MiR-374a通过PTEN/AKT信号通路调节乳腺癌细胞的增殖和凋亡

摘 要：［目的］ 探讨miR-374a在乳腺癌细胞增殖和凋亡中的作用，并进一步探讨其机制。［方法］ 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测人乳腺癌细胞MCF-7及正常人乳腺细胞Hs 578Bst的miR-374a及PTEN mRNA转录水平，Western blot法测定MCF-7、Hs 578Bst组细胞及对照、 miR-374a抑制剂组细胞的PTEN、p-AKT蛋白表达变化，用CCK-8法及Tunel法分别观察对照组和miR-374a抑制剂组细胞的增殖和凋亡，并用Western blot法检测两组细胞的凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9表达。［结果］ 与人正常乳腺Hs 578Bst细胞相比，乳腺癌MCF-7细胞的miR-374a表达水平显著性增高（P<0.001），PTEN mRNA及蛋白的表达水平显著性降低（P<0.001），而p-AKT蛋白表达水平明显升高（P<0.001）。miR-374a抑制剂可抑制乳腺癌细胞的增殖（P<0.001），并促进其凋亡的发生（P<0.001），降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平（P<0.001）的同时活化凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9（P<0.001）。miR-374a 通过靶点PTEN影响AKT通路，miR-374a组细胞PTEN mRNA表达水平显著性降低（P<0.001），而miR-374a抑制剂处理后，PTEN蛋白水平显著性升高（P<0.001），p-AKT表达降低（P<0.001）。［结论］ miR-374a在乳腺癌细胞高表达，并通过调节PTEN/AKT信号通路抑制乳腺癌细胞的增殖，促进凋亡的发生。miR-374a/PTEN/AKT信号通路有望成为乳腺癌的新治疗靶点。     

乳腺癌组织和细胞中低表达的LZTS2 通过PI3K/AKT信号通路抑制癌细胞增殖、迁移和EMT

[摘要] 目的：探讨亮氨酸拉链肿瘤抑制因子2（leucine zipper tumor suppressor 2, LZTS2）基因在人乳腺癌组织和细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、迁移和EMT的影响及其作用机制。方法：收集2016 年1 月至2016 年12 月开封中心医院乳腺外科收治的50 例女性乳腺癌患者的癌及癌旁组织标本和乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468 以及正常人乳腺上皮细胞株HBL-100,用qPCR 和Western blotting 检测乳腺癌组织和细胞中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平。构建pcDNA-LZTS2 真核表达载体并采用脂质体转染MCF-7 细胞,同时转染pcDNA3.1 作为阴性对照。用Western blotting 检测转染48~72 h 后MCF-7 细胞中LZTS2 蛋白表达水平;用MTT法、Transwell 小室法检测LZTS2 过表达对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,同时用Western blotting检测细胞中EMT相关蛋白Cyclin D1、波形蛋白、神经钙黏蛋白、上皮钙黏蛋白以及PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达。结果：人乳腺癌组织中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平均明显低于癌旁组织（P<0.05 或P<0.01）;乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231 和MDA-MB-468 细胞中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平显著低于乳腺上皮细胞HBL-100（P<0.05 或P<0.01）。与空白对照组和pcDNA3.1组相比,pcDNA-LZTS2 组MCF-7 细胞中LZTS2 蛋白表达水平明显上调（P<0.01）,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著受到抑制（P<0.05 或P<0.01）,同时过表达LZTS2 细胞中Cyclin D1、波形蛋白和神经钙黏蛋白表达水平均明显降低（P<0.05 或P<0.01）、上皮钙黏蛋白表达水平明显升高（均P<0.01）,显示LZTS2 过表达通过降低p-PI3K和p-AKT 表达而抑制PI3K/AKT信号通路。结论：LZTS2 在乳腺癌中低表达,过表达LZTS2 能够抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能与抑制细胞EMT过程的PI3K/AKT信号通路有关。     

大荨麻提取物对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能的机制

目的：探讨大荨麻提取物对乳腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法：用不同质量浓度的大荨麻提取物（0、1、2、4、8、16、32、64 mg/ml）处理乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231 24 h,MTT法检测细胞增殖活力,选择中位抑制浓度附近的浓度（5和10 mg/ml）作为给药浓度分别处理MCF-7和MDA-MB-231细胞24 h后,平板克隆形成实验和流式细胞术分别检测大荨麻提取物对乳腺癌细胞增殖、周期和凋亡的影响,WB法检测对细胞周期和凋亡相关蛋白以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达的影响。在MCF-7细胞用5 mg/ml大荨麻提取物处理的同时转染过表达AKT质粒（大荨麻+AKT组）,转染空载质粒为对照组（大荨麻+vec组）,WB法检测过表达效率,比较过表达AKT对细胞增殖、周期和凋亡的影响。结果：各大荨麻提取物处理组 MCF-7 和 MDA-MB-231细胞增殖活力均显著低于对照组（P<0.05或P<0.01）;与对照组比较,5或10 mg/ml大荨麻处理组乳腺癌细胞的克隆形成数显著减少,G0/G1期细胞占比和凋亡率显著增加（P<0.05或P<0.01）,P21、BAX蛋白表达显著升高而Cyclin D1、CDK4、Bcl2蛋白以及p-PI3K、p-AKT蛋白表达显著降低（P<0.05或P<0.01）。大荨麻+AKT 组 p-AKT 和 AKT 蛋白表达显著高于大荨麻+vec 组,克隆数、S 期和 G2/M 期细胞占比均高于大荨麻+vec 组（P<0.05 或 P<0.01）,G0/G1期细胞占比和凋亡率低于大荨麻+vec组（P<0.05或P<0.01）。结论：大荨麻提取物可以抑制乳腺癌细胞增殖、促进凋亡且阻滞细胞在G0/G1期,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路相关。     

PCDGF shRNA对乳腺癌细胞系MCF-7增殖凋亡和VEGF表达的影响

背景与目的：畸胎瘤细胞源性生长因子（PC cell-derived growth factor,PCDGF）是调节乳腺癌细胞增殖和凋亡的重要因子,然而其作用机制目前尚不清楚。本研究通过构建并体外转染针对PCDGF的shRNA,分析PCDGF对乳腺癌细胞系MCF-7增殖、凋亡及细胞中血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。方法：RT-PCR法检测PCDGF在4种乳腺癌细胞系中的表达,构建含2条shRNA的RNAi质粒,脂质体转染质粒于MCF-7细胞中,MTT法检测转染前后细胞增殖变化,ELISA法检测VEGF表达。结果：被检测的4种乳腺癌细胞中均有不同程度的PCDGFmRNA表达,转染shRNA质粒对MCF-7细胞PCDGF mRNA表达抑制率为59．8％;转染质粒后MCF-7细胞增殖受到抑制,实验组早期细胞凋亡率为30．41％,晚期细胞凋亡率为35．38％;阴性对照组早期细胞凋亡率为3．69％,晚期细胞凋亡率为15．39％。同阴性对照质粒相比,转染阳性质粒的MCF-7细胞VEGF的表达抑制率为47．2％。结论：PCDGF调节MCF-7细胞的增殖、凋亡和VEGF的表达。     

白花丹醌通过CXCL8/PI3K/AKT糖酵解通路抑制结肠癌细胞增殖、促进凋亡

目的:观察白花丹醌对结肠癌细胞Caco-2增殖、凋亡的影响,探究其潜在的作用机制。方法:运用CCK8法、流式细胞术检测不同浓度白花丹醌（4、8、12 μmol/L）处理的Caco-2细胞的增殖抑制率、凋亡率。不做任何处理的Caco-2细胞设为Control;脂质体法将si-NC组（转染si-NC）、si-CXCL8组（转染si-CXCL8）转染至Caco-2细胞;8 μmol/L的白花丹醌与0.5%DMSO处理的Caco-2细胞设为8 μmol/L+DMSO组;8 μmol/L的白花丹醌分别与z-VAD-FMK、740Y-P处理的Caco-2细胞设为8 μmol/L+z-VAD-FMK组、8 μmol/L+740Y-P组。RT-qPCR、Western blot实验检测细胞中CXCL8的mRNA、蛋白表达,CXCL8、M2-型丙酮酸激酶（M2 pyruvate kinase, PKM2）、L-乳酸脱氢酶A（lactate dehydrogenase A,LDHA）、人α-烯醇化酶(apha-enolase,ENO1)、葡萄糖磷酸异构酶（glucose phosphate isomerase,GPI）、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（phosphorylated phosphatidylinositol 3 kinase,p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B,p-AKT）的蛋白表达。结果:与Control组相比,白花丹醌（4、8、12 μmol/L）呈浓度依赖性促进Caco-2细胞增殖抑制率、凋亡率升高,抑制CXCL8的mRNA和蛋白表达。与8 μmol/L+DMSO组相比,8 μmol/L+z-VAD-FMK组细胞的增殖抑制率、凋亡率明显降低,CXCL8的mRNA和蛋白表达明显升高（P＜0.05）。白花丹醌（4、8、12 μmol/L）呈浓度依赖性抑制PKM2、LDHA、p-PI3K、p-AKT的蛋白表达。si-CXCL8组PKM2、LDHA、p-PI3K、p-AKT的蛋白表达明显低于si-NC组。740Y-P明显减弱白花丹醌对Caco-2细胞增殖抑制率和凋亡率的促进作用。结论:白花丹醌抑制结肠癌细胞增殖,促进凋亡,其潜在的作用机制与CXCL8/PI3K/AKT糖酵解通路有关。     

siRNA 沉默MEKK3基因促进TRAIL诱导乳腺癌MCF-7细胞的凋亡

目的：研究抑制促分裂原活化蛋白激酶／细胞外信号调节激酶-激酶3（mitogen—activated protein／extraeellular signal regulated kinase—kinase3，MEKK3）基因表达促进TRAIL诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用，寻找乳腺癌临床治疗新策略。方法：应用MTT法检测人TRAIL对MCF-7细胞生长的抑制作用。合成MEKK3-siRNA，应用脂质体介导MEKK3-siRNA转染人人乳腺癌细胞MCF-7，以RT，PCR和Westernblotting法检测MCF-7细胞MEKK3mRNA和蛋白的表达。应用MTr法和流式细胞术检测MEKK3-siRNA与TRAIL联合处理后MCF-7细胞的增殖和凋亡。结果：TRAIL具有抑制MCF-7细胞增殖作用，但其抑制作用较弱。MEKK3-siRNA转染后能有效而稳定地抑制MCF-7细胞中MEKK3mRNA和蛋白的表达（P〈0．01）。TRAIL与MEKK3-siRNA联合处理MCF-7细胞较TRAIL单独处理更明显地抑制细胞增殖活力（P〈0．05），更明显地增加细胞凋亡率（P〈0．01）。结论：siRNA沉默MEKK3基因能显著促进TRAIL对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的诱导作用，为探讨乳腺癌治疗新方案提供了实验依据。     

基因转染LL-37/hCAP-18对人乳腺癌细胞凋亡的影响

目的：探讨基因转染人源抗菌肽LL-37/hCAP-18对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响。方法：将含人LL-37/hCAP-18的真核表达质粒瞬时转染人MCF-7细胞,48h后,MTT比色检测MCF-7细胞的增殖,流式细胞术检测MCF-7细胞周期及凋亡,细胞免疫组化染色检测MCF-7细胞中Bax、Bcl-2的表达。结果：重组基因瞬时转染MCF-7细胞48h后,与各对照组相比,肿瘤细胞的生长增殖受到显著抑制（P〈0.05）;转染重组基因组肿瘤细胞凋亡率显著高于各对照组（P〈0.05）,但细胞周期无明显变化;与对照组相比,转染重组基因pEGFP-c1-LL-37的MCF-7细胞中Bcl-2表达显著下降（P〈0.05）,Bax由阴性表达转为表达明显升高。结论：LL-37/hCAP-18可以通过上调促凋亡因子Bax、下调抗凋亡因子Bcl-2诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖。     

低表达DJ-1调控PI3K/AKT通路对肺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨低表达DJ-1对肺癌细胞增殖凋亡及PI3K/AKT通路的影响。方法:采用Western blot检测肺癌细胞系中DJ-1蛋白的表达;以脂质体法转染干扰SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的表达后,MTT法检测细胞的增殖变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Western blot检测细胞中p-AKT和AKT蛋白的表达水平;将PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理SK-MES-1细胞48 h后,MTT法和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡情况,Western blot检测细胞中p-AKT和AKT蛋白的表达。结果:与正常肺上皮BEAS-2B细胞相比,肺腺癌A549细胞和肺鳞癌SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的相对表达量均显著升高,且SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的表达量高于A549细胞,差异均有统计学意义（P＜0.05）。转染后siRNA DJ-1组细胞中DJ-1蛋白的表达量明显低于对照组（P＜0.05）;与对照组相比,转染24 h后siRNA DJ-1组细胞的吸光值（OD值）变化不显著（P＞0.05）,而转染48 h和72 h后细胞的OD值明显降低（P＜0.05）;转染48 h后,与对照组相比,siRNA DJ-1组细胞的凋亡率显著升高（P＜0.05）,p-AKT/AKT值显著降低（P＜0.05）。SK-MES-1细胞经抑制剂LY294002处理48 h后,细胞的增殖凋亡趋势与下调DJ-1表达的结果相一致。结论:DJ-1在肺癌细胞中高表达,下调其表达能够抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

miR-26b靶向GSK-3β发挥抗乳腺癌细胞干性的作用研究

目的 探讨miR-26b对乳腺癌细胞增殖、凋亡及干性的影响并探讨其相关机制。方法 采用无血清悬浮培养法培养MCF-7细胞以获得MCF-7干细胞,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测MCF-7及其干细胞中的miR-26b水平,根据实验将MCF-7干细胞分为3组：对照组、空转染组（转染con-mimics）和miR-26b过表达组（转染miR-26b mimics）,MTT法检测各组转染24、48、72及96 h的增殖能力,流式细胞仪检测各组转染后的凋亡水平及侧群（SP）细胞数量,体外干细胞成球培养实验检测各组转染后的成球率情况,qRT-PCR检测转染后各组干细胞标记物CD44、ALDH 1、BMI 1、OCT-4和Lin-28B的mRNA水平,生物信息学及Western blotting法分析验证miR 26b对靶基因糖原合成酶激酶 3β（GSK-3β）的调控机制。结果 MCF-7干细胞的miR-26b水平低于MCF-7细胞（P＜0.05）,且转染miR-26b mimics可升高MCF-7干细胞的miR-26b水平（P＜0.05）;与对照组相比,过表达组转染后增殖抑制率和凋亡率均升高,SP细胞数量和成球率均降低（P＜0.05）;转染miR-26b mimics可导致CD44、ALDH-1、BMI-1、OCT-4和Lin-28B的mRNA水平降低（P＜0.05）。生物信息学软件预测GSK-3β是miR-26b的潜在靶基因,转染miR-26b mimics可显著降低GSK-3β的表达,双荧光素酶报告基因检测证明miR-26b 可作用于GSK-3β 基因 mRNA的 3’ UTR区预测靶位。结论 MCF-7干细胞中miR-26b呈低表达,过表达miR-26b可抑制细胞增殖、诱导凋亡并负性参与了乳腺癌细胞的干性调节,可能与其下调GSK-3β表达有关。     

慢病毒载体介导shRNA干扰对乳腺癌MCF-7细胞RSK4基因表达的影响

目的观察慢病毒干扰载体（RSK4-RNAi—LV）转染对低侵袭、低转移潜能的乳腺癌MCF-7细胞中核糖体s6蛋白激酶4（fibosomalproteins6kinase4,RsK4）基因表达的影响。方法设计合成特异性的RSK4shRNA干扰体RSK4-RNAi—Lv,稳定转染至乳腺癌MCF-7细胞中,应用实时荧光定量PCR法和Westernblot法检测RSK4mRNA及其蛋白的表达情况。结果稳定转染慢病毒干扰载体至乳腺癌细胞后,72h开始检测到GFP荧光表达,90h后GFP荧光表达明显增强,RSK4mRNA及其蛋白的表达均被明显抑制,抑制率分别为98．2％和80．1％。结论稳定转染RSK4．RNAi。LV可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞中RSK4mRNA及其蛋白的表达。     

Possibility of predicting the results of the surgical treatment of cancer of the thoracic portion of the esophagus

Within a 18-year period in the clinic 273 patients were subjected to radical surgery for cancer of the thoracic esophagus. 206 patients were discharged from the clinic. The survival rate for 5 years and longer was noted in 58 patients. The data and results of the treatment depending on a sum of clinical signs were treated mathematically. It is noted that the patients' survival is influenced by such factors as sex, the stage of the disease, the morphological structure of tumor, the character of course, tumor size and spread, the type of surgical intervention. An advanced course, changes in blood presence of metastases do not seem to be the reason for cancellation of the operation.     

Cardiac tolerance of the combination paclitaxel-anthracyclines in the context of the management of cancer of the breast

Within the past decades there has been major interest in associating the paclitaxel into the management of breast cancer patients with a strong improvement of clinical results. Moreover, doxorubicin is historically one of the major chemotherapeutic agents in breast cancer treatment. So, investigations of the combination of the paclitaxel with doxorubicin have logically taken place in the strategy of breast cancer management. Also, this association became a standard of care neoadjuvantly in locally advanced breast cancer. The aim of this review of literature consists to make a special focus on cardiac toxicity occurring after doxorubicin and paclitaxel association and to give adequate directions for the next future in this promising combination.     

Improvement of the efficiency of the treatment of gastric cancer by the standardization of the treatment plan

Standardized treatment plan for gastric cancer was established in our department by which surgeons and nurses understood the treatment schedules of each gastric cancer patient as the common knowledge, and the cooperation of surgeons and nurses could be improved. Furthermore, the modality decreased the length of hospital stay from 35 +/- 15 days to 24 +/- 8 days, which indicated that the number of patients per one bed for one year increased from 10 to 15, and the efficiency of the treatment of gastric cancer patients 50% by our system.