HIV-1整合酶:艾滋病治疗的新靶点

目前,抗逆转录病毒的治疗虽然已经有了显著进展,但寻找价格低廉,活性更强的抗HIV药物仍在继续,以HIV pol基因的两个产物逆转录酶和蛋白酶为靶点,美国食品与药品管理局(FDA)批准了9种逆转录酶抑制剂和5种蛋白酶抑制剂作为临床抗艾滋病药物.目前对HIV的治疗主要是采取逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂合用的联合疗法.但此种方法不能完全清除病毒,停药后产生反跳,病情反复.HIV复制过程中还有另一个重要的酶一整合酶,使病毒基因组整合于宿主细胞染色体,病毒在体内长期潜伏.整合酶是HIV自身特有的酶,也是一个抗HIV药物设计的理想靶点.本文主要介绍HIV-1整合酶的结构,在病毒复制过程中的功能,以及整合酶抑制剂作为抗HIV药物设计靶点的研究进展.     

抗HIV-1活性化合物作用靶点的快速判断方法

目前,艾滋病的防治工作主要依靠抗HIV-1药物,临床使用的抗HIV药物主要是逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、融合抑制剂和整合酶抑制剂。逆转录酶抑制剂包括核苷类逆转录酶抑制剂（NRTI）,如Zidovudine（AZT）、Lamivudine（3TC）、Emtricitabine（FrC）等,非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTI）,如Efavirenz（EFV）、Nevirapine（NVP）、Delavirdine（DLV）等。蛋白酶抑制剂主要有Ritanovir（RTV）、Saquinavir（SQV）、Indinavir（IDV）等。     

螃蟹甲内生真菌Chaetosphaeronema sp.的化学成分研究

目的 研究一株来源于藏药螃蟹甲内生真菌 PHY-24的化学成分。 方法 采用麦麸培养基,对内生真菌 PHY-24进行放大培养,通过硅胶柱色谱、MCI 柱色谱、ODS 柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、高效液相色谱等对其发酵液中的化学成分进行分离纯化,利用 NMR、MS 等波谱方法进行化学成分的结构鉴定,并测定这些成分抗 HIV-1整合酶链转移反应活性。 结果 从内生真菌 PHY-24发酵液的乙酸乙酯提取部分分离并鉴定了4个化合物,分别是：integrastatin B（1）、2-乙酰基-3,5-二羟基-苯乙酸（2）、curvulin （3）、O-methylcurvulinic acid（4）。其中化合物（1）和（2）具有抗 HIV-1整合酶链转移反应活性,其 IC50分别为6.22和75.1μmol/L。 结论 4个化合物均为从此属真菌中首次分得,其中化合物（1）、（2）具有抗 HIV-1整合酶链转移反应活性。化合物（2）的活性为首次报道。     

HIV—1整合酶：艾滋病治疗的新靶点

目前，抗逆转录病毒的治疗虽然已经有了显著进展，但寻找价格低廉, 活性更强的抗HIV药物仍在继续，以HIV pol基因的两个产物逆转录酶和蛋白酶为靶点，美国食品与药品管理局（FDA）批准了9种逆转录酶抑制剂和5种蛋白酶抑制剂作为临床抗艾滋病药物，目前对HIV的防要是采取转录酶抑制剂和蛋白酶抑制合用的联合疗法，但此种方法不能完全清除病毒，停药后产生反跳，病情反复，HIV复制过程中还有另一个重要的酶一整合酶，使病毒基因组整合于宿主细胞染色体，病毒在体内长期潜伏，整合酶是HIV自身特有的酶，也是一个抗HIV药物设计的理想靶点，本文主要介绍HIV－1整合酶的结构，在病毒复制过程中的功能，以及整合酶抑制剂为抗HIV药物设计靶点的研究进展。     

HIV-1整合酶酶联免疫吸附试验及其抑制剂的研究

目的　建立一种检测人类免疫缺陷病毒 1型 (HIV - 1 )整合酶的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法 ,用于筛选和研究HIV - 1整合酶抑制剂。方法　将质粒F1 85K C2 80SIN1 2 88转化到大肠埃希菌中 ,经IPTG诱导表达 ,柱亲和层析纯化 ,获得HIV 1整合酶融合蛋白。建立酶联免疫吸附试验方法测定其生物学活性 ,与3 2 P同位素标记方法比较 ,并用ELISA方法筛选HIV 1整合酶的抑制剂。结果　SDS PAGE电泳分析显示 ,相对分子质量 30 0 0 0上方有HIV 1整合酶融合蛋白条带出现。ELISA及3 2 P同位素标记法证实 ,此融合蛋白对于特异底物具有 3′切割和链转移活性。ELISA反应的平均P N值为 2 836± 0 1 61 ,批内及批间变异系数 (CV)分别为 4 63 %和 5 89%。检测到中药丹参提取物CEH等有抑制整合酶的活性 ,CEH的大孔树脂洗脱物CEHL活性提高。结论　ELISA法检测HIV 1整合酶活性技术简单 ,快速 ,重复性好 ,无同位素污染 ,可用于HIV 1整合酶为靶点的抑制剂的筛选及抗 HIV药物作用机理的研究。     

双二酮酸结构HIV-1整合酶抑制剂的合成及活性研究

目的设计合成双二酮酸类化合物,并探讨此类化合物抑制HIV-1整合酶活性的构效关系。方法以甲基取代苯乙酮为起始原料,经溴代后与羟基取代苯乙酮反应生成乙酰基苄氧苯乙酮,然后在氢化钠作用下,脱去α氢后进攻草酸二乙酯生成双二酮酸酯,水解脱去酯基生成双二酮酸;经1H-NMR、IR和MS验证化合物结构。ELISA法测定目标化合物对HIV-1整合酶的抑制活性;采用高通量荧光法测定目标化合物对HIV-1整合酶3'加工过程的抑制活性;测定目标化合物对HIV假病毒的细胞活性。结果合成了6个全新结构的二酮酸类化合物;体外整合酶活性评价结果表明,6个目标化合物对HIV-1整合酶的活性IC50≤20μg/ml,双二酮酸之间距离稍短的5a、5c、5d对3'加工过程有一定的活性,IC50约为40μg/ml。结论 6个新化合物对HIV-1的活性主要表现在链转移过程。     

以HIV-1 IN-LEDGF/p75相互作用为靶点的抑制剂筛选

目的晶状体上皮源性生长因子p~(75)蛋白(LEDGF/p75)与HIV-1整合酶(IN)之间的蛋白-蛋白相互作用是开发抗HIV-1药物的有效靶点,本文旨在寻找以HIV-1IN-LEDGF/p75相互作用为靶点的小分子抑制剂。方法采用均相时间分辨荧光技术(HTRF)筛选了799个化合物,比对IN-LEDGF/p75相互作用的抑制活性。结果发现5个化合物——肾上腺酮、6-溴-1,2-二氢萘-1,2-二酮、头孢噻吩、根皮含柘树呫吨酮L和迷迭香酸对该相互作用表现出不同程度的抑制作用,其IC50值分别为12.3、22.7、26.2、18.5和1.13μmol/L。结论为HIV-1IN-LEDGF/p75相互作用抑制剂的发现以及新的抗HIV-1药物的开发提供了重要基础。     

HIV-1整合酶酶联免疫吸附试验的建立和应用

目的：建立一种检测人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)整合酶的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,用于筛选HIV-1整合酶抑制剂。方法：将质粒F185K／C2280SIN1—288转化到大肠杆菌中,经IPTG诱导表达,柱亲和层析纯化,获得HIV-1整合酶融合蛋白。建立酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。与^3H同位素标记方法比较,     

HIV-1整合酶抑制剂的研究进展

HIV 1中病毒编码的酶有三种 ,即逆转录酶、蛋白酶和整合酶。目前 ,FDA已批准上市了 9个逆转录酶抑制剂和 6个蛋白酶抑制剂 ,虽然对整合酶有抑制作用的化合物很多 ,但到目前为止还没有一个上市。　　抗逆转录病毒组合疗法 (有效的逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂的联合用药 )可以抑制HIV 1的复制 ,在被感染者血浆中两年多都检测不出病毒来。但病毒仍存在于某些细胞中 ,例如周边血液的单核细胞和休眠的T 淋巴细胞 ,处于早期复制阶段后的潜伏状态。从组合疗法 1 995年应用于临床以来 ,事实证明用这种疗法能控制HIV 1感染但不能根除。此外 ,…     

介绍HIV-1整合酶抑制剂研究中几种检测方法

抗HIV-1整合酶（Integrase,IN）抑制剂的研发主要依赖于体外筛选方法,因此设计可靠稳定的筛选方法是新药研究和开发的基础.     

灵长类尿酸酶假基因化机制及其与灵长类进化关系研究进展

尿酸酶是生物体内嘌呤代谢途径中的一种氧化酶，广泛分布于自然界多种物种体内，主要介导尿酸氧化降解的酶促反应[1-3]。自然界内的绝大多数哺乳动物具有功能型尿酸酶，而部分灵长类（大型猿类、人类）尿酸酶基因由于进化中突变事件而成为假基因不能表达功能型尿酸酶，因此后者血清内尿酸水平比前者高3~10倍[4-5]，这也是人类是唯一容易罹患痛风的哺乳动物的主要原因。近年来痛风在全球范围内的发病率呈上升趋势，而临床上的治疗药物比较匮乏[6]。尿酸酶类药物可以快速降解人血清中尿酸从而有效地治疗痛风，但是目前临床上使用的均是外源性尿酸酶，强烈的免疫原性限制了其使用[7]。研究灵长类尿酸酶基因失活的机制从而恢复其活性对于低免疫原性抗痛风药物的开发无疑是一条新思路。目前，灵长类尿酸酶失活的分子机制还不清楚，本文就灵长类尿酸酶的结构与功能关系、进化失活与自然选择及其失活的分子机制研究现状进行综述。     

2019—2020年北京市未治疗HIV-1感染者传播性耐药特征分析

目的:了解北京市未治疗HIV-1感染者蛋白酶-逆转录酶和整合酶基因型耐药发生水平和特征,为临床诊疗提供数据参考。方法:于2019—2020年募集北京市新确诊或新入组接受抗逆转录病毒治疗HIV-1感染者,进行 pol基因片段和整合酶基因扩增和测序。系统进化分析判断病毒亚型,通过HIV耐药数据库比对解析耐药突变...     

HIV-1病人体内出现多种蛋白酶抑制剂抗性变异株

蛋白酶抑制剂作为抗HIV-1感染的治疗药物已进入临床研究阶段。临床使用逆转录酶抑制剂由于耐药毒株的出现而受到限制,体外试验已表明使用蛋白酶抑制剂也可产生耐药毒株。本文报道从4位HIV感染病人体内分离到5个对蛋白酶抑制剂MK-639等耐受的变异株。在病人接受MK-639治疗的过程中,定期从体内分离病毒,利用培养细胞检测这些分离株对6种蛋白酶抑制剂(MK-639,XM323,A-80987,R031-8959,VX-478 和SC52151)的敏感性,同时用RT-PCR法扩增这些分离株的蛋白酶基因,并进行克隆和测序,然后用各种     

五种药用石斛内生真菌抑制HIV-1整合酶活性研究

目的 评价5种药用石斛内生真菌发酵产物抑制HIV-1整合酶的活性.方法 将分离自石斛的202株内生真菌提取物共404个采用高通量ELISA法评价其抑制HIV-l整合酶活性;对抑制活性大于100％的样品进行量效关系考察并进行体外抑制肿瘤细胞活性筛选.结果 筛选得到19个对HIV-l整合酶抑制活性大于80％的样品,其中样品5119F、5297F、5097F、5140J和5211F的抑制率分别达到117.96％、113.53％、108.62％、103.74％和109.02％,其对应的IC50值分别为0.02024、0.003125、0.00862、0.01007 和 0.01192 mg/ml.结论石斛属药用植物内生真菌是一个潜在的、丰富的用于筛选HIV-1整合酶抑制剂的资源库,值得进一步研究和开发.     

真核泛素缀合途径研究进展

泛素 (ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ)存在于所有真核细胞中 ,是一种高度保守的 76个氨基酸残基的蛋白 ,游离存在于细胞内或共价缀合到各种胞浆、核和整合的膜蛋白上[1 ] 。泛素要经过一系列步骤才能缀合到底物蛋白上。首先 ,在一个ＡＴＰ依赖性反应中 ,泛素通过其羧基末端甘氨酸经泛素激活酶 (ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ -ａｃｔｉ ｖａｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅ ,ＵＢＡ ,Ｅ1 )共价附着到该Ｅ1酶的巯基(ｔｈｉｏｌ)位置 ;然后 ,泛素从Ｅ1酶被转移到泛素缀合酶 (ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ -ｃｏｎｊｕｇａｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅ ,ＵＢＣ ,Ｅ2 )的巯基位置 ;最后 ,泛素缀…     

我国HIV-1 CRF55_01B感染者抗病毒治疗前耐药分析

目的:了解我国HIV-1 CRF55_01B感染者抗病毒治疗前对蛋白酶类抑制剂(PI)、核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)、非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)、整合酶抑制剂(INSTIs)的耐药程度以及耐药株的传播关系。方法:对2018年全国抗病毒治疗前HIV耐药监测中CRF55_01B重组亚型感染者的血浆样本提取...     

氯沙坦对糖尿病肾病患者超敏C反应蛋白的影响

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病常见的微血管并发症,也是引起糖尿病患者死亡的主要原因之一。近年来研究发现,糖尿病的发生、发展及其并发症DN的产生与体内慢性亚临床炎症有关,其中超敏C反应蛋白(hs-CRP)是亚临床炎症的一个敏感性指标[1-2]。临床研究表明,氯沙坦是一种安全而有效的治疗DN药物[3-4]。本文观察氯沙坦对DN患者血清hs-CRP的影响,旨在探讨其治疗DN的作用机制。     

组蛋白脱乙酰化酶抑制剂抗心脏纤维化作用及免疫机制

可逆性组蛋白乙酰化在调节心肌纤维化过程中具有核心作用,而组蛋白乙酰基转移酶(HATs)和组蛋白脱乙酰化酶(HDACs)是决定组蛋白乙酰化程度的两种主要酶.组蛋白脱乙酰酶抑制剂(HDACIs)具有抗纤维化作用,可减少心脏细胞凋亡、肥大以及心室纤维化,其抗心脏纤维化作用与其对心脏成纤维细胞、肾素-血管紧张素-醛固酮系统及其免疫机制密切相关.不久的未来,HDAC抑制剂可能作为一种新型的治疗心衰的药物.     

抑郁症的药物治疗进展

抑郁症属于情感性障碍,是一种常见的精神疾病。据WHO预测,到2020年将成为仅次于心脏病的第二大疾病[1]。并且抑郁症患者在抑郁症期间会出现频繁自杀和频繁入院治疗[2]。到目前为止,抗抑郁药可以根据结构或药物作用于中枢哪个神经递质系统分为不同的类别,包括三环类抗抑郁药（TCAs）、单胺氧化酶抑制剂（MAOIs）,以及目前的选择性5-HT再摄取抑制剂（SSRIs）和其他新型抗抑郁药。