抗艾滋病药物研究进展

艾滋病 (AIDS)即人类免疫缺陷综合证 ,HIV是其病原体。HIV属于逆转录病毒科、慢病毒属中的灵长类免疫缺陷病毒亚属〔1,2〕。HIV病毒有 2种 ,即HIV 1和HIV 2 ,其中HIV 1致病常见 ,感染率高 ,传播迅速。HIV基因结构 ,HIV原病毒 (provirus)DNA的基因具有逆转录病毒基本结构的 gag、pol、env基因。gag基因编码结构蛋白 :pol基因编码切断结构蛋白的蛋白酶 (PR)、逆转录酶 (RT)与整和酶 (IN)等颗粒内酶 ,而env基因则编码包装病毒颗粒的包膜蛋白。HIV除以上三种基因外 ,还有辅助基因即病毒所必需的调节基因tat、rev ,以及体外病…     

用从头药物设计方法合理设计HIV-1整合酶抑制剂

目的：合理设计新的HIV-1整合酶抑制剂。方法：采用从头药物设计方法，从苯乙烯基喹啉抑制剂与整合酶的活性位点出发，产生3220个化合物。同时，通过分子对接方法模拟分析这些化合物与整合酶的结合能和结合模式。结果：设计产生的这些化合物能结合于HIV-1整合酶的活性区域中，包含4类在已知苯乙烯基喹啉类抑制剂中没有的新结构：乙烯基萘类、苯乙烯基苯并氮蒽类、苯乙烯基苯并喹噁啉类和杂环类。结论：本研究对进一步进行装乙烯基喹啉类抑制剂的结构改造以及研制新的HIV-1整合酶抑制剂且有一定的指导意义。     

Mx蛋白抗病毒研究进展

Mx蛋白属于大GTP酶的动态蛋白( dynamin)超家族,在体内由Ⅰ型IFN诱导.大多数的脊椎动物有1～3个不同细胞内定位的Mx蛋白异构体,一般定位于核内或胞质中.Mx蛋白具有广谱的抗病毒能力,对RNA病毒,如流感病毒、水泡性口炎病毒、托高土病毒、汉坦病毒和狂犬病毒等有作用,甚至对DNA病毒(如乙型肝炎病毒)也有一定的作用.本文论述了Mx蛋白的结构,并探讨了各个种属来源的Mx蛋白抑制不同病毒的作用及机制.     

登革2型病毒PrM基因对不同型登革病毒复制的特异抑制作用

目的 :将我国登革 2型病毒PrM(D2 _PrM)基因导入甲病毒载体系统 ,探讨含正、反义PrM基因的重组病毒对不同血清型登革病毒复制的特异抑制作用。方法 :采用体外转录和电穿孔的方法 ,首先分别将构建的含正、反义PrM基因的重组质粒DNA和辅助载体DNA转录成RNA ,然后将这两种RNA共转染BHK细胞 ,进而包装成重组病毒颗粒。再将经激活的重组病毒感染宿主细胞 ,分别用不同型登革病毒攻击 ,然后通过免疫荧光法 ,观察对不同型登革病毒复制的抑制作用。结果 :含登革 2型正、反义PrM基因的重组甲病毒 ,不仅可完全抑制该型病毒在宿主细胞中的复制 ,而且对其他 3个型病毒的复制也具有不同程度的抑制作用。含反义PrM基因的重组病毒对 4个型登革病毒复制的抑制作用最强。结论 :登革 2型病毒的正、反义PrM基因在宿主细胞中通过重组甲病毒 ,可介导对登革 1～ 4型病毒复制的特异抑制作用     

电离辐射诱导的S期检查点非依赖于CD-KN1A

细胞周期检查点在DNA的复制和有丝分裂过程中具有调节细胞分化与死亡的关键作用。近来研究表明,除了G1和G2期检查点外,S期检查点在DNA的损伤修复及复制过程中同样具有重要的作用。为此,采用HCT116细胞来源的蛋白激酶抑制因子CDKN1A敲除的细胞株(CDKN1A+/+和CD-KN1A-/-),直接观察了电离辐射诱发的细胞S期损伤应答过程中CDKN1A的作用。方法:1采用3H-脱氧胸苷掺入法,观察不同剂量的电离辐射对HCT116(CDKN1A+/+)和S4(CD-KN1A-/-)细胞DNA合成抑制的剂量反应曲线;2将两种细胞同步化,观察10Gy照射诱导的DNA合成抑制动力学变…     

1，5-二咖啡酰奎宁酸对大鼠所微粒体细胞色素P450含量的影响

1，5-二咖啡酰奎宁酸（1,5-dicaffeoylquini cacid，1，5-DCQA）是我国近期自主研发的拟申报治疗艾滋病（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）的一类创新新药（药品注册管理办法，注册分类1），它为首次合成的全新化合物，其抑制人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）的作用已经在细胞与整体动物等多种实验模型上得到证实。研究表明它的作用靶点为HIV-1整合酶，该酶是介导HIV基因组进入宿主染色体的一个关键性的酶。毒理学实验表明该药的毒性较低，提示该化合物为有独特作用特点的、毒副反应小的潜在新药。     

阿德福韦、拉米夫定联合治疗拉米夫定耐药乙型肝炎的抗耐药优势

乙型肝炎病毒（HBV）是一种DNA病毒，它通过逆转录在肝细胞中进行复制。HBV聚合酶在HBV复制过程中起着重要的作用．已知核苷类药物耐药突变均发生在HBV聚合酶上。与其它DNA聚合酶不同，HBV聚合酶是一种逆转录酶，缺乏校正的功能，同时HBV复制能力强，每日可产生1012～1013个病毒，因此发生突变的概率高，使HBV变异率高于其他DNA病毒10倍左右。核苷类药物主要是通过与HBV聚合酶的天然底物（dNTP）竞争来达到抑制HBV聚合酶的活性，从而达到抑制HBV复制的作用。但是由于它不能清除肝细胞内病毒的环状DNA（cccDNA），未达到血清转换，停药后HBVDNA又可再度复制．所以需长期使用。     

人源抗HIV—1整合酶单链抗体基因的构建及表达

获得人源抗ＨＩＶ－１整合酶单链抗体基因并在大肠杆菌及细胞中进行表达。方法：从人的抗ＨＩＶ－１整合酶的Ｆａｂ抗体基因片段中通过ＰＣＲ扩出此抗体的重链可变区和轻链可变区基因,经一弹性连接肽连接构建成人源抗ＨＩＶ－１整合酶的单链抗体基因。     

靶向DNA损伤应答在小细胞肺癌中的作用研究进展

小细胞肺癌(SCLC)是高度恶性肿瘤,具有增殖速度快、早期转移及预后差的特点,5年生存率仅7.2%。DNA损伤应答(DDR)是机体在面对DNA损伤及复制应激时,通过激活细胞周期检查点、阻滞细胞周期来促进DNA损伤修复,避免未修复的DNA损伤诱导程序性死亡的过程。SCLC具有突变负荷高、基因组不稳定的特征,普遍存在p53及RB1功能失活,致使细胞周期G₁/S检查点缺陷,因而更加依赖后续的S、G₂/M检查点进行周期阻滞和DNA损伤修复以确保基因组的稳定性及染色体的正确分离。因此,在基于致DNA损伤的放化疗应用背景下,抑制周期检查点以促进周期进程、增加DNA损伤及抑制DNA损伤修复成为SCLC治疗的新策略。本文就靶向DDR及其通路关键分子(PARP、ATR、CHK1/2、WEE1、ATM、Aurora A)抑制剂在SCLC中的研究进展进行综述,以期为SCLC的治疗策略提供思考。     

大肠杆菌合成的乙肝病毒核心抗原转化为e抗原的探索

在一些乙肝表面抗原(HBsAg)阳性的乙肝患者血清中出现e抗原(HBeAg)与血清中存在有大量Dane颗粒、高活力DNA聚合酶有关,说明乙肝病毒(HBV)的复制活跃,传染性强。凡血清中无HBeAg或有抗-HBe的人,一般来讲循环病毒较少,即其传染性较弱,所以检查HBeAg和抗-HBe在临床上具有重要的意义。科学家们对HBeAg的重视不仅在于它在临床和流行病学上的意义,同时也对它的结构与功能的关系感到兴趣。至今为止,HBeAg基因在HBV DNA序列上的位置尚未确定,HBeAg与核心抗原(HBcAg)结构间     

新型二氢吡啶类化合物的合成及其抗乙型肝炎病毒活性研究

目的合成全新的二氢吡啶类化合物,并对其抗乙型肝炎病毒（HBV）复制活性进行研究,以获得新型的抗病毒药物先导物。方法以芳杂环取代的二氢嘧啶类化合物为模板,通过比较分子场分析,设计全新的二氢吡啶类化合物。以乙酰乙酸乙酯,芳香酸为起始原料,分别经胺化、烷基化反应,再与芳香醛缩合关环得到最终目标化合物,并对其体外抑制HBV的活性进行试验。结果合成了未见文献报道的全新二氢吡啶类化合物13个,经1HNMR和MS确定了结构,部分化合物显示了对HBV DNA复制的抑制作用。化合物6f表现出较强的抑制病毒复制活性,体外活性优于阳性对照药拉米夫定。结论二氢吡啶类化合物做为一类全新结构的抗HBV化合物,值得进行深入研究。     

乙肝病毒cccDNA的研究进展

在人乙型肝炎病毒（HBV）慢性感染过程中,血清病毒负荷量至关重要。HBVDNA量的持续升高不仅导致感染者10年生存率明显降低,而且使肝癌、肝硬化的发生率明显升高。而DNA共价闭合环状（cccDNA）作为嗜肝DNA病毒基因组的复制中间体,是嗜肝DNA病毒mRNA和前基因组RNA的合成模板,也是嗜肝病毒持续感染的关键因素。     

高温和辐射对DNA合成的起始与延伸过程的效应

业已证明,处于晚G_1期或S期的细胞经43℃/1小时处理后,与未经高温处理的细胞相比,起始作用的DNA片段减少,DNA延伸过程也受到抑制。本文旨在进一步研究高温和电离辐射对于DNA复制起始作用和延伸过程的影响。本实验评价DNA复制(起始作用和延伸作用)改变所采用的为pH逐级碱洗脱法和碱性蔗糖梯度技术。实验材料为同步化单层培养的中国地鼠卵巢细胞。高温处理为水浴43℃,1小时。X射线的剂量为5Gy,由4MeV线性加速器产生,以剂量率4Gy/分照射细胞。     

1.1倍长乙型肝炎病毒基因组在Huh7细胞中的高效复制和表达

目的构建乙型肝炎病毒(HBV)1.1倍基因组长度的重组载体,研究其在人肝癌细胞系Huh7中的复制与表达。方法以慢性乙型肝炎患者C基因型HBV DNA为模板,用聚合酶链反应(PCR)扩增出HBV基因组的两条DNA片段,酶切后与载体连接成含HBV1.1倍基因组长度的重组载体。经PCR、酶切及测序鉴定后,将重组载体经FuGENEHD转染入Huh7细胞,用ELISA检测转染细胞培养上清液的HBsAg和HBeAg表达,用荧光定量PCR和Southern杂交检测HBV DNA的复制水平及复制中间体。结果经鉴定证实成功构建1.1倍基因组长度C基因型HBV重组载体,体外转染Huh7细胞48h后,培养上清液中检出HBsAg和HBeAg表达;转染72h后,荧光定量PCR检出较高的HBV DNA复制水平(107～109拷贝/ml);Southern杂交检出病毒复制中间体。结论构建的1.1倍长重组载体可以介导高水平的HBV病毒复制和基因表达,为进一步体外瞬时转染HBV表型耐药分析奠定基础。     

健康成人外周血EB病毒感染98例的研究

目的:探讨鼻咽癌高发区健康人群外周血EB病毒DNA阳性率与EB病毒血清学抗体水平之间的关系.方法:收集98例祖籍广东的健康成人外周血,分离外周血单个核细胞和血浆/血清,用巢式PCR法检测EB病毒DNA的W片段,同时用免疫酶标法检测EB病毒VCA/IgA和EA/IgA的血清学滴度.结果:57例外周血单个核细胞可以扩增出阳性产物(57/98,58.16%),这57例外周血单个核细胞EB病毒DNA阳性者中有10例(10/57,17.54%)的血浆/血清也扩增出EB病毒DNA.98例健康成人的VCA/IgA抗体的几何平均滴度为1:20.61,只有1例可检出EA/IgA(滴度为1:5).结论:大部分居住在鼻咽癌高发区的健康成人外周血携带有EB病毒,部分可进入溶解周期.外周血单个核细胞EB病毒DNA阳性组与阴性组之间的抗EB病毒抗体水平(VCA/IgA)没有差异.     

拉米夫定联合用药治疗慢性乙型肝炎

临床研究发现 [1-5] :拉米夫定可迅速抑制慢性乙型肝炎患者体内 HBV的复制 ,使血清 HBV DNA转阴 ,同时还可促进 HBe Ag血清转换 ,血清 ALT正常 ,肝组织学改善和延缓肝纤维化进程 ,是一种安全有效的抗 HBV感染药物 ,也是目前治疗慢性乙型肝炎最新和最有前途的药物之一。但在其临床应用过程中 ,人们同时也发现由于拉米夫定对 HBVD-NA复制的原始摸板 ccc DNA无效 ,持久 HBe Ag血清转换率较低 ,停药以后有相当部分患者血清 HB-VDNA阳转 ,甚至出现撤药性肝炎或使原病情加重 [6-8] ;另外 ,由于拉米夫定需要长期服用 ,而长期服用的…     

前S1抗原在乙型肝炎诊断中的作用

目的：分析乙型肝炎病毒前S1抗原（PreS1）与乙型肝炎病毒（HBV）复制的关系。方法：采用酶联免疫吸附实验（ELISA）方法对364例乙型肝炎不同标志物的患者血清进行PreS1测定并与用荧光定量聚合酶链反应对HBV—DNA进行含量测定，然后做对比分析。结果：364例乙型肝炎患者中，167例HBsAg、HBeAg、抗HBc^＋阳性组中PreS1叶。144例（86．2％），HBVDNA阳性147例（88．0％），这组患者病毒高度复制，PreS1和HBVDNA两者间差异无显著意义，P〉0．05。122例HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性组中PreS1^＋38例（31．1%），HBVDNA阳性43例（35．2％），表明HBeAg阴性患者仍有病毒复制，两者间差异无显著意义，P〉0．05。65例HBsAg和抗HBc阳民生组中PreS1^＋17例（26．2％），HBVDNA^＋20例（30．7％），表明病人仍有病毒在复制。10例HBsAg、HBeAg阳性组中PreS1^＋7例（70．0％），HBVDNA＋9例（90．0％），表明病人病毒在复制。结论：乙肝病毒前S1抗原是乙肝病毒在体内复制和传染的可靠指标，特别是在反映HBeAg阴性的乙型肝炎患者是否有病毒复制的诊断中有重要意义。     

尖锐湿疣及湿疣样病变人乳头瘤病毒6/11DNA原位杂交病理组织学观察

对48例生殖道尖锐湿疣(CA)及湿疣样病变常规福尔马林固定石蜡包埋组织切片进行人乳头瘤病毒(HPV)6/11型DNA原位分子杂交及病理组织学观察.在12例CA中9例(75%)和湿疣样病变中1例(2.7%)检出HPV6/11DNA,阳性细胞定位于鳞状上皮中表层的凹空细胞及其周围细胞核内,充分显示出6/11型HPV感染鳞状细胞后,病毒的整合,复制依赖于鳞状细胞的分化过程,其引起的相应的病理组织学特点以表皮棘层乳头状增生、典型的凹空细胞、角化过度和炎症为主.在CA与湿疣样病变的鉴别诊断中,HPV6/11型DNA具有重要的价值.     

登革4型病毒基因组cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用

目的:探讨登革4型病毒C基因中保守的cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用.方法:首先在获得含有海肾荧光素酶(Renilla luciferase, R.luc)报告基因的复制子(DEN-R.luc2A-RP)基础上,利用重叠PCR构建cHP发卡结构系列突变体(cHP1～cHP6).将构建的突变体(包括相关的阳性和阴性对照复制子)分别线性化并体外转录成RNA后,取等量各转录体RNA,以脂质体法分别转染BHK-21细胞.通过间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、R.luc报告基因检测技术和实时定量RT-PCR对突变体的复制和翻译进行检测.结果:cHP发卡结构系列突变体均可在BHK-21细胞中复制并稳定表达病毒特异蛋白,在该发卡结构中引入缺失或突变对病毒早期翻译并无显著影响,但病毒RNA复制均显著下调.结论:cHP发卡结构在基因组RNA复制过程中可能具有重要的调控作用.