神经干细胞移植对Alzheimer病的影响

阿尔茨海默综合征（Alhzeimer disease,AD）是典型的神经退行性疾病,传统治疗方法是药物治疗和外科手术治疗,但长期疗效并不显著。通过移植具有分化为神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞能力的神经干细胞替换AD病中丢失的细胞达到治疗目的。     

神经干细胞与嗅成鞘细胞共培养 共移植对大鼠阿尔茨海默病的影响

<正>阿尔茨海默病(AD)是一种严重危害中老年人身心健康的中枢神经系统退行性疾病,其临床表现为进行性记忆力减退和智力下降,主要神经病理特征是大脑皮质神经细胞丧失、神经突触减少,细胞外存在大量由β-淀粉样蛋白     

慢性吗啡处理及戒断对大鼠不同脑区突触素ImRNA表达水平的影响

目的 :探讨慢性吗啡处理及戒断对大鼠中脑腹侧被盖区 (VTA)、伏隔核 (NAc)、中脑导水管灰质 (PAG)、杏仁核 (AMG)、海马CA1区 (HIPCA1)突触素ⅠmRNA表达水平的影响。方法 :吗啡组大鼠ip吗啡 10d ,每日两次 ,剂量递增 ,对照组大鼠注射等量生理盐水。于末次注射后 3h及 72h处死 ,取脑并做冰冻切片。利用原位杂交技术检测各脑区突触素ⅠmRNA的水平并作同期比较。结果 :3h处死时 ,吗啡组大鼠突触素ⅠmRNA表达水平在VTA显著高于同期对照 (P <0 .0 1) ,在NAc、HIPCA1显著低于同期对照 (P <0 .0 5 )。自然戒断 72h时 ,吗啡组大鼠突触素ⅠmRNA表达水平在VTA仍显著高于同期对照 (P <0 .0 1) ,在AMG、HIPCA1显著低于同期对照(P <0 .0 5 )。结论 :吗啡慢性处理及戒断大鼠突触素ⅠmRNA表达在不同脑区有选择性的改变 ,可能是阿片依赖及戒断的分子机制之一     

Noggin基因修饰对Aβ致伤神经干细胞凋亡及突触素表达的影响

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)R病人群大多数为中老年人.此病患者经常记不清发生的事情,认不出熟悉的人,而且在行为神态上呈现出呆傻状态.这主要是因为病人的中枢神经受到此病的侵害,中枢神经不能正常工作.年龄越大的人患病的可能性越大.因此,由该病引起的死亡排在临床死亡原因的第四位.此类疾病的病理是:病患的神经细胞遭到破坏,影响病患的部分身体机能的工作.治疗该病的关键在于病变神经元的恢复和替换.婴儿和成年人的大脑内都有神经干细胞.利用神经干细胞移植入受损的神经组织,更换和修复受损的神经元,以恢复大脑的正常功能,是用于AD的治疗未来的一个重要方向.     

神经干细胞移植对Alzheimer病大鼠脑形态及动物行为学影响

目的 :观察移植入 Alzheimer病 (AD)大鼠脑内的神经干细胞存活、分化及功能。方法 :由新生大鼠海马分离培养神经干细胞 ,采用切断穹窿海马伞的方法制作 AD大鼠模型 ,模型建立 8～ 10 d后行神经干细胞移植。移植 1个月后 ,通过暗回避试验检测大鼠的学习记忆能力 ,应用尼氏染色 ,乙酰胆碱酯酶 (Ach E)染色观察体内移植神经干细胞的存活 ,分化以及 AD大鼠 Ach E纤维密度的变化。结果 :神经干细胞在额叶和海马都能够存活 ,分化成神经元 ,可与宿主建立突触联系 ,在海马区移植神经干细胞的生长优于额叶。与对照组相比 ,接受神经干细胞移植鼠的暗回避潜伏期变长 (P <0 .0 5 ) ,探索次数减少(P<0 .0 5 ) ,海马 Ach E纤维密度增加 (P <0 .0 5 )。结论 :神经干细胞能够在 AD大鼠额叶、海马存活、分化 ,并可导致 Ach E纤维密度增加 ,AD大鼠学习、记忆能力改善     

慢性吗啡处理及戒断对大鼠不同脑区突触素ⅠmRNA表达水平的影响

目的 :探讨慢性吗啡处理及戒断对大鼠中脑腹侧被盖区 (VTA)、伏隔核 (NAc)、中脑导水管灰质 (PAG)、杏仁核 (AMG)、海马CA1区 (HIPCA1)突触素ⅠmRNA表达水平的影响。方法 :吗啡组大鼠ip吗啡 10d ,每日两次 ,剂量递增 ,对照组大鼠注射等量生理盐水。于末次注射后 3h及 72h处死 ,取脑并做冰冻切片。利用原位杂交技术检测各脑区突触素ⅠmRNA的水平并作同期比较。结果 :3h处死时 ,吗啡组大鼠突触素ⅠmRNA表达水平在VTA显著高于同期对照 (P <0 .0 1) ,在NAc、HIPCA1显著低于同期对照 (P <0 .0 5 )。自然戒断 72h时 ,吗啡组大鼠突触素ⅠmRNA表达水平在VTA仍显著高于同期对照 (P <0 .0 1) ,在AMG、HIPCA1显著低于同期对照(P <0 .0 5 )。结论 :吗啡慢性处理及戒断大鼠突触素ⅠmRNA表达在不同脑区有选择性的改变 ,可能是阿片依赖及戒断的分子机制之一     

生长相关蛋白和突触素对突触可塑性的影响

GAP-43为生长相关蛋白,涉及轴突末梢的生长及突触结构重建。而P38则参与多种突触相关活动,与其他囊泡蛋白相互配合调节突触囊泡的停靠与融合,实现Ca2＋依赖性神经递质释放过程。最近的研究进一步证实,P38和GAP-43除作为突触结构及功能的标记物外,也参与突触可塑性发育,这些研究提示,     

脑缺血大鼠脑脊液对神经干细胞存活及分化的影响

目的：探讨脑缺血大鼠脑脊液对新生大鼠海马神经干细胞生存及分化的影响。方法：将脑缺血大鼠脑脊液加入神经干细胞的培养液中，观察神经干细胞存活及贴壁细胞团的分化．并应用免疫细胞化学技术对神经干细胞分化情况进行鉴定。结果：悬浮培养细胞实验组较对照组有明显差异；贴壁培养细胞分化的细胞数量较对照组明显增多。结论：脑缺血大鼠脑脊液可促进体外培养神经干细胞存活，并且促进神经干细胞向神经元和星形胶质细胞分化。     

嗅成鞘细胞与神经干细胞共移植对阿尔茨海默病大鼠海马生长相关蛋白-43表达的影响

目的探讨嗅成鞘细胞(OECs)与神经干细胞(NSCs)共移植对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马生长相关蛋白(GAP)-43表达的影响。方法雄性SD大鼠双侧穹隆-海马伞切断,建立AD大鼠模型。实验动物分为4组:NSCs移植组、NSCs与OECs共移植组、AD模型组、正常对照组,每组30只。从SD胎鼠(孕16～18d)取材,在体外分别培养和共培养OECs与NSCs,并将共培养的OECs与NSCs移植于AD大鼠大脑侧脑室;观察各组大鼠行为学、宿主脑海马GAP-43和NOS阳性神经元表达的变化。结果①NSCs与OECs共移植组潜伏期明显缩短、通过平台次数明显增加,与NSCs移植组、AD模型组差异有统计学意义(P<0.05)。②反转录聚合酶链反应(RT-PCR)与Western Blot分析,NSCs与OECs共移植组宿主脑海马GAP-43mRNA和GAP-43蛋白的表达量高于NSCs移植组、AD模型组(P<0.05)。③NSCs与OECs共移植组NOS阳性细胞(22.2±1.7)较NSCs移植组(13.1±1.9)、AD模型组(7.1±0.9)明显增多(P<0.05)。结论嗅成鞘细胞与神经干细胞共移植能促进宿主脑海马GAP-43的表达,其可能在AD大鼠中枢神经系统损伤时具有促进神经再生和修复的作用。     

电刺激小脑顶核对HIBD新生大鼠超微结构及突触素表达的影响

目的 探讨电刺激对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠海马CAI区突触超微结构和突触素表达的影响.方法 按Rice法制作HIBD新生SD大鼠模型,共计120只,随机分为电刺激组和模型组,同时设假手术对照组(简称对照组)60只.各组术后又按3、7、14、21d随机分为4组.电刺激组大鼠于术后第2d开始给予电刺激,刺激结束...     

神经营养素对培养的新生大鼠神经干细胞分化的影响

为了了解不同神经营养因子对体外培养不同时间的大鼠脑神经干细胞(NSCs，Neural stem cells)分化的影响，采用BDNF、GDNF、CNTF、NGF和PDGF，以及腺苷酸环化酶激动剂forskolin等对新生大鼠脑神经干细胞进行诱导。研究发现，BNDF、GDNF、CNTF对体外培养3个月内的NSCs分化为神经元均有不同程度的作用，其     

共移植体对神经干细胞向神经元分化的影响

目的:探讨共移植体所构成的微环境对神经干细胞移植后向神经元分化的影响。方法:48只同一基因背景的Wistar大鼠,随机分为:NSCs移植组,共移植体移植组。在新生的同一基因背景鼠海马取神经干细胞和大脑皮质取血管内皮细胞,把单独NSCs和共移植体移植入同一基因背景大鼠MCAO造模后24h缺血半暗带区,Brdu标记其中NSCs,利用免疫荧光双标于3d,7d,14d,60d分别观察NSCs向神经元分化情况。结果:在7d,14d,60d三个时间点神经干细胞向神经元分化中,共移植体组神经元分化率高于NSCs组,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:共移植体对移植入MCAO模型大鼠的NSCs向神经元分化有促进作用。     

蛛网膜出血模型大鼠海马中突触素表达及其意义

目的:通过检测蛛网膜出血模型大鼠海马中突触素表达,探讨其表达意义。方法:模型大鼠建立成功后,在健康雄性SD大116只,随机分为SAH模型组,SAH模型假手术组,正常对照组,SAH模型组分1d组,7d组,30d组等3个亚组,模型建立成功后,在1d,7d,30d检测海马中其P38表达,采用RT-PCR、western blot方法检测mRNA及蛋白表达。结果:SAH模型组与对照组有明显差异(P0.05,P0.01),模型组明显低于对照组。模型组内比较,光密度校对值1d、7d组时明显低于30d组,1d组最低(P0.05,P0.01)。结论:蛛网膜下腔出血大鼠海马组织中P38表达的变化表明与学习记忆重要关系。     

移植神经干细胞在脑缺血大鼠损伤脑区的定向分化及其对运动功能的影响

目的:研究神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脑缺血模型损伤脑区结构和功能的影响。方法:从新生的Wistar大鼠脑组织中分离、培养NSCs。制作大鼠脑缺血再灌注模型,24h后移植BrdU标记的NSC于梗死灶同侧的侧脑室。记录损伤和移植后的大鼠运动功能评分,研究移植后的NSC迁徙、定向分化的情况及其与宿主细胞间的关系。结果:大鼠NSCs移植后部分可在体内存活并迁徒至脑缺血病灶区,在缺血区内能分化成为神经元细胞并与宿主神经细胞形态一致,运动神经功能评分与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。结论:移植的NSCs对缺血损伤脑区结构有修复作用,可改善脑缺血模型动物运动功能。     

人神经干细胞移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究

目的研究人神经干细胞（hNSCs）移植对大鼠脊髓损伤的修复作用，并初步探讨其作用原理。方法分离、培养和鉴定hNSCs。24例成年SD大鼠分为移植组12例和对照组12例，均采用NYU-Ⅱ型脊髓打击器制作脊髓损伤模型，第9天移植组于损伤脊髓中心分别注入经CM-DiI标记的hNSCs混悬液，对照组注入人DMEM／F12培养液。术后第4、8周取损伤部位脊髓，免疫组织化学染色检测移植细胞的存活和分化；术后每7天行BBB评分，评定大鼠后肢运动功能恢复情况。数据进行成组设计资料的t检验。结果成功建立hNSCs的体外培养体系；移植的hNSCs在大鼠脊髓内存活超过8周，并向脊髓损伤头尾端迁移，免疫组织化学荧光染色示移植细胞可分化为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞；移植组大鼠BBB评分高于对照组（P〈0．05）。结论移植到大鼠损伤脊髓中的人神经干细胞可分化为神经元和神经胶质细胞，并可促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复。     

运动对快速老化小鼠海马突触素表达的影响

目的研究运动对快速老化小鼠（SAMP8）海马突触素表达的影响,探讨运动改善阿尔茨海默病（AD）学习记忆功能的机制。方法 3月龄SAMP8小鼠40只随机分为运动组（采用跑笼运动训练）和对照组,2个月后HE染色观察2组海马神经元形态改变;免疫组化技术检测2组海马突触素表达。结果 5月龄SAMP8小鼠对照组海马部分神经元细胞变性、死亡,核浓缩,空泡变性;运动组偶有神经元细胞变性、死亡,大部分细胞形态正常。海马突触素表达运动组较对照组显著增高（P〈0.05）。结论运动可以延缓SAMP8小鼠海马神经元变性,提高海马突触素表达,这可能是运动改善AD学习记忆功能的重要机制之一。     

阿尔茨海默病患者来源的诱导多能干细胞向神经干细胞及神经元的诱导分化

目的将阿尔茨海默病(AD)患者、年轻人和认知正常老年人的血细胞重编程为诱导多能干细胞(i PSC),进一步分化为神经干细胞(NSC)和神经元,观察不同来源i PSC向NSC和神经元分化时细胞表型和功能的变化。方法取年轻人、认知正常老年人和AD患者来源的外周单核巨噬细胞,引入转录因子Oct3/4,Sox2,c-Myc和Klf4重编程为i PSC,进一步诱导为NSC和神经元;应用Incu Cyte ZOOM动态细胞观察系统记录分化过程中细胞生长曲线及神经突生长情况;Ed U增殖试剂盒检测细胞增殖能力;采用NSC标记物Nestin,Sox1,Sox2和Ki67对诱导得到的NSC鉴定,双肾上腺皮质激素(DCX)对诱导得到的新生神经元鉴定;采用全细胞膜片钳记录分化神经元钠电流、钾电流以及诱发动作电位。结果经过7 d诱导,i PSC可分化为NSC,年轻人和认知正常老年人以及AD患者NSC均表达NSCs标记物Nestin,Sox1,Sox2和Ki67。NSC传代过程中,AD患者来源NSC生长曲线低于年轻人和认知正常老年人;Ed U结果显示AD患者来源NSCs中Ed U阳性细胞比例显著少于年轻人和认知正常老年人;AD患者来源NSC传代过程中DCX阳性细胞比例明显高于年轻人和认知正常老年人,且可记录到K+电流、Na+电流以及诱发动作电位;进一步将NSC向神经元定向分化结果显示,AD患者DCX阳性新生神经元比例以及神经突的生长速度明显大于年轻人和认知正常老年人;膜片钳结果显示AD患者来源神经元K+电流和Na+电流明显大于年轻人和认知正常老年人,动作电位频率和幅度也大于年轻人和认知正常老年人。结论年轻人、认知正常老年人和AD患者的i PSC能够诱导分化为NSC和神经元;AD患者来源NSC增殖能力显著低于年轻人和认知正常老年人;且AD患者来源NSC更容易向神经元分化,分化的神经元表现出更强的兴奋性。     

突触体素在大鼠蛛网膜下腔出血后脑组织中的表达

目的探讨蛛网膜下腔出血(SAH)后突触体素(Syn)在大鼠脑组织中的表达变化。方法成年健康雄性SD大鼠42只,随机均分为正常(BC)组、生理盐水对照(MC)组和5个SAH模型组(D1-5组,用非肝素化动脉血注入视交叉池建模)。D1-5组大鼠分别在SAH后1、3、5、7、14d处死,取颞叶皮层、海马、小脑标本,用Western blot和免疫组化法测定Syn表达。结果与BC组和MC组比较,D1、D2、D3和D4组Syn蛋白表达明显降低(P<0.05),D5组Syn蛋白表达与BC组和MC组相仿(P>0.05)。结论 Syn的表达在SAH后第1天明显下降,其后逐渐上升,至14d时基本恢复正常。     

梓醇对大鼠梗死灶周围大脑皮质神经元树突生长及突触素表达的影响

目的观察梓醇对局灶脑缺血大鼠梗死灶周围大脑皮质(peri-infarction cortex,PIC)锥体神经元树突生长及突触素p38蛋白表达的影响,探讨其促脑卒中后神经修复作用及机制。方法 57只清洁级成年SD大鼠,随机分为假手术组,模型组,生理盐水组,梓醇低、中、高剂量(分别为1、5、10 mg·kg-1)组和胞磷胆碱(0.5 g·kg-1)对照组。开颅电凝右侧大脑中动脉制备局灶永久性脑缺血模型。于造模后24 h开始腹腔注射不同剂量梓醇或胞磷胆碱,每日1次,连续7d。术后1、4、7和15 d采用角落实验评估神经缺失功能恢复状况;术后1 d和15 d磁共振成像测量脑梗死体积;术后15 d,断头取脑,Golgi-Cox染色显示PIC区锥体神经元树突变化,免疫荧光组织化学染色及Western blot检测PIC区突触素p38蛋白表达。结果梓醇各剂量组和胞磷胆碱组术后7 d和15 d神经功能恢复明显优于模型组和生理盐水组(P<0.05);术后1 d、15 d,各实验组脑梗死体积差异无显著性(P>0.05);梓醇中剂量组PIC区锥体神经元树突分支数和树突棘密度均比模型组、生理盐水组和胞磷胆碱组明显增加(P<0.05);梓醇各剂量组PIC区突触素p38表达均比模型组、生理盐水组和胞磷胆碱组明显上调(P<0.05)。结论梓醇可增强局灶脑缺血大鼠PIC区锥体神经元树突可塑性,上调突触素p38表达,促进神经缺失功能恢复。     

银杏叶提取物对局灶性脑缺血/再灌注大鼠突触素表达的影响

目的：研究银杏叶标准提取物（EGB）对局灶性脑缺血／再灌注损伤（I／R）后突触素表达的影响．并探讨其可能的机制。方法：Wistar大鼠随机分为假手术组,I／R模型对照组和EGB干预组,采用线栓法制造大鼠大脑中动脉阻塞／再灌注（MCAO／R）模型,MCAO2h后恢复再灌注．用免疫组化方法检测再灌注后1d、3d、7d、14d、21d五个时间点突触素（SYN）的表达。结果：I／R对照组自再灌注1d起,梗死灶周围皮质SYN表达开始下降（P〈0．05）．3d降至最低（P〈0．01）,7d开始逐渐回升,14d超过正常水平（P〈0．05）。EGB干预组．从1d后各时间点SYN表达显著高于I／R对照组（P〈0．05）。结论：I／R大鼠术后SYN表达变化明显,表明脑缺血再灌注损伤后存在突触可塑性．EGB可以易化这种突触可塑性。