PCR检测生殖器疱疹患者HSV-2

目的：用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ, Ｐ Ｃ Ｒ）检测生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍ ｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ２, Ｈ Ｓ Ｖ２）。方法：对１０１ 例生殖器疱疹和糜烂患者及２０ 例对照组用 Ｐ Ｃ Ｒ法检测 Ｈ Ｓ Ｖ１、 Ｈ Ｓ Ｖ２。结果： Ｈ Ｓ Ｖ２ 检出阳性率占 ６０４％ （６１／１０１）, Ｈ Ｓ Ｖ２ 和 Ｈ Ｓ Ｖ１ 双重感染占４％ （４／１０１）。对照组均为阴性,并且年龄轻者感染阳性率高于年龄长者。结论： Ｐ Ｃ Ｒ 具有操作较易、快速、敏感的特点,为临床对生殖疱疹的诊断和鉴别诊断提供了理想的新方法。     

单纯疱疹病毒2型ICP4基因荧光实时定量PCR检测方法的建立

目的 建立实时荧光PCR定量检测单纯疱疹病毒2型(HSV2)ICP4基因的方法.方法 依据HSV2 ICP4基因序列设计引物.PCR纯化后克隆到pMD-18T载体上进行测序,抽提重组质粒作为标准品.根据测序结果设计荧光定最PCR的引物和探针,质粒标准品10倍稀释后进行扩增,建立标准曲线,并进行灵敏度和可靠性分析.结果 测序结果显示在扩增的PCR片段中有在A-G无和T-C的无义突变.标准品101以下没有检测信号,101具有明确的检测信号,因而检测的灵敏度为10.可靠性测定结果:107-101进行10次重复Ct值的平均值分别为14.275±0.137、17.988±0.162、22.081±0.259、25.957±0.345、29.565±0.203、33.269±0.287、37.737±0.698,变异系数分别为0.965%、0.902%、1.174%、1.329%、0.686%、0.862%、1.851%.Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系.回归系数为0.998.结论 成功建立了HSV2 ICP4基因实时定量荧光PCR检测的方法,灵敏度高,重复性好,可用于HSV2 ICP4基因的定量分析.     

荧光定量PCR法检测生殖器疱疹病毒感染患者的结果及分析

目的：了解重庆地区疑有单纯疱疹病毒（HSV）感染患者的感染情况。方法：用荧光定量PCR法对422例疑有HSV感染的门诊患者进行检测。结果：（1）3个年龄段患者，即≤25岁，＞25岁并≤35岁，＞35岁的阳性率分别为27．93％（31／111）、23．65％（48／203）、15．74％（17／108），0．05＜P＜0．1，无差异。（2）男性患者和女性患者的阳性率分别为29．5％（41／139）和19．43％（55／238），P＜0．05，相差显著。（3）妇科、泌尿科、皮肤科就诊患者的阳性率分别为18．14％（41／226）、26．44％（23／87）、29．36％（32／109），P＜0．05，相差显著。结论：（1）重庆地区HSV感染率在男性患者和低龄人群（≤25岁）中发病率较高。（2）皮肤科患者的阳性率较其他两个科室为高。说明取标本的采取集部位十分重要。（3）FQ－PCR特异性高，灵敏度强，操作简单，时间短，结果客观准确，特别适宜于门诊患者快速检测诊断的需要。     

PCR检测生殖器疱疹患者HSV—2

目的：用聚合酶链反应检测生殖器疱疹患者２型单纯疱疹病毒。方法：对１０１例生殖器疱疹和糜烂患者及２０例对照组用ＰＣＲ法检测ＨＳＶ－１，ＨＳＶ－２。结果：ＨＳＶ－２检出阳性率占６０．４％（６１／１０１），ＨＳＶ－２和ＨＳＶ－１双重感染占４％（４／１０１），对照组均为阴性，并且年龄轻者感染阳性率高于年龄长者，结论：ＰＣＲ具有操作较易，快速，敏感的特点，为临床对生殖疱疹的诊断和鉴别诊断提供了理想的新方法。     

实时荧光定量PCR鉴别检测单纯疱疹病毒方法的建立

目的:建立快捷、灵敏、特异的单纯疱疹病毒(HSV)的实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测及分型方法。方法:选择HSV1和HSV2的糖蛋白B基因设计一对通用引物和对应的探针组建2个FQ-PCR反应体系,应用克隆的质粒建立系列标准品制作标准曲线,进行重复性和敏感性试验,以其他种类的细菌、病毒、真菌进行特异性分析,并用于检测生殖器疱疹患者的HSV1和HSV2。结果:HSV1和HSV2两标准曲线的线性检测范围均为105到1011Copies/L,相关系数均大于0.99,其他种类的细菌、病毒、真菌均未出现特异性扩增;48例生殖器疱疹患者疱液中HSV1和HSV2的检出率分别为6.3%(3/48)和87.5%(42/48)。结论:实时FQ-PCR法鉴别检测HSV1和HSV2,具有快速、特异、灵敏、便捷的特点,有助于HSV感染的流行病学和病理机制的研究;生殖器疱疹患者以HSV2感染为主。     

PCR检测角膜炎泪液中单纯疱疹病毒DNA的临床意义

单纯疱疹性角膜炎 (ＨＳＫ)主要是由单纯疱疹病毒Ｉ型 (ＨＳＶ Ｉ)引起的一种致盲率很高的传染性眼病。目前主要依靠病史及典型的角膜病变形态确诊 ,尚缺少实验室的病原学早期诊断指标。笔者自1999年 6月至 2 0 0 0年 5月 ,采用聚合酶链反应(ＰＣＲ)技术对 4 5例各型角膜炎患者泪液ＨＳＶ ＩＤＮＡ进行检测 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1.1　标本来源　 4 5例各型角膜炎患者系本院门诊就诊者。男 2 5例 ,女 2 0例 ,年龄 9～ 70岁。对照组30例 ,体检为健康者 ,男 2 0例 ,女 10例 ,年龄 10～73岁。各型角膜炎患者均按临床诊断标准确诊。…     

生殖器疱疹患者HSV-2和anti—HSV-2检测的临床意义

目的探讨生殖器疤疹（GH）患者HSV-2PCR及HSV-2抗体（包括IgG、IgM）检测的临床意义，评价其对GH诊断的重要性和实用性。方法对182例生殖器部位有皮损的现症GH患者检测HSV-2PCR及HSV-2抗体（包括IgG、IgM）。结果HSV-2PCR阳性检测率为90．6％（165／182），明显高于HSV-2IgG阳性检测率68．7％（125／182）和HSV-2IgM阳性检测率为14．3％（26／128）；初发患者HSV-2PcR阳性检测率为89．7％（61／68）明显高于HSV-2IgG阳性检测率39．7％（27／68）和HSV-2IgM阳性检测率25％（17／68）；复发患者HSV-2PCR阳性检测率为95．6％（109／114），HSV-2IgG阳性检测率为100％（114／114），两者几无差别，而HSV-2IgM阳性检测率为0；23例皮损不明显患者HSV-2IgG阳性检测率为78．3％（18／23），明显高于HSV-2PCR阳性检测率26％（6／23）和HsV-2IgM阳性检测率13％（3／23）。结论HSV-2PCR检测法对有典型临床症状如水疱和糜烂的GH阳性率高、诊断价值大，对临床症状不典型者阳性率低；HSV-2IgG检测对无皮损和无症状的患者有较大的诊断价值；HSV-2IgM对诊断GH感染的价值不大。     

衡阳地区性乱人群中HSV2感染的研究

目的：了解性乱人群典型皮损及无皮损的生殖道分泌物中2型单纯疱疹病毒（HSV2）的感染情况。方法：用PCR法对衡阳地区310例性乱者作HSV2－DNA检测。结果：187例典型皮损的性乱人群中,115例检出HSV2－DNA,阳性率为61．5％,其中男性阳性率为54．9％,女性阳性率为77．8％,男女之间差异显著（P＜0．05）。123例无皮损性乱人群中,28例检出HSV2－DNA,HSV2－DNA检出率为22．8％,其中男性阳性率为20．9％,女性阳性率为27．0％。结论：衡阳地区性乱人群中HSV2有较高的感染率,典型皮损区HSV2－DNA检出率高于无皮损的生殖道分泌物。     

实时定量PCR检测白色念珠菌方法学的建立

目的 采用Taq Man MGB探针技术, 建立白色念珠菌实时荧光定量PCR (RQ-PCR) 检测方法, 为临床白色念珠菌的检测提供快捷的方法.方法 以真菌D1/D2区基因的一段高度保守序列为扩增靶序列, 合成白色念珠菌特异性引物和探针, 提取白色念珠菌标准菌株的DNA, 构建含有靶基因片段的重建质粒, 扩增后DNA作为标准品, 建立白色念珠菌RQ-PCR的标准曲线, 并对其重复性、敏感性及特异性等方面进行方法学评价.结果 对构建好的克隆质粒测序, 插入片段与预期片段序列一致, 相似性达100%.白色念珠菌标准曲线为Y=-3.824x+41.36, R2=0.990, 该扩增曲线形态良好.结论 成功建立了实时荧光定量PCR检测白色念珠菌的方法, 其敏感性和特异性较好.     

佛山市南海区性病门诊350例疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒抗原与抗体检测与分析

目的了解佛山市南海区性传播疾病(STD)门诊病人单纯疱疹病毒感染的流行情况。方法对2013年1月—2014年6月间前往佛山市南海区3个规范化性病门诊就诊的患者进行问卷调查、生殖器疱疹临床诊断和单纯疱疹病毒分类抗体检测、分泌物实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测。结果 350例疑似生殖器疱疹患者中,HSV-I的Ig M和Ig G的检出率分别是5.4%(19/350)和87.7%(307/350),HSV-II的Ig M和Ig G检出率分别是2.9%(10/350)和42%(147/350),两种血清型中以HSV-I感染为主,且Ig G阳性率高于Ig M(HSV-I的χ2=238.1,P<0.005;HSV-II的χ2=259.08,P<0.005);HSV-ⅡIg G感染者147例(男115例,女32例),感染率分别为41.2%和42.7%。男性HSV-ⅡDNA感染率高于女性,二者差异有统计学意义(χ2=3.94,P<0.05)。结论本地区性病门诊中HSV抗体检出率高,以HSV-I感染为主;对于疑似生殖器疱疹患者,同时进行HSV抗原及血清HSV-I、HSV-II的Ig M和Ig G抗体联合检测更有助于临床GH诊断;男性患者易于临床诊断。     

实时荧光定量PCR技术用于MDS患者基因检测

目的探讨实时荧光定量PCR SYBR Green I探针技术用于骨髓增生异常综合征（MDS）患者基因检测的可行性。方法运用实时荧光定量PCR SYBR GreenI技术，检测21例MDS患者的SLCTA5基因表达情况，并以IDA、ITP、增贫及其他贫血19例为对照组。结果实验组和对照组SLC7A5基因的表达无明显的统计学差异。结论。eal-time PCR技术检测目的基因的表达是非常方便、快捷、准确的方法。     

培养的人胎盘细胞能被HSV-2感染

单纯疤疹病毒-2型(HSV-2)是某些新生儿先天性畸形和自发性流产的原因。为评估HSV-2感染人胎盘的可能性,用培养的人胎盘细胞被该病毒感染。敏感的抗补体免疫荧光(ACIF)法显示,感染的胎盘细胞有强烈的核荧光。故推测,HSV-2在体内有时可能先感染胎盘组织后再感染胎儿。     

多重巢式和定量PCR联合应用提高SARS病毒检测率

目的寻求一种可靠、可行的对急性严重呼吸道综合征病毒的早期诊断方法。方法应用多重巢式PCR联合荧光实时定量方法，对广州地区91份确诊和疑似病例标本、25份健康志愿者标本同时进行检测。结果25份健康志愿者标本经两种方法检测均为阴性。91份确诊和疑似病例标本经多重巢式PCR方法检测，阳性标本数53例，总阳性检测率58．24％；荧光实时定量PCR检测阳性标本数68例，阳性检出率74．73％；两种方法联合，阳性标本数76例，阳性检出率83．52％。结论多重巢式PCR联合荧光实时定量方法可进一步提高SARS病毒的阳性检出率，也为今后应对可能发生的其它突发性传染病病毒的检测提供分子诊断基础。     

HSV-2糖蛋白D在昆虫-杆状病毒表达系统中的表达及免疫原性分析

目的：在昆虫细胞中表达2型单纯疱疹病毒（HSV-2）糖蛋白D（gD2）胞外区基因,检测其免疫原性。方法：以HSV-2病毒基因组为模板,PCR扩增得到gD2片段,构建至杆状病毒质粒Bacmind中,转染sf9细胞,包装重组杆状病毒,收集后连续感染sf9细胞,收获第4代重组杆状病毒（P4）,通过Western blotting法鉴定蛋白表达情况,采用空斑实验检测重组病毒滴度,将P4代重组病毒作为种子大量感染sf9细胞,上清经镍柱亲和层析进行纯化,将纯化后的蛋白在第0、2和4周免疫BALB/c小鼠（gD2组）,以PBS作为阴性对照（PBS组）,ELISA检测小鼠血清中gD2特异性IgG滴度。结果：PCR鉴定和DNA测序,重组表达质粒gD2-Bacmind构建正确,空斑实验检测重组病毒滴度为2.0×10⁹ pfu·mL^-1,纯化的gD2重组蛋白在相对分子质量37000处出现目标条带,纯度达90%以上。第6周gD2组小鼠免疫血清中gD2特异性IgG抗体滴度Log10平均值达到4.34,与PBS组比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论：利用昆虫-杆状病毒表达系统表达的gD2胞外区蛋白具有良好的免疫原性,可作为HSV-2疫苗的候选。     

实时荧光定量PCR 法在检测血浆结核杆菌DNA 的应用

目的:探讨实时荧光定量PCR 法在检测血浆结核杆菌DNA 的应用及价值.方法:以我院确诊为结核病且未经治疗的患者392 例作为实验组,同时选取健康体检人群100 例作为对照组.分别对两组患者取静脉血,并对其血浆中结核分枝杆菌DNA 采用实时荧光定量PCR 法进行检测,同时对实验组患者进行痰涂片检查.结果:对照组患者实时荧光定量PCR 法检测全为阴性;实验组患者采用痰涂片检查,结果显示有80 例为阴性,其实时荧光定量PCR 法检测结果显示,痰涂片阳性的患者全为阳性,其阴性患者中有24 例为阳性,在对阳性患者抗痨治疗后有12 例患者转为阴性.实验组患者MTB DNA 为1.76×109 copies/mL.结论:本实验表明结核患者血浆中存在MTB DNA,采用实时荧光定量PCR 法可有效的对痰涂片阴性以及无痰患者进行诊断,有较好的利益价值.     

Real-time PCR检测人非小细胞肺癌中CYP2A6基因的表达

目的检测肺癌及相应癌旁正常组织中细胞色素P450 2A6(CYP2A6)mR NA的表达,探讨其可能的临床意义。方法采用Real-time PCR技术比较人肺癌与相应癌旁正常组织中CYP2A6mRNA的表达差异,并比较CYP2A6基因的表达与患者临床病理参数的关系。结果 CYP2A6 mR NA在肺癌组织中的表达低于对应的癌旁组织(P<0.05),CYP2A6 mRNA的表达程度与患者的性别、年龄、肺癌的病理分型及有无淋巴结转移无关(P>0.05)。结论 CYP2A6 mRNA在肺癌组织中的表达下调,提示CYP2A6基因表达下调可能在肺癌的发生发展中起作用。     

复发性口疮患者HSV—1的检测及其抗病毒治疗观察

目的：为了研究单纯疱疹病毒Ⅰ型与复发性口疮的关系：方法：采用ＰＣＲ技术检测复发性口疮患者（ＲＯＵ）损害区和健康对照者口腔粘膜脱落细胞的ＨＳＶ－１ＤＮＡ，然后对ＨＳＶ－１ＤＮＡ阳性和阴性患者用无环鸟苷作抗病毒治疗，并观察半年。结果：ＲＯＵ患者ＨＳＶ－１ＤＮＡ的检出率为２６．７％，对照组为６．７％，两者之间有高度显著性差异。ＨＳＶ－１ＤＮＡ阳性者与阴性者抗病毒治疗有效率分别是９３．７５％和１３．６３％     

实时荧光PCR法检测HER2基因扩增方法的建立

目的探讨应用双标准曲线的实时荧光PCR法检测原癌基因人类表皮生长因子受体2(HER2)基因扩增在临床乳腺癌诊治中的可行性。方法收集500例乳腺癌术后新鲜组织标本,抽提组织DNA进行实时荧光PCR检测,采用双标准曲线法定量,通过计算目的基因浓度和内标基因浓度的比值来判断HER2基因的扩增情况。选择灵敏度和特异度均较高的荧光原位杂交方法作为对照方法。结果检测阳性标本72例,阴性样本419例。该方法检测的灵敏度为85.9%,特异度为98.79%,准确度为96.74。与荧光原位杂交法(FISH)检测结果相比,二者具有较好的一致性。结论双标准曲线的实时荧光PCR法用于检测HER2基因扩增相对准确可靠,有较好的临床应用前景。