健骨颗粒对大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响

目的探讨健骨颗粒对骨组织成骨细胞雌激素受体表达的影响。方法通过切除6月龄SD雌性大鼠卵巢,建立绝经后骨质疏松症动物模型,分假手术组、模型组、治疗组,运用RT-PCR实时荧光定量SYBR GREEN法检测雌激素受体ERα、ERβmRNA的表达。结果治疗组与模型组比较,ERα、ERβmRNA的相对表达量增加,差异有显著性(P0.01)。结论健骨颗粒能提高去卵巢骨质疏松模型大鼠的成骨细胞ERα、ERβ的表达,促进成骨细胞增殖。     

Ⅰ型胶原-整合素α2β1系统对成骨细胞生物学特性的调控

为进一步探讨I型胶原及其受体系统是否为成骨细胞功能活动所必需, 使用Ⅰ型胶原和整合素α2β1的一抗阻断Ⅰ型胶原整合素α2β1系统,以细胞计数法比较成骨细胞的增殖能力,流式细胞仪分析成骨细胞的凋亡情况,RTPCR技术研究I型胶原、整合素α2β1 及骨钙素的mRNA表达情况。结果发现阻断I型胶原整合素α2β1系统后,成骨细胞的增殖能力减弱,凋亡率增高,Ⅰ型胶原、整合素α2β1 及骨钙素的mRNA表达减少,其中I型胶原一抗的阻断作用大于整合素α2β1的一抗,这种阻断作用具有可复性,随抗体的去除可部分恢复,表明Ⅰ型胶原整合素α2β1系统为成骨细胞功能活动所必需,构建骨组织工程的支架材料时要考虑到骨组织的基质成份,应为成骨细胞提供相对正常的胞外基质环境。     

杜仲叶颗粒抗骨质疏松作用及其机制

目的：评价杜仲叶颗粒对去除卵巢致骨质疏松大鼠的作用,并初步探讨其作用机制。方法：SD大鼠行双侧卵巢切除术进行骨质疏松模型构建。手术一周后,以雌二醇片和杜仲叶颗粒连续灌胃给药12周,然后取大鼠股骨进行骨密度检测;取血清测定ALP活力和CTX-1含量;HE染色观察骨组织形态和骨丢失情况;采用定量PCR法测定胫骨组织中Wnt3a、β-catenin、DKK1的mRNA表达水平。结果：杜仲叶颗粒能显著升高骨密度,显著降低血清ALP和CTX-1含量,且能显著增加Wnt3a、β-catenin的mRNA表达水平,降低DKK1的mRNA表达水平。结论：杜仲叶颗粒具有明显的抗骨质疏松作用,其机制可能是通过激活wnt/β-catenin信号通路实现的。     

更年春方对卵巢切除大鼠骨与子宫组织雌激素受体亚型的调节

目的探讨更年春方对卵巢切除大鼠骨与子宫组织雌激素受体(estrogenreceptor,ER)亚型的调节。方法10~12月龄SD雌性大鼠卵巢切除建立骨质疏松模型。分别用更年春方、尼尔雌醇灌药4个月,RT-PCR法检测胫骨骨骺与子宫组织ER亚型mRNA的表达。结果大鼠卵巢切除后,血E2水平、椎骨骨密度、子宫湿重及胫骨骨骺与子宫组织ERα、ERβmRNA的表达均明显下降。尼尔雌醇治疗后椎骨骨密度、子宫湿重及胫骨骨骺与子宫组织ERα、ERβmRNA的表达均增高;更年春方组椎骨骨密度及胫骨骨骺与子宫组织ERβmRNA的表达增高,而子宫湿重及胫骨骨骺与子宫组织ERαmRNA的表达无明显改变。结论更年春方对卵巢切除骨质疏松大鼠有防治作用,对子宫无不良反应。其机制可能与其选择性上调胫骨骨骺与子宫组织ERβmRNA的表达有关。     

p38MAPK通路在健骨颗粒促成骨细胞早期分化中的作用

目的观察p38MAPK信号转导通路在健骨颗粒促进体外培养成骨细胞早期分化过程中的作用。方法采用酶消化法分离、培养SD大鼠成骨细胞,分4组进行干预:对照组(加入生理盐水血清)、阻断剂组(加入p38MAPK的阻断剂SB202190)、中药组(加入健骨颗粒含药血清)和中药加阻断剂组(加入健骨颗粒含药血清和SB202190),运用化学比色法检测上清液中碱性磷酸酶(AKP)活性及羟脯氨酸(HYP)含量,实时荧光定量PCR-SYBR GREEN法检测成骨细胞Ⅰ型胶原(ColⅠ)的表达。结果在AKP活性、HYP含量及ColⅠmRNA表达3项指标上,中药组>中药加阻断剂组>对照组>阻断剂组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外培养大鼠成骨细胞的早期分化与p38MAPK信号转导通路有关;健骨颗粒含药血清能促进成骨细胞的早期分化,但这一作用仅部分通过p38MAPK信号通路实现。     

Ⅰ型胶原—整合素α2β1系统对成骨细胞生物学特性的调控

为进一步探讨Ⅰ型胶原及其受体系统是否为成骨细胞功能活动所必需,使用Ⅰ型胶原和整合素α２β１的一抗阻断Ⅰ型胶原－整合素α２β１系统,以细胞计数法比较成骨细胞的增殖能力,流式细胞仪分析成骨细胞的凋亡情况,ＲＴ－ＰＣＲ技术研究Ⅰ型胶原、整合素α２β１及骨钙素的ｍＲＮＡ表达情况。结果发现阻断Ⅰ型胶原－整合素α２β１系统后,成骨细胞的增殖能力减弱,凋亡率增高,Ⅰ型胶原、整合素α２β１及骨钙素的ｍＲＮＡ表达减     

大豆异黄酮和钙对去卵巢大鼠骨密度及IGF-Ⅰ表达的影响

目的探讨大豆异黄酮和钙对去卵巢骨质疏松大鼠的骨密度及胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)表达的影响.方法将雌性SD大鼠28只,随机分为假手术组(sham)、去卵巢组(OVX)、去卵巢补钙组[Ca,50 mg/(kg·d)]和去卵巢加大豆异黄酮组[Isof,100 mg/(kg·d)],10周后测骨密度和尿液钙含量,用免疫组化法测骨骼组织IGF-Ⅰ表达,原位杂交法测骨骼组织IGF-Ⅰ mRNA的表达.结果去卵巢组大鼠尿钙显著增高,而骨密度降低,骨IGF-Ⅰ和IGF-Ⅰ mRNA表达显著低于sham组.大豆异黄酮组大鼠尿钙丢失减少,骨密度升高,IGF-Ⅰ和IGF-Ⅰ mRNA表达增加.单纯补钙组与去卵巢组比较,各指标恢复不明显.结论大豆异黄酮表现出类似雌激素的作用,能够调节IGF-Ⅰ等生长因子的表达,减少尿钙丢失,可用于预防骨质疏松.     

骨松灵合剂对去卵巢大鼠成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原雌激素受体表达的影响

目的通过观察骨松灵合剂对去卵巢大鼠成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原、雌激素受体表达的影响,探讨骨松灵合剂对骨代谢的可能作用机制。方法不同浓度的骨松灵合剂刺激大鼠成骨细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定活细胞的数量,RT-PCR和免疫细胞化学染色方法来测定不同浓度的骨松灵合剂对去卵巢大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原、雌激素受体表达的影响。结果与对照组相比,30,60,120,240mg/ml的骨松灵合剂对成骨细胞均有促增殖作用(P<0.05),48h、72h后,120mg/ml的骨松灵合剂仍有此作用,其他浓度对成骨细胞促增殖作用消失(P>0.05)。120mg/ml骨松灵合剂培养成骨细胞24h、48h、72h后均可增加成骨细胞Ⅰ型胶原mRNA表达,并有时间依赖性。120mg/ml骨松灵合剂培养成骨细胞24h、48h、72h后均可增加成骨细胞ERαmRNA,ERβmRNA表达,ERαmRNA表达在培养24 h后有所增加,48h、72h较24 h无明显变化;ERβmRNA表达增加有时间依赖性。结论骨松灵合剂可以促进去卵巢大鼠成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原、雌激素受体表达,这些可能是骨松灵合剂对骨形成的作用机制。     

大豆异黄酮和钙对去卵巢大鼠骨密度及IGF—I表达的影响

目的探讨大豆异黄酮和钙对去卵巢骨质疏松大鼠的骨密度及胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)表达的影响。方法将雌性SD大鼠28只,随机分为假手术组(sham)、去卵巢组(OVX)、去卵巢补钙组[Ca,50mg/(kg.d)]和去卵巢加大豆异黄酮组[Isof,100mg/(kg.d)],10周后测骨密度和尿液钙含量,用免疫组化法测骨骼组织IGF-Ⅰ表达,原位杂交法测骨骼组织IGF-ⅠmRNA的表达。结果去卵巢组大鼠尿钙显著增高,而骨密度降低,骨IGF-Ⅰ和IGF-ⅠmRNA表达显著低于sham组。大豆异黄酮组大鼠尿钙丢失减少,骨密度升高,IGF-Ⅰ和IGF-ⅠmRNA表达增加。单纯补钙组与去卵巢组比较,各指标恢复不明显。结论大豆异黄酮表现出类似雌激素的作用,能够调节IGF-Ⅰ等生长因子的表达,减少尿钙丢失,可用于预防骨质疏松。     

去卵巢大鼠成骨细胞雌激素受体表达的研究

目的 观察研究去卵巢SD大鼠成骨细胞内雌激素受体(ER)表达水平的变化规律.方法 SD雌性大鼠随机分为正常对照组和去卵巢(OVX)后第5周组、第7周组;采用二次酶消化、反复贴壁法分离纯化培养大鼠颅骨成骨细胞,进行钙钴法碱性磷酸酶(ALP)染色,I型胶原免疫组化染色来观察、鉴定大鼠成骨细胞.应用半定量Western blot对各组SD大鼠成骨细胞内雌激素受体进行检测.结果 通过ALP染色、I型胶原免疫组化及形态学观察符合成骨细胞特征.western blot显示雌激素受体表达OVX组明显低于正常组,第7周组低于第5周组.结论 随着去卵巢后时间延长,成骨细胞表达的雌激素受体下降,骨质疏松风险变大.