%A;40~50 min,40%A),运用DAS2.1.1程序拟合药物浓度-时间曲线,计算药代动力学参数及生物利用度。结果:葛根素自微乳和混悬液的tmax分别为0.71,1.1 h,Cmax分别为2.052,1.120 mg·L-1,AUC0-24 h依次为2.901,2.013 mg·h·L-1,葛根素自微乳相对于混悬液的生物利用度144.11%。结论:与葛根素混悬液相比,葛根素自微乳能显著提高葛根素在大鼠体内的生物利用度。     

牛至油注射亚微乳的安全性试验研究

目的 :对牛至油注射亚微乳进行安全性评价。方法 :采用体外溶血性试验和体内血管刺激性试验考察牛至油注射亚微乳的安全性。结果 :3%牛至油注射亚微乳在6h内无溶血现象,按低、中、高三个剂量组进行家兔静注给药均无血管刺激性,病理组织学研究结果表明,空白组和给药组无明显差异,不会对血管造成明显的病理损伤及影响。结论 :牛至油注射亚微乳刺激性小,安全性高,可用于静注给药。     

葛根素注射液对家兔不良反应的实验研究

 目的 研究葛根素注射液的不良反应情况及作用机制。 方法 参考反映Ⅱ型变态反应的免疫毒理学研究模型,以家兔耳缘静脉注射绵羊红细胞为阳性对照组,连续注射葛根素注射液（28.6 mg·kg-1）6 d,停药1 d,持续6周,停药当天观察家兔免疫系统大体症状如呼吸困难、喷嚏等,并监测体温;检测血液、尿液中溶血相关指标和肝肾功能指标;用Coombs实验法检测家兔血清体外使红细胞溶血情况;给药结束后处死家兔测定脏器指数,并进行组织学观察。 结果 家兔注射葛根素注射液3周开始出现尿潜血,第5、6周血浆游离血红蛋白显著增加,提示家兔可能出现血管内溶血。中性粒细胞数目从1周开始减少,其中第4周与对照组相比有显著性差异（P<0.05）,提示对粒细胞有损伤;淋巴细胞数目在第2周显著增加（P<0.05）;血小板数目于第6周显著增加;脏器指数显示胸腺增生,提示免疫系统参与此过程。血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）及肝脏病理学结果提示肝脏损伤。而免疫系统大体反应均未见显著变化。Coombs试验结果表明,3周后有67%的家兔血清在体外使与葛根素抗原共孵育的红细胞溶血,提示其含有葛根素抗体。结论 静脉注射葛根素注射液会引起家兔溶血、粒细胞减少、淋巴细胞增加及肝损伤等不良反应,其机制可能与Ⅱ型变态反应相关。     

葛根素制剂的研究进展

葛根素是中药葛根的活性成分之一,具有舒张血管、抗氧化、保护神经细胞及免疫调节等药理作用。但是葛根素的溶解度和生物利用度低、半衰期短。目前在临床使用的葛根素注射液、葛根素滴眼液、葛根素片等普通制剂存在需要多次、大剂量给药,此外葛根素注射液还有溶血、致敏等风险,限制了葛根素的临床应用。针对这些问题,现已开发出多种葛根素的新剂型,可提高葛根素的溶解度、生物利用度。     

葛根素注射剂致溶血的研究进展

葛根素注射剂在心脑血管疾病治疗中应用广泛,但其致溶血的不良反应已严重影响临床使用.作者系统介绍了葛根素注射剂致溶血的实验室和临床病例研究结果,并结合本课题组的前期研究工作对葛根素致溶血的机制和过敏原进行总结和评述.     

葛根素及其衍生物抗炎、抗痛风作用研究进展

该文综述了葛根素及其衍生物在抗炎、抗痛风方面的研究进展。葛根素可通过影响免疫细胞、炎性因子、信号通路等方式起到抗炎作用;同时可通过抑制黄嘌呤氧化酶、促进尿酸排泄降低血清尿酸水平,达到抗痛风作用。虽然与临床使用的别嘌醇相比,其体内降尿酸水平活性较低,但葛根素能增强机体总抗氧化和清除氧自由基的能力,且抗炎作用较强,因此预测,以葛根素为先导化合物,对其结构进行修饰或改造以期寻找活性好、副作用小的新型抗痛风药物将是一个有一定前景的研究方向。     

Alleviation of PEGylated Puerarin on Erythrocyte Hemolysis Induced by Puerarin in Glucose-6-phosphate Dehydrogenase- deficient Rats

Objective To explore and analyze the reducing hemolytic effects of PEGylated puerarin (PEG-PUE) on erythrocytes induced by PUE in glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD)-deficient rats. Methods The rat model with G6PD-deficiency was established via sc injecting 1% acetylphenyl-hydrazine. Then the G6PD-deficient erythrocyte suspension obtained from this rat model was used to evaluate the hemolytic effects of PUE and the reducing hemolytic effects of PEG-PUE via hemolytic activity and erythrocyte osmotic fragility assay. Results It was found that PUE could cause a serious hemolysis to the erythrocyte suspension with the increase of drug concentration and the prolongation of drug incubation time, the hemolytic rate of PUE was up to 40%, while the addition of PEG-PUE to the erythrocyte suspension revealed no significant hemolysis. Additionally, the result of erythrocyte osmotic fragility indicated that PEG-PUE exerted a slight effect on the erythrocyte membranes, and the NaCl concentration that induced 50% hemolysis (32 mmol/L) was about one-third PUE. Conclusion These results demonstrate that PEG-PUE could play a significant role in reducing the side effect of hemolysis induced by PUE. The low hemolytic activity of PEG-PUE makes it a favorable candidate for in vivo tests and PEG-PUE could also provide the useful insight for the further formulation development as an innovative drug.     

葛根素微乳凝胶的制备及体外释放考察

目的:制备葛根素微乳凝胶并考察其体外释放度。方法:采用Franz扩散池对葛根素微乳凝胶进行体外释放试验研究。结果:葛根素微乳凝胶在5 h内释放较快,6～24 h释放稳定。体外释放度经一级、零级和Higuchi方程3种常用的数学模型拟合,结果葛根素微乳凝胶的体外释药符合Higuchi释放模型。结论:葛根素微乳凝胶体外释放性能良好,有一定的缓释作用。     

Antiviral activity of puerarin as potent inhibitor of influenza virus neuraminidase

Puerarin is a major isofiavone compound isolated from the root of Pueraria lobata. It was reported that puerarin had antioxidant, antiinflammatory, antitumor, cholesterol lowering, liver protective, and neuroprotective properties. However, few studies have explored the antiviral effect of puerarin and its target mechanism related to influenza virus. Here, the antiinfluenza activity of puerarin in vitro and in vivo and its mode of action on the potential inhibition of neuraminidase (NA) were investigated. Puerarin displayed an inhibitory effect on A/FM/1/1947(H1N1) (EC₅₀ = 52.06 μM). An indirect immunofluorescence assay indicated that puerarin blocked the nuclear export of viral NP. The inhibition of NA activity confirmed that puerarin can block the release of newly formed virus particles from infected cells. Puerarin (100 and 200 mg/kg/d) exhibited effective antiviral activity in mice, conferring 50% and 70% protection from death against H1N1, reducing virus titers, and effectively alleviating inflammation in the lungs. The molecular docking results showed that puerarin had a strong binding affinity with NA from H1N1. The results of the molecular dynamics simulation revealed that puerarin had higher stable binding at the 150‐loop region of the NA protein. These results demonstrated that puerarin acts as a NA blocker to inhibit influenza A virus both in cellular and animal models. Thus, puerarin has potential utility for the treatment of the influenza virus infection.     

Neuroprotective Effects of Puerarin on 1‐methyl‐4‐phenyl‐1,2,3,6‐tetrahydropyridine induced Parkinson's Disease Model in Mice

Puerarin, an active component of Pueraria montana var. lobata (Willd.) Sanjappa & Pradeep is well‐known for its anti‐oxidative and neuroprotective activities. Although anti‐Parkinson's disease activity of puerarin was reported in both of in vivo and in vitro model, detailed mechanisms are not clarified. In this study, we addressed that puerarin attenuated 1‐methyl‐4‐phenyl‐1,2,3,6‐tetrahydropyridine (MPTP)‐induced behavioral deficits, dopaminergic neuronal degeneration and dopamine depletion. Puerarin administration enhanced glutathione (GSH) activity, glial cell line‐derived neurotrophic factor (GDNF) expression and PI3K/Akt pathway activation, which might ameliorate MPTP injection‐induced progressive elevation of reactive oxygen species (ROS) formation in mice. In addition to the effect on ROS, puerarin ameliorated MPTP‐reduced lysosome‐associated membrane protein type 2A (Lamp 2A) expression. Taken together, our data demonstrate that puerarin attenuates MPTP‐induced dopaminergic neuronal degeneration via modulating GDNF expression, PI3K/Akt pathway and GSH activation, which subsequently ameliorate MPTP‐induced ROS formation and decrease of Lamp 2A expression. Copyright © 2013 John Wiley & Sons, Ltd.