rhG—CSF增加实验性脑缺血周围区的nestin蛋白表达

目的研究重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulatingfactor,rhG-CSF)对大鼠局灶性脑缺血的神经元保护作用.方法用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,于再灌注不同时间点对治疗组和对照组进行神经缺损评分(NSS);并用免疫组织化学方法测定神经上皮干细胞蛋白(nestin)的表达.结果与对照组相比,rhG-CSF治疗组大鼠的神经缺损评分明显降低(P＜0.05);治疗组脑梗死区周围的nestin表达较对照组增多.结论脑缺血再灌注后,一定剂量rhG-CSF可能通过提高nestin的表达,增加神经细胞的修复,改善脑卒中的预后.     

rhG—CSF改变大鼠局灶性脑缺血预后的初步研究

目的　 研究重组人粒细胞集落刺激因子 (recombinanthumangranulocytecolony stimulatingfactor,rhG CSF)对大鼠局灶性脑缺血预后的影响以及与微管相关蛋白 (macrotubule associatedprotein 2 ,MAP 2 )mRNA表达的关系。 方法　 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型 ,观察rhG CSF对死亡率和神经功能评分的影响。用半定量逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,测定rhG CSF用药组和非用药组的MAP 2mRNA表达水平的改变。 结果　 比较rhG CSF治疗组与非用药组 :治疗组大鼠 ,局灶性脑缺血再灌注后死亡率显著降低 ,神经功能评分明显改善。治疗组缺血侧脑组织的MAP 2mRNA表达明显提前恢复正常。结论　一定剂量的rhG CSF可以减轻脑缺血再灌注损伤 ,保护神经元 ,改善功能预后。     

rhG-CSF增加脑缺血周边区脑源性神经营养因子的表达

目的　 观察重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)是否能改善局灶性脑缺血大鼠的神经功能 ,以及其对脑缺血周边区脑源性神经营养因子 (BDNF)表达的影响。方法　线栓法复制大鼠大脑中动脉梗死模型 ,皮下给予rhG CSF ,10 μg/ (kg .d) ,连续 5d。进行神经功能评分并采用免疫组织化学法观察脑组织中BDNF的表达。进行nestin和BDNF的免疫双标染色。结果　 手术 7,14 ,2 1d干预组的神经功能缺损评分分别为 4 .0 0± 0 .89,3.83±1.17,3.5 0± 1.38,对照组分别为 5 .5 0± 1.38,5 .83± 1.4 7,5 .6 6± 1.6 3,干预组明显低于对照组 ,差别有显著性 (P<0 .0 5 )。干预组梗死边缘区的BDNF免疫阳性细胞数较对照组明显增加 (P <0 .0 5 )。梗死边缘区可见nestin和BDNF双阳性细胞。结论　粒细胞集落刺激因子可增加脑缺血之后梗死边缘区BDNF的表达和改善神经功能     

人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)治疗急性脑梗死的短期评估

目的通过随机、安慰剂对照的临床研究,对人重组粒细胞集落刺激因子(rhG—CSF)治疗急性脑梗死的有效性及安全性进行客观评价。方法将50例发病1周的急性脑梗死患者随机分为rhG-CSF治疗组和对照组。其中rhG—CSF治疗组为25例,给予rhG—CSF皮下注射2μg／kg,连续使用5d。对照组25例,按同样方式给予安慰剂。评定的终点指标包括急性脑梗死治疗后第10天、第20天的神经功能缺损评分NIHSS评分以及副作用。结果经治疗后,rhG-CSF治疗组第20天NIHSS评分与治疗前有显著性差异(P=0．004,P<0．01)、第20天治疗组和对照组两组间差异有显著性(P=0．007,P<0．01)。结论 rhG—CSF治疗急性脑梗死在短时间内观察有效,未见不良反应。其在适应证、治疗剂量及用药时限等方面与临床疗效的关系有待进一步研究。     

重组人粒细胞集落刺激因子对实验性脑出血大鼠星形胶质细胞表达的影响

背景：星形胶质细胞是中枢神经系统的主要成分之一,具有对各种损伤产生强烈反应的特性,脑出血后星形胶质细胞大量表达、活性增强,这种由常态转变为反应性状态的星形胶质细胞的病理生理学意义是目前研究热点。 目的:探讨重组人粒细胞集落刺激因子对脑出血后星形胶质细胞表达的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2006-03/11在泸州医学院中心实验室完成。 材料：清洁级健康雄性SD大鼠50只,随机分为3组：假手术组10只、模型组20只、实验组20只。重组人粒细胞集落刺激因子为深圳新鹏生物工程有限公司产品。 方法：模型组、实验组利用鼠脑立体定向仪、采用断尾取自体血法制备脑出血动物模型,假手术组用等量生理盐水代替自体血,余干预措施与模型组一致。造模1 h后,实验组大鼠腹腔注射重组人粒细胞集落刺激因子 60 μg/kg,余2组未注射任何物质。 主要观察指标：分别于干预后6 h,24 h,48 h,72 h,7 d采用免疫组织化学ABC法检测胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的表达。 结果：假手术组未见胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的表达。模型组干预6 h即有少量胶质纤维酸性蛋白阳性细胞表达,48 h后开始增多,至72 h胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数量达高峰(P < 0.05),7 d后仍有大量胶质纤维酸性蛋白阳性细胞表达,但较72 h时有所减少。实验组干预6 h时胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的表达与模型组相似,干预24 h,48 h,72 h,7 d时胶质纤维酸性蛋白阳性细胞较模型组明显减少( P < 0.05),细胞变形程度减轻。 结论：重组人粒细胞集落刺激因子能够抑制脑出血后星形胶质细胞的过度活化,可能对损伤脑组织重建和功能恢复起重要作用。     

重组人粒细胞集落刺激因子对脑梗死大鼠的神经保护作用及对脑组织Fas蛋白表达的影响

目的 研究重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对脑梗死大鼠的神经保护作用以及对脑组织Fas蛋白表达的影响.方法 线栓法制作大鼠脑梗死模型36只,随机分为rhG-CSF组和对照组,rhG-CSF组术后当日起给予rhG-CSF 50 μg/kg皮下注射,每日1次.比较两组术后不同时间点神经功能缺损评分(NSS)、病灶体积、脑组织形态学变化和Fas蛋白表达水平.结果 rhG-CSF组大鼠术后3 d、5 d时NSS明显高于对照组(均P＜0.01);梗死体积明显小于对照组(P＜0.05～0.01);术后5 d时神经细胞损伤明显轻于对照组;术后1 d、5 d时Fas蛋白表达水平明显低于对照组(P＜0.05～0.01).结论 rhG-CSF对脑梗死大鼠具有神经保护作用,可以降低Fas蛋白的表达水平.     

人重组粒细胞集落刺激因子对大鼠脑出血周围区新生血管的影响

背景：研究表明人重组粒细胞集落刺激因子可动员内皮前体细胞，增加脑缺血区域新生血管生成。 目的：观察人重组粒细胞集落刺激因子对大鼠脑出血周围区新生血管的影响。 设计、时间及地点：随机分组设计的动物对照实验，于2006-03/11在泸州医学院中心实验室完成。 材料：健康雄性SD大鼠72只，人重组粒细胞集落刺激因子。 方法：72只大鼠按随机数字表法分为3组，假手术组、脑出血组、治疗组，每组24只。断尾取自体血通过鼠脑立体定向仪注入鼠脑内制备脑出血模型，假手术组用生理盐水代替自体血。治疗组于制模后1 h腹腔注射人重组粒细胞集落刺激因子60 μg/kg。假手术组、脑出血组不做任何处理。 主要观察指标：于6，12，24，48，72 h，7 d 6个时间点检测血肿周围区CD34+血管的表达，每个时间点检测4只。利用内皮细胞的标志性抗原CD34变化了解微血管的生成情况，CD34抗原也越多，新生血管越多。 结果：脑出血组CD34＋血管数明显高于假手术组（P < 0.05）；治疗组CD34＋血管数明显高于脑出血组（P < 0.05），且在72 h增多明显，与7 d比较差异无显著性意义（P > 0.05），但与6，12，24，48 h比较差异有显著性意义（P < 0.05）。 结论：人重组粒细胞集落刺激因子能够促进脑出血后血肿周围新生血管生成。     

粒细胞集落刺激因子和促红细胞生长素单药或联合治疗急性脑梗死的临床分析

目的 (1)观察重组人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和重组人促红细胞生长素(EPO)单用或联合应用对大鼠脑缺血再灌注(I/R)后的保护作用。(2)探讨临床应用G-CSF和EPO治疗急性脑梗死的疗效及安全性。方法 (1)大鼠实验:72只大鼠制备局灶性I/R模型,分为G-CSF组(给予G-CSF)、EPO组(给予EPO)和对照组(均n=24),各组又分为1 d、7 d、14 d、28 d,共4个亚组(均n=6)。于再灌注后不同时间点进行神经功能评分及梗死面积检测。(2)临床试验:72例急性脑梗死患者随机分为治疗组(36例)和对照组(36例)。两组均按急性脑梗死常规方法治疗,治疗组在此基础上分别添加G-CSF(GCSF亚组,12例)、EPO(EPO亚组,12例)和G-CSF+EPO联合(G-CSF+EPO亚组,12例)治疗。采用美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)和改良Rankin量表进行评分。结果 (1)大鼠实验:再灌注后14和28 d,两组神经功能评分均高于对照组(P0.05),梗死面积均明显小于对照组(P0.05)。(2)临床试验:治疗后1、7和14 d各组NIHSS评分和改良Rankin量表评分比较差异无显著性(P0.05)。与对照组比较,治疗后28 d、3个月、6个月、1年、2年各治疗亚组NIHSS评分、改良Rankin量表评分均显著好转(P0.05或P0.01)。G-CSF+EPO亚组疗效明显优于G-CSF亚组和EPO亚组(P0.05)。治疗后14d,治疗组与对照组比较脑梗死体积差异无显著性(P0.05);治疗后28 d各亚组脑梗死体积均明显小于对照组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。G-CSF、EPO治疗期间未出现明显不良反应。结论 G-CSF、EPO能明显改善大鼠的神经功能症状、减小梗死面积,对大鼠I/R损伤有保护作用。G-CSF和EPO单药或联合治疗急性脑梗死患者耐受性良好,可改善临床预后。     

rhG-CSF增加糖尿病并发脑梗死大鼠神经细胞增殖的实验研究

目的研究重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对局灶性脑缺血糖尿病大鼠的神经功能是否得到改善,并观察对神经细胞的再生的影响。方法线栓法制作糖尿病大鼠大脑中动脉栓塞模型,rhG-CSF干预组连续皮下注射rhG-CSF 50μg/(kg.d),进行神经功能缺损评分,采用免疫组化方法观察BrdU蛋白表达。结果rhG-CSF干预组神经功能缺损评分明显低于对照组(P<0.01)。结论rhG-CSF可增加糖尿病脑缺血后缺血周边BrdU蛋白表达,促进脑组织的再生修复。     

rhG-CSF改变大鼠局灶性脑缺血预后的初步研究

目的 研究重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor，rhG-CSF)对大鼠局灶性脑缺血预后的影响以及与微管相关蛋白(macrotubule-associated protein2，MAP-2)mRNA表达的关系。方法 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，观察rhG-CSF对死亡率和神经功能评分的影响。用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，测定rhG-CSF用药组和非用药组的MAP-2 mRNA表达水平的改变。结果 比较rhG-CSF治疗组与非用药组：治疗组大鼠，局灶性脑缺血再灌注后死亡率显著降低，神经功能评分明显改善。治疗组缺血侧脑组织的MAP-2 mRNA表达明显提前恢复正常。结论 一定剂量的rhG-CSF可以减轻脑缺血再灌注损伤，保护神经元，改善功能预后。     

Glial Damage After Transient Focal Cerebral Ischemia in Rats

We investigated the immunohistochemical changes of 8-hydroxy-2′-deoxyguanosine (8-OHdG) immunoreactivity as a marker of DNA damage and single-strand DNA (ssDNA) immunoreactivity as a marker of apoptosis in the striatum from 1 up to 15 days after 90 min of focal cerebral ischemia caused by middle cerebral artery occlusion in rats. In the present study, marked loss of MAP2 immunostaining was observed in the ipsilateral striatum 3 days after focal cerebral ischemia. A significant increase in the number of ssDNA-immunoreactive apoptotic neurons was observed in the ipsilateral striatum 1 and 3 days after focal cerebral ischemia. In contrast, a significant increase in densities of 8-OHdG-immunopositive cells was observed in the ipsilateral striatum from 3 up to 15 days after focal cerebral ischemia. Our double-labeled immunochemical study showed that 8-OHdG immunoreactivity was observed in both isolectin B₄-positive microglia and glial fibrillary acidic protein-immunopositive astrocytes in the ipsilateral striatum 7 days after focal cerebral ischemia. These results suggest that focal cerebral ischemia can cause a marked increase in the number of microglia and astrocytes with oxidative DNA damage in the ipsilateral striatum. Furthermore, our results show that most microglia and astrocytes in the ipsilateral striatum after focal cerebral ischemia may not die by apoptosis. Thus, our findings provide novel evidence that focal cerebral ischemia can cause oxidative DNA damage in most microglia and astrocytes.     

重组人粒细胞集落刺激因子对局灶性脑缺血大鼠的抗凋亡作用

The neuroprotective effects of granulocyte colony-stimulating factor in cerebral ischemia/reperfusion injury are currently contentious. The present study examined the effects of subcutaneous injection of recombinant human granulocyte colony-stimulating factor (50 μg/kg) over 5 days in a model of cerebral ischemia/reperfusion with intraluminal filament occlusion in rats. The results indicated that recombinant human granulocyte colony-stimulating factor reduced brain infarct volume following cerebral ischemia/reperfusion injury in rats, down-regulated the expression of caspase-3 mRNA (a key protease for apoptosis in the cerebral ischemia zone), lowered the rate of neuronal apoptosis in the cerebral ischemia zone, and notably ameliorated neurological function. These results indicate that recombinant human granulocyte colony-stimulating factor has anti-apoptotic effects on neurons following focal cerebral ischemia/reperfusion injury, and exerts neuroprotective effects.     

IL-1、TNF在局部脑缺血/再灌注中的表达

研究脑缺血／再灌流损伤中IL－1、TNF的来源、变化规律和作用。方法用免疫组化方法检测了局部脑缺血／再灌流大鼠模型中IL－1β、TNF－α的表达。结果缺血组（I）3hlL－1β表达增多并持续至120h,缺血再灌流组（IR）0．5hIL－1β即明显增高,高峰在24h,120h已降至对照组（C）水平,阳性细胞主要为纹状体区及顶叶皮层的神经元、胶质细胞和血管内皮细胞;I组和IR组0．5hTNF－α表达增多,12h达高峰,持续至120h,阳性细胞为纹状体和缺血皮层的神经元和胶质细胞。结论IL－1β、TNF－α参与缺血／再灌流脑损伤,其来源于损伤局部的神经元、胶质细胞及血管内皮细胞,并对其作用进行了探讨。     

caspase-3基因在脑缺血再灌流损伤中的动态表达

目的 :探讨caspase 3基因在缺血神经细胞死亡机制中的作用。方法 :采用大鼠大脑中动脉阻塞再灌流模型 (MCAO R) ,运用RT PCR和原位杂交技术观察缺血再灌流后caspase 3mRNA表达的时空分布动态变化 ,结合TUNEL技术观察其与凋亡的关系。结果 :脑缺血 3 0min再灌流 6h和缺血 2h再灌流 1h ,caspase 3mRNA在梗死边缘区的内侧诱导表达 ,并随着缺血时间或再灌流时间的延长而增强。caspase 3基因的表达与凋亡细胞的时空动态变化趋势基本一致。结论 :脑缺血损伤诱导caspase 3基因表达增强 ,caspase 3在介导神经细胞凋亡和缺血性脑损害中起关键作用     

老龄大鼠局灶性脑缺血后CyclinD1表达与小胶质细胞活化、神经元凋亡间关系的研究

目的:探讨老龄大鼠局灶性脑缺血后CyclinD1表达与小胶质细胞活化、神经元凋亡之间的内在关系。方法:建立光化学诱导的老龄大鼠局灶性脑缺血模型,利用原位分子杂交、IsolectinB4免疫组织化学和原位末端标记等方法,检测缺血4、24 h和3、5 d组大鼠脑组织中的CyclinD1 mRNA阳性细胞、小胶质细胞和凋亡细胞的时空分布规律。结果:CyclinD1 mRNA阳性细胞、小胶质细胞和凋亡细胞皆分布于缺血灶周围,发布空间相互重叠。CyclinD1 mRNA在多种形态细胞中表达,以胶质细胞最为多见,其表达高峰与小胶质细胞活化高峰一致。在各时间点的病灶周围皆发现TUNEL阳性细胞,其高峰时点提前于CyclinD1 mRNA阳性细胞及小胶质细胞活化高峰。结论:CyclinD1可能参与了缺血后小胶质细胞的活化及神经元的凋亡过程。     

阿司匹林促进大鼠缺血脑组织脑源性神经营养因子的表达

目的:探讨不同剂量阿司匹林(Asp)对脑缺血/再灌注(CI/RP)损伤大鼠的神经保护作用及其对脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法:采用线栓法建立大鼠大脑中动脉CI/RP模型,对CI/RP后大鼠进行肢体神经功能缺损评分:1~3分的48只大鼠入选。入选大鼠分为对照组、Asp小剂量组(20 mg.kg-1)、Asp中剂量组(80 mg.kg-1)和Asp大剂量组(320 mg.kg-1),于CI/RP术后每日腹腔注射Asp或溶媒,并进行神经功能缺损评分,72 h后处死,测定脑梗死体积和BDNF免疫组化检测。结果:CI/RP后24、48和72 h各Asp组大鼠与对照组相比,神经缺损评分明显降低(P<0.05或P<0.01),梗死灶体积显著减小(P<0.01),缺血区域BDNF表达显著增加(P<0.05或P<0.01)。对BDNF表达的作用Asp大剂量组的作用并不优于Asp小剂量组和中剂量组。结论:Asp可以减少CI/RP大鼠的脑梗死体积;促进内源性BDNF的表达可能是其神经保护的机制之一,Asp对BDNF表达的作用并非随Asp剂量的加大而增强。