苦参碱逆转人乳腺癌MCF-7/ADR细胞株耐药性及对PI3 K/AKT信号通路下游因子的影响

目的：探索苦参碱对人乳腺癌耐药株MCF-7/ADR多药耐药性逆转的作用机制及对PI3K/AKT信号通路下游因子的影响。方法：采用MTT法检测不同浓度苦参碱和MK2206作用MCF-7/ADR细胞24h后的生长抑制率,以抑制率为10%左右为检测标准;用荧光定量RT-PCR、Western blot检测不同浓度苦参碱作用MCF-7/ADR细胞24h后Bcl-2、Bax、Caspase-3、PARP、GSK-3β、p65六种基因mRNA和蛋白的相对表达量。结果：荧光定量RT-PCR结果显示0.6、1.2g/L的苦参碱处理组与空白对照组相比,随着苦参碱浓度的提高,PI3K/AKT信号通路下游作用因子Bcl-2基因和p65基因的相对表达量逐渐降低,Caspase-3基因的相对表达量变化不显著,而Bax基因、GSK-3β基因及PARP基因的相对表达量逐渐增高;相同抑制率的苦参碱组（0.6g/L）和MK2206组（0.05μmol/L）相比,两组降低基因表达量的差异不明显,苦参碱组更能增加Bax、PARP和GSK-3β基因的相对表达量并且能够明显减低p65基因的相对表达量。Western blot结果显示0.3、0.6、1.2g/L三组不同浓度苦参碱干预组与空白对照组相比,随着苦参碱浓度的提高Bcl-2和p65蛋白表达量逐渐降低,Bax、PARP和GSK-3β蛋白表达量逐渐增高,Caspase-3蛋白表达量变化不明显;相同抑制率的苦参碱组（0.6g/L）和MK2206组（0.05μmol/L）相比,苦参碱组更明显。结论：苦参碱可能是通过作用AKT靶基因启动PI3K/AKT信号转导通路中下游相关凋亡因子而发挥逆转乳腺癌多药耐药的作用。     

达沙替尼基于PI3K/AKT信号通路调节乳腺癌细胞生物学行为

目的:基于PI3K/AKT信号通路探讨达沙替尼(dasatinib, DAS)对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响。方法:分别使用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法、Transwell法、流式细胞术和Western blotting法检测DAS不同浓度(0、2、6、10μmol/L)作用下MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移、细胞凋亡以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达情况。同时设置对照组(溶媒对照)、DAS组(DAS 10μmol/L)、PI3K抑制剂组(LY294002 20μmol/L)、联合组(DAS 10μmol/L+LY294002 20μmol/L),比较各组细胞增殖、侵袭和迁移、细胞凋亡以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达情况。结果:随着DAS作用浓度的升高,MCF-7细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05),侵袭细胞数、迁移细胞数和PI3K、p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低(P<0.05)。与对照组相比,DAS组、PI3K抑制剂组、联合组MCF-7细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05)...     

PI3K/AKT/mTOR信号通路介导乳腺癌内分泌治疗耐药的研究进展

内分泌治疗在激素受体阳性乳腺癌患者中的地位越来越受到重视,可以明显改善患者预后.内分泌治疗耐药严重制约着其临床应用,但耐药机制仍不明确,目前认为多信号通路激活参与耐药形成,其中PI3K/AKT/mTOR信号通路在耐药机制中发挥重要作用.临床试验提示,在内分泌治疗的基础上阻断信号通路可以逆转耐药,研究结果令人鼓舞.本文对PI3K/AKT/mTOR信号通路在内分泌耐药机制中的作用进行综述.     

大荨麻提取物对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能的机制

目的:探讨大荨麻提取物对乳腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法:用不同质量浓度的大荨麻提取物(0、1、2、4、8、16、32、64 mg/ml)处理乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-23124 h,MTT法检测细胞增殖活力,选择中位抑制浓度附近的浓度(5和10 mg/ml)作为给药浓度...     

P13K／AKT／mTOR信号通路在乳腺癌Her-2治疗耐药中的作用研究进展

Her-2靶向治疗是Her-2过表达乳腺癌治疗的重要组成部分,但Her-2靶向治疗的耐药严重影响了乳腺癌的治疗。研究证实乳腺癌Her-2靶向治疗出现耐药的过程中有P13K／AKT／mTOR信号通路的激活,因此对P13K／AKT／mTOR信号通路及以P13K／AKT／mTOR信号通路为靶点的药物研究对乳腺癌治疗具有重要意义。     

紫草素诱导人白血病细胞K562的凋亡

目的: 研究紫草素对人白血病细胞株K562增殖抑制和诱导凋亡作用.方法: 四氮甲唑蓝(MTT)观察细胞的生长状况,应用彗星分析法、TUNEL技术和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果: 紫草素在(1-9)×10-5mol/L浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性,9 X 10-5mol/L紫草素作用72h的K562细胞株A值最低;彗星分析法显示经紫草素作用的K562细胞出现长的彗尾条带;原位细胞凋亡可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块;流式细胞仪检测细胞凋亡主要发生在G1/S期.结论: 紫草素在体外一定浓度范围内能抑制K562细胞增殖,诱导凋亡.     

细胞角蛋白13通过PTEN抑制PI3K/AKT/mTOR通路增强鼻咽癌HNE1细胞放疗敏感性

目的:探讨细胞角蛋白13(cytokeratin13,CK13)对鼻咽癌HNE1细胞放疗敏感性的影响及其作用机制.方法:将HNE1细胞分为对照组、anti-CK13#a组及anti-CK13#b组(敲减CK13)、对照组+西罗莫司处理组(100nmol/L的西罗莫司处理1 h)、anti-CK13#a+西罗莫司处理组(...     

人脑胶质瘤中PI3K/AKT通路蛋白的表达及其与胶质瘤发生发展的相关性

目的探讨人脑胶质瘤中PI3K/AKT通路蛋白的表达及其与胶质瘤发生发展的相关性。方法选取脑胶质瘤患者84例,依据病理分级将这些患者分为低恶性组(Ⅰ~Ⅱ级,n=42)和高恶性组(Ⅲ~Ⅳ级,n=42)。将这些患者作为脑胶质瘤组,另选取同期采集的20例正常脑组织作为正常对照组。对胶质瘤不同病理分级与正常脑组织中PI3K、AKT、PTEN蛋白表达、人脑胶质瘤中PI3K、AKT、PTEN蛋白表达之间的相关性进行统计分析。结果脑胶质瘤组PI3K、AKT阳性率均显著高于正常对照组(P<0.05),PTEN阳性率显著低于正常对照组(P<0.05);脑胶质瘤组中高恶性组PI3K、AKT阳性率均显著高于低恶性组(P<0.05),PTEN阳性率显著低于低恶性组(P<0.05);高恶性组、低恶性组PI3K、AKT阳性率均显著高于正常对照组(P<0.05),PTEN阳性率显著低于正常对照组(P<0.05)。84例人脑胶质瘤组织中,66例PI3K、AKT蛋白共同阳性表达,2例共同阴性表达。人脑胶质瘤中PI3K、AKT与PTEN蛋白表达均呈负相关关系(P<0.05),而PI3K与AKT呈显著的正相关关系(P<0.05)。结论人脑胶质瘤中PI3K/AKT通路蛋白在脑胶质瘤中的表达提升,与胶质瘤病理分级呈显著的正相关关系。     

三阴性乳腺癌中PI3K/AKT/mTOR信号通路的突变及相关靶向治疗的研究进展

三阴性乳腺癌（TNBC）是最具侵袭性的乳腺癌亚型,PI3K/AKT/mTOR信号通路失调是TNBC最常见的致癌突变之一,靶向PI3K/AKT/mTOR信号通路是治疗TNBC的重要方向。本文着重介绍了PI3K/AKT/mTOR信号通路的机制,TNBC中出现的PIK3CA、AKT1或mTOR的突变,以及失活张力PTEN、PIK3R1或INPP4B的突变或丢失,也展现了布帕尼西、帕他色替、依维莫司等PI3K/AKT/mTOR信号通路靶向药物在治疗TNBC中单独、联合应用和与化疗或免疫疗法联用的疗效,同时论述了目前正在进行的各类临床试验及其未来的前景。     

PI3K/AKT/MTOR信号通路对肾癌A498细胞增殖、迁移及侵袭的影响研究

目的 探讨PI3K/AKT/MTOR信号通路对肾癌A498细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 选用PI3K/MTOR双重阻断剂NVP-BEZ235体外处理肾癌A498细胞,浓度分别为0、100、250、500 nmol/L.48 h后采用蛋白质印迹法(Western blot)检测肾癌A498细胞中AKT和MTOR蛋白磷酸化情况;MTT法检测细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室检测细胞侵袭能力;Western blot法检测细胞中E-Cadherin和PTEN蛋白表达变化.结果 肾癌A498细胞中p-AKT、MTOR、p-MTOR、E-Cadherin、PTEN的表达及细胞增殖率、迁移率、穿膜细胞数量各自在不同NVP-BEZ235浓度下比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01).与0 nmol/L组比较,100、250、500 nmol/L的NVP-BEZ235处理肾癌A498细胞后,细胞中磷酸化蛋白p-AKT和p-MTOR的表达均下调,细胞增殖率下降,细胞迁移率下降,穿膜细胞数量减少,细胞中E-Cadherin和PTEN蛋白表达均上调,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 通过阻断PI3K/AKT/MTOR信号通路可以抑制肾癌A498细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与上调细胞中E-Cadherin和PTEN蛋白表达有关.     

PI3K/AKT/mTOR信号通路在三阴性乳腺癌中的作用及靶向治疗研究进展

摘 要：三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）是一种特殊类型的乳腺癌亚型,占所有乳腺癌的15%,具有高度异质性。目前临床上以化疗为主要治疗手段,但效果并不理想。全文主要介绍了TNBC的生物学特点、分子分型和重要相关通路,其中PI3K/AKT/mTOR 信号传导通路在TNBC中尤为重要,该通路上的相关靶点为TNBC提供了更好的精准治疗。     

The PI3K/AKT/MTOR Signaling Pathway: The Role of PI3K and AKT Inhibitors in Breast Cancer

Breast cancer is the second leading cause of cancer death in women. Targeted therapies are available for HER2-positive and endocrine-sensitive disease while chemotherapy remains the mainstay of treatment for triple-negative breast cancer. The efficacy of all targeted interventions is, however, limited by primary or secondary resistance. Preclinical data show that active PI3K/AKT/mTOR signaling contributes to therapy resistance in HER2-positive and hormone-receptor-positive breast cancer. In line with these preclinical observations, clinical trials such as BOLERO-2 demonstrated a benefit of additional inhibition of mTOR signaling in advanced estrogen-receptor-positive breast cancer patients refractory to prior aromatase-inhibitor therapy. Besides the mTOR, several other proteins involved in the PI3K-pathway serve as potential therapeutic targets, such as PI3K and AKT. In this review, we summarize the current available knowledge and experimental and clinical research results about targeting the PI3K-pathway in breast cancer and, thus, provide the rationale for PI3K- and AKT-inhibitor use in the clinic.     

KAI1基因对乳腺癌细胞生物学特征的影响

目的:研究稳定转染外源性KAI1基因对人乳腺癌细胞体外生物学特性的影响。方法:应用脂质体将pCMV-KAI1质粒转染入人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,免疫印迹方法检测蛋白表达,分别利用MTT法,体外粘附及侵袭力实验判断KAI1基因对细胞增殖能力及粘附,侵袭力的影响,并利用ELISA法检测转染前后游离组织间粘附因子-1(sICAM-1)的动态变化。结果:获得了稳定表达KAI1基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞克隆,并有KAI1蛋白的高表达。MTT法显示转染组的细胞增殖力低于未转染组和转染空载体组(P<0.05)。体外粘附及侵袭力实验表明转染组的细胞粘附侵袭能力低于未转染组和转染空载体组(P<0.05)。转染后sICAM-1含量下降。结论:KAI1基因可抑制人乳腺癌细胞的恶性特征,并可能是通过影响一些粘附因子作用而抑制肿瘤细胞转移。     

The PI3K/AKT/mTOR Signaling Pathway: Implications in the Treatment of Breast Cancer

Epidemiologic and experimental studies support a key role of the phosphatidyl inositol 3-kinase/AKT/mammalian target of rapamycin (PI3K/AKT/mTOR) pathway in the biology of human cancers. Alterations resulting in activation of PI3K/Akt/mTOR signaling are perhaps the most frequent events observed in solid tumors, including breast cancer, and contribute to neoplastic transformation. The PI3K/mTOR pathway can be activated by overproduction of growth factors or chemokines, loss of phosphatase and tensin homolog (PTEN) expression, or by mutations in growth factor receptors Ras, PTEN, or PI3K itself. Activation of this pathway contributes to cell cycle proliferation, growth, cell cycle entry, survival, cell motility, protein synthesis, and glucose metabolism, all important aspects of tumorigenesis. The most common genetic aberrations in breast cancer are activating somatic missense mutations in the gene encoding the p110a (PIK3CA) subunit of PI3K. The PTEN gene is often hypermethylated or decreased in expression, through as yet unclear mechanisms, in breast cancer. Studies have shown that PI3K/PTEN/AKT pathway modulation is implicated in HER2/neu-tumorigenesis and in response to the HER2-targeting antibody trastuzumab. Components of the pathway are regulated by feed-back and cross-talk to other signaling cascades and appear to be implicated with drug resistance. Over the past few years, a number of components of this signaling cascade have been the subject of intense drug-discovery activities. Rapamycin analogs have already been shown to have antitumor efficacy in some tumor types. Newer-generation PI3K, AKT, and mTOR inhibitors have shown significant promise preclinically and are now in clinical trials. This article summarizes the progress made in the elucidation of the pathway, clinical implications in pathology of breast cancer, and reviews novel drugs targeting this pathway for cancer treatment, particularly inhibitors of PI3K, AKT, and mTOR, currently undergoing clinical trials. Potential combination strategies, safety concerns, and resistance mechanisms for this new generation of anticancer agents are also discussed.     

MiR-374a通过PTEN/AKT信号通路调节乳腺癌细胞的增殖和凋亡

摘 要：［目的］ 探讨miR-374a在乳腺癌细胞增殖和凋亡中的作用,并进一步探讨其机制。［方法］ 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测人乳腺癌细胞MCF-7及正常人乳腺细胞Hs 578Bst的miR-374a及PTEN mRNA转录水平,Western blot法测定MCF-7、Hs 578Bst组细胞及对照、 miR-374a抑制剂组细胞的PTEN、p-AKT蛋白表达变化,用CCK-8法及Tunel法分别观察对照组和miR-374a抑制剂组细胞的增殖和凋亡,并用Western blot法检测两组细胞的凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9表达。［结果］ 与人正常乳腺Hs 578Bst细胞相比,乳腺癌MCF-7细胞的miR-374a表达水平显著性增高（P<0.001）,PTEN mRNA及蛋白的表达水平显著性降低（P<0.001）,而p-AKT蛋白表达水平明显升高（P<0.001）。miR-374a抑制剂可抑制乳腺癌细胞的增殖（P<0.001）,并促进其凋亡的发生（P<0.001）,降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平（P<0.001）的同时活化凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9（P<0.001）。miR-374a 通过靶点PTEN影响AKT通路,miR-374a组细胞PTEN mRNA表达水平显著性降低（P<0.001）,而miR-374a抑制剂处理后,PTEN蛋白水平显著性升高（P<0.001）,p-AKT表达降低（P<0.001）。［结论］ miR-374a在乳腺癌细胞高表达,并通过调节PTEN/AKT信号通路抑制乳腺癌细胞的增殖,促进凋亡的发生。miR-374a/PTEN/AKT信号通路有望成为乳腺癌的新治疗靶点。     

雌二醇对子宫内膜癌细胞AKT通路中细胞因子的影响

通过17β雌二醇（E2）诱导人子宫内膜癌HEC-1A细胞产生不同细胞因子,探讨雌激素在子宫内膜癌发展中的作用。方法：以浓度为1×10-6 mol/L雌二醇（E2组）作用于HEC-1A细胞8h、12 h后,或1×10-6 mol/L雌激素受体抑制剂（ER组）、25×10-6 mol/L AKT抑制剂（AKT组）分别预处理HEC-1A细胞60min,各加入1×10-6 mol/L雌二醇作用8h和12h后;采用荧光定量PCR及ELISA技术,分别检测细胞内VEGF、bFGF、IL-8基因mRNA及细胞培养上清液中蛋白表达情况。Western Blot检测以1×10-6 mol/L雌二醇作用HEC-1A细胞15min后,细胞内AKT蛋白表达情况。结果：E2组的VEGF、bFGF、IL-8 mRNA及蛋白的表达均明显高于对照组（P<0.05）;ER组VEGF、bFGF、IL-8 mRNA和蛋白的表达,与E2组相比较,除了8h的VEGF蛋白和12 h的IL-8 mRNA表达无显著性差异及12 h的VEGF mRNA表达稍增加外,均明显低于E2组（P<0.05）;AKT组VEGF、bFGF、IL-8 mRNA和蛋白的表达,与E2组相比较,除了12 h的IL-8 mRNA表达无显著性差异外,均明显低于E2组（P<0.05）。雌二醇作用HEC-1A细胞15 min后,与对照组比较,细胞内p-AKT蛋白表达明显增强（P<0.05）。结论：雌二醇诱导子宫内膜癌产生细胞因子VEGF、bFGF、IL-8可能是通过激活AKT通路实现的。     

莪术醇对乳腺癌细胞增殖凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响

[目的]探讨莪术醇对乳腺癌细胞增殖凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响。[方法]以不同浓度(0、12.5、25、50、100μg/ml)莪术醇作用于乳腺癌MCF-7细胞,MTT法检测MCF-7细胞增殖抑制率,流式细胞术观察细胞周期凋亡分布,Hoechst33258染色法观察细胞凋亡形态学变化,逆转录聚合酶链反应法检测细胞酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)信使核糖核酸相对表达量,蛋白印迹法检测细胞磷酸化JAK2(P-JAK2)、磷酸化STAT3(P-STAT3)蛋白相对表达量。[结果]莪术醇对MCF-7细胞增殖具有明显抑制作用,且抑制率随药物作用时间及作用浓度的增加而上升。随着莪术醇作用浓度的增加,细胞凋亡率也有所上升[(4.27%±0.82%)、(4.54%±1.21%)、(19.32%±1.87%)、(29.58%±2.92%)、(33.74%±3.91%)、(42.94%±2.81%)]。细胞周期结果显示,莪术醇可将细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制细胞增殖。Western blot结果显示,莪术醇可抑制JAK2、STAT3磷酸化的表达,而RT-PCR结果显示,莪术醇作用细胞后,JAK2、STAT3 mRNA表达受到明显抑制。[结论]莪术醇作用于乳腺癌MCF-7细胞G0/G1期,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过JAK2/STAT3信号通路来实现。     

Dexamethasone Disrupts Cytoskeleton Organization and Migration of T47D Human Breast Cancer Cells by Modulating the AKT/mTOR/RhoA Pathway

Background: Glucocorticoids are commonly co-administered with chemotherapy to prevent drug-inducedallergic reactions, nausea, and vomiting, and have anti-tumor functions clinically; however, the distinct effectsof GC on subtypes of tumor cells, especially in breast cancer cells, are still not well understood. In this study,we aimed to clarify the effect of GC on subtypes of T47D breast cancer cells by focusing on apoptosis, cellorganization and migration, and underluing molecular mechanisms. Materials and Methods: The cell scratchtest was performed to observe the cell migration rate in T47D cells treated with dexamethasone (Dex). Hoechstand MTT assays were conducted to detect cell survival and rhodamine-labeled phalloidin staining to observecytoskeleton dynamics. Related factors in the AKT/mTOR pathway were determined by Western blotting. Results:Dex treatment could effectively inhibit T47D breast cancer cell migration with disruption of the cytoskeletaldynamic organization. Moreover, the effect of Dex on cell migration and cytoskeleton may be mediated by AKT/mTOR/RhoA pathway. Although Dex inhibited T47D cell migration, it alone may not induce cell apoptosis inT47D cells. Conclusions: Dex in T47D human breast cancer cells could effectively inhibit cell migration bydisrupting the cytoskeletal dynamic organization, which may be mediated by the AKT/mTOR/RhoA pathway.Our work suggests that glucocorticoid/Dex clinical use may prove helpful for the treatment of breast cancermetastasis.     

PI3K/AKT信号通路与前列腺癌关系的研究进展

近年来针对前列腺癌靶向治疗的研究作为新的热点受到越来越多的关注,主要集中在非AR途径的通路及靶点的探索,其中较为成熟且具有明显研究价值的途径之一是磷脂酰肌3-羟激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路.研究表明,该信号通路的异常活化与疾病的发展和转归有显著相关性,在机体细胞的生长、增殖、凋亡以及炎症反...