从再生障碍性贫血患者检出阵发性睡眠性血红蛋白尿症异常细胞的观察

目的：探讨在再生障碍性贫血（再障）患者中检出阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）异常细胞的发生率。方法：用荧光标记的抗ＣＤ５９抗体，以流式细胞仪检测缺失ＣＤ５９的异常细胞。结果：１０名正常人骨髓单个核细胞及外周血红细胞和中性粒细胞的ＣＤ５９标记率均＞９５％。２３例再障患者中约２／３标记率正常，另外１／３患者的标记率有不同程度的减低。结论：该法是从再障患者检出少量ＰＮＨ异常细胞的良好手段，可用以早期发现再障－阵发性睡眠性血红蛋白尿症综合征。     

用流式细胞仪检测CE59表型对诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症…

探讨根据免疫表型检出糖化肌醇磷脂缺陷细胞在阵发性睡眠性血红蛋白尿症诊断中的意义。方法：用ＦＩＴＣ标记的ＣＤ５９单抗，以流式细胞仪分析２９例ＰＮＨ患者外周血及骨髓中ＣＤ５９细胞的百分率。结论：用流式细胞仪检测ＣＤ５９表型是目前诊断ＰＮＨ的较直接而又特异，敏感的方法。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓正常及异常造血细胞增殖及生存特性初探

目的：探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者正常及异常造血细胞的增殖及生存特性。方法：用ＣＤ５９单抗及羊抗鼠ＩｇＧ免疫磁珠将６例患者骨髓单个核细胞（ＢＭＭＮＣ）分选为ＣＤ５９＋及ＣＤ５９－两群，分别进行体外培养并与正常对照比较。结果：ＰＮＨ患者ＣＤ５９＋及ＣＤ５９－ＢＭＭＮＣ的体外增殖及生存能力均弱于正常ＢＭＭＮＣ；患者体内“正常”的ＣＤ５９＋ＢＭＭＮＣ生长能力反较异常的ＣＤ５９－细胞显著降低；患者ＣＤ５９＋细胞培养后出现ＣＤ５９抗原的丢失，正常对照则无此改变。结论：ＰＮＨ患者ＢＭＭＮＣ中ＣＤ５９－的异常造血细胞具有相对的生长优势，ＣＤ５９＋的ＢＭＭＮＣ并非真正“正常”，可能存在尚未明了的某种缺陷；ＰＮＨ发病机制复杂，异常细胞除可因ＰＩＧ－Ａ基因突变产生外，还可能因ＧＰＩ蛋白的丢失而产生。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症外周血红系的免疫分型

目的探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者网织红细胞膜上反应性溶血膜抑制物（ＣＤ５９）的表达对诊断ＰＮＨ的意义。方法对１０例ＰＮＨ患者及５例健康成人，采用流式细胞术间接免疫荧光双标记法检测外周血红系ＣＤ５９的表达，荧光染料噻唑橙用于测定网织红细胞，抗ＣＤ５９单抗检测糖化肌醇磷脂结合蛋白（ＧＰＩ锚蛋白）缺失的细胞。结果健康成人网织红细胞及红细胞膜上ＣＤ５９表达完全阳性，而ＰＮＨ患者ＣＤ５９表达分为三型，Ⅰ型细胞的ＣＤ５９完全阳性，Ⅱ型细胞ＣＤ５９部分阳性，Ⅲ型细胞ＣＤ５９完全阴性。１０例ＰＮＨ患者５例表现为两群即Ⅰ型细胞＋Ⅲ型细胞或Ⅱ型细胞＋Ⅲ型细胞，４例表现为三群即Ⅰ型细胞＋Ⅱ型细胞＋Ⅲ型细胞，１例红细胞表现为Ⅰ型细胞，而其网织红细胞为Ⅰ型细胞＋Ⅲ型细胞。绝大多数ＰＮＨ患者网织红细胞中Ⅲ型细胞占主要成分（６１．０％），同一患者病态网织红细胞高于病态成熟红细胞，ＲＥＴ／ＲＢＣⅢ或ＲＥＴ／ＲＢＣⅡ＋Ⅲ。结论病态网织红细胞膜上ＣＤ５９的表达比成熟红细胞更有利于对ＰＮＨ的诊断     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症外周血红系的免疫分型

目的 探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者网织红细胞膜上反应性溶血膜抑制物（ＣＤ５９）的表达对诊断ＰＮＨ的意义。方法 对１０例ＰＮＨ患者及５例健康成人，采用流式细胞术间接免疫荧光双标记法检测外周血红系ＣＤ５９的表达，荧光染料噻唑橙用于测定网织红细胞，抗ＣＤ５９单抗检测经肌醇磷脂结合蛋白（ＧＰＩ锚蛋白）缺失的细胞。结果 健康成人网织红细胞及红细胞膜上ＣＤ５９表达完全阳性，而ＰＮＨ患者ＣＤ５９表     

正常骨髓及阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓有核细胞的CD_(59)抗原表达研究

正常骨髓及阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓有核细胞的ＣＤ５９抗原表达研究李强张之南许彩民刘尔坤潘华珍为探讨正常骨髓有核细胞ＣＤ５９表达特点及阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者骨髓有核细胞ＣＤ５９缺失特点，我们采用ＣＤ５９单抗标记及流式细胞术，分析...     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓正常及异常造血细胞增殖…

探讨阵发性睡眠性蛋白尿症患者正常及异常造血细胞增殖及生存特性。方法：用ＣＤ５９单抗及单抗鼠ＩｇＧ免疫磁珠将６例者骨髓单个核细胞分选为ＣＤ５９＾＋及ＣＤ５９＾－两群,分别进行体外培养并与正常对照比较。结果：ＰＮＨＡ患者ＣＤ５９＾＋及ＣＤ５９＾－ＢＭＭＮＣ的体外增殖及生存能力增弱于正常ＢＭＭＮＣ;     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症临床缓解患者仍可查出异常血细胞

目的观察临床完全缓解的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者体内是否仍有异常造血细胞并探讨其临床意义。方法用免疫荧光标记及流式细胞术检测患者骨髓有核细胞、外周血红细胞ＣＤ５９抗原表达及骨髓ＣＤ３４＋造血干／祖细胞数。结果２例临床完全缓解的ＰＮＨ患者体内仍呈正常造血细胞与异常克隆并存状态,但与未缓解ＰＮＨ患者相比,完全缓解患者外周血红细胞、骨髓单个核细胞及ＣＤ３４＋细胞中均以正常的ＣＤ５９＋细胞为主,表明体内异常克隆造血优势已经消失。结论临床完全缓解的ＰＮＨ患者仍可有残存的异常克隆;ＰＮＨ达到临床完全缓解并不一定需要体内异常克隆的彻底消灭;ＰＮＨ患者体内异常克隆的造血优势在一定条件下是可以消失的。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症淋巴细胞亚群数量异常与GPI蛋 …

目的 分析阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者外周血淋巴细胞亚群数量及Ｔ、Ｂ淋巴细胞和ＮＫ细胞表面糖基磷脂酰肌醇（ＧＰＩ）蛋白表达情况,以期能深入探讨ＰＮＨ的本质。方法 ＰＮＨ患者共１５例,采用双色和三色荧光标记的单克隆抗体在流式细胞仪上分析淋巴细胞亚群分类计数和测定Ｔ、Ｂ淋巴细胞和ＮＫ细胞表面ＣＤ４８、ＣＤ５５、ＣＤ５９抗原。结果 １５例患者均有不同程度的淋巴细胞亚群数量异常,以Ｂ淋巴细胞和Ｎ     

再生障碍性贫血患者骨髓造血干/祖细胞c-kit受体表达

目的 观察再生障碍性贫血（再障）患骨髓造血干／祖细胞ｃ－ｋｉｔ受体（ＣＤ１１７）的表达,以了解再障碍造血功能衰竭与ｃ－ｋｉｔ受体水平间的关系。方法 采用免疫荧光法及流式细胞技术检测２０例再障患骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）和ＣＤ３４细胞ＣＤ１１７的表达水平,结果 （１）ＭＮＣＣＤ１１７表达率慢性再障（ＣＡＡ）组为（２．０８±１．９６）％,重型再障（ＳＡＡ）组为（０．８９±０．３２）％,正常对照组和增     

从再生障碍性贫血患者检出阵发性睡眠性血红蛋白尿症异常…

目的 探讨在再生障碍性贫血患者中检出阵发性睡眠性血红蛋白症异常细胞的发生率。方法：用荧光标记的抗ＣＤ５９抗体，以流式细胞仪检测缺失ＣＤ５９的异常细胞。结果：１０名正常人骨髓单个核细胞及外周血红细胞和中性粒细胞的ＣＤ５９标记率均〉９５％。２３例再障患者中红２／３标记率正常，另外１／３患者的标记率有不同程度的减低。     

CD59检测在阵发性睡眠性血红蛋白尿症诊断中的意义

目的　探讨CD5 9检测对阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (paroxysmalnocturnalhemoglobinuria ,PNH)及再生障碍性贫血 (AA) PNH综合征的临床诊断意义。方法　用FITC标记的CD5 9单抗 ,以流式细胞仪检测 13例PNH、37例AA和 2 0例正常人外周血红细胞和粒细胞膜表面CD5 9的表达情况。结果　正常人红细胞和粒细胞CD5 9表达阳性率均 >98% ;13例PNH患者红细胞及粒细胞CD5 9表达阳性率均 <90 % ;37例再障患者中 2 4例表达正常 ,13例红细胞或粒细胞CD5 9表达阳性率均有不同程度的减低。结论　CD5 9检测是诊断PNH较直接而又特异、敏感的方法 ,特别是对表现不典型的PNH及AA PNH综合征的诊断具有重要意义     

嗜水气单胞菌hec毒素溶血试验诊断阵发性睡眠性血红蛋白 …

目的 研究嗜水气单胞菌ｈｅｃ毒素对红细胞的作用,为阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）的临床诊断提供一种新方法。方法 从患暴发性传染病的家养鲫鱼分离到嗜水气单胞菌,其培养上清经硫酸铵沉淀获得粗提毒素,经ＤＥＡＥ纤维素层析得提纯毒素。粗提毒素作用于ＰＮＨ和其他贫血患者及正常人的红细胞,采用９６孔板在波长６３０ｎｍ酶标仪比色;同时用ＣＤ５９单抗和ＦＴＴＣ标记的羊抗鼠ＩｇＧ标记红细胞,以流式细胞仪分析毒素     

Investigation of the survival of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria red cells through the immunophenotyping of reticulocytes

BACKGROUND: Complement-mediated lysis of red cells (RBCs) is a classic feature of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) that is traditionally studied with a combination of radiolabeling of RBCs and in vitro hemolysis tests. Phenotyping of reticulocytes was used as an alternative method for the evaluation of the relative life span of normal RBCs (PNH I) and RBCs that were partially (PNH II) or completely (PNH III) deficient in CD59. STUDY DESIGN AND METHODS: Murine monoclonal antibodies CD55, CD58, and CD59 and thiazole orange were used to phenotype reticulocytes by two-color flow cytometry in nine PNH patients. RBC survival could be calculated from the ratio of CD59- or CD59low mature RBCs to CD59- or CD59low reticulocytes obtained from these patients who had not received a transfusion. RESULTS: The life span of PNH III RBCs varied from about 17 to 60 days. PNH II reticulocytes were found in the four patients with PNH II RBCs. The life span of PNH II RBCs varied with their residual expression of CD59, and cells with 15 to 20 percent of the normal amount of CD59 were protected against in vivo hemolysis. CONCLUSION: Phenotyping of reticulocytes is a convenient and reliable tool for evaluating the relative survival of normal and PNH RBCs. PNH II and PNH III reticulocytes are phenotypically distinct, and some PNH II RBCs may be sensitive to complement-mediated lysis in vitro, but normally they are complement-resistant in vivo.     

嗜水气单胞菌毒素溶血试验比色法诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症

本研究建立嗜水气单胞菌（HEC）毒素溶血试验比色法诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）。方法为取正常人，贫血病人和PNH病人（各10例）外周血标本，用HEC毒素处理外周血红细胞并630nm测定吸光度，以定量溶血程度，所测结果与流式细胞术检测CD59^-细胞进行验证。结果表明，PNH病人的红细胞对HEC毒素溶血试验有抗性，而正常人和非PNH病人的红细胞几乎全部溶解，结论：HEC毒素溶血试验比色法对PNH是一种简便，快速，特异而又可靠的诊断方法。     

评估骨髓、外周血红细胞和粒细胞CD55、CD59检测在PNH诊断中的应用

目的评估骨髓红细胞、粒细胞CD55、CD59检测对阵发性睡眠性血红蛋白尿（paroxys—realnoturnal hemoglobinura,PNH）的诊断价值。方法收集107例PNH及其他-系至三系血细胞减少患者骨髓及外周血标本,采用流式细胞仪检测其红细胞、粒细胞CD55、CD59表达缺失情况。通过受试者工作特征（receiverOperatingcharacteristic,ROC）曲线评价各指标对PNH的诊断效能,并采用线性内插法计算其诊断PNH的诊断点。结果除PNH外,骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血、白血病及各类贫血患者的骨髓、外周血CD55-、CD59-红细胞、粒细胞比例,大多数均在5％以下。各疾病组间各指标比例差异均有统计学意义（P均〈0．05）。PNH患者各指标比例均较其他疾病患者高,且差异均有统计学意义（P均〈0．05）。造血干细胞疾病组与非造血干细胞疾病组的骨髓CD55-粒细胞比例差异无统计学意义（P〉0．05）。骨髓CD55-、CD59-红细胞、粒细胞比例诊断PNH的ROC曲线下面积均达0．700以上。各指标对PNH的诊断点分别为骨髓CD55红细胞4．81％,骨髓CD59-红细胞4．25％,骨髓CD55-粒细胞49．43％,骨髓CD59粒细胞4．63％,外周血CD55-红细胞3．99％,外周血CD59红细胞3．25％,外周血CD55-粒细胞4．17％,外周血CD59-粒细胞4．71％。结论骨髓红细胞、粒细胞CD55、CD59的诊断价值优于外周血,可以作为诊断PNH的辅助手段。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓造血细胞对粒细胞集落刺激因子反应的研究

目的　观察阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者骨髓造血细胞对粒细胞集落刺激因子(G CSF)的反应并研究其机制。方法　①用半固体培养基体外培养17例PNH患者和12名正常人骨髓单个核细胞(BMMNC),观察加与不加G CSF两组粒单核细胞集落(CFU GM)和集簇(cFU GM)形成情况。PNH患者骨髓GPI+CD34+和GPI-CD34+细胞表达粒细胞集落刺激因子受体(G CSFR、CD114)和干细胞生长因子受体(C KIT、CD117)的差异。②用流式细胞术检测20例初发PNH患者和12名正常对照BMMNC和CD34+细胞表面GPI锚定蛋白CD59以及CD114和CD117的表达。结果　①无G CSF及加G CSF培养PNH组cFU GM数量分别为( 112. 41±22. 74 )和( 133. 82±25. 85 ) /105BMMNC,均较正常对照的(190. 33±36. 05)和(309. 42±92. 94) /105 BMMNC少(P<0. 05);无G CSF及加G CSF培养PNH组CFU GM数量分别为(24. 29±9. 05)和(27. 53±10. 65) /105 BMMNC,也较正常对照的(77. 42±36. 01)和(98. 00±43. 14) /105 BMMNC少(P<0. 05 )。PNH组加G CSF后,cFU GM增加率为(20. 29±6. 82)% (P<0. 05),CFU GM增加率为(16. 45±3. 28)% (P>0. 05)。正常对照加G CSF后,cFU GM增加率为(56. 11±37. 59)%,CFU GM增加率为(48. 03±13. 60)% (P值均<0. 05),PNH组增加率均低于正常对照(P<0