Toll样受体4信号转导研究进展

Toll样受体（Toll-like-receptors,TLRs）是一个主要分布于炎症细胞的识别病源分子的受体超家族,其中TLR4主要识别革兰阴性细菌细胞壁成分脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）。LPS与TLR4结合后活化髓样分化因子88 (myeloid differentiation factor 88, MyD88)依赖性和非依赖性两条信号途径;前者活化丝裂原激活的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）和核因子-κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）信号通路,后者活化NF-κB和干扰素调节因子-3(IFN-regulated factor-3,IRF3)信号通路。通过这些信号途径TLR4诱导炎症细胞释放炎症因子介导炎症反应;同时TLR4通过活化树突状细胞促进抗原递呈,介导先天性免疫向获得性免疫的转化。此外,TLR4能诱导磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶B（PI3K-AKT）的信号转导,LPS介导的细胞存活和增殖与TLR4活化 PI3K-AKT途径有关。     

UⅡ／UT系统对LPS刺激枯否细胞固有免疫炎症信号通路TLR4-IRF3的影响

目的：探讨Urotensin Ⅱ（ UⅡ）/UT系统对脂多糖（ Lipopolysaccharide ,LPS）刺激枯否细胞（ Kupffer cell ,KC）固有免疫炎症信号通路Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）-干扰素调节因子3（Interferon regulatory factor 3,IRF3）的影响。方法：体外分离培养大鼠肝KCs,KCs培养上清液促炎性细胞因子IL-6、IFN-β和IFN-γ分泌水平采用ELISA分析检测,细胞表面TLR4的表达采用流式细胞技术分析,IRF3基因和蛋白表达情况分别采用real-time PCR和Western blot 分析方法检测。结果：LPS刺激后,KCs培养上清液IL-6、IFN-β和IFN-γ分泌水平、细胞表面TLR4表达阳性细胞率及细胞内IRF3 mRNA表达水平均显著升高,UT拮抗剂urantide预处理抑制了LPS刺激诱导KCs对上述分子的上调表达;LPS的应用也造成了KCs胞核内IRF3蛋白表达水平升高,而使胞浆内IRF3蛋白表达水平降低,urantide预处理后,抑制了LPS诱导KCs核内IRF3蛋白上调和胞浆水平下调。结论：UⅡ/UT系统通过对TLR4-IRF3通路的正性调控作用,介导了或至少部分介导了LPS刺激KCs的免疫性炎症分泌效应。     

脂多糖预致敏的人骨髓间充质干细胞促炎机制研究

目的探索脂多糖（LPS）预致敏的人骨髓间充质干细胞（MSC）产生促炎功能的免疫调节机制。方法采用Real-time PCR和免疫荧光法检测MSC被预致敏前后TLR4信号通路相关分子（如TLR4、MyD88、TRAF6等）的表达水平,以及NF-κB的入核情况。通过Real-time PCR比较MSC被致敏前后促炎因子（IL-1β、IL-6、MIP-2、TNF-α）和Th1/Th2型细胞因子及其受体的表达差异。结果与未致敏的MSC相比,LPS预致敏的MSC中TLR4表达升高,NF-κB入核增加,促炎性因子IL-1β、IL-6、MIP-2、TNF-α表达升高,提示LPS预致敏可以激活MSC中的TLR4信号通路,并且诱导MSC中Th1型细胞因子及其受体表达升高,而Th2型细胞因子及其受体表达无变化或减少。结论MSC被LPS预致敏后TLR4信号通路激活,Th1型细胞因子及受体表达上调,从而诱导MSC分化成促炎表型。     

脂多糖通过NF-κB途径调节大鼠星形胶质细胞Toll样受体表达

目的 研究脂多糖（LPS）对大鼠星形胶质细胞Toll样受体表达的影响及其机制。方法 在原代培养的第3代星形胶质细胞中加入不同浓度的LPS作用24h,通过免疫荧光、western blot观察星形胶质细胞 Toll样受体的表达和NF-κB p65的表达,同时研究NF-κB通路抑制剂对其的影响。结果 在正常状况下,星形胶质细胞胞浆和胞膜表达大量的TLR3受体,很少的TLR4受体。在LPS的刺激下,星形胶质细胞的TLR3表达保持不变,TLR4受体的表达随予以LPS的量增加而增高。LPS可刺激星形胶质细胞NF-κB的表达升高,抑制NF-κB通路活化抑制TLR4受体的上调。 结论 星形胶质细胞Toll样受体的表达是不同源的,TLR4受体随环境的变化而改变,其分子机制可能与NF-κB信号途径有关。     

4-1BB信号对小鼠树突状细胞表面TLR4表达的调节

目的 探讨4-1BB（CD137）激发型单克隆抗体2A对小鼠骨髓来源的树突状细胞（DC）表面TLR4表达的调节.方法 用不同剂量2A、LPS以及2A与LPS联合,或用LPS预刺激后再加入2A,以流式细胞术检测这些处理因素作用下DC表面TLR4表达情况.结果 LPS可下调DC TLR4的表达,下调作用可维持24 h,而2A可使DC TLR4的表达上调,上调作用可维持12 h,并可拮抗LPS对TLR4的下调作用.用LPS预处理DC后再加入2A,也可拮抗LPS的下调作用.结论 4-1BB信号可以上调DC表面TLR4的表达.     

脂多糖通过TLR4对幼年哮喘大鼠气道炎症的调节作用

以前的研究表明，TH2细胞的优势应答是导致嗜酸性粒细胞性哮喘发生发展的主要免疫学基础。近年研究发现，Toll样受体（TLR）信号通路激活诱导TH1免疫应答的作用可用来防治有害的TH2优势应答，如哮喘病的发生发展。然而在免疫激活的初始阶段TLR4刺激物脂多糖（LPS）的不同构型、不同浓度以及不同作用时间会影响适应性免疫应答的极化方向，目前对LPS在哮喘的气道炎症发生发展中的作用仍有争论。     

蝙蝠蛾被毛孢菌丝体通过激活TLR2、TLR4和Dectin-1诱导Th1型免疫反应

目的:研究蝙蝠蛾被毛孢菌丝体(MHCS)对抗原呈递细胞树突状细胞(Dendritic cells,DCs)成熟和功能的调节作用.方法:利用流式细胞术、实时荧光定量PCR、Western blot和混合淋巴细胞培养等实验方法,检测了MHCS对DCs成熟和功能相关表面分子、细胞因子表达以及Toll样受体(TLR)2、TLR4和Dectin-1相关信号转导通路蛋白活性的调节作用.结果:MHCS显著上调DCs表面分子CD11c、MHCⅠ和MHC Ⅱ、辅助刺激分子CD40、CD80和CD86以及模式识别受体TLR2、TLR4和Dectin-1的表达;促进Th1型细胞因子IL-12产生,抑制Th2型细胞因子IL-10、IL-13和TGF-β1产生;诱导TAK1和IRF3磷酸化活性增加.MHCS也显著刺激幼稚型Th1细胞增殖,诱导幼稚型Th细胞向Th1方向分化.利用中和性抗体,分别阻断DCs细胞TLR2、TLR4或Dectin-1活性,可部分抑制MHCS诱导的DCs成熟.结论:MHCS能促进DO成熟,诱导Th1型免疫反应.MHCS的这些作用与其激活模式识别受体TLR2、TLR4或Dectin-1有关.     

Toll样受体4在β2GPI诱导小鼠骨髓来源树突状细胞成熟过程中的作用

目的探讨Toll样受体4(TLR4)在β2糖蛋白I(β2GPI)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)成熟过程中的作用。方法体外联合使用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)诱导TLR4正常(C3H/HeN)及TLR4缺陷(C3H/HeJ)小鼠的骨髓细胞为未成熟树突状细胞(iDC)。用β2GPI或LPS(阳性对照)对iDC进一步刺激后,采用倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞术分析细胞表面分子变化,ELISA测定细胞因子IL-12和TNF-α的分泌水平。结果同C3H/HeJ小鼠相比,C3H/HeN小鼠iDC经β2GPI或LPS刺激后,细胞突起较多,形态上更成熟;细胞表面分子CD11c和MHC-Ⅱ的表达量更高(P0.05);细胞因子IL-12和TNF-α的分泌更强(P0.01)。结论 TLR4在β2GPI诱导小鼠骨髓细胞来源的树突状细胞成熟过程中起重要作用。     

CD14与TLR2、TLR4在天然免疫中的相互作用

CD14与Toll样受体(TLRs)是天然免疫中重要的模式识别分子。CD14能够结合细菌内毒素脂多糖(LPS)，TLR2可以介导多种G^ 细菌细胞壁成分与细胞的反应，TLR4是介导LPS细胞内信号转导的关键分子。在天然免疫中CD14与TLR2／TLR4协同作用，能够介导机体与多种病原体成分的反应。本文主要就CD14与TLR2／TLR4的协同作用作一综述。     

TLR4在慢性重型肝炎患者中的表达及意义

Toll样受体4（TLR4）是细胞壁脂多糖（LPS）的特异性受体，可通过特定的细胞信号转导途径介导细胞免疫，以造成机体的损伤。本研究通过检测慢性重型肝炎患者外周血单个核细胞（淋巴细胞、单核细胞）表面的TLR4表达水平，探讨其在慢性重型肝炎中的意义及作用机制。     

Fasudil通过TLR4通路抑制脂多糖诱导的小鼠BV-2小胶质细胞TNF-α和IL-1β的表达

目的探讨Fasudil对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞系促炎细胞因子表达中的作用。方法体外培养BV-2小胶质细胞系,实验分为PBS对照组、LPS刺激组、LPS联合Fasudil干预组,ELISA检测细胞TNF-α、IL-1β的释放,Griess法检测NO释放水平,流式细胞术检测Toll样受体4(TLR4)、TLR2蛋白表达。结果 LPS刺激BV-2细胞可导致TNF-α、IL-1β和NO的释放明显增加,还可导致炎性信号通路中的受体TLR4表达明显增加。Fasudil能明显抑制炎性因子的释放和TLR4的表达。结论 Fasudil可抑制LPS诱导的小胶质细胞NO、TNF-α和IL-1β释放,其作用机制可能与Fasudil下调TLR4通路有关。     

sTLR4的研究进展

TLR4是第一个被发现的哺乳动物的Toll样受体(TLRs),广泛表达于哺乳动物细胞表面,能识别病原体的入侵,通过识别配体,激活核转录因子kappa B(NF-κB),进而触发炎症反应。近年来,在体液中发现了一种可溶性形式TLR4(s TLR4)。s TLR4来自TLR4 mRNA的可变剪切,广泛存在于各种体液中。s TLR4主要通过与MD-2形成复合体,抑制LPS信号通路,从而抑制LPS引起的炎症反应。s TLR4作为炎症的诊断工具;作为某些炎症的拮抗剂,抑制炎症反应;替代细胞膜上TLR4受体的胞外域,用于研究信号分子与TLR4的相互作用;作为某些癌症的预后指标。     

Toll样受体与肿瘤免疫

toll样受体（toll-like receptors,TLRs）是新近十余年发现的主要在哺乳动物细胞表面进化上高度保守的受体分子家族,主要通过识别病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns,PAMPs）来迅速激活天然免疫系统,并且还能够诱导获得性免疫的产生。迄今为止,已经发现哺乳动物至少有13种toll样受体,其中人的toll样受体鉴定出11种（TLR1-TLR11）。在某些肿瘤中TLRs的表达发生量的变化,并且许多微生物组分和药物能够通过TLRs信号通路介导肿瘤的免疫治疗。     

CD14与TLR2、TLR4在天然免疫中的相互作用

CD1 4与Toll样受体 (TLRs)是天然免疫中重要的模式识别分子。CD1 4能够结合细菌内毒素脂多糖 (LPS) ,TLR2可以介导多种G+ 细菌细胞壁成分与细胞的反应 ,TLR4是介导LPS细胞内信号转导的关键分子。在天然免疫中CD1 4与TLR2 /TLR4协同作用 ,能够介导机体与多种病原体成分的反应。本文主要就CD1 4与TLR2 /TLR4的协同作用作一综述     

MD-2——Toll样受体的重要辅助分子

MD 2是 1999年发现的能与TLR4胞外区结合并能促进TLR4转导LPS信号的重要分子。它不仅能促进TLR4的表达、影响TLR4在细胞内的分布、促进TLR4与LPS的结合 ,还能直接与LPS结合 ,并通过与TLR4胞外区结合 ,促进细胞对LPS的反应性 ;而且MD 2还能通过与TLR2胞外区结合促进细胞对LPS、肽聚糖、磷壁酸、G+ 细菌及G 细菌的敏感性     

TOLL样受体家族与LPS信号转导

细菌脂多糖（LPS）可激活巨噬细胞、内皮细胞等引起一些炎症介质的释放,最终可导致机体的损伤甚至休克死亡。在这一过程中LPS如何机体细胞识别并启动细胞反应已引起高度重视。十几年来研究已明确LBP／CD14、CD11／CD18可使LPS解聚并被运送和结合到细胞表面,但是这些分子缺乏信号转导的功能。近二三年发现了一种功能性的LPS跨膜受体－－Toll样受体家族。Toll样受体被认为是其它LPS受体的协同受体或接头受体（adaptor receptor）,正是这种受体直接将LPS的刺激信号向细胞内传递,其胞浆区具有与IL－1受体同源的结构,其作用涉及炎症因子主要是细胞因子级联反应中的基因激活及反应基因的调节。     

体外LPS刺激及CD40的配基化对sCD40基因修饰DCs TLR4-MD2表达及IL-12分泌的影响

目的： 研究体外LPS刺激及CD40的配基化对可溶性CD40（sCD40）基因修饰树突状细胞TLR4-MD2表达及IL-12分泌的影响,为有效利用树突状细胞诱导特异性移植免疫耐受提供实验依据。方法: 脂质体法将质粒pEGFP-N1/sCD40及空质粒pEGFP-N1转染DC2.4细胞株;应用LPS及抗CD40单抗刺激6 h,流式细胞仪检测DC表面TLR4-MD2的表达,RT-PCR法检测DC 的TLR4 mRNA 表达水平,并用ELISA法检测细胞因子IL-12p70的分泌。结果: LPS刺激下调DC表面TLR4-MD2的表达,同时给予CD40配基化可引起TLR4-MD2的表达显著增高;CD40配基化对DC TLR4mRNA 水平表达无影响，但可部分地增高LPS引起的TLR4mRNA 表达降低;此外,CD40的配基化可显著诱导LPS刺激后IL-12分泌增加。sCD40基因修饰DC可拮抗以上作用。结论: 体外LPS及抗CD40单抗刺激下,sCD40基因修饰树突状细胞可显著下调其表面TLR4-MD2的表达,IL-12p70分泌减少，可能与阻断胞浆内的TLR4-MD2的转运过程有关。     

乙型肝炎e抗原、s抗原对Toll样受体及共刺激分子表达的调控和影响

目的：探讨乙型肝炎e抗原、s抗原（HBeAg、HBsAg）对健康人外周血单个核细胞（PBMC）Toll样受体（TLRs）和共刺激分子表达的影响。方法：分别用HBeAg、HBsAg、空质粒以及卵清蛋白（OVA）作为无关蛋白刺激健康人外周血单个核细胞（PBMC）,采用流式细胞技术检测各刺激组CD14＋细胞TLR2、TLR4、CD86、PD-L1的表达水平。结果：健康人PBMC经HBeAg或HBsAg刺激后,CD14＋细胞表面TLR2、TLR4的表达明显低于未刺激组（P〈0.05）,CD14＋细胞PD-L1的表达则明显增高（P〈0.05）;HBeAg刺激后同时可见CD14＋细胞表面共刺激分子CD86的表达水平明显降低（P〈0.02）。结论 HBeAg和HBsAg通过上调单核细胞表面PD-L1的表达,下调CD14＋单个核细胞表面TLR2、TLR4和共刺激分子CD86的表达,削弱机体固有免疫系统的应答能力,降低启动特异性免疫的活化信号,从而导致免疫清除逃避。因此,HBeAg和HBsAg可能是促进HBV感染慢性化的重要因素。     

sTLR4 的研究进展

TLR4 是第一个被发现的哺乳动物的Toll 样受体(TLRs),广泛表达于哺乳动物细胞表面,能识别病原体的入侵,通过识别配体,激活核转录因子kappa B(NF-κB),进而触发炎症反应。近年来,在体液中发现了一种可溶性形式TLR4(sTLR4)。sTLR4 来自TLR4 mRNA 的可变剪切,广泛存在于各种体液中。sTLR4 主要通过与MD鄄2 形成复合体,抑制LPS 信号通路,从而抑制LPS 引起的炎症反应。sTLR4 作为炎症的诊断工具;作为某些炎症的拮抗剂,抑制炎症反应;替代细胞膜上TLR4受体的胞外域,用于研究信号分子与TLR4 的相互作用;作为某些癌症的预后指标。     

内毒素预处理促进金黄色葡萄球菌刺激的巨噬细胞生成一氧化氮

目的：明确脂多糖（LPS）预处理后巨噬细胞对后续热灭活革兰氏阳性金黄色葡萄球菌（HKSa）刺激的反应性变化,并探讨其机制。方法：Griess法检测细胞培养上清一氧化氮（NO）含量;实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测Toll样受体2（TLR2）mRNA和蛋白表达;双荧光报告基因检测法观察细胞内活化T细胞核因子（NF-AT）转录活性。结果：LPS预处理小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞24 h后,该细胞在后续HKSa刺激下NO生成量显著增加,提示LPS可以致敏巨噬细胞、增强其对HKSa的反应性。LPS可以剂量依赖性地增加细胞内TLR2 mRNA和蛋白表达;LPS预处理也可增强TLR2特异性配体肽聚糖刺激巨噬细胞NO生成的效应;TLR2特异性中和抗体可部分阻断LPS的致敏效应。LPS可促进NF-AT转录激活,细胞内钙离子（Ca2+）螯合剂BAPTA/AM和calcineurin抑制剂cyclosporin A(CsA)均可阻断LPS的作用;BAPTA/AM和CsA均能显著抑制LPS的致敏效应。结论：LPS可以致敏巨噬细胞,从而使其在后续HKSa作用下NO生成量增加;模式识别受体TLR2和Ca2+/calcineurin/NF-AT信号转导途径可能参与了LPS的这一致敏效应。