高发区乙型肝炎病毒致肝细胞癌风险的病毒学特征

目的 研究启东高发区人群慢性乙型肝炎病毒（HBV）HBeAg、共价闭环DNA（CCCDNA）的表达和HBV核苷酸1762／1764错义突变与肝细胞癌发生的关系。方法 自1989年1月至2002年12月,随访启东地区377例临床诊断为慢性HBV感染的中年男性,选取发生肝癌的32例患者,与年龄、职业、生活环境相匹配的慢性HBV感染患者32例组成巢式病例对照研究队列。采用ELISA法检测血清HBeAg表达情况,半巢式PCR扩增HBVcccDNA,巢式PCR扩增HBVX基因并测序,分析核苷酸1762／1764点突变,比较肝癌组和对照组在HBV风险特征上的差异。结果肝癌组和对照组血清HBeAg的阳性率分别是53．1％（17／32）和15．6％（5／32）（P〈0．01）;HBVcccDNA的阳性率分别是62．5％（21／32）和25．0％（8／32）（P〈0．01）;HBV核苷酸1762／1764的突变率分别为82．1％（23／28）和71．4％（20／28）（P=0．425）。结论 HBeAg和CCCDNA所反映的HBV滴度和活跃复制状态与肝癌的发生密切关联,可作为预测肝癌发生的风险指标。     

中国北方肝细胞癌与乙肝病毒感染的紧密关联性

目的确立乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)及丙肝病毒(hepatitis C virus，HCV)感染在中国北方肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)发生中的病因学地位。方法采用Abbott AxSym系统检测119例连续系列中国北方地区HCC病例的血清HBV、HCV标志，对血清HBV标志阴性病例，采用免疫组化、巢式PCR和DNA测序等对HBVX基因进行鉴定。结果119例HCC中，血清HBsAg阳性率为82．4％(98／119)；anti-HBc阳性率为94．1％(112／119)；4例血清HBsAg及anti-HBc均阴性病例中，3例HBVX基因阳性，因而HBV感染的阳性率达99．2％(118／119)。本组anti-HCV阳性率11．8％(14／119)，且均伴有HBV感染标志。结论中国北方地区HCC与HBV感染具有紧密关联性，是本地区HCC发生的主导病因。HCV感染是一个HOC发生的重要辅助因素。     

慢性乙型肝炎抗病毒治疗研究现状与热点

乙型肝炎病毒（乙肝病毒，HBV）感染极为广泛，60亿世界人口中有20亿人感染HBV，其中3．5亿～4．0亿人为慢性HBV携带者。慢性HBV感染引起慢性并发病发生，其中15％～40％将发展为肝硬化、肝衰竭或肝细胞癌，且有15％～40％患者死于肝硬化，有或无肝细胞癌。病死率男50％，女15％。据统计全世界每年死于慢性乙型肝炎（CHB）包括它的并发病者约100万人，代偿性肝硬化的5年病死率为16％，失代偿性肝硬化为86％。     

慢性乙型肝炎患者肝细胞内HBcAg分布与血清病毒学指标的相关性研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者肝细胞内HBcAg分布规律与血清病毒学指标的相关性。方法对958例慢性乙型肝炎患者的血清学、病毒学、免疫组织化学等资料进行对比分析。结果在肝细胞内HBcAg不同分布类型之间,血清HBeAg阳性率及HBV DNA载量均存在显著性差异（χ2值分别为364.01和417.41,P〈0.001）。其中,此两项指标以HBcAg核型和混合型分布组最高,HBcAg阴性组最低,而HBcAg浆型分布组的HBeAg阳性率及HBV DNA载量则介于上述两组之间。结论 HBcAg在受染肝细胞内的分布与血清病毒学指标之间具有明显的相关性,随着HBcAg分布态势由受染肝细胞核向细胞浆漂移到最终不能检测到,HBeAg阳性率及HBV DNA载量呈逐渐降低的趋势。     

胆管癌组织中肝炎病毒抗原的检测

目的：探讨胆管癌与乙型肝炎、丙型肝炎病毒感染的关系。方法：对20例胆管癌病人用酶免疫法检测血清抗－HBe、抗－HBc和抗－HCV，用电化学发光免疫测定法检测血清HBeAg、抗－HBs和HBeAg，采用免疫组化ABC法检测胆管癌和肝组织中HBeAg和CP10，用PAP法检测HBeAg。结果：20例胆管癌病人血清HBsAg、抗－HBe和抗－HBc的阳性率分别为45％、25％、35％和40％，HBV总的感染率为75％，血清抗－HCV阳性率为5％。癌组织中HBsAg和CP10的阳性率分别为55％和50％，而肝组织中二者的阳性率高达83．3％。结论：胆管癌可能与乙型肝炎病毒感染有密切关系，而且大多伴有丙型肝炎病毒重叠感染。     

肝细胞肝癌与乙、丙及庚型肝炎病毒感染相关的组织学证据

目的探讨肝细胞肝癌（HCC）与乙、丙及庚型肝炎病毒（HBV，HCV，HGV）感染的相关性。方法采用免疫组化方法检测HCC患者癌及癌旁肝组织中HBV，HCV及HGV表达状况。结果65例HCC患者中，共计52例（80．0％）检出以上三种肝炎病毒抗原，其中乙型肝炎表面抗原（HBsAg），HCVNSS和HGVNSS抗原阳性者分别为47（72．3％），30（46．2％）和10（15．4％）例。52例病毒标志阳性者中，HBV，HCV和HGV三重感染者5例，HBV／HCV，HBV／HGV或HCV／HGV二重感染者各25例，单纯HBV和HCV阳性者各18例和4例，无单纯HGV阳性者。各病毒主要在癌旁组织中表达，但HBV和HCV在癌组织中也较活跃。此外，间或可在肿瘤与正常组织移行处检出HBV或HCV表达，但未见HGV抗原阳性。混合感染、单独感染及病毒标志阴性的HCC比较，肿瘤分化程度无明显区别。结论我国HCC患者肝炎病毒混合感染普遍存在；除HBV和HCV外，HGV感染也可能与肝癌发生有一定关系。     

慢性肝病、原发性肝癌病人血清、肝组织纳米细菌的检测

目的 研究慢性肝病和原发性肝癌病人血清、组织中纳米细菌（NB）感染，为其发生机制提供新的认识。方法 55例慢性肝病（25例慢性乙肝和30例肝炎后肝硬化）、43例肝癌病人和336例健康人血清采用ELISA、免疫组化和钙染色；53例慢性肝病（28例慢性乙肝和25例肝硬化）、43例肝癌和15例对照肝组织行免疫组化染色，部分阳性组织透射电镜观察。结果 （1）慢性肝病、肝癌病人和健康人血清ELISA检测阳性率分别为20．0％、9．3％和8．0％，慢性肝病NB感染率高于健康人（P〈0．05）。免疫组化染色感染率分别为14．5％、4．7％和5．7％（P〈0．05）。钙染色分别为7．3％、4．7％和6．5％（P〉0．05）。（2）慢性肝病、癌及癌旁、对照组免疫组化阳性率分别为：20．8％、16．3％、14．0％和0％（P〉0．05）。部分肝癌和癌旁组织透射电镜观察发现纳米细菌样微生物结构（3／5）。结论 部分慢性肝病、肝癌病人血清、组织中存在纳米细菌感染，慢性肝病血清中纳米细菌感染率高于健康人。     

HBeAg阴性慢性乙型肝炎研究进展

乙型肝炎病毒 (HBV)感染是全球面临的严重公共卫生问题,全世界约20亿人曾感染HBV,其中3.5亿为慢性HBV感染者,每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌(HCC)[1].根据血清HBeAg的状况,慢性乙型病毒性肝炎可以分为HBeAg阳性和阴性两种[2].近年来的临床与基础研究表明,HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者所占的比例逐年增高,其分子病原学、流行病学、发病机制、自然进程、临床表现、预后、抗病毒治疗的方案与应答等诸多方面与HBeAg阳性的慢性乙型肝炎存在显著差别.……     

乙型肝炎病毒大蛋白与HBeAg检测的临床意义

目的探讨HBeAg与乙型肝炎病毒（HBV）大蛋白（LHBs）、HBVDNA检测的临床意义。方法采集175例慢性乙型肝炎患者的空腹静脉血清,采用荧光定量PCR方法检测HBVDNA,采用ELISA法检测LHBs、HBeAg。结果116例HBeAg阴性患者中LHBs与HBVDNA的阳性率分别为64．66％（75／116）、58．62％（68／116）;59例HBeAg阳性患者中LHBs与HBVDNA的阳性率分别为98．31％（58／59）、94．92％（56／59）。两者比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。124例HBVDNA阳性乙型肝炎患者LHBs吸光度值与HBVDNA拷贝数对数呈正相关关系（r=0．989,P〈0．05）,不同HBVDNA拷贝数之间,LHBs含量差异有统计学意义（F=146．8,P〈0．01）。结论LHBs可以反映临床乙型肝炎病毒复制水平。能够反映HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒复制情况。     

慢性乙型肝炎和肝硬化及肝癌与HLA-DQA1基因多态性关系的研究

目的:研究HLA-DQA1等位基因多态性与慢性乙型肝炎(HBV)病毒感染、肝硬化及肝癌的关系。方法:采用聚合酶链序列特异性引物(PCR-SSP)技术分别对168例慢性HBV感染者(包括48例慢性乙型肝炎、42例乙型肝炎肝硬化和78例乙型肝炎后肝癌患者)以及100例对照(感染后自发恢复者)进行HLA-DQA1等位基因的检测。结果:慢性HBV感染者HLA-DQA1*0102的表型频率显著低于对照组(25.6%vs47.0%,OR=0.39,Pc=0.003),DQA1*0601表型频率高于对照组(4.2%vs0,OR=0.96,P=0.039),但后者差异无统计学意义(Pc>0.05)。肝硬化患者DQA1*0104的表型频率显著低于无肝硬化患者(6.4%vs28.4%,OR=0.17,Pc=0.001),DQA1*0201的表型频率高于无肝硬化患者(27.7%vs12.2%,OR=2.76,P=0.014),但后者差异无统计学意义(Pc>0.05)。HLA-DQA1各等位基因的表型频率在肝癌患者与非肝癌患者间差异无统计学意义。结论:HLA-DQA1*0102等位基因可能降低慢性HBV感染的风险,而DQA1*0104等位基因可能降低乙型肝炎肝硬化的风险。乙型肝炎后肝癌的发生与HLA-DQA1等位基因无明显相关性。     

不同HBVDNA水平乙型病毒性肝炎肝硬化患者的临床特征及HBeAg状态比较

目的研究乙型病毒性肝炎（乙肝）肝硬化活动期患者HBVDNA水平与HBeAg状态的分布和临床特点及意义。方法调查337例乙肝肝硬化住院患者,采用荧光定量PCR方法检测HBVDNA载量,MEIA法检测HBV血清标志物,常规方法检测肝功能,同时行超声检查。比较不同HBVDNA水平患者中HBeAg阳性和阴性、不同Child—Push分级和肝癌患者的比例,以及不同年龄患者中不同HBVDNA水平和HBeAg状态患者的比例。结果80．4％（271／337）患者HBVDNA阳性,31．5％（106／337）患者HBeAg阳性,68．5％（231／337）患者HBeAg阴性。HBVDNA水平越高者中HBeAg阳性者比例越高,HBeAg阴性者比例越低;不同HBVDNA水平患者中不同Child-Pugh分级患者比例差异无统计学意义,但HBVDNA3～41g拷贝／ml患者中肝癌的比例高于HBVDNA〈31g拷贝／ml患者（P=0．014）和≥71g拷贝／ml患者（P=0．009）;HBeAg阴性患者比例随年龄增大而增加,但HBeAg阳性患者与阴性患者的临床特征差异无统计学意义。结论绝大多数乙肝肝硬化患者HBVDNA阳性,且2／3患者HBeAg阴性。长期抗病毒治疗可能有助于改善乙肝肝硬化患者的病情和预后。     

感染乙型肝炎病毒肝癌患者体内病毒活动状态及对外科治疗的反应

目的了解乙型肝炎病毒标志物阳性肝癌患者体内乙肝病毒的活动状态及外科治疗肝癌对其的影响。方法ＨＢＶＤＮＡ定性ＰＣＲ及免疫学方法检测９７例肝癌患者的血清乙肝病毒ＤＮＡ及其标志物,９７例患者分为２组,术前组６６例,术后组３１例;ＨＢＶＤＮＡ定量ＰＣＲ方法对２０例乙肝病毒阳性肝癌患者外科治疗前后血清中病毒的存在状态及血清中病毒ＤＮＡ复制数进行对比研究。结果术前组及术后组均有部分肝癌患者血清中可以发现复制型乙肝病毒,两组阳性率分别为４０９％、６４５２％,术后组较术前组有显著意义的升高（Ｐ＜００５）;２０例乙肝病毒阳性患者经外科治疗后血清中乙肝病毒ＤＮＡ复制数较术前有显著意义增加（Ｐ＜００１）。结论部分乙肝病毒阳性肝癌患者体内乙肝病毒仍然活跃复制;外科干预更加激发乙肝病毒的复制过程。建议在肝癌外科干预的同时应当防范乙肝的活动     

原发性肝癌组织RASSF1A异常甲基化与DNMTs及HBV的关系

目的探讨原发性肝癌ras相关结构域家族1A（ras association domain family 1A,RASSF1A）异常甲基化与肿瘤组织中DNA甲基转移酶（DNA methyltransferases,DNMTs）转录水平变化及HBV感染的关系.方法采用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）技术检测61例原发性肝癌组织RASSF1A基因异常甲基化情况,RT-PCR法检测其中三种主要DNA甲基转移酶（DNMT1、DNMT3A、DNMT3B）水平的变化.结果61例肝癌标本中RASSF1A基因启动子区异常甲基化45例（73.8%）;HBV感染者47例（77.1%）,其中MSP阳性32例;无HBV感染者14例,其中MSP阳性13例,RASSF1A基因异常甲基化与HBV感染之间的关系无统计学意义（x2=2.260,P=0.133）.肝癌组、肝癌细胞系组及HBV感染组DNMTs表达水平与正常对照组相比均显著升高;组内比较显示肝癌组中DNMT3A、DNMT3B在MSP阳性患者中较阴性患者升高（分别为t=3.494,P＜0.01;t=4.258,P＜0.01）,而DNMT1下降（t=3.221,P＜0.05）;HBV感染组中,MSP阳性组织其DNMT3B较阴性者升高（t=12.171,P＜0.01）.结论肝癌组织DNMTs水平变化与RASSF1A异常甲基化有密切关系;HBV感染与DNMT3B转录水平变化相关.     

原发性肝细胞癌中乙型肝炎病毒基因整合状态研究

目的：探讨原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC)与肝硬化（liver cirrhosis,LC)组织中乙型肝炎病毒（HBV）基因各片段的整合情况。方法：采用PCR与Southern杂交技术检测HCC与LC各35例肝组织标本DNA中是否存在HBV基因的整合。结果：HCC组中HBV DNA阳性率为94％（33/35), 其中X片段阳性率为92％（32／35）；HBV DNA整合率为69％（24／35），其中X片段整合率为69％（24／35），LC组中HBV DNA阳性率为94％（33／35），其中X片段阳性率为84％（29／35）；HBV DNA整合率为60％（21／35），其中X片段整合率为40％（14／35）。两组在X片段整合率上存在统计学差异（P＜0．05）。结论：HBV基因的整合在肝硬化与肝癌中是一个普遍的现象。HBV基因的整合是癌变的早期事件。HBV基因中的X片段的整合与HCC关系密切。     

复方肃毒星提取物抑制乙型肝炎病毒cccDNA的作用

目的研究复方肃毒星提取物（简称肃毒星）体外对乙型肝炎病毒（HBV）复制模板共价闭合环状DNA（cccDNA）的抑制作用。 方法通过细胞计数试剂盒CCK-8检测肃毒星在恩替卡韦耐药HBV稳定复制细胞系（HepG2.A64）、野生HBV稳定复制细胞系（HepG2.2.15和HepAD38）以及肝癌细胞系（HepG2）中的毒性作用；选择安全有效的高、中、低浓度肃毒星分别处理3个细胞系，采用实时荧光定量PCR法检测细胞内HBV cccDNA水平。以高斯荧光素酶微环cccDNA（mc-cccDNA）转染HepG2细胞，同时选择高、中、低浓度的肃毒星在不同时间点作用转染mc-cccDNA的HepG2细胞，荧光素酶检测试剂盒分析相对荧光强度，计算对cccDNA的抑制率，评价cccDNA转录活性。 结果肃毒星在HepG2.A64、HepG2.2.15、HepAD38和HepG2细胞中的半数毒性浓度分别为27.01 μg/ml、29.36 μg/ml、31.20 μg/ml和52.80 μg/ml。肃毒星对HepG2.A64、HepG2.2.15和HepAD38细胞中HBV cccDNA有抑制作用，最佳作用时间为5 d，5 d最大抑制率分别为（84.24 ± 2.1）%、（52.02 ± 4.74）%和（47.16 ± 6.69）%，与未用药处理组差异有统计学意义（P均< 0.05）。肃毒星对转染HepG2细胞后mc-cccDNA转录活性的最佳抑制率为（48.44 ± 4.54）%，抑制作用优于干扰素对照组（P < 0.05），略弱于特异性敲低mc-cccDNA的pLV-CRISPR处理对照组（P < 0.05），差异有统计学意义。 结论肃毒星对恩替卡韦耐药型和野生型细胞系HBV cccDNA的复制及转录均有很好的抑制作用，为慢性乙型肝炎功能学治愈新药的开发提供参考。     

霉酚酸对乙型肝炎病毒作用的体外实验

目的 探讨霉酚酸(MPA)在体外对乙型肝炎病毒(HBV)基因复制、病毒蛋白合成的影响。方法 将不同浓度的MPA(1～50nag／L)作用于2．2．15细胞，12d后用酶联免疫吸附试验检测培养上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)，狭缝印迹杂交法定量分析培养细胞内的HBV DNA。结果 霉酚酸对HV的复制起轻微的抑制作用，随着浓度的增加，抑制作用逐渐增强；50mg／L的MPA对HBsAg、HBeAg的抑制率分别为24．05％和30．20％，HBV DNA的表达量仅为对照组的49％。结论 霉酚酸具有抑制2．2．15细胞分泌HBsAg、HBeAg和复制HBV DNA的作用，并呈剂量依赖性。     

Impact of Intrahepatic Hepatitis B DNA and Covalently Closed Circular DNA on Survival After Hepatectomy in HBV-Associated Hepatocellular Carcinoma Patients

Background

Chronic hepatitis B virus (HBV) infection induces persistent but ineffective immune activation that contributes to necroinflammation, fibrosis, and risk of hepatocellular carcinoma (HCC). This study aims to determine the relationship of intrahepatic total HBV (ih HBV) DNA and covalently closed circular DNA (cccDNA) with necroinflammation and fibrosis, and their impact on prognosis after resection in HBV HCC patients.

Methods

Data are from 111 patients treated with primary liver resection for HBV HCC at Mount Sinai, New York (1991–2008). ih HBV DNA and cccDNA were quantitated by real-time PCR. Necroinflammation was graded according to histologic activity index (HAI), and liver fibrosis was staged by the modified Ishak method.

Results

A total of 106 (95 %) and 89 patients (80 %) had detectable ih HBV DNA and cccDNA, respectively, while 43 % had detectable serum HBV DNA. cccDNA made up a small proportion of ih HBV DNA (median cccDNA/ih HBV DNA ratio = 0.022). Higher levels of ih HBV DNA were associated with higher HAI and serum alanine aminotransferase (ALT), while a lower ratio of cccDNA/ih HBV DNA was associated with higher HAI, ALT, and Ishak fibrosis stage. ih HBV and cccDNA were not associated with survival, but the lowest quintile of cccDNA/ih HBV DNA ratio (<0.0024) was independently associated with poor overall survival.

Conclusions

A lower cccDNA/ih HBV DNA ratio was associated with greater necroinflammation and liver fibrosis, and was independently associated with poor overall survival. Thus, intracellular virus loads and relative proportions of virus DNA reflect histologic damage in the liver and influence the clinical outcome of HBV HCC patients.     

乙肝相关性肝癌和丙肝相关性肝癌的临床病理特征及意义

【摘要】〓目的〓探讨乙肝相关性肝癌和丙肝相关性肝癌在临床病理特征的差异,以及这些差异的临床意义和对预后的影响。方法〓收集2003年12月~2010年10月在南方医科大学附属南方医院行手术治疗C-HCC标本18例和2011年3月~2012年12月行手术治疗的B-HCC标本34例,以及这些肝癌患者的临床病理资料。分析乙肝相关性肝癌和丙肝相关性肝癌在临床病理特征的差异,以及这些差异的临床意义和对预后的影响。结果〓乙肝相关性肝癌平均年龄(46.9±10.5)显著低于丙肝相关性肝癌组(59.0±9.9),平均住院天数(17.9±6.8)显著低于丙肝相关性肝癌组(34.9±16.5),平均术后住院天数(11.5±4.3)显著低于丙肝相关性肝癌组(19.4±11.9),肝功能分级中A级肝功明显较丙肝相关性肝癌组多,最大肿瘤直径明显大于丙肝相关性肝癌组,差异均有统计学意义(P<0.05)。B-HCC组患者中位无瘤生存时间为13个月,1年、2年无瘤生存率分别为56.3%和32.0%;C-HCC组患者中位无瘤生存时间为16.5个月,1年、2年无瘤生存率分别为75%和75%。Cox模型分析提示肝炎类型是肝细胞癌术后复发的独立影响因素。乙肝相关肝细胞癌术后复发的风险是丙肝相关性肝癌的2.35倍(P=0.108)。结论〓乙肝病毒与丙肝病毒相关肝细胞癌的临床病理特征及预后有显著差异。乙肝相关性肝癌术后恢复较丙肝相关性肝癌快,而丙肝相关肝细胞癌术后复发风险低于乙肝相关肝细胞癌。