ERβ对小鼠阴茎海绵体血管内皮保护作用的实验研究

目的:初步探讨雌激素受体β(ERβ)对小鼠阴茎血管内皮的保护作用。方法:随机选取ERβ基因敲除(ERβKO)雄性小鼠和相应野生型雄性小鼠各12只,随机分为4组:正常对照组、ERβKO组、野生型+TNFα处理组和ERβKO+TNFα处理组。ERβKO组及正常对照组腹腔注射生理盐水,野生型+TNFα处理组和ERβKO+TNFα处理组给予TNFα6μg/(kg.d)腹腔注射,连续14 d。观察阿朴吗啡诱导的自发勃起反应;制备阴茎组织切片,内皮细胞标志物CD34、vWF免疫组化染色观察海绵窦内皮细胞变化,TUNEL法检测海绵体组织细胞凋亡情况。结果:与正常对照组相比,ERβKO组勃起潜伏期延长(P<0.05),但勃起次数无显著差异;ERβKO+TNFα组与野生型+TNFα组潜伏期显著延长(P<0.05),勃起次数显著减少(P<0.05),以ERβKO+TNFα组变化更显著。免疫组化结果显示,与正常对照组(CD34:3.00±0.00,vWF:2.75±0.50)比较,海绵体组织CD34、vWF蛋白表达在ERβKO组(CD34:2.25±0.50,vWF:2.00±0.00)、ERβKO+TNFα组(CD34:0.25±0.50,vWF:0.33±0.58)、野生型+TNFα组(CD34:1.50±0.58,vWF:1.25±0.50)均显著减少(P<0.05),且ERβKO+TNFα组比野生型+TNFα组减少更显著(P<0.05)。仅在ERβKO+TNFα组海绵体发现凋亡细胞。结论:ERβ基因敲除后,尤其在内皮损伤因素TNFα作用下,小鼠阴茎血管内皮细胞减少,提示ERβ对阴茎海绵窦内皮具有保护效应。     

pAdxsi-ERβ腺病毒转染对ERβKO小鼠阴茎海绵体血管内皮的影响

目的:探讨ERβ基因过表达对ERβKO小鼠阴茎血管内皮的影响及相关分子机制。方法:选取ERβKO雄性小鼠12只,随机分为两组:ERβKO+TNFα+pAdxsi-ERβ组和ERβKO+TNFα+空病毒组。ERβKO+TNFα+pAdxsi-ERβ组给予ERβ基因重组腺病毒转染处理14 d,ERβKO+TNFα+空病毒组转染空病毒作对照,同时两组均给予TNFα6μg/(kg·d)腹腔注射,连续14 d。采用APO法观察小鼠的阴茎勃起功能;免疫组化检测内皮标志物CD34、vWF的变化情况;RT-PCR、Western印迹和免疫组化检测eNOS-NO通路相关分子表达情况。结果:与ERβKO+TNFα+空病毒组相比,ERβKO+TNFα+pAdxsi-ERβ组小鼠的变化情况如下:①勃起次数增多(2.17±0.41 vs 0.50±0.55,P<0.05),勃起潜伏期缩短[(24.0±1.27)min vs(28.83±1.33)min,P<0.05];②内皮标志物CD34、vWF表达更丰富[(1.50±0.55;1.33±0.52)vs(0.67±0.52;0.50±0.55),P<0.05];③eNOS、Cam表达减少,小窝蛋白-1表达上调(P均<0.05),RT-PCR与Western印迹结果相符合。结论:ERβ基因对阴茎血管内皮具有保护作用,eNOS-NO通路是其发挥作用的机制之一。     

褪黑素抗氧化治疗糖尿病大鼠阴茎勃起功能障碍的研究

目的 观察褪黑素对糖尿病大鼠阴茎勃起功能的影响,探讨氧化应激在糖尿病性勃起功能障碍发病机制中的作用.方法 一次性腹腔注射STZ建立糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病组、褪黑素(MT)治疗组以及对照组.8周后通过电刺激各组大鼠勃起神经来检测海绵体内压,评价勃起功能;采用硫代芭比妥酸法检测阴茎海绵体组织中丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测超氧化物氧化酶(SOD)活性;免疫组化染色半定量分析各组大鼠阴茎海绵体中平滑肌及内皮的含量.结果 与正常对照组相比,阴茎海绵体组织中MDA含量显著增加(P＜0.01),SOD活性降低(P＜0.05),最大海绵体内压(ICP)亦显著降低(P＜0.05);与糖尿病组相比,MT组大鼠海绵体MDA含量明显降低(P＜0.05),其SOD活性和ICP显著升高(P＜0.05);且其海绵体平滑肌及海绵窦内皮细胞含量明显提高.结论 MT可通过改善组织中氧化应激水平,促进阴茎海绵体平滑肌和内皮组织修复,提高勃起功能;抗氧化治疗可能为糖尿病性勃起功能障碍的防治提供新的策略.     

利拉鲁肽对糖尿病大鼠阴茎海绵体eNOS表达的影响

目的:研究胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物利拉鲁肽对糖尿病(DM)大鼠阴茎海绵体内皮型一氧化氮合酶(e NOS)表达的影响,探讨利拉鲁肽对DM勃起功能障碍(DED)大鼠勃起功能的作用。方法:取6周龄雄性SD大鼠,分为正常对照组(NC,n=10)与实验组(n=20),实验组构建DM大鼠模型,随机将实验组分为DM组(n=8)与GLP-1组(n=8)。干预12周后,检测各组空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、睾酮、白介素-6,计算胰岛素敏感指标Homa-IR与Homa-β,比较各组大鼠勃起功能;Western印迹检测各组大鼠阴茎海绵体组织Akt/p-Akt、e NOS/p-e NOS的表达。结果:DM组大鼠勃起次数(0.90±1.14)及勃起率(37.5%)较GLP-1组(2.90±1.53,25.0%)、NC组(4.20±1.05,100%)均明显减少(P0.05);GLP-1组大鼠勃起率及勃起次数亦少于NC组大鼠(P0.05)。免疫荧光染色提示e NOS主要表达在海绵体血管、血窦内皮细胞的细胞质中,DM组、GLP-1组e NOS蛋白表达水平显著低于正常对照组(P0.05),且GLP-1组明显高于DM组(P0.05)。DM、GLP-1组大鼠阴茎组织e NOS/p-e NOS表达水平较NC组明显下降(P0.01或0.05)。与DM组相比,GLP-1组大鼠阴茎组织p-e NOS表达水平明显升高(P0.05)。3组大鼠阴茎组织Akt比较无显著差异(P0.05)。DM、GLP-1组大鼠阴茎组织p-Akt表达水平较NC组明显下降(P0.01或0.05)。与DM组相比,GLP-1组大鼠阴茎组织p-e NOS表达水平明显升高(P0.05)。结论:GLP-1可能通过调节Akt/e NOS信号通路,保护阴茎海绵体组织内皮细胞功能,改善DED大鼠的勃起功能,提示GLP-1的使用可能是将来治疗和预防DED的重要方法之一。     

尿源干细胞治疗海绵体神经损伤性勃起功能障碍大鼠模型的实验研究

目的:探讨尿源干细胞(USC)对海绵体神经损伤性勃起功能障碍(CNIED)大鼠勃起功能和阴茎海绵体组织结构的保护作用。方法:60只成年雄性SD大鼠随机平均分为4组(n=15只/组):假手术组、双侧海绵体神经钳夹损伤组(BCNI组)、PBS组、USC组。假手术组予暴露双侧海绵体神经后直接关闭手术切口,其余3组均予血管钳钳夹双侧海绵体神经1 min,建立CNIED模型;PBS组和USC组分别予阴茎海绵体注射PBS(200μl)或USC(1×10~6细胞/200μl PBS)。治疗28 d后测定大鼠的最大海绵体内压(mICP)和m ICP/平均动脉压(mICP/MAP),并通过Western印迹检测海绵窦内皮细胞标志物e NOS,平滑肌标志物α-SMA,以及Collagen I,通过免疫组化检测海绵体阴茎背神经内的神经标志物(nNOS、NF-200),Masson染色检测海绵体平滑肌/胶原比值,以及TUNEL染色检测海绵窦内细胞凋亡水平。结果:治疗28 d后,USC组大鼠的mICP及mICP/MAP均较PBS组[(81±9.9)mm Hg vs(31±8.3)mm Hg,0.72±0.05 vs 0.36±0.03,P0.05]和BCNI组[(81±9.9)mm Hg vs(33±4.2)mm Hg,0.72±0.05 vs 0.35±0.04,P0.05]显著升高。免疫组化结果显示:USC组大鼠背神经内n NOS、NF-200阳性神经纤维面积的比例(%)均较PBS组(11.31±4.22 vs 6.86±3.08,27.31±3.12 vs 17.38±2.87,P0.05)和BCNI组(11.31±4.22 vs 7.29±4.84,27.31±3.12 vs 19.49±4.92,P0.05)显著增加;Western印迹检测结果显示:USC组大鼠e NOS/GAPDH比值较PBS组(0.52±0.08 vs 0.31±0.06,P0.05)和BCNI组(0.52±0.08 vs 0.33±0.07,P0.05)均显著提高,α-SMA含量亦较PBS组(1.01±0.09 vs 0.36±0.05,P0.05)和BCNI组(1.01±0.09 vs 0.38±0.04,P0.05)显著提高,而Collagen I含量较PBS组(0.28±0.06 vs 0.68±0.04,P0.05)和BCNI组(0.28±0.06 vs 0.70±0.10,P0.05)显著降低;且Masson染色结果示USC组大鼠阴茎平滑肌/胶原比值(%)亦较PBS组(17.91±2.86 vs 7.70±3.12,P0.05)和BCNI组(17.91±2.86 vs 8.21±3.83,P0.05)显著升高。TUNEL染色显示USC组大鼠海绵窦内细胞的凋亡指数(%)较PBS组(3.31±0.83 vs 9.82±0.76,P0.01)和BCNI组(3.31±0.83 vs 9.75±0.91,P0.05)显著降低。结论:USC可以通过保护神经、改善海绵窦内皮功能和海绵体纤维化,抑制细胞凋亡,显著保护CNIED大鼠的勃起功能。     

胱硫醚-γ-裂解酶和胱硫醚-β-合成酶在高血压大鼠阴茎海绵体中的表达

目的:探讨高血压对大鼠阴茎海绵体组织胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)表达的影响及与大鼠勃起功能的关系。方法:健康雄性SPF级自发性高血压大鼠(SHR)与对照组WKY(Wistar-Kyoto)大鼠各10只,于12周龄时测定大鼠血清睾酮、阴茎海绵体内压/平均动脉压(ICP/MAP)、血浆和阴茎海绵体内源性H2S的含量,采用免疫组化和Western印迹分析CSE和CBS在阴茎海绵体内的表达。结果:SHR与WKY大鼠的血清睾酮值没有显著差别,SHR的ICP/MAP在0、3和5 V电刺激盆腔神经节(MPG)时均显著低于WKY组(n=10,P0.05)。SHR血浆H2S含量显著低于WKY大鼠[(10.49±1.35)μmol/Lvs(21.92±2.75)μmol/L,P0.05],SHR阴茎海绵体组织内源性H2S含量显著低于WKY大鼠[(52.60±3.44)nmol/mg prot vs(87.67±2.12)nmol/mg prot,P0.05],SHR阴茎海绵体组织内源性H2S生成率也较WKY大鼠显著降低[(1.14±0.07)nmol/(mg·min)vs(4.35±0.32)nmol/(mg·min),P0.05]。CSE及CBS主要表达在SHR和WKY大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞和血管内皮细胞的胞质,SHR的CSE及CBS蛋白表达量均显著低于WKY大鼠(P0.05)。ICP/MAP与CSE和CBS表达呈高度正相关(r=0.955、0.977,P均0.05)。结论:高血压大鼠阴茎海绵体组织中CBS和CSE的表达下降,导致阴茎海绵体内H2S合成减少,可能是高血压引起勃起功能下降的机制之一。     

CD34及Sca-1蛋白在不同月龄大鼠阴茎海绵体中的表达

目的 检测CD34和干细胞抗原-1(Sca-1)在不同月龄组SD大鼠阴茎海绵体组织中的表达,对阴茎海绵体干细胞进行初步的观察.方法 随机选取2月龄、5月龄、20月龄不同窝别SD大鼠各10只分别作为幼龄组、壮龄组和老龄组,乙醚麻醉下取阴茎海绵体组织,分别采用免疫组织化学和RT-PCR技术对CD34和Sca-1进行测定.结果 阴茎海绵体组织中存在CD34和Sca-1这两种干细胞抗原标志物的表达.CD34表达以血管及血窦内皮为主,并可见部分散在表达;Sca-1散在表达,主要沿血窦及动脉血管分布;亦可见极少量双阳性染色细胞(CD34/Sca-1),主要表达于海绵体血窦周围.CD34、Sca-1、CD34/Sca-1表达量于组间两两比较均有显著统计学差异(P＜0.01),且均与月龄呈明显负相关(P＜0.01).结论 SD大鼠阴茎海绵体内CD34及Sca-l蛋白表达随月龄增长明显下降,并有双阳性染色细胞的存在.海绵体组织中有内源性干细胞存在的可能.     

高脂血症大鼠阴茎海绵体中VEGF含量变化对NOS的影响

目的 探讨高脂血症引起大鼠阴茎海绵体中血管内皮生长因子(VEGF)含量的变化,以及这种变化对一氧化氮合酶(NOS)活性的影响.方法 将32只雄性wistar大鼠随机分为2组,高脂血症组和正常对照组各16只,通过建立大鼠高脂血症模型,于实验开始后10d和20d,分别随机取各组1/2大鼠观察其勃起功能;采用免疫组化方法观察大鼠阴茎海绵体内VEGF,并用图像分析法测定其含量;用分光光度法分别测定海绵体匀浆中NOS活性.结果 造模开始后第10天,高脂血症组和正常对照组相比,大鼠阴茎海绵体内VEGF含量、NOS活性及阴茎勃起次数差异均有显著性(P＜0.05):造模开始后第20天,两组的VEGF含量、NOS活性及阴茎勃起次数差异均有显著性(P＜0.05).高脂血症组VEGF含量、NOS活性及阴茎勃起次数,第20天均明显低于第10天,两两比较差异均有显著性(P＜0.05).结论 高脂血症大鼠阴茎海绵体中VEGF明显减少,内皮细胞增殖下降,进而NOS下降,这可能是高脂血症引起勃起功能障碍(ED)的发病机制之一.     

转化生长因子β1、结蛋白及CD34在大鼠阴茎海绵体组织中的表达

目的:检测转化生长因子β1(TGF-β1)、结蛋白(Desmin)及CD34在不同月龄组SD大鼠阴茎海绵体组织中的表达情况。方法:随机选取2、5、20月龄不同窝别SD大鼠各10只分别作为幼龄组、壮龄组和老龄组,乙醚麻醉下取阴茎海绵体组织,分别用RT-PCR和免疫组化检测TGF-β1、Desmin及CD34mRNA及蛋白的表达。结果:RT-PCR结果显示,阴茎海绵体组织中有TGF-β1、Desmin及CD34mRNA的表达,且3者表达量于组间两两比较均有统计学差异(P<0.01)。TGF-β1蛋白主要表达于海绵体小梁及动脉血管周围,胞膜、胞质染色;Desmin蛋白为肌性组织染色,以胞膜、胞质为主;CD34蛋白表达以血管及海绵窦内皮为主。TGF-β1mRNA的表达与月龄呈明显正相关(r=0.944,P<0.01),Desmin及CD34mRNA的表达与月龄呈明显负相关(r=-0.947,P<0.01;r=-0.934,P<0.01),且Desmin、CD34mRNA的表达均与TGF-β1mRNA的表达有明显的相关性(r=-0.888,P<0.01;r=-0.887,P<0.01)。结论:随着月龄的增长,阴茎海绵体组织中TGF-β1的表达明显增加,Desmin、CD34的表达明显减少;TGF-β1的表达与Desmin、CD34的表达均呈显著负相关;TGF-β1是ED的重要影响因子。     

枸杞多糖对糖尿病大鼠阴茎海绵体氧化应激损伤的保护作用

目的探讨枸杞多糖(LBP)对糖尿病大鼠阴茎海绵体氧化应激损伤的保护作用。方法 SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,随机设立糖尿病组(DM组)、枸杞多糖灌胃组(LBP组),并设立正常对照组(NC组)。8周后通过APO试验检测勃起功能,硫代巴比妥酸法检测阴茎海绵体组织内丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法检测阴茎海绵体组织内超氧化物歧化酶(SOD)含量,光镜下观察阴茎海绵体组织Masson染色病理切片中胶原纤维、平滑肌纤维的差异。结果与NC组比较,DM组大鼠勃起次数明显减少(P0.05),阴茎海绵体组织内MDA含量显著增高(P0.05),SOD含量明显减少(P0.01);大鼠阴茎海绵体组织平滑肌部分断裂,数目减少,胶原纤维菲薄,结构破坏,排列紊乱。经灌胃8周后,LBP组与DM组比较:勃起次数增多(P0.05),大鼠阴茎海绵体组织中MDA含量降低(P0.05),SOD含量明显增加(P0.01),光镜下观察阴茎海绵体组织结构改善。结论实验证实,LBP可以减轻糖尿病大鼠阴茎海绵体氧化应激损伤,修复部分组织结构,改善大鼠勃起功能。     

静脉性勃起功能障碍中阴茎静脉漏的彩色多普勒超声观察

目的 探讨静脉性勃起功能障碍(ED)患者阴茎静脉的血液动力学变化. 方法 静脉性ED患者32例,年龄26～63岁,平均41岁.病程6个月～10年,平均2.5年.采用前列腺素E1试验后行常规阴茎彩色多普勒超声检查,观察阴茎背深静脉、海绵体静脉、球静脉的超声表现,分析其与海绵体动脉阻力指数(RI)的相关性. 结果 32例患者诱发勃起前静脉内径(0.06±0.15)mm,血流速度(4.30+1.36)cm/s,诱发勃起5 min后阴茎静脉管径(1.23±0.30)mm,血液回流增多,血流速度(11.50+4.02)cm/s.阴茎背深静脉、海绵体静脉、球静脉流量与海绵体动脉RI的相关系数r分别为-0.55,-0.53,-0.24(P＜0.05).考虑存在混合性静脉漏因素的前提下,阴茎静脉流量与海绵体动脉RI的r为-0.88(P＜0.001). 结论 高频超声能清楚显示阴茎静脉漏部位,可初步判断静脉性ED患者的静脉漏部位及其程度.     

不同生理阶段小鼠雌激素受体水平及IL-13、TNF-α含量的变化

目的观察小鼠在不同生理阶段雌激素及其受体及白细胞介素13(IL-13)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的变化,探讨雌激素水平对小鼠免疫功能的影响。方法清洁级健康雌性C57BL/6小鼠60只,其中2月龄小鼠(40只)随机分为发情间期组(对照组)、妊娠组,10月龄小鼠拟为自然绝经组,每组20只。3个月后进行实验,RT-PCR技术检测3组小鼠脾脏IL-13、TNF-αmRNA、ERαmRNA和ERβmRNA水平,ELISA检测血清雌二醇(E_2)水平,比较三组间各个指标差异。结果与对照组相比,妊娠组血E_2水平[(82.27±8.70)pmol/L vs.(55.23±5.11)pmol/L]和ERαmRNA水平[(3.93±1.54)vs.(2.70±1.17)]显著升高,自然绝经组E_2水平[(23.52±4.46)pmol/L vs.(55.23±5.11)pmol/L]和ERαmRNA水平[(1.15±0.71)vs.(2.70±1.17)]显著降低(P0.05);妊娠组小鼠脾脏IL-13、TNF-αmRNA水平显著降低,而绝经期小鼠脾脏IL-13、TNF-αmRNA水平显著升高,差异有统计学意义(P0.05);三组小鼠ERβmRNA水平无显著性差异(P0.05)。结论绝经组小鼠IL-13、TNF-α浓度水平较妊娠组及发情间期组升高,可能与其雌激素水平及ERα受体下降有关。     

血管活性肠多肽基因转导增强阴茎勃起功能

目的 探讨阴茎海绵体勃起神经递质血管活性肠多肽(VIP)基因转导入糖尿病大鼠阴茎海绵体并表达多量VIP以增强勃起功能的可行性.方法 将构建的重组质粒pcDNA3/VIPcDNA注射入链尿佐菌素诱导的糖尿病大鼠阴茎海绵体,在注射3 d后测定阴茎海绵体内压(ICP),分别以正常空白、空白、单纯注射缓冲液和单纯注射pcDNA3载体对照.Dot blot法测定阴茎组织中VIP mRNA表达水平.结果 糖尿病大鼠阴茎海绵体注射重组质粒后3 d,电刺激海绵体神经,ICP较对照组明显升高(P＜0.05);阴茎组织VIP mRNA表达增多(P＜0.05).结论 成功将重组质粒pcDNA3/VIP cDNA转导入糖尿病阴茎海绵体,VIP mRNA表达增加能增强糖尿病大鼠阴茎海绵体的勃起功能.     

MSCs与CD34~+单核细胞共培养联合脱细胞支架植入体内构建兔阴茎海绵体

目的研究将异体骨髓间充质干细胞(MSCs)和CD34~+单核细胞(MNCs)共培养体系种植于脱细胞海绵体支架上在兔体内构建阴茎海绵体组织的可行性。方法分别从兔骨髓与兔外周血中提取并鉴定MSCs与CD34~+MNCs,将两种细胞组分以107/mL的密度种植于制备好的兔阴茎海绵体脱细胞胶原支架上,同时将相同密度的MSCs、CD34~+MNCs分别种植于支架上,培养4天后植入一种兔阴茎海绵体缺损模型中。3个月后对工程化组织进行取材,行HE及Masson三色染色等组织学检测。结果 MSCs和CD34~+MNCs共培养组近白膜处的海绵体保留了正常海绵体结构,而MSCs组、CD34+单核细胞组及空白支架组以疤痕增生为主,尽管较之CD34~+单核细胞组及空白支架组,间充质干细胞组疤痕组织中的血管数目较多(P0.05)。结论我们的研究证明了将MSCs和CD34~+MNCs的共培养体系种植于脱细胞支架上植入兔体内可以构建出一段组织学上与原生海绵体相似的组织;CD34~+MNCs在体内主要通过协同MSCs而非单独发挥其促血管化的生物学效应。     

糖尿病大鼠阴茎海绵体CBS和CSE表达及其意义

目的:内源性硫化氢(H2S)是新发现的气体信号分子,对于平滑肌细胞的舒张具有重要的调节功能。本文探讨糖尿病(DM)大鼠阴茎海绵体组织H2S信号通路及其与DM勃起功能障碍(ED)的关系。方法:8周龄健康雄性SD大鼠20只,随机分成4组:正常对照4周组(A)、DM 4周组(B)、正常对照6周组(C)、DM 6周组(D)。采用腹腔注射链脲佐菌素(50 mg/kg)制作DM模型,对照组给予等量生理盐水腹腔注射。测定各组大鼠阴茎海绵体内压/平均颈动脉压(ICPmax/MAP),取阴茎标本测定组织内H2S浓度、免疫组化和Western印迹检测阴茎海绵体组织内胱硫醚-β-合成酶(CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)蛋白含量。结果:电压5V和7 V刺激盆神经节测定ICPmax/MAP比值,B组(0.19±0.03,0.29±0.04)较A组(0.46±0.07,0.68±0.09),D组(0.14±0.04,0.25±0.04)较C组(0.43±0.07,0.65±0.16)均显著降低(P0.05)。各组大鼠血清睾酮水平比较,B组[(359.08±60.06)ng/dl]与A组[(469.19±126.46)ng/dl]比较无显著差异性(P0.05),D组血清睾酮水平[(297.01±96.58)ng/dl]与C组[(470.44±209.28)ng/dl]比较无显著差异性(P0.05)。血浆及阴茎组织内H2S浓度,B组较A组、D组较C组均显著降低(P均0.05)。阴茎海绵体组织内CBS和CSE蛋白表达量,B组较A组、D组较C组均显著降低(P0.05),D组较B组亦显著降低(P0.05)。结论:DM大鼠阴茎海绵体内H2S浓度降低、CBS和CSE表达下降,提示H2S信号系统可能与DM的ED病理机制相关。     

大鼠阴茎海绵体肌源性干细胞向内皮细胞分化的研究

目的 观察大鼠阴茎海绵体肌源性干细胞(MDSCs)在血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)共同作用下向内皮细胞分化的潜能.方法 采用Preplate差速贴壁法结合密度梯度离心法分离、纯化大鼠阴茎海绵体MDSCs,获得差速贴壁细胞(PP1-PP6),免疫荧光细胞化学法检测PP6细胞干细胞抗原-l(Sca-1)和结蛋白(Desmin)的表达,并传代培养.取PP6第3代细胞在VEGF和bFGF共同诱导21 d后,免疫荧光细胞化学法鉴定内皮细胞标志物[CD31、胎肝激酶-l(Flk-1)]的表达;分别在诱导0、5、10、15、21 d,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测干细胞标志物(Oct-4)和内皮细胞标志物[CD31、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、Flk-1] mRNA的表达量;通过Dil-Ac-LDL摄取实验检测细胞吞噬低密度脂蛋白的能力;划痕24h后观察划痕空白处的距离,评估细胞的迁移能力.结果 PP6细胞表达肌源性干细胞标志物Sca-1和Desmin;PP6诱导21 d后表达内皮细胞标志物(CD31和Flk-1),诱导21 d后与诱导0d比较,干细胞标志物Oct-4的mRNA表达量下降(下降倍数为0.445±0.025),而内皮细胞标志物mRNA表达量升高(CD31、eNOS、Flk-1升高倍数分别为2.541±0.146、2.364±0.175、2.538±0.100),差异均有统计学意义(P＜0.05).Dil-Ac-LDL摄取实验提示诱导后的细胞具有吞噬低密度脂蛋白的能力;划痕实验观察到诱导组空白处距离为282.01±3.84,未诱导组空白处距离为450.35±1.86,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 大鼠阴茎海绵体MDSCs在VEGF和bFGF的共同诱导下可分化为内皮细胞,且具有成熟内皮细胞的功能.     

白细胞介素-6在全身炎症反应中对冠脉内皮细胞的作用

目的 应用基因敲除小鼠模型研究白细胞介素(IL)-6在这一损伤过程中对内皮细胞的损伤作用及其机制.方法 IL-6 knockout(IL-6 KO,C57BL/6J-116tmlKopf,实验组)小鼠与其野生型小鼠C57BL/6J(对照组)分别给予40%烧伤,用Langendorff离体工作心模型观察烧伤后鼠心心功能及冠脉流量的变化,并观察内皮细胞对乙酰胆碱的反应性,用HE和Tunel染色观察心肌血管及其内皮细胞的变化.结果 在非烧伤应急情况下,对照组与实验组的冠脉流量、心排出量及对乙酰胆碱刺激的反应均无明显差异,病理学差异无统计学意义.但在烧伤后,对照组冠脉流量(1.94±0.17比2.32±0.21 mL/min,P＜0.05)与心排量(3.7±0.3)比(7.5±0.4)ml/min,P＜0.05)均显著减少,对乙酰胆碱刺激的反应显著低于实验组(2.34±0.23)比(2.88±0.26);(5.0±0.4)比(8.4±0.4),P＜0.05);病理学上对照组血管内皮肿胀、排列紊乱及内皮细胞凋亡现象.结论 循环血液中IL-6对内皮细胞的损伤作用可能是其心功能抑制的始动环节.     

雄激素缺乏对大鼠阴茎海绵体H2S信号通路的影响

目的:研究H2S信号通路在雄激素缺乏引起勃起功能下降中的作用。方法:8周龄健康雄性SD大鼠30只,随机分成6组:假手术2周组(A组)、假手术4周组(B组)、去势2周组(C组)、去势4周组(D组)、去势后雄激素替代治疗2周组(E组)和去势后雄激素替代治疗4周组(F组)。E、F去势术后给予生理剂量丙酸睾酮3 mg/(kg·d)皮下注射。测定各组大鼠血清睾酮、阴茎海绵体内压(ICP)、平均颈动脉压(MAP),测定血浆和阴茎组织内H2S浓度,免疫组化和Western印迹检测胱硫醚-β-合成酶(CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)蛋白的表达。结果:血清睾酮水平结果显示C组[(0.63±0.15)nmol/L]较A组[(16.55±4.17)nmol/L]、E组[(18.99±4.62)nmol/L]显著降低(P0.05);D组[(0.70±0.22)nmol/L]较B组[(15.44±5.18)nmol/L]、F组[(20.99±6.41)nmol/L]显著降低(P0.05)。予以5、7 V电刺激盆神经后,ICP/MAP在C组较A、E组显著降低(P0.05),D组较B、F组显著降低(P0.05)。血浆及阴茎组织内H2S浓度含量C组较A、E组显著降低(P0.05),D组较B、F组显著降低(P0.05)。免疫组化和Western印迹检测阴茎海绵体组织内CBS、CSE蛋白表达量,C组较A、E组显著降低(P0.05),D组较B、F组显著降低(P0.05)。C组较D组CBS、CSE蛋白表达量显著降低(P0.05)。结论:阴茎海绵体组织CBS、CSE表达下降引起H2S信号通路受抑可能是雄激素缺乏引起大鼠勃起功能下降的机制之一。     

糖尿病性勃起功能障碍大鼠中低睾酮水平对阴茎海绵体平滑肌的影响

目的 观察糖尿病性勃起功能障碍(DMED)大鼠的睾酮水平变化对其阴茎海绵体平滑肌组织和超微结构的影响.方法 将3个月龄雄性Wistar大鼠20只随机等分为两组:正常对照组和DMED组,行放射免疫法测定其血清睾酮浓度和masson染色观察阴茎海绵体平滑肌(CCSM)密度以及通过透射电镜观察海绵体平滑肌细胞的超微结构.结果 DMED组大鼠的血清睾酮水平(17.445 ±2.540) nmol/L较正常组(338.457±63.802) nmol/L明显下降(P＜0.01);同时DMED组大鼠CCSM密度(5.640±0.597)％较正常对照组(19.890±1.957)％亦明显减少(P＜0.01),透射电镜下还观察到DMED组大鼠阴茎CSMC的核浆比增大,高尔基复合体明显肥大以及线粒体水肿.结论 睾酮水平下降可能导致DMED大鼠阴茎海绵体平滑肌发生病理变化.     

骨髓间充质干细胞即刻与延时治疗修复阴茎海绵体神经损伤大鼠勃起功能的研究

目的:拟观察在双侧阴茎海绵体神经(CN)损伤的大鼠神经性勃起功能障碍(NED)模型中即刻和延时向阴茎海绵体注射骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对大鼠阴茎勃起功能的修复作用。方法:选取28只8周龄、体重200~250 g雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组找到双侧海绵体神经后不做处理直接关腹并缝合皮肤;对照组、即刻治疗组和延时治疗组均通过钳夹的方式损伤双侧阴茎海绵体神经建立NED模型随后关腹缝合。假手术组和对照组向阴茎海绵体内注射对照剂,即刻治疗组注射BM-MSCs,延时治疗组术后两周注射BM-MSCs。术后12周采用电刺激CN记录阴茎海绵体内压(ICP),颈动脉穿刺测定平均动脉压(MAP),ICP/MAP作为勃起功能的评价指标来评估大鼠的勃起功能。在勃起功能检测后处死大鼠,取阴茎海绵体中段组织检测平滑肌、胶原和神经纤维。结果:在手术后12周,即刻治疗组和延时治疗组ICP和ICP/MAP均较对照组升高(P0.05)。即刻治疗组和延时治疗能提高大鼠海绵体组织内平滑肌与胶原的比例(P0.05),同时两组阴茎海绵体内平滑肌含量高于对照组(P0.05),阴茎海绵体背神经内神经微丝(NF)蛋白阳性神经纤维数目和nNOS的表达高于对照组(P0.05)。结论:阴茎海绵体内注射BM-MSCs能对双侧CN损伤大鼠的勃起功能恢复有促进作用。BM-MSCs治疗可以提高海绵体组织内平滑肌与胶原的比例,改善纤维化,并能提高海绵体组织中平滑肌含量、阴茎背神经的神经丝含量和nNOS的表达水平,术后延时治疗同样能取得一定的治疗效果。