14-3-3γ对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌损伤的保护作用

目的研究14-3-3γ在异丙肾上腺素(Iso)诱导的大鼠心肌损伤中的保护作用。方法构建pc DNA3.1~(-1)4-3-3γ重组载体,使用pc DNA3.1~(-1)4-3-3γ或pc DNA3.1对体外培养的H9c2(2~(-1))细胞进行转染。实验分为四组:pc DNA3.1~(-1)4-3-3γ+Iso损伤组,pc DNA3.1+Iso损伤组,Iso损伤组及空白对照组(未经任何处理细胞组)。Western印迹检测心肌细胞中14-3-3γ的表达情况;MTT法检测心肌细胞增长率;取培养液检测各组细胞丙二醛(MDA)含量变化和超氧化物歧化酶(SOD)活性变化;流式细胞法检测重组质粒转染对心肌细胞凋亡的影响。结果 Iso损伤使心肌细胞的MDA含量显著增加、SOD活性降低、细胞增长率降低、细胞凋亡增加,转染pc DNA3.1~(-1)4-3-3γ重组质粒后再进行Iso损伤,则MDA含量显著减少、SOD活性增高、细胞增长率增高、细胞凋亡减少(P0.05)。结论 14-3-3γ对Iso诱导的大鼠心肌细胞损伤有明显的对抗和保护作用。     

血管内皮细胞生长因子真核表达质粒的构建及其在心肌细胞中的表达

目的 :构建血管内皮细胞生长因子 （ VEGF1 65）真核表达质粒 pc DNA3 .1（ -） /h VEGF1 65,并通过转染心肌细胞来验证其生物活性。方法 :应用 DNA重组方法 ,将编码 h VEGF1 65全长 c DNA克隆于真核表达载体 pc DNA3 .1（ -）中 ,构建 pc DNA3 .1（ -） /h VEGF1 65真核表达质粒 ;应用阳性脂质体介导的基因转染技术 ,将真核表达质粒 pc D-NA3 .1（ -） /h VEGF1 65瞬时转染培养的大鼠心肌细胞中 ;采用 RT-PCR,ELISA,Western blot及免疫组化染色等方法检测 VEGF1 65基因在心肌细胞中的表达情况 ;应用 MTT法检测转染后细胞上清液中 VEGF1 65的生物活性。结果 :将构建好的真核表达质粒 pc DNA3 .1（ -） /h VEGF1 65转染心肌细胞后 ,VEGF m RNA及蛋白表达水平明显增高 ,转染后的心肌细胞培养上清液具有促使内皮细胞增殖的生物活性。结论 :成功构建了真核表达质粒 pc DNA3 .1（ -） /h VEGF1 65,其转染心肌细胞后可获得较高水平 VEGF蛋白的表达 ,所表达出 VEGF蛋白具有生物学活性     

HIF-1α介导线粒体功能调控糖尿病心肌缺血再灌注损伤的作用机制研究

目的研究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对高糖作用下缺血再灌注(IR)损伤的心肌细胞凋亡和氧化应激,及其信号通路下游因子的调控作用。方法二甲基乙二酰基甘氨酸激活HIF-1α对高糖作用下IR心肌细胞损伤的干预。实验分四组:对照组(细胞常规培养)、高糖+缺氧复氧组(25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基培养24 h,缺氧2 h,复氧8 h)、HIF-1α处理组(高糖,缺氧加复氧,缺氧前3 h用100μmol/L的二甲基乙二酰基甘氨酸处理)、二甲基亚砜(DMSO)对照组(高糖,缺氧加复氧,缺氧前3 h用100μmol/L的DMSO处理)。流式细胞术测定细胞凋亡率,CCK-8法分析细胞活性; ELISA法检测细胞培养上清液中超氧化物歧化酶活性和丙二醛的表达; ATP含量试剂盒检测各组细胞ATP含量; Western Blot法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1,以及能量代谢相关的p-AMPK、AMPK蛋白表达,HIF-1α核蛋白表达。结果高糖合并IR损伤增加心肌细胞的凋亡(P<0.01),降低心肌细胞活力(P<0.01),HIF-1α表...     

HIF-1α反义寡核苷酸体外对缺氧时视网膜血管内皮细胞HIF-1α和VEGF表达的影响

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）反义寡核苷酸（ASODN）治疗视网膜新生血管性疾病的可行性及机制。方法将体外培养的牛眼视网膜微血管内皮细胞（BREC）分为转染组和未转染组,转染组体外转染HIF-1α ASODN（根据GenBank提供的HIF-1αcDNA序列设计）,两组均予125μmol/L的CoCl2行缺氧处理。采用免疫荧光法检测细胞HIF-1α的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF蛋白水平。结果脂质体介导的HIF-1α ASODN可成功转染BREC细胞。未转染组缺氧开始时HIF-1α有极低表达,缺氧1h时表达量显著升高,4h达到高峰,16h后下降。而转染组HIF-1α的表达始终在极低水平,两组间有显著性差异（P〈0.01）。转染组从缺氧1h开始VEGF表达明显低于未转染组（P〈0.01）。结论脂质体介导的HIF-1α ASODN能有效抑制BREC细胞HIF-1α的表达,从而降低细胞VEGF的表达。     

过表达RGC-32对胰腺癌BxPC-3细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨RGC-32基因在胰腺癌Bx PC-3细胞增殖、凋亡中的作用。方法常规培养胰腺癌Bx PC-3细胞,构建RGC-32表达质粒pc DNA3.1/myc-His C-RGC-32,并瞬时转染Bx PC-3细胞作为实验组;将转染空质粒pc DNA3.1/myc-His C的Bx PC-3细胞作为对照组;应用实时定量PCR及Western blotting确定转染效率。采用细胞增殖试剂盒CCK-8(cell counting kit-8)法检测转染前后细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡的变化。结果定量PCR及Western blotting检测结果均显示转染实验组较对照组RGC-32mRNA及蛋白表达显著上调(P0.05)。细胞增殖实验表明实验组较对照组细胞存活率显著性下降(P0.05);细胞凋亡实验表明实验组较对照组细胞凋亡率无显著性下降(P0.05)。结论在胰腺癌Bx PC-3细胞中,过表达RGC-32可抑制细胞增殖,但对细胞凋亡无明显作用。     

阿霉素损伤心肌细胞miRNA378＊与calumenin、GRP78、bax及bcl-2相关性研究

目的:研究阿霉素损伤心肌细胞miRNA378*与网腔钙结合蛋白(calumenin)、内质网应激伴侣蛋白GRP78、凋亡因子bax及bcl-2相关性。方法:实验分6组:对照组、阿霉素组、miRNA378*过表达对照组、miRNA378*过表达组、miRNA378*沉默对照组、miRNA378*沉默组。原代培养乳鼠心肌细胞,采用免疫组织化学方法检测培养乳鼠心室肌细胞α-SMA蛋白,慢病毒质粒转染心室肌细胞,实时荧光定量PCR技术检测各组心肌细胞miRNA378*、calumenin、GRP78、bax及bcl-2mRNA表达。结果:1与对照组相比较,阿霉素组心肌细胞calumenin mRNA表达明显减少(P0.01),GRP78 mRNA表达增加(P0.01),bax mRNA表达增加(P0.01),bcl-2mRNA表达明显减少(P0.01)。2与阿霉素组相比较,miRNA378*过表达组心肌细胞calumenin mRNA表达增加(P0.01),bcl-2mRNA表达增加(P0.01),而GRP78mRNA表达减少(P0.01),bax mRNA表达减少(P0.01)。与阿霉素组相比较,miRNA378*沉默组GRP78、bax mRNA表达增加(P0.01),bcl-2mRNA表达减少(P0.01)。结论:阿霉素损伤可能引起心肌细胞calumenin表达减少进而发生内质网应激;上调miRNA378*表达会增加阿霉素损伤心肌细胞calumenin表达缓解内质网应激,进而抑制心肌细胞凋亡;而沉默miRNA378加重阿霉素损伤心肌细胞内质网应激及促进心肌细胞凋亡。     

miRNA378*对柯萨奇B3病毒感染心肌细胞凋亡、网腔钙结合蛋白、内质网应激及信号通路因子的作用

目的:探讨上调miRNA378*表达对柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞凋亡、网腔钙结合蛋白、内质网应激及信号通路因子的作用。方法:实验分4组:对照组(正常细胞)、CVB3感染组(正常细胞+CVB3)、miRNA378*过表达对照组(正常细胞+CVB3+转染miRNA378*空表达质粒)、miRNA378*过表达组(正常细胞+CVB3+转染miRNA378*过表达质粒)。原代培养乳鼠心肌细胞,采用免疫组织化学方法检测培养乳鼠心室肌细胞α-SMA蛋白,慢病毒质粒转染心室肌细胞,除对照组外,其他各组心肌细胞感染CVB3,采用TUNEL技术检测各组心肌细胞凋亡率;用Western blotting技术检测各组心肌细胞网腔钙结合蛋白、内质网应激伴侣蛋白GRP78及内质网应激信号通路因子PERK、P-PERK、eIF2α、ATF4、CHOP表达。结果:与CVB3感染组比较,miRNA378*过表达组心肌细胞凋亡率明显减少,网腔钙结合蛋白表达增加,而GRP78、P-PERK、eIF2α、ATF4、CHOP表达均减少(均P0.01),PERK表达差异无统计学意义。结论:上调CVB3感染心肌细胞miRNA378*表达可引起心肌细胞凋亡减少,网腔钙结合蛋白表达增多,进而缓解内质网应激,并抑制内质网应激凋亡信号通路因子表达。     

低氧诱导因子1α基因转染的人脂肪源性干细胞对肾小管上皮细胞损伤的影响

将低氧诱导因子1α(HIF-1α)基因质粒高效感染人脂肪源性干细胞(hADSCs),并与顺铂诱导的入近端肾小管上皮细胞(HK-2)共孵育,观察hADSCs对HK-2细胞损伤的影响.方法:以慢病毒为载体,将HIF-1α转染hADSCs,与顺铂诱导的HK-2细胞共孵育.电镜观察HK-2细胞形态、结构的变化;原位末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡指数;Western blot检测HK-2细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病2基因(Bcl-2)的变化及hADSCs细胞促红细胞生成素(EPO)、血红素氧化酶1(HO-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,ELISA检测培养液中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子1(KIM-1)的浓度,EPO、HO-1、VEGF和HIF-1α的浓度变化.结果:(1)与顺铂诱导组相比,共孵育后的HK-2细胞结构损伤减轻、凋亡细胞减少,caspase-3的表达低于顺铂诱导组、Bcl-2的表达水平升高;其中HIF-1α转染的hADSCs与HK-2细胞共孵育后,HK-2细胞损伤明显减轻,凋亡蛋白的变化更为明显.(2)顺铂诱导组培养液中NGAL、KIM-1浓度升高,以KIM-1变化明显(P＜0.05);细胞共孵育后培养液中KIM-1浓度降低,转染组较明显.(3)转染后的hADSCs细胞内EPO、HO-1、VEGF的蛋白表达升高;培养液中HO-1、VEGF含量增高(P＜0.05),HIF-1α、EPO的含量变化不明显.结论:hADSCs与HK-2细胞共孵育后,可以减轻顺铂诱导的HK-2细胞结构损伤、抑制细胞凋亡,HIF-1 α转染hADSCs后其作用更为明显,可能与细胞保护因子的高表达有关.     

上调FBP1表达对胃癌细胞生长的抑制作用

目的探讨上调果糖-1,6-二磷酸酶1(fructose-1,6-bisphosphatase 1,FBP1)表达对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法以实时定量PCR和Western blotting检测胃癌BGC-823、SGC-7901细胞中FBP1 mRNA和蛋白的表达;将培养的BGC-823细胞随机分为对照组(未转染)、阴性组(转染pc DNA3.1质粒)和实验组(转染pc DNA3.1-Flag-FBP1质粒),以实时定量PCR检测FBP1 mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blotting检测FBP1、Cyclin D1、c-Myc和Cleaved caspase-3蛋白表达。结果与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比,胃癌BGC-823、SGC-7901细胞中FBP1蛋白及mRNA的相对表达水平均显著降低,且BGC-823细胞较SGC-7901细胞下降更为明显;转染后,与对照组相比,实验组细胞中FBP1蛋白及mRNA、细胞的增殖能力和Cyclin D1、c-Myc蛋白表达水平均显著降低,细胞凋亡能力和Cleaved caspase-3蛋白表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P0.05);阴性组与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 FBP1在胃癌细胞中低表达,上调其表达能够抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与上调Cleaved caspase-3蛋白和下调Cyclin D1、c-Myc蛋白表达有关。     

芒柄花素调节HIF-1α/VEGF信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡和肿瘤血管生成拟态的影响

目的 探讨芒柄花素(FMN)调节低氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子(HIF-1α/VEGF)信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡和肿瘤血管生成拟态(VM)的影响。方法 采用实时荧光定量PCR法检测人胃癌细胞株BGC-823、MGC-803、MKN28、SGC-790和人胃黏膜上皮细胞株GES-1中HIF-1α、VEGF的m RNA表达水平。将生长良好的MGC-803细胞分别设为对照组、30μmol/L FMN组、50μmol/L FMN组、80μmol/L FMN组、80μmol/L FMN+HIF-1α过表达质粒(pc-HIF-1α)组、80μmol/L FMN+阴性对照(pc-vector)组并进行相应处理。MGC-803细胞经上述药物处理及质粒转染后,采用MTT法计算MGC-803细胞增殖率,实时荧光定量PCR法检测各组MGC-803细胞中HIF-1α、VEGF的mRNA表达水平,流式细胞仪检测MGC-803细胞凋亡率,成管实验检测VM形成情况,蛋白质印迹法检测MGC-803细胞中VEGF、HIF-1α的蛋白表达水平。结果 各种人胃癌细胞株中HIF-1α、VEGF的mRNA表达水平均较...     

WWOX基因过表达对人胃癌细胞增殖、凋亡能力的影响及机制研究

目的探究含有WW结构域的氧化还原酶基因(WWOX)mRNA在胃癌中的表达量及过表达WWOX对人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡能力的影响及作用机制。方法使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测WWOX mRNA在胃癌组织和癌旁组织中的表达量;利用脂质体LipofectamineTM2000将重组质粒pc DNA3.0-WWOX、空载体pc DNA3.0-NC转入人胃癌SGC7901细胞中,未转染细胞为空白组,蛋白质印迹法(Western blotting)检测WWOX蛋白表达量;绘制转染后人胃癌SGC7901细胞增殖状况;流式细胞术检测SGC7901细胞凋亡率;Western blotting检测转染后细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和生存素(Survivn)蛋白的表达量。结果 WWOX mRNA在胃癌组织中的表达量显著低于癌旁组织(P0.05);pc DNA3.0-WWOX组WWOX蛋白的表达量显著高于pc DNA3.0-NC组和空白组(P0.05);绘制细胞生长曲线发现,WWOX基因能抑制胃癌SGC7901细胞的增殖;流式细胞术检测结果显示,pc DNA3.0-WWOX组细胞的凋亡率显著高于pc DNA3.0-NC组和空白组(P0.05);pc DNA3.0-WWOX组细胞Cyclin D1蛋白的表达显著低于pc DNA3.0-NC组和空白组(P0.05),而Survivn蛋白显著高于pc DNA3.0-NC组和空白组(P0.05)。结论 WWOX mRNA在胃癌中的表达量低于癌旁组织;过表达WWOX可通过降低Cyclin D1蛋白、增加Survivn蛋白抑制胃癌SGC7901细胞的增殖,并促进其凋亡。     

稳定转染hSOD1-G93A基因的肌萎缩侧索硬化细胞模型的建立

目的建立稳定转染h SOD1-G93A真核表达载体肌萎缩侧索硬化细胞模型。方法进行NSC-34细胞的培养,利用脂质体方法把已经构建好的pc DNA3.1(-)、h SOD1-WT-pc DNA3.1(-)和h SOD1-G93A-pc DNA3.1(-)质粒转染至NSC-34细胞系中,再通过G418筛选建立稳定表达h SOD1基因的NSC-34细胞系;以RT-PCR法鉴定转染后h SOD1在NSC34细胞系中的表达。结果转染h SOD1-G93A-pc DNA3.1(-)质粒的细胞与正常NSC-34细胞相比,胞体变圆,突起减少,且轴突变短。而转染pc DNA3.1(-)和h SOD1-WT-pc DNA3.1(-)质粒的细胞较正常NSC-34细胞无明显变化。RT-PCR法鉴定结果显示,转染h SOD1-WT-pc DNA3.1(-)和h SOD1-G93A-pc DNA3.1(-)质粒的细胞中h SOD1基因表达为阳性,而正常NSC-34细胞和转染pc DNA3.1(-)质粒的对照组为阴性。结论成功获得可稳定表达h SOD1-G93A基因的肌萎缩侧索硬化细胞模型。     

作者单位：030001山西省太原市 山西医科大学基础医学院生理学系,细胞生理学山西省重点实验室通讯作者：贺忠梅,E-mail：hezmei@126.com

目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)稳定表达对大鼠心肌缺血再灌注细胞凋亡的影响及可能机制。方法 采用结扎冠脉左前降支45min,再灌注3h的方法,构建大鼠心肌缺血再灌注损伤模型;实验分为假手术组(Sham)、心肌缺血/再灌注组(MI/R)、HIF-1α活化剂DMOG 心肌缺血/再灌注组(D MI/R)、HIF-1α抑制剂YC-1 心肌缺血/再灌注组(YC-1 MI/R);采用全自动生化分析仪测定血清心肌酶(CK-MB,LDH)活性;Western blot检测心脏组织HIF-1α蛋白表达;Evens blue/TTC染色测定心肌梗死面积;TUNEL染色及Caspase-3,8,9活性测定心肌细胞凋亡。结果 (1)与MI/R 组相比,D MI/R 组的HIF-1α蛋白表达量明显增加,心肌酶CK-MB、LDH的活性降低,心肌梗死面积明显减小,并且心肌组织的病理损伤减轻;(2)稳定HIF-1α表达可明显降低心肌细胞凋亡率,且部分逆转了缺血再灌注后心肌组织Caspase-9与Caspase-3的活性升高。结论 HIF-1α稳定表达可抑制线粒体途径介导的心肌细胞凋亡,从而发挥对缺血再灌注损伤的心脏保护效应。     

乳腺癌细胞中缺氧诱导因子-1α和miR-210的表达及其调控

目的探讨乳腺癌MCF-7细胞中缺氧诱导因子(HIF)-1α与microRNA-210(miR-210)的表达情况及二者之间的调控关系。方法应用Western印迹和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术分别检测MCF-7细胞中HIF-1α和miR-210的表达情况。分别构建针对HIF-1α和miR-210的shRNA质粒表达载体,利用LipofectamineTM2000转染至MCF-7细胞中,观察HIF-1α和miR-210的表达情况。结果 MCF-7细胞中存在HIF-1α和miR-210表达,转染HIF-1α的shRNA后HIF-1α和miR-210的表达明显下降;转染miR-210的shRNA后HIF-1α表达没有变化,但miR-210的表达明显下降。结论乳腺癌MCF-7细胞中存在HIF-1α和miR-210表达,HIF-1α可正向调控miR-210的表达。     

缺氧诱导因子1α对肝癌细胞HepG2干细胞特性及表阿霉素敏感性的影响

目的探讨缺氧诱导因子(HIF)1α对肝癌细胞HepG2干细胞特性及表阿霉素敏感性的影响。方法以肝癌细胞为研究对象,肝癌细胞HepG2脂质体转染过表达HIF-1α的质粒作为实验组,转染pcDNA3.1空质粒作为对照组,单独HepG2细胞为HepG2组。实时荧光定量PCR检测HIF-1αmRNA表达,Western Blot检测HIF-1α蛋白表达;流式细胞术检测细胞表面CD133表达。不同浓度表阿霉素(0、6.25、12.5、25、50μmol/L)作用3组细胞24 h,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测表阿霉素(50μmol/L)处理后细胞凋亡情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用t检验。结果相较于HepG2组及对照组,实验组HIF-1αmRNA的表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P值均<0.001);Western Blot结果显示实验组HIF-1α蛋白高表达。HepG2组、对照组和实验组细胞的CD133比例分别为0.040%±0.003%、0.030%±0.010%、20.110%±0.600%,实验组的CD133阳性率显著高于HepG2组和对照组(P值均<0.001)。表阿霉素浓度为25、50μmol/L时,HepG2组和对照组的细胞活性明显受到抑制,显著低于实验组(P值均<0.05)。50μmol/L表阿霉素作用48 h后,实验组的细胞凋亡率(67.9%±2.5%)较HepG2组(93.6%±1.5%)和对照组(93.0%±1.2%)明显降低(P值均<0.001)。结论过表达HIF-1α的质粒成功转染至HepG2细胞,HIF-1α可提高肝癌细胞干细胞比例使其对表阿霉素耐药。     

核糖核酸干扰缺氧诱导因子-1α对食管鳞癌细胞的抑制效果研究

目的 探讨人食管鳞癌细胞系Eca-109中RNA干扰抑制缺氧诱导因子(HIF)-1α的体内、外实验效果.方法 用针对HIF-1α mRNA的小发夹RNA(shRNA)真核表达载体转染人食管鳞癌细胞Eca-109,检测HIF-1α、基质金属蛋白酶(MMP)-2、葡萄糖载体蛋白(GLUT)-1表达,挑选干扰效果最好的细胞命名为Eca-109/shRNA,流式细胞仪检测细胞凋亡率.6周龄BALB/C裸鼠30只,按皮下注入细胞不同均分为三组,A组为Eca-109,B组为转染空质粒Eca-109(Eca-109/Neo),C组为Eca-109/shRNA.观察肿瘤出现时间,测量裸鼠体质量、瘤体大小,计算肿瘤体积.28 d后处死全部裸鼠,取瘤体称重.用Western印迹法检测肿瘤组织HIF-1α蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)、凋亡抑制蛋白bcl-2和生存素的表达.结果 Eca-109/shRNA细胞的HIF-1α蛋白表达明显被抑制,同时MMP-2,GLUT-1表达也明显下调,细胞凋亡率为(21.32±1.12)%,比Eca-109细胞和Eca-109/Neo细胞[(1.17±0.85)%和(5.31±1.46)%]明显升高(P＜0.01).A、B组裸鼠接种1周左右成瘤,C组裸鼠2周左右成瘤,成瘤时间较A、B组延迟,且瘤体生长减慢.28 d后移植瘤体积:A组为(1.29±0.34)cm3,B组为(1.19±0.35)cm3,C组为(0.45±0.20)cm3.瘤重:A组为(0.73±0.13)g,B组为(0.71±0.15)g,C组为(0.21±0.11)g.C组与A、B组比较移植瘤体积和瘤重差异均有统计学意义(P值均＜0.01),抑瘤率达65%.Western印迹检测蛋白表达,C组HIF-1α、VEGF、bcl-2和生存素表达均比A、B组明显减少(P值均＜0.01).结论 在食管癌Eca-109细胞中利用RNA干扰HIF-1α能抑制肿瘤生长,其机制为抑制VEGF介导的肿瘤血管生成和无氧糖酵解,可能与影响bcl-2和生存素的表达,促进肿瘤细胞凋亡有关.     

低氧诱导因子-1α对老年骨关节炎软骨细胞活性的影响

目的探讨低氧诱导因子(HIF)-1α与老年骨关节炎(OA)软骨细胞增殖和凋亡的关系。方法选择老年OA患者84例,另选健康人群80例作为对照。免疫组织化学方法检测HIF-1α、bcl-2蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)在OA和正常软骨细胞中的表达,分析其对OA软骨细胞增殖和凋亡的影响。结果 OA组HIF-1α阳性表达率为83.9%,明显高于正常对照组(χ2=30.312,P=0.000)。正常软骨细胞中bcl-2蛋白表达量明显高于OA软骨细胞。TUNEL法检测细胞凋亡结果显示,OA软骨组中细胞凋亡碎片明显多于正常软骨细胞,正常组软骨细胞凋亡指数为7.16±9.01,而OA组软骨细胞凋亡指数为39.7±7.23,两者差异显著(P0.05)。PCNA计数,OA组中软骨细胞增殖活性明显低于正常组。结论 HIF-1α表达与OA软骨细胞活性密切相关,可能通过调控bcl-2蛋白及PCNA影响软骨细胞的增殖与凋亡。     

Tei指数、caspase-3 mRNA、bcl-2 mRNA检测在心肌缺血再灌注损伤中的应用价值

目的 探讨Tei指数、caspase-3 mRNA及bcl-2 mRNA表达与心肌缺血再灌注（IR）损伤的关系.方法 将新西兰大耳白兔16只随机均分为假手术组和IR组.IR 180 min后,检测其左心室Tei指数及心功能指标;并用原位末端标记法检测心肌细胞凋亡灰度,半定量RT-PCR法检测caspase-3 mRNA、bcl-2 mRNA表达.结果 与假手术组比较,IR组Tei指数升高,左室射血分数降低,细胞凋亡灰度值、caspase-3 mRNA表达升高,bcl-2 mRNA表达降低（P均＜0.05）.结论 Tei指数、caspase-3 mRNA、bcl-2 mRNA与心肌细胞凋亡的相关性良好,可作为判定心肌IR损伤的有效指标.     

人HNF4α基因真核表达载体的构建与鉴定

目的体外构建人肝细胞核因子4α(HNF4α)基因真核表达载体,并初步鉴定其在Hep G2细胞的表达。方法从肝癌手术患者获得肝组织,分离得到肝组织总RNA,将其逆转录合成c DNA,经特异性引物扩增HNF4α基因片段,将其定向连接到pc DNA3.1(+)真核表达载体,经抗生素筛选后,酶切及测序鉴定其序列正确。提取质粒,转染Hep G2细胞,48 h后裂解细胞,应用抗HNF4α行Western blot检测目的蛋白。结果从临床肝癌患者肝组织中成功分离得到总RNA,扩增出HNF4α基因,经筛选、酶切鉴定和测序,确认pc DNA3.1-4α真核表达载体构建成功。在转染Hep G2细胞48 h后,检测显示53 k Da位置有明显融合蛋白条带。结论我们成功构建了HNF4α基因真核表达载体,体外转染Hep G2细胞成功表达HNF4α蛋白,为后续研究奠定了基础。     

缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子与非小细胞肺癌中临床病理特征和预后关系的研究

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)术后双重表达的临床和预后意义,并研究HIF-1α抑制剂LW6和贝伐单抗(Avastin)对非小细胞肺癌细胞HIF-1α和VEGF表达的影响,初步探索HIF-1α与VEGF潜在的调控机制。方法采用免疫组化方法测定非小细胞肺癌组织中HIF-1α和VEGF的表达情况。用HIF-1α的抑制剂LW6和VEGF的抑制剂Avastin分别处理培养的非小细胞肺癌细胞系,采用western blotting检测HIF-1α和VEGF的表达。结合HIF-1α和VEGF的免疫组化结果和患者的临床病理资料进行统计分析。结果HIF-1α和VEGF双阳性表达与pT(P<0.05)、pN(P<0.01)和pTNM分期(P<0.01)及5年生存率(P<0.01)显著相关。在非小细胞肺癌细胞系中,用LW6处理缺氧细胞可以显著抑制HIF-1α的表达(P<0.01);用Avastin处理缺氧细胞对HIF-1α的表达无显著影响(P>0.05)。在缺氧细胞中,采用LW6或Avastin处理细胞均可抑制VEGF的表达。结论HIF-1α和VEGF双重表达能使我们更准确地预测非小细胞肺癌患者的预后,进一步验证在非小细胞肺癌中,HIF-1α是VEGF重要的上游调控者,参与VEGF表达调控。