哈巴苷对H2O2诱导的大鼠心肌细胞H9c2氧化应激损伤的保护作用

目的探究哈巴苷(HG)对大鼠心肌细胞氧化应激损伤的作用。方法将H9c2细胞随机分为对照组(H9c2组)、哈巴苷组、H2O2组和H2O2+哈巴苷组,用H2O2处理细胞,复制氧化损伤模型。用哈巴苷(4μmoL)处理细胞,CCK8检测细胞增殖,Hoechst染色检测细胞凋亡,二氯荧光乙酰乙酸盐(DCF)法检测细胞内活性氧(ROS),根据试剂盒说明书检测上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)浓度,Westernblot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达。结果与H9c2组比较,H2O2组心肌细胞增殖倍数明显降低,哈巴苷作用细胞4d后,H2O2+哈巴苷组心肌细胞增殖倍数明显高于H2O2组;同时,与H9c2组比较,H2O2组细胞凋亡率明显升高;与H2O2组比较,H2O2+哈巴苷组细胞凋亡率显著降低;H2O2还能显著诱导H9c2细胞Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达,抑制Bcl-2表达;HG能显著减弱H2O2诱导Caspase-3和Caspase-9表达和抑制Bcl-2表达的作用;此外,H2O2组细胞内ROS活性及上清液中SOD和GSH浓度明显低于H9c2组,MDA浓度明显高于H9c2组,H2O2+哈巴苷组细胞内ROS活性及SOD和GSH浓度明显高于H2O2组,MDA浓度明显低于H2O2组。结论哈巴苷能通过抑制氧化应激抑制心肌细胞H9c2凋亡。     

黄芪总黄酮和黄芪甲苷对H_2O_2诱导的MRC-5细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨黄芪总黄酮(AF)和黄芪甲苷(Astr)对硫氧还蛋白(Trx)和无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子-1(APE/Ref-1)的表达影响及作用机制。方法将培养的细胞随机分为对照组、H2O2组、AF+H2O2组和Astr+H2O2组。H2O2作用于MRC-5细胞建立细胞氧化损伤模型;MTT法观察细胞活力,免疫荧光检测8-OHdG的表达,确定MRC-5细胞氧化损伤情况;流式细胞仪测定细胞凋亡;RT-PCR和Western印迹法检测APE/Ref-1、Trx mRNA和蛋白的表达。结果 800μmol/L H2O2孵育细胞24 h可显著诱导MRC-5细胞损伤,使细胞存活力下降至47.25%,细胞经AF和Astr与H2O2共孵育后,明显抑制由H2O2引起的APE/Ref-1蛋白表达下调,上调Trx的表达,降低了8-OHdG含量,抑制了氧化环境下的MRC-5细胞凋亡,细胞存活率明显升高。结论 Astr和AF通过上调APE/Ref-1和Trx的基因表达水平、拮抗H2O2而对MRC-5的氧化损伤具有保护作用。两者相比Astr优于AF。     

银杏叶内酯N对PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨银杏内酯N对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法用H2O2诱导PC12细胞损伤,刺激其凋亡,给予不同剂量的受试药物干预。用MTT法检测细胞存活率;用吖啶橙染色检测银杏内酯N对PC12细胞凋亡的作用;用流式细胞术检测银杏内酯N对PC12细胞活性氧(ROS)的影响,荧光定量RT-PCR法、Western印迹法分别检测Bcl-2、Bax mRNA和相应蛋白的表达。结果银杏内酯N可对抗H2O2诱导的PC12损伤,提高存活率和抑制凋亡,降低PC12细胞ROS水平,与模型组比较均有显著差异(P<0.05);Bcl-2蛋白及mRNA表达量升高,而Bax mRNA和Bax蛋白及表达量降低,与模型组比较均有显著差异(P<0.05),且呈一定的量效关系。结论银杏内酯N可对抗H2O2的神经毒性,其机制与调节凋亡相关基因及蛋白的表达有关。     

五味子乙素抗H2O2诱导PC12细胞凋亡的机制

目的 探讨五味子乙素(Sch B)抗H2O2诱导PC12细胞凋亡的影响及机制.方法 在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上,采用MTT比色法分析细胞存活率; Hochest33258荧光染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡情况;DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)水平;Real Time PCR和Western印迹检测p53基因mRNA和蛋白的表达.结果 不同剂量Sch B处理PC12细胞48 h后,可剂量依赖性对抗H2O2引起的细胞凋亡,提高细胞存活率,减轻H2O2导致的细胞核固缩、聚集和碎裂,降低细胞内ROS的含量,抑制p53基因mRNA和蛋白的表达.结论 Sch B可剂量依赖性对抗H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与其抗氧化、下调促凋亡基因p53的表达等有关.     

肌肽对过氧化氢诱导PC12细胞损伤后NF-κB P65表达的影响

目的探讨L-肌肽对H2O2诱导PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)凋亡的保护机制。方法在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上,加入肌肽作用于细胞,采用MTT比色法检测肌肽对PC12细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测凋亡相关基因NF-κB P65 mRNA的表达变化;免疫组化SABC法检测凋亡相关蛋白Caspase-3和NF-κB P65的表达,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡。结果不同浓度的肌肽对H2O2损伤的PC12细胞的存活率有显著的提高作用,20 mmol/L浓度时达最大值(P<0.05)。20 mmol/L的肌肽作用于PC12细胞可降低NF-κB P65的mR-NA表达,降低NF-κB P65蛋白的表达,流式细胞仪检测显示肌肽可抑制细胞的早期和晚期凋亡率。结论肌肽对H2O2损伤的PC12细胞有保护作用,机制可能是通过抑制NF-κB P65的表达来抑制PC12细胞的凋亡而实现的。     

硒对砷诱导的大鼠H9c2心肌细胞氧化损伤的抑制作用和可能机制

目的探讨硒对砷诱导的H9c2心肌细胞氧化损伤的保护作用及其可能机制。方法H9c2细胞按处理方法不同分对照组、Na2SeO3（1μmol/L）组、As2O3（5μmol/L）组、As2O3（5μmol/L）＋Na2SeO3（1μmol/L）组以及NF-κB抑制剂PDTC（100 nmol/L）不同处理组。应用MTT法检测细胞存活率;DTNB法检测细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）含量;二氢乙啶（Dihydroethidium,DHE）染色法检测细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）产生;提取细胞核蛋白,Western blotting法检测核蛋白中NF-κB的p65亚单位表达。结果与对照组相比,5μmol/L As2O3作用下,H9c2细胞生存率、细胞内GSH含量降低,ROS生成和核蛋白中NF-κB p65的表达增加;1μmol/L Na2SeO3可以提高As2O3损伤的H9c2细胞存活率和细胞内GSH含量,减少ROS生成和p65的表达。PDTC干预可减轻砷所致心肌细胞的损伤,表现为细胞ROS产生减少;Na2SeO3和抑制剂PDTC共同作用时,H9c2细胞生成ROS进一步减少。结论NF-κB信号途径参与了As2O3诱导的H9c2心肌细胞氧化应激反应,Na2SeO3可能通过抑制NF-κB减轻氧化应激诱导的H9c2细胞损伤。     

丙泊酚对过氧化氢诱导的H9c2细胞损伤的保护作用

目的观察丙泊酚对过氧化氢诱导的H9c2细胞损伤的保护作用。方法本实验通过使用过氧化氢（H2O2）在体外诱导H9c2细胞氧化应激反应,给予不同浓度的丙泊酚（5,10,20,50μM）作用后,分别测定细胞存活率,乳酸脱氢酶（LDH）释放,细胞内活性氧（ROS）释放,超氧化物歧化酶（SOD）活性,过氧化氢酶（CAT）活性及蛋白表达量。结果处理丙泊酚（10,20μM）能够抑制由H2O2诱导的细胞死亡,提高细胞存活率（P〈0.01）;抑制LDH释放（P〈0.01）和细胞内ROS释放（P〈0.01）;提高SOD活性,提高CAT活性和蛋白表达量（P〈0.01）。结论丙泊酚可能是通过提高内源性抗氧化酶的活性及蛋白表达量,抑制氧化应激反应,从而产生心脏保护作用。     

柚皮素对高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡及Nrf2/ARE信号通路的影响

[目的]探讨柚皮素(NAR)对高糖(HG)诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)凋亡及核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路的影响。[方法]将培养的H9c2细胞分为对照组(正常糖量)、HG组(35.5 mmol/L葡萄糖)、HG+NAR低、中、高浓度组(35.5 mmol/L葡萄糖+6.25、12.5、25.0μmol/L NAR)。用噻唑蓝法检测H9c2细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针染色法检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western blot法检测Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、Bax、Caspase-3、Bcl-2蛋白表达水平。[结果]经HG处理的H9c2细胞增殖活性、Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率、ROS水平、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。经HG与NAR共同处理H9c2细胞后,NAR低、中、高浓度组H9c2细胞增殖活性、Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率、ROS水平、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P...     

海藻多糖调节Nrf2通路对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤及铁死亡的抑制作用

目的 研究海藻多糖调节Nrf2通路对过氧化氢(H2O2)诱导的H9C2心肌细胞损伤及铁死亡的抑制作用。方法 采用H2O2诱导法建立心肌细胞损伤模型,设置正常对照组、氧化损伤组、海藻多糖低、中、高剂量组及阳性对照组,海藻多糖各剂量组分别加入0.3、0.6、1.2 mg/ml的海藻多糖,阳性对照组加入50μmol/L的叔丁基对苯二酚(tBHQ),继续培养72 h,使用噻唑蓝比色(MTT)法测定H9C2细胞存活率,酶联免疫吸附法(ELISA)测定H9C2细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,H9C2细胞Fe2+、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、4-羟基壬烯醛(4-HNE)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平及H9C2细胞上清液LDH、肌酸激酶(CK)水平,流式细胞法测定H9C2细胞凋亡率,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定H9C2细胞Nrf2、GPX4及HO-1 mRNA水平,免疫印迹法(Western blot)测定H9C2细胞Nrf2、GPX4及HO-1蛋白水平。结果 与氧化损伤组比较,海藻多糖各剂量组及阳性对照组H9C2细胞存活率、GSH水平,H9C2细胞Nrf2、GPX4及HO-1...     

lncRNA NEAT1调控miR-206对缺氧复氧大鼠心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1调控miR-206对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响和机制。方法 体外培养H9c2心肌细胞,构建心肌细胞缺氧复氧模型。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测缺氧复氧诱导后lncRNA NEAT1和miR-206的表达水平。将lncRNA NEAT1小干扰RNA(si-lncRNA NEAT1)、miR-206模拟物(miR-206 mimics)分别转染H9c2细胞,缺氧复氧诱导后,检测细胞中丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量以及细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)和cleaved Caspase-9蛋白表达。利用荧光素酶报告基因实验以及RT-qPCR验证lncRNA NEAT1和miR-206的靶向结合关系。结果 缺氧复氧诱导后H9c2细胞中lncRNA NEAT1的表达显著升高,miR-206的表达显著降低(P＜0.05)。转染si-lncRNA NEAT1或miR-206 mimics处理缺氧复氧H9c2细胞,细胞存活率显著升高,MDA、ROS含量以及LDH活性显著降低,cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9蛋白的表达显著降低,细胞凋亡率显著降低(P＜0.05)。lncRNA NEAT1靶向miR-206并负调控miR-206表达。抑制miR-206部分逆转沉默lncRNA NEAT1对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化损伤和凋亡的影响(P＜0.05)。结论 沉默lncRNA NEAT1通过上调miR-206可减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤和细胞凋亡,进而发挥心肌保护作用。     

干扰或过表达PDIA3对过氧化氢诱导的星形胶质细胞损伤的影响

目的探讨干扰或过表达蛋白质二硫键异构酶(PDI)A3对过氧化氢诱导的星形胶质细胞损伤的影响及其作用机制。方法体外培养星形胶质细胞,构建PDIA3干扰及过表达载体稳定株系,采用过氧化氢(H 2O 2)诱导建立星形胶质细胞损伤模型。实验将星形胶质细胞分为对照组(NC组)、H 2O 2组、H 2O 2+si-con组、H 2O 2+si-PDIA3组、H 2O 2+pcDNA组、H 2O 2+pcDNA-PDIA3组。实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PDIA3 mRNA表达;Western印迹检测PDIA3及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡。收集各组星形胶质培养基上清液检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率及肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平。结果与NC组相比,H 2O 2组星形胶质细胞中PDIA3 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);H 2O 2组细胞LDH释放量、TNF-α、IL-6水平、细胞凋亡率及p-p38蛋白表达均显著升高(P<0.05),干扰PDIA3表达后明显升高(P<0.05),PDIA3过表达后明显降低(P<0.05);H 2O 2组细胞存活率显著降低(P<0.05),干扰PDIA3表达后明显降低(P<0.05),PDIA3过表达后明显升高(P<0.05)。结论PDIA3过表达可改善H 2O 2诱导的星形胶质细胞氧化应激及炎症损伤,其可能通过抑制p38MAPK信号通路激活而发挥作用。     

虎杖苷通过激活Nrf2/HO-1信号抑制氧化应激诱导的心肌细胞损伤

目的研究过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2细胞损伤模型中,虎杖苷对心肌细胞的保护作用及机制。方法建立H2O2诱导的H9c2细胞损伤模型,MTT检测细胞生存能力;Western印迹检测细胞蛋白表达;试剂盒检测细胞培养上清液中超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平。结果MTT实验筛选药物剂量为100μmol/L;H2O2有效刺激剂量为100μmol/L;虎杖苷预处理抑制了H2O2诱导的细胞活性下降,抑制了H2O2诱导的细胞凋亡。虎杖苷促进了核因子E2相关因子(Nrf)2和血红素加氧酶(HO)-1蛋白的表达,降低了SOD的水平,同时使MDA水平升高。Nrf2抑制剂ML385与虎杖苷同时预处理后细胞凋亡得到抑制,同时Nrf2和HO-1蛋白的表达水平下降,SOD的水平升高而MDA水平下降。结论虎杖苷抑制H2O2诱导的H9c2细胞凋亡,其机制与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

异丙酚对过氧化氢导致PC12细胞损伤的影响及机制

目的探讨异丙酚对过氧化氢(H2O2)导致的PC12细胞损伤的影响及机制。方法以H2O2损伤PC12细胞作为氧化应激细胞损伤模型,加入10μmol/L的异丙酚,采用MTT法分析细胞存活率,Hoechst33258染色检测细胞核形态变化,罗丹明123染色检测细胞线粒体膜电位变化,双氯荧光黄乙酸乙酯(DCF-DA)染色检测细胞内活性氧(ROS)的含量,免疫印迹法检测pAkt蛋白表达;在此基础上,探讨异丙酚保护作用机制时再加入LY294002,分别检测细胞上述指标及pAkt的表达。结果 H2O2可致PC12细胞存活率下降,凋亡增加,异丙酚(10μmol/L)可使PC12细胞的存活率增加,凋亡率降低;异丙酚可抑制H2O2导致ROS和膜电位变化;增加Akt磷酸化水平;PI3K抑制剂LY294002可拮抗异丙酚的保护作用,使细胞存活率降低、ROS生成增加、膜电位下降。结论异丙酚可减轻H2O2导致的PC12细胞损伤,这一作用是通过激活PI3K/Akt通路实现的。     

过表达SHC3激活AKT/Nrf2/GSH通路保护帕金森病氧化应激损伤

目的研究过表达含有Src同源结构域2的衔接蛋白(SHC)3对帕金森病(PD)氧化应激损伤的影响及其机制。方法运用1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)处理PC12细胞构建PD模型,将PC12细胞分为正常组、模型组、模型+NC组、模型+SHC3组;用qRT-PCR法检测各组细胞中SHC3 mRNA表达;Western印迹检测各组细胞中SHC3、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)/Bcl-2关联X的蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3、磷酸化(p)-蛋白激酶B(AKT)、核因子NF-E2相关因子(Nrf)2的蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量;流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果与正常组相比,成功构建PC12细胞损伤模型,且MPP+损伤的PC12细胞可显著下调SHC3表达,上调ROS、MDA、LDH含量,下调GSH含量,显著降低细胞活性,促进细胞凋亡,显著下调p-AKT、Nrf2的蛋白表达,上调Bcl-2/Bax、caspase-3的蛋白表达。与模型+NC组相比,成功构建过表达SHC3的PC12细胞损伤模型,且过表达SHC3可降低ROS、MDA、LDH含量,升高GSH含量,显著升高细胞活性,显著抑制细胞凋亡,显著上调p-AKT、Nrf2的蛋白表达,下调Bcl-2/Bax、caspase-3的蛋白表达。结论过表达SHC3可保护PD的氧化应激损伤,其机制可能与激活AKT/Nrf2/GSH通路有关。     

番茄红素对过氧化氢诱导的小鼠来源神经瘤母细胞损伤的保护作用及机制研究

目的观察番茄红素(LY)对过氧化氢(H2O2)诱导的神经瘤母(N2a)细胞损伤的保护作用及可能机制。方法用H2O2处理小鼠来源N2a细胞6h,建立细胞氧化损伤模型。用LY预孵N2a细胞24h后,加入100μmol/LH2O2共同作用6h,以探讨LY的保护作用。实验分对照组、LY组、损伤组及保护组。采用MTT比色法测定N2a细胞活力;Hochest33258染色观察凋亡细胞形态;流式细胞仪测定N2a细胞凋亡率;Western blot法测定细胞质Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达。结果与对照组比较,损伤组明显造成细胞损伤(P<0.01),导致细胞凋亡,同时降低Bcl-2表达,增加Bax表达,Bcl-2/Bax比值显著降低,增加Caspase-3蛋白水平(P<0.01)。与损伤组比较,保护组予LY预处理后,N2a细胞活力明显增加(P<0.01),凋亡细胞减少,Bcl-2/Bax比值增高,Caspase-3蛋白表达降低(P<0.05)。结论 LY能有效保护H2O2对N2a细胞的损伤,并通过提高Bcl-2/Bax比值,抑制Caspase-3蛋白活化,发挥保护作用。     

莱菔硫烷对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法:H9C2心肌细胞随机分为3组:正常对照组、缺氧/复氧组(H/R组)和SFN预处理组(10μmol/L SFN预处理细胞12 h后,进行缺氧/复氧处理)。采用倒置显微镜观察各组细胞形态及凋亡程度,CCK8法检测各组H9C2心肌细胞存活率,Western blot法检测血红素氧化酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果:与正常对照组相比,H/R组和SFN预处理组心肌细胞存活率均降低(P均0.01),HO-1、NQO1、Bcl-2和Bax蛋白表达水平及Bcl-2/Bax均升高(P均0.01)。与H/R组相比,SFN预处理组的细胞生长状态较好,细胞存活率明显提高[(76.00±0.52)%对(55.73±0.43)%,P0.01],HO-1(3.24±0.01对1.86±0.01,P0.01)、NQO1(1.67±0.01对0.95±0.01,P0.01)和Bcl-2(0.70±0.00对0.48±0.01,P0.01)蛋白表达水平及Bcl-2/Bax(1.22±0.01对0.56±0.00,P0.01)均明显升高,Bax蛋白表达水平明显降低(0.57±0.00对0.85±0.01,P0.01)。结论:SFN对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤有保护作用,可能与促进HO-1、NQO1、Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达有关。     

丹参酮ⅡA对大鼠心肌细胞H9C2氧化损伤的保护作用

目的:探究丹参酮ⅡA对大鼠心肌细胞H9C2氧化损伤的保护作用。方法:建立H2O2诱导大鼠心肌细胞H9C2氧化损伤模型。将体外培养的H9C2细胞随机分为空白对照组、DMSO溶剂对照组、H2O2模型组、丹参酮ⅡA高、中、低剂量组。用MTT法测定心肌细胞存活率,并检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)以及丙二醛(MDA)的水平。结果:与空白对照组相比,H2O2模型组细胞存活率显著降低,LDH、MDA水平升高,SOD水平降低;与H2O2模型组相比,丹参酮ⅡA高剂量组心肌细胞存活率显著增高,LDH和MDA水平降低,SOD水平升高(P0.01)。结论:丹参酮ⅡA能够减轻心肌细胞氧化损伤。     

miR-141-3p靶向调控Keap1对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡、氧化应激和Nrf2/HO-1通路的影响

目的:探讨miR-141-3p通过靶向调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞氧化应激、凋亡和Nrf2/血红素氧合酶1(HO-1)通路的影响。方法:体外培养大鼠胚胎心肌细胞H9c2,构建心肌细胞H/R损伤模型。将H9c2细胞随机分为control组(正常培养的H9c2细胞)、H/R组(H9c2细胞经H/R处理)、H/R+miR-NC组(H9c2细胞NC转染经H/R处理)和H/R+miR-141-3p组(H9c2细胞转染miR-141-3p经H/R处理),每组设3个复孔。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测不同组别心肌细胞中miR-141-3p和Keap1表达水平,细胞毒性试验(CCK-8)法检测心肌细胞存活率,流式细胞术检测心肌细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组心肌细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)表达水平,化学荧光法检测各组心肌细胞活性氧(ROS)含量,蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测Nrf2、HO-1蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验和Western Blo...     

复方丹参注射液对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的　探讨复方丹参注射液 (ISM)对 H2 O2 诱导的 PC1 2细胞凋亡的保护作用机制。方法　在 H2 O2 诱导 PC1 2细胞凋亡模型的基础上 ,采用 MTT比色分析测定细胞存活率 ,Hoechst- PI荧光染色和流式细胞仪检测分析细胞凋亡情况 ,RT- PCR检测 par- 4和 caspase- 3基因 m RNA表达 ,Western blot检测 par- 4蛋白表达和 caspase- 3P2 0活性片段 ,比色法检测 caspase- 3相对活性。结果　不同剂量 ISM预处理 1 h可提高 PC1 2细胞存活率 ,降低 par- 4和 caspase- 3的 m RNA表达以及 Par- 4的蛋白表达 ,caspase- 3 P2 0活性片段和 caspase- 3相对活性减少 ,但变化不明显。结论　 ISM可剂量依赖性地对抗 H2 O2的神经毒性作用 ,其机制可能与凋亡基因 par- 4表达有关 ,与 caspase- 3的关系尚需进一步探讨。     

抗衰老Klotho蛋白对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的研究抗衰老Klotho蛋白对过氧化氢(H2O2)氧化损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的影响及其作用机制。方法用H2O2诱导HUVEC构建氧化损伤模型。将HUVEC设置对照组、H2O2损伤组、不同浓度(1、10、100μg/L)Klotho蛋白组、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)作用组。噻唑蓝法检测细胞存活率;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量;酶联免疫吸附法检测一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、核因子κB(NF-κB)的含量;SA-β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况;流式细胞术检测活性氧(ROS)和细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、NF-κB p65及p-AKT的表达变化。结果与对照组相比,H2O2损伤组细胞存活率显著下降,LDH、MDA含量显著增加,SOD、GSH活性显著下降,NO含量下降,ET-1、ICAM-1、VCAM-1、NF-κB、细胞衰老率、ROS含量和细胞凋亡率显著增加,Bax蛋白表达上升而Bcl-2蛋白表达显著降低,NF-κB p65磷酸化水平显著升高而p-AKT/AKT水平下降(均P0.05)。在不同浓度Klotho蛋白组,细胞存活率逐渐上升,LDH、MDA含量逐渐下降,SOD、GSH活性随之上升,NO含量上升,ET-1、ICAM-1、VCAM-1、NF-κB、细胞衰老率、ROS含量和细胞凋亡率逐渐下降,Bax蛋白、NF-κB p65磷酸化水平逐渐下降,Bcl-2蛋白、p-AKT/AKT水平逐渐上升(均P0.05)。AKT作用组上述指标的检测结果与Klotho蛋白组相反。结论抗衰老Klotho蛋白能提升H2O2氧化损伤后HUVEC的存活率,增强细胞功能和抗氧化作用,减少细胞炎性反应、衰老和凋亡,其通过抑制Bax、NF-κB p65及促进Bcl-2、p-AKT/AKT而发挥作用。