白血病患者WT1基因微卫星不稳定性和杂合性缺失的研究

微卫星是一种新型的遗传学标记,构成了第２代基因图谱上的图标。以微卫星作为分子标记检测微卫星不稳定性（ＭＳＩ）和杂合性缺失（ＬＯＨ）,为揭示肿瘤的发病机制及寻找新的抑癌基因开辟了新的途径。ＷＴ１基因是ＷｉｌｍｓＴｕｍｏｒ的相关基因,是一种抑癌基因。在血液系统恶性肿瘤中ＷＴ１基因失活还未见报道。我们利用微卫星标记技术,选用了ＷＴ１基因附近２个微卫星位点检测ＭＳＩ和ＬＯＨ,旨在探索ＷＴ１基因与白血病的关系。１材料与方法１．１病例选择与标本采集共检测成人患者２５例,其中ＡＬ１４例（ＡＭＬ１１例,ＡＬＬ３…     

急性白血病患者p16及p15基因纯合子缺失及甲基化研究

目的　探讨血液系统恶性肿瘤患者ｐ１６ 及ｐ１５ 基因失活的发生率及其临床意义。方法　用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 方法扩增ｐ１６ 及ｐ１５ 基因外显子１ 及外显子２ ,检测等位基因纯合子缺失;再用限制性内切酶 Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测ｐ１６ 及ｐ１５ 基因甲基化; 然后用 Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ 法（ Ｔｄ Ｔｍｅｄｉａｔｅｄ ｄ Ｕ Ｔ Ｐｄｉｇｏｘｙｇｅｎｉｎ ｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ） 检测细胞凋亡。结果　５６ 例患者中有ｐ１６ 和（ 或）ｐ１５ 基因失活者共３３ 例,其中急性淋巴细胞白血病（ Ａ Ｌ Ｌ）３８ 例中２３ 例（ 占６０ ．５ ％ , Ｔ Ａ Ｌ Ｌ１２ 例, Ｂ Ａ Ｌ Ｌ１１ 例） , Ａ Ｎ Ｌ Ｌ１８ 例中１０ 例（ 占５５５ ％ ） 。 Ａ Ｌ Ｌ 患者ｐ１６ 及ｐ１５ 基因均以甲基化失活为主。 Ｔ Ａ Ｌ Ｌ 失活的频率比 Ｂ Ａ Ｌ Ｌ 高。有ｐ１６ 和（ 或）ｐ１５ 基因失活者, 细胞的凋亡比例明显减少,病情进展迅速,治疗效果差,缓解率低, 缓解期明显缩短。结论　ｐ１６ 及ｐ１５ 基因失活的检测对于探讨急性白血病的发病机制,判断疾病进程有重要意义。     

小儿急性T淋巴细胞白血病tal－1基因缺失分析

根据ｔａｌ－１基因缺失上下游序列设计一对引物，应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术对１０株人白血病细胞株和７０例小儿急性白血病骨髓标本进行ｔａｌ－１基因缺失分析。结果ＣＥＭ、ＨＢＳ－２和ＲＰＭＩ－８４０２三株Ｔ细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）细胞株以及３／１６例Ｔ－ＡＬＬ发现ｔａｌ－１基因缺失，５４例其它类型急性白血病均未见基因缺失，而且具ｔａｌ－１基因缺失的Ｔ－ＡＬＬ细胞均为胸腺发育Ｉ期，免疫表型特征为ＣＤ＿２＋、ＣＤ＿７＋、ＣＤ＿１￣－、ＣＤ＿４￣－和ＣＤ＿８￣－。ＰＣＲ方法敏感性达１０￣（－４）。说明ｔａｌ－１缺失发生于部分Ｔ－ＡＬＬ中，可用于微小残留病的检测。     

急性T淋巴细胞白血病中SIL-TAL1融合基因与6q缺失的相关性研究

本研究旨在探讨SIL-TAL1融合基因在急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）患者中的表达情况,分析伴有SILTAL1阳性的T-ALL患者的临床和细胞遗传学特征。运用巢式逆转录聚合酶链反应检测68例T-ALL患者骨髓标本中的SIL-TAL1的表达,以R显带核型分析和微阵列比较基因组杂交检测核型异常。结果表明：在12例T-ALL患者中检测到SIL-TAL1融合基因的表达,儿童检出率明显高于成人（38.5%vs 4.8%,P=0.001）,其中50%（6/12）SIL-TAL1阳性患者存在两种转录本;SIL-TAL1阳性组核型异常率为54.5%（6/11）,其中4例伴有6号染色体长臂大片段缺失;2例经array-CGH检测到1p32存在约90 kb的缺失,形成SIL-TAL1融合基因;6号染色体长臂共同缺失区域为6q14.1-q16.3,均为杂合性缺失;SIL-TAL1阳性组中位白细胞计数和乳酸脱氢酶水平均高于阴性组（P〈0.05）。结论：SIL-TAL1融合基因与6q杂合性缺失有一定相关性（P=0.005）,在儿童中SIL-TAL1的检出率明显高于成人,且常伴有白细胞计数升高、乳酸脱氢酶升高等不良预后因素。     

急性淋巴细胞白血病p16/MTS1基因缺失与临床预后相关性研究

ｐ1 6基因缺失与急性淋巴细胞白血病 (ＡＬＬ) ,特别与高危组ＡＬＬ患者之间的关系尚未得出确切的结论。我们检测了ＡＬＬｐ1 6基因的纯合性缺失并分析其与临床预后的关系。病例和方法1　病例选择　安徽医科大学附属医院血液科 1 997年 3月～1 998年 6月收治的ＡＬＬ住院患者 4 0例 ,对完全缓解的 3 0例患者进行预后分析。男性 2 2例 ,女性 8例 ,年龄 1 4～ 65岁 ,中位年龄 2 7岁。患者的危险程度根据文献 [1 ]划分 ,入选病例诱导缓解和巩固治疗采用标准方案。2　白血病基因组ＤＮＡ的提取　按常规方法抽提白血病细胞ＤＮＡ[2 ],用ｄＨ2 Ｏ…     

儿童急性白血病GSTM1、GSTF1基因多态性分析

谷胱甘肽S-转移酶超家家族（GSTs）参与致突变物在体内的代谢解毒过程。其中的GSTM1（编码μ），GSTT1(编码θ）基因在人群中呈多态性分布。已证实GSTM1、GSTT1基因多态性与多种恶性肿瘤的易感性有关。我们就GSTM1、GSTT1基因多态性与儿童急性白血病易感性的关系进行研究。     

GSTM1、GSTT1基因多态性与白血病易感性的分析

目的分析GSTM1缺失基因型与白血病遗传易感性的关系。方法 131例白血病患者纳入病例组,200例体检健康者纳入对照组。采用巢式PCR检测GSTM1、GSTT1基因型。应用χ2检验和精确概率法比较各基因型频率在病例组与对照组之间的差异,用比值比(OR)及其95%的可信区间(CI)表示各基因型发生白血病的风险度。结果病例组GSTM1缺失基因型频率与对照组比较,差异有统计学意义(P=0.000 1,其OR值为2.152,95%CI为2.301~5.985);在病例组与对照组中均未检测到GSTT1缺失基因型;CML、AML与ALL组间进行GSTM1缺失基因型频率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论GSTM1缺失基因型可能是白血病的重要危险因素。     

白血病相关基因zo-1参与白血病发病过程及其机制的初步研究

本研究探讨新的白血病相关基因zo-1在白血病细胞中的作用及其初步机制。应用甲基化PCR方法验证THP-1等白血病细胞中基因zo-1甲基化与白血病的关系,用甲基化PCR及RT—PCR方法验证THP-1等白血病细胞系中基因zo-1甲基化与基因表达的关系。选择基因zo-1高表达的THP—1细胞,用脂质体Oligofectamine将针对基因zo-1的小干扰RNA转染THP-1细胞,RT—PCR方法验证抑制效率,Annexin V和PI观察细胞凋亡率,PI检测细胞周期,CCK-8检测细胞增殖。结果表明：急性白血病人中基因zo-1呈高甲基化状态,健康人群中基因zo-1不发生甲基化。基因zo-1未甲基化的THP-1细胞系高表达基因zo-1;基因zo-1高甲基化的Molt4及HL-60细胞系中不表达基因zo-1。脂质体Oligofectamine转染针对zo-1的小干扰RNA成功地抑制了THP-1细胞基因zo-1的表达,而不影响THP-1细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡。结论：基因zo-1为白血病相关基因,急性白血病中基因zo-1高甲基化,基因zo-1的甲基化状态调控基因zo-1表达。THP—1细胞中基因zo-1表达缺失不影响细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡。     

急性白血病患者WT1基因异构体的研究

ＷＴ1基因是Ｗｉｌｍｓ瘤的候选基因。近年来研究发现它在白血病中有异常的高表达 ,提示ＷＴ1与造血系统恶性疾病有密切的关系。为了研究在白血病中ＷＴ1四种异构体相对比例的改变对造血系统疾病发生和预后的意义 ,我们使用ＲＴ ＰＣＲ方法联合核酸扫描定量技术 ,对 4 6例ＷＴ1表达阳性白血病患者骨髓细胞进行了分析研究。对象和方法1　研究对象　 4 6例ＷＴ1基因表达阳性的初治白血病患者的骨髓标本 ,其中急性淋巴细胞白血病 (ＡＬＬ) 8例 ,急性髓细胞白血病 (ＡＭＬ) 38例 (Ｍ15例、Ｍ2 10例、Ｍ3 13例、Ｍ42例、Ｍ58例 )。临床治疗方案 :…     

急性髓细胞白血病M2b型AML1基因重排的研究

应用ＤＮＡ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交法，检测３３例Ｍ２ｂ，２７例其它亚型急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者，发现８１．８％的Ｍ２ｂ患者，包括４例型正常的Ｍ２ｂ有ＡＭＬ１基因重排。本研究结果表明ＡＭＬ１基因重排检测可作为Ｍ２ｂ基因诊断及疗效监测的手段之一。     

白血病中FHIT基因的异常表达和缺失

FHIT基因位于染色体 3p14 .2 ,实验室的研究证实FHIT基因具有抑癌基因活性。FHIT基因异常表达或表达缺失出现在多种实体肿瘤和造血系统恶性疾病。为了探讨白血病细胞中FHIT基因的异常表达及意义 ,采用巢式RT PCR法对急性髓性白血病 (AML)、急性淋巴细胞白血病 (ALL)、慢性粒细胞白血病 (CML)以及骨髓增生异常综合症 (MDS)、慢性淋巴细胞白血病 (CLL)、骨髓瘤 (MM )等不同类型白血病患者FHIT基因转录本进行检测 ,并对FHIT基因转录本进行序列测定。 98份血液系统恶性疾病患者的骨髓或外周血标本中AML 38例 ,ALL16例 ,CML 34例 ,其它恶性血液病 10例。全部患者经骨髓细胞形态检查 ,诊断符合FAB诊断标准。肝素抗凝骨髓或外周血 2 - 3ml,分离单个核细胞 ,取 5× 10 7个细胞 ,用RTIZOL 试剂一步法提取细胞总RNA ,行PCR扩增 ,琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物。回收目的片段 ,克隆到PGEM T载体 ,进行序列测定。结果表明 :在 5 5 / 98(5 6 % )的被检测病例有FHIT基因的异常表达 ,在AML、ALL和CML异常表达的发生率分别为 2 2 / 38(5 8% ) ,9/ 16(5 6 % )和 19/ 34(5 6 % )。正常骨髓或外周血标本未见有FHIT基因的异常表达。 4 3/ 98(44 % )的患者表达正常转录本 (Ⅰ型 ) ,4 0 / 98(41% )的患者同时表达正常转录本和异常     

WT1基因与白血病

ＷＴ１基因能抑制生长因子和生长因子受体的转录,因此被归类为肿瘤抑制基因,但在人类白血病细胞ＷＴ１基因呈高表达,基表达水平与预后呈负相关,ＷＴ１基因的反义核苷酸可抑制白血病细胞增殖、诱导细胞凋亡,野生型的ＷＴ１转染组系祖细胞后,可使细胞失去受粒细胞集落刺激因子的诱导分化,而代之以持续增殖。这些现象揭示,在造血祖细胞ＷＴ１基因可能起癌基因的作用。     

白血病白细胞p16基因纯合缺失的检测和临床意义

目的 探讨p16基因纯合缺失与白血开门见山发病的关系。方法 用聚合酶链反应（PCR）检测73例白血病患者白细胞p16基因纯合缺失情况。结果 73例白血病患者中有5例p16基因纯合缺失,其中,21例慢性粒细胞性白血病患者未见p16基因纯合缺失,27例急性非淋巴细胞性白血病（急非淋）患者有1例缺失,缺失率为3.7%(1/27)。25例急性淋巴细胞性白血病患者有4例缺失,缺失率为16%（4/25）。20例正常对照未发现p16基因缺失。结论 p16基因在急性淋巴细胞性白血病（急淋）中有较高的缺失率。     

正常人与白血病患者GPI-PLD基因外显子1多态性分析

现已发现1 5 0余种蛋白质通过糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定于细胞表面,包括细胞黏附分子、淋巴细胞分化抗原、肿瘤标志物等。人类造血细胞膜上的分化抗原(CD)约1 0 %是GPI锚定蛋白[1 ] ,对造血细胞的生成、分化、成熟等起着重要作用。人体中能水解GPI、释放锚定蛋白的酶只有GPI特异性磷脂酶D(GPI PLD)。不同病理状态下人血浆中GPI PLD活性改变不同[2 ] 。为探讨白血病患者外周血有核细胞GPI PLD基因是否存在单核苷酸多态性(SNP)及GPI PLD活性水平,我们对湖南地区白血病患者与正常人GPI PLD基因外显子1多态性分布情况及外…     

小儿急性淋巴细胞白血病p16基因缺失与临床特征相关性的研究

p16基因异常与人类多种肿瘤的发生与发展有关。作者用PCR方法检测了42例小儿急性淋巴细胞白血病(ALL)p16基因3个外显子缺失状况,初步探讨了pl6基因缺失与小儿ALL的发病、临床表现及预后的相关性。结果表明,p16基因缺失在小儿ALL的发生率为40％,其中1例为exon1单一缺失。T-ALL中p16基因缺失为12/13(92％),远高于B-ALL,后者为5/22(23％),临床高危型ALL pl6基因缺失为17/19(89％),20例标危型ALL均未检测到p16基因缺失。实验证明,pl6基因缺失在小儿ALL(尤其是T-ALL)的发病过程中起重要作用。与临床的相关性研究表明,pl6基因缺失提示预后不良。     

急性白血病患者AML1a基因的表达

AML1基因又称为CBFα或RUNX1，其编码的产物是一种重要的转录因子，参与体内多种重要物质转录表达的调节。AML1功能缺失影响胚胎期定向造血，并在急性白血病(AL)的发生和发展中起着重要作用。AML1a是AMI-1的一种选择性剪接体，缺乏正常的转录调节功能，且具有更强的靶基因亲和力，能干扰AML1的正常功能，可能与AL的发生、发展有关。我们应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对AL患AML1基因的表达进行研究，从分子水平探讨该基因在AL发生中的作用机制。     

多发性骨髓瘤患者的p16及p15基因纯合子缺失及甲基化研究

ｐ16及ｐ15基因是细胞周期依赖激酶 (ＣＤＫ4/6 )的抑制因子 ,通过抑制ｐＲｂ(视网膜母细胞基因表达产物 )的磷酸化 ,阻滞细胞进入Ｓ期。若ｐ16及ｐ15基因发生纯合子缺失、甲基化或点突变 ,导致其功能失活 ,ＣＤＫ4/6与ｃｙｃｌｉｎＤ1结合 ,活化ｐＲｂ ,使细胞进入ＤＮＡ合成期 ,肿瘤细胞进行无序增殖 ,形成克隆性疾病。在多发性骨髓瘤 (ＭＭ)的基因学研究中发现ｐ15和ｐ16在其发生中起重要作用[1 3] 。为此 ,我们探讨了ｐ16及ｐ15基因在ＭＭ中失活的发生率及临床意义。材料和方法1　研究对象　初次诊断的ＭＭ患者 31例 ,所有患者的诊断均…     

急性白血病p16基因的研究

为研究p16抑癌基因在急性白血病中的变化,用ABC法研究了61例急性白血病细胞表面p16抗原的表达和用多重PCR法研究了51例急性白血病p16基因的结构缺陷。结果发现白血病患者p16抗原的表达明显低于正常人(P<0.001),其中急性淋巴细胞白血病(ALL)又明显低于急性髓细胞白血病(AML)(P<0.05);但在AML和ALL完全缓解组(CR)和未缓解组(NR),p16抗原表达均无差异(P>0.05)。在30例ALL中仅发现4例p16基因第二外显子纯合子缺失,在21例AML未发现pl6基因的结构变化,说明p16基因的表达缺陷是急性白血病发生和发展中的主要变化,而结构异常并不是其演变中的必需分子事件。     

WT1基因与白血病研究现状

WT1是Wilms’瘤抑癌基因,在人类白血病细胞中表达水平很高,对其生长分化有重要作用。本文综述了WT1基因的结构、功能以及与白血病的关系。