rhG-CSF改变大鼠局灶性脑缺血预后的初步研究

目的 研究重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor，rhG-CSF)对大鼠局灶性脑缺血预后的影响以及与微管相关蛋白(macrotubule-associated protein2，MAP-2)mRNA表达的关系。方法 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，观察rhG-CSF对死亡率和神经功能评分的影响。用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，测定rhG-CSF用药组和非用药组的MAP-2 mRNA表达水平的改变。结果 比较rhG-CSF治疗组与非用药组：治疗组大鼠，局灶性脑缺血再灌注后死亡率显著降低，神经功能评分明显改善。治疗组缺血侧脑组织的MAP-2 mRNA表达明显提前恢复正常。结论 一定剂量的rhG-CSF可以减轻脑缺血再灌注损伤，保护神经元，改善功能预后。     

rhG—CSF增加实验性脑缺血周围区的nestin蛋白表达

目的研究重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulatingfactor,rhG-CSF)对大鼠局灶性脑缺血的神经元保护作用.方法用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,于再灌注不同时间点对治疗组和对照组进行神经缺损评分(NSS);并用免疫组织化学方法测定神经上皮干细胞蛋白(nestin)的表达.结果与对照组相比,rhG-CSF治疗组大鼠的神经缺损评分明显降低(P＜0.05);治疗组脑梗死区周围的nestin表达较对照组增多.结论脑缺血再灌注后,一定剂量rhG-CSF可能通过提高nestin的表达,增加神经细胞的修复,改善脑卒中的预后.     

rhG-CSF增加糖尿病并发脑梗死大鼠神经细胞增殖的实验研究

目的研究重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对局灶性脑缺血糖尿病大鼠的神经功能是否得到改善,并观察对神经细胞的再生的影响。方法线栓法制作糖尿病大鼠大脑中动脉栓塞模型,rhG-CSF干预组连续皮下注射rhG-CSF 50μg/(kg.d),进行神经功能缺损评分,采用免疫组化方法观察BrdU蛋白表达。结果rhG-CSF干预组神经功能缺损评分明显低于对照组(P<0.01)。结论rhG-CSF可增加糖尿病脑缺血后缺血周边BrdU蛋白表达,促进脑组织的再生修复。     

阿托伐他汀钙对实验性脑缺血MMP-9表达变化的影响

目的探讨阿托伐他汀钙对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中MMP-9mRNA及蛋白表达的影响。方法采用大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注模型,参考Longa5分制法在动物麻醉清醒后进行评分,应用原位杂交和免疫组化法检测MMP-9mRNA及蛋白表达。结果大鼠脑缺血再灌注后缺血脑组织中MMP-9mRNA和蛋白表达增加(P<0.01),24h达高峰;阿托伐他汀钙干预治疗后能减少缺血脑组织中MMP-9mRNA和蛋白表达(P<0.05);降低神经功能缺损评分(P<0.05)。结论阿托伐他汀钙能抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织中MMP-9mRNA及蛋白表达,减轻缺血再灌损伤。     

葛根素对脑缺血再灌注大鼠脑组织eNOS蛋白表达的影响

目的观察葛根素对脑缺血再灌注大鼠的脑保护作用及脑组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达的影响。方法采用神经功能缺损评分评价脑缺血再灌注模型大鼠神经功能变化,取脑测定脑含水量、脑梗死面积和脑组织eNOS蛋白的表达。结果治疗组神经功能缺损较对照组明显减轻,其脑含水量和脑梗死面积减少,脑组织eNOS蛋白表达也减少,但较假手术组高。结论葛根素可通过减少脑缺血再灌注亚急性期脑组织eNOS蛋白的表达而发挥脑保护作用。     

重组人粒细胞集落刺激因子在大鼠局灶性脑缺血中促进神经细胞分化作用的实验研究

目的 探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)在大鼠局灶性脑缺血中促进神经细胞分化作用.方法 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO/R)模型,于再灌注不同时间点对治疗组和对照组进行神经功能缺损评分,并用免疫组织化学方法测定5-溴脱氧尿核苷(Brdu)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性核蛋白(NeuN)的表达.结果 与对照组相比,rhG-CSF治疗组大鼠的神经功能缺损评分明显降低,治疗组缺血区及周边的Brdu、GFAP、NeuN表达较对照组增多.结论 脑缺血再灌注后,rhG-CSF可促进神经细胞分化,增加神经细胞修复,具有神经保护作用.

Abstract：

Objective To investigate recombinant human granulocyte colony-stimulating factor ( rhG-CSF) induce neuronal differentiation in focal cerebral ischemia rats. Methods A model of focal cerebral ischemia /reperfusion in rats was performed with the intraluminal filament occlusion. To evaluate neurological severity score of rhG-CSF treated group and contrast group in different reperfusion time,and using immunohistochemistry to measure the expression of 5-bromodeoxyuri-dine( Brdu) ,glial fibrilary acidic protein( GFAP) ,Neuronal Nuclei( NeuN) . Results Compare to contrast group, rhG-CSF significantly reduced the neurological severity scores and increased the expression of Brdu, GFAP, NeuN in peri-infarcted zones. Conclusion The rhG-CSF treatment can induce neuronal differentiation, can enhance the repairment of neuronal cells and have neuroprotective effects.     

重组人粒细胞集落刺激因子对脑缺血再灌注大鼠的神经保护和血管再生作用

目的利用局灶性脑缺血再灌注模型,观察重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对脑缺血大鼠的神经保护和血管再生作用。方法健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组,生理盐水对照组,rhG-CSF治疗组。线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,模型缺血90min时再灌注,治疗组予rhG-CSF 50μg/(kg·d),连续5d。每只大鼠均于治疗结束后分别进行神经功能缺损评分。采用免疫组化法检测CD105、VEGF的表达。结果 (1)病死率:对照组病死率为53.85%,rhGCSF治疗组为25%,差别有统计学意义(P0.05)。(2)神经功能评分:治疗后24h,对照组和治疗组较假手术组评分均明显上升,有显著性差异(P0.05)。治疗后7d和14d,治疗组较对照组神经功能恢复较好(P0.05)。(3)免疫组化结果:对照组及治疗组大鼠的CD105、VEGF阳性表达高于假手术组,治疗组的CD105、VEGF阳性表达要高于假手术组和对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 rhG-CSF具有神经保护作用,能促进缺血区脑组织血管再生,其神经保护作用可能与促进血管再生有关。     

阿托伐他汀钙对大鼠脑缺血再灌后NF-kBp56表达的影响

目的探讨阿托伐他汀钙对大鼠脑缺血再灌后脑组织中NF-kBp56rnRNA及蛋白表达的影响。方法采用大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型，参考Longa的5分制法在大鼠麻醉清醒后进行评分，应用原位杂交和免疫组化法检测NF-kBp56mRNA及蛋白表达。结果大鼠脑缺血再灌注后缺血脑组织中NF-kBp56mRNA和蛋白表达增加（P〈0．01），24h达高峰；给予阿托伐他汀钙干预后能减少缺血脑组织中NF-kBp56mRNA和蛋白表达（P〈0．05），降低神经功能缺损评分（P〈0．05）。结论阿托伐他汀钙能抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织中NF-kBp56mRNA及蛋白表达，减轻缺血再灌损伤。     

rhG—CSF改变大鼠局灶性脑缺血预后的初步研究

目的　 研究重组人粒细胞集落刺激因子 (recombinanthumangranulocytecolony stimulatingfactor,rhG CSF)对大鼠局灶性脑缺血预后的影响以及与微管相关蛋白 (macrotubule associatedprotein 2 ,MAP 2 )mRNA表达的关系。 方法　 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型 ,观察rhG CSF对死亡率和神经功能评分的影响。用半定量逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,测定rhG CSF用药组和非用药组的MAP 2mRNA表达水平的改变。 结果　 比较rhG CSF治疗组与非用药组 :治疗组大鼠 ,局灶性脑缺血再灌注后死亡率显著降低 ,神经功能评分明显改善。治疗组缺血侧脑组织的MAP 2mRNA表达明显提前恢复正常。结论　一定剂量的rhG CSF可以减轻脑缺血再灌注损伤 ,保护神经元 ,改善功能预后。     

转化生长因子β1对大鼠脑缺血再灌注损伤后肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对脑缺血再灌注损伤后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法 用线栓法建立大鼠局灶脑缺血再灌注模型，给模型大鼠侧脑室内注入不同剂量TGF_区或生理盐水，观察各组大鼠的神经功能缺损评分和脑组织中TGF-α的表达。结果大、小剂量TGF-β1治疗组大鼠脑组织TNF-α表达较对照组均明显降低，神经功能缺损评分亦明显下降，大、小剂量治疗组之间比较无明显差异。结论TGF-β1对脑缺血再灌注损伤具有保护作用，其机制可能为抑制TNF-α表达，并且其保护作用与剂量无明显关系。     

去铁敏预处理通过增加缺氧诱导因子1α和促红细胞生成素的表达减轻大鼠缺血性脑损伤

目的观察去铁敏（Desferoxamine,DFO）预处理后大鼠脑组织和体外培养神经元中缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor1α,HIF-1α）和促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）表达的变化,探讨预处理是否对体内及体外的脑缺血损伤的具有保护效应。方法去铁敏预处理大鼠后不同时间点制作大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,术后24h后处死动物。采用神经功能评分（neurological severity scores,NSS）和计算梗死体积（TTC染色）评价DFO的脑保护效应,细胞活力测定评价DFO对缺氧缺糖条件下（oxygen-glucosede privation,OGD）皮层神经元的保护效应。免疫荧光染色检测HIF-1α和EPO蛋白表达情况。结果与生理盐水对照组比较,去铁敏预处理后2d,MCAO大鼠出现梗塞面积缩小,神经功能损伤减轻,在预处理后3d达到高峰,7d仍然有效,14d去铁敏预处理的保护效应消失。去铁敏对OGD神经元同样具有神经保护作用：与未进行预处理的神经元细胞相比,预处理后8h的细胞活力增加23％,12h增加34％,24h增加40％,36h增加48％,48h增加56％（P〈0．05）。免疫荧光染色发现,大鼠脑组织的HIF-1α和EPO在去铁敏预处理后3d及7d表达上调;皮层神经元细胞的HIF-1α和EPO在去铁敏预处理后36h及48h表达上调。结论去铁敏预处理有确切有效的脑保护效应,不仅可以预防脑缺血损伤,对体外培养的OGD皮层神经元细胞损伤也具有保护作用,其机制可能与脑神经细胞的HIF-1α和EPO蛋白表达增加有关。     

人脐带血间充质干细胞移植对脑梗死大鼠外周血Foxp3表达的影响

目的探讨人脐带血间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)移植对脑梗死大鼠外周血Foxp3调节性T细胞改善缺血性脑损害的可能机制。方法选择SD大鼠40只,随机分为假手术组、对照组、生理盐水组、MSC组,每组10只。各组大鼠分别测定1 d、7 d、14 d、28 d外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达和神经功能缺损评分;TUNEL法检测神经细胞凋亡数。结果 MSC组14 d、28 d神经功能缺损评分明显低于对照组及生理盐水组[(6.1±1.4)分vs(7.3±1.1)分,(7.3±0.9)分;(5.2±1.0)分vs(6.2±1.0)分,(6.3±0.5)分;P0.05];28 d凋亡细胞数明显少于对照组及生理盐水组(P0.05)。对照组、生理盐水组及MSC组1 d、7 d、14 d、28 d外周血Foxp3 mRNA表达明显高于假手术组,差异有统计学意义(P0.01)。MSC组1 d、7 d外周血Foxp3 mRNA表达明显高于对照组和生理盐水组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 MSC移植改善大鼠急性脑缺血神经功能恢复的机制之一,可能与上调免疫炎性反应初期Foxp3 mRNA表达有关。     

骨髓基质干细胞移植对脑损伤大鼠神经行为学和血管再生的影响

目的探索移植骨髓基质干细胞(BMSCs)对局灶性脑损伤大鼠的神经功能修复的作用及血管再生的影响,探讨BMSCs移植促进大鼠脑损伤修复的机制。方法 30只大鼠制备大鼠局灶性脑损伤动物模型,随机分为假手术组、脑损伤组和BMSCs移植组,每组10只大鼠。取供体鼠BMSCs,体外扩增,DAPI荧光标记。在脑立体定向仪引导下将BMSCs移植到脑损伤大鼠局部损伤灶边缘,于3d、7d及14d通过观察大鼠神经行为能力的变化,评价移植细胞后大鼠神经功能的修复情况;14d后取脑组织荧光显微镜观察移植细胞存活的情况,采用免疫组化法检测脑组织微血管密度(MVD)来评估血管再生情况、血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体(Flt-1、Flk-1)的蛋白表达情况。结果脑损伤组和BMSCs移植组于移植后3d时神经行为学评分差异无统计学意义(P>0.05),而在移植后7d、14d,BMSCs移植组与脑损伤组在神经行为学评分指标上差异有统计学意义(P<0.05)。BMSCs移植组与脑损伤组比较,脑组织微血管密度明显增加,VEGF和Flt-1、Flk-1表达明显增加。结论骨髓基质干细胞移植后可促进脑损伤大鼠神经功能的恢复,其机制可能与其增加VEGF和Flt-1、Flk-1表达促进血管再生有关。     

局部脑缺血预处理对大鼠脑梗死的影响和HSP70的表达及mRNA的变化

目的建立局灶性可重复性大鼠脑缺血动物模型,研究短暂性局部脑缺血后再灌注不同时间对大脑中动脉阻塞(MCAO)的影响。方法应用改进的Longa's法,建立阻断左侧中动脉的局部脑缺血预处理模型。各组大鼠均经两次处理预处理(PC)组大鼠20min短暂脑缺血,分别在再灌注12h、1d、3d、5d、7d、14d后,造成MCAO;脑梗死组大鼠只在第二次处理造成大脑中动脉闭塞;短暂缺血组只在第一次处理时缺血20min,各组大鼠均在第二次处理后24h断头处死,检测以下指标神经功能缺失评分;TTC染色测量梗死范围HE染色观察组织结构变化;免疫印迹(原位杂交)和免疫组织化学染色观察HSP70的表达。结果PC后1d、2d、3d、5d、7d组与脑梗死组相比较,脑梗死范围,梗死周边区脑组织的缺血性损伤明显减轻了;短暂性脑缺血引起了轻微的神经细胞结构的改变并使缺血区HSP70的表达增加,MCAO后24hHSP70蛋白在缺血周边区出现了广泛表达。结论短暂局部缺血预处理可以诱导脑梗死后脑组织产生缺血耐受性,其保护作用出现再灌注后l~7d;缺血预处理引起HSP70的变化与缺血耐受的产生有一定联系。     

骨髓间充质干细胞移植对脑缺血大鼠突触可塑性影响的实验研究

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对脑缺血大鼠神经功能恢复及突触可塑性的影响。方法：采用大鼠大脑中动脉缺血模型，分为假手术组、模型组、PBS组和MSCs组，研究脑缺血24h后移植MSCs的大鼠神经功能缺损评分（NSS）；分别测定梗死灶周围脑组织突触素（SYN）和脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA的表达；电镜及免疫电镜下观察突触结构的变化。结果：与模型组及PBS组大鼠相比，MSCs组的NSS评分较低，SYN及BDNF mRNA的表达则明显较高；电镜检查示MSCs组大鼠突触界面曲率较大，突触后致密物质的厚度增加，突触间隙宽度变窄，突触活性带长度增加；免疫电镜示BrdU阳性细胞和宿主脑神经元形成非成熟的突触样结构。结论：MSCs移植可能通过神经营养效应调节脑缺血周围神经细胞的可塑性改善脑缺血大鼠的神经功能。