雷公藤内酯醇对人胰腺癌PANC-1细胞的抑制作用及其可能的机制

目的： 通过体内外实验观察雷公藤内酯醇（triptolide,TPL）对人胰腺癌PANC-1细胞生长和凋亡的抑制作用,并分析其对Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）、血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial cell growth factor,VEGF）的表达和肿瘤血管生成的影响。 方法： 以0、20、40、80 ng/ml的TPL作用于PANC-1细胞,MTT法和流式细胞术分别检测TPL对PANC-1细胞增殖和凋亡的影响,Western blotting检测TPL作用后PANC-1细胞中TLR4和VEGF的表达。建立PANC-1细胞裸鼠荷瘤模型并随机分为TPL组、PBS组,测量移植瘤的体积变化,治疗35 d后摘取瘤块,免疫组织化学方法检测移植瘤组织内TLR4、VEGF和CD31的表达,并计算微血管密度（microvessel density,MVD）。 结果： 与0 ng/ml组相比,PANC-1细胞经20、40和80 ng/ml的TPL处理24 h后,细胞凋亡率均显著升高\[（4.7±1.0）%、（10.5±2.0）%、（21.1±4.2）% vs （2.6±05）%,P<0.05或P<0.01\];48 h后,细胞增殖率均显著下降\[（68.0±5.3）%、（59.6±5.0）%、（51.6±4.2）% vs （99.6±5.2）%,均P<0.01\],并较相同浓度TPL处理24 h时显著降低（P<0.05或P<0.01）。80 ng/ml TPL组处理后PANC-1细胞中TLR4蛋白\[(20.2±4.7)% vs (57.5±63)%,P<0.01\]和VEGF蛋白\[ (35.8±4.0)% vs (92.1±8.3)%,P<0.01\]的表达量显著低于未处理组。TPL治疗组第34天的裸鼠移植瘤体积显著小于PBS对照组\[（510.9±79.8）vs（1 220.6±127.2）mm3,P<0.01\];TPL治疗组移植瘤组织内的TLR4、VEGF表达均显著低于PBS组\[（3.2±0.6) vs (6.7±1.1),(3.7±0.7) vs (7.1±1.2);均P<0.01）,其MVD也显著低于PBS组\[(12.2±4.0) vs (22.7±5.6),P<0.01\]。 结论： TPL能够抑制人胰腺癌PANC-1细胞及其裸鼠移植瘤的生长,并促进PANC-1细胞凋亡,其机制可能与TPL抑制TLR4、VEGF表达及肿瘤血管生成有关。     

siRNA 抑制胃腺癌VEGF2C 表达和淋巴管生成

 目的　研究瘤内注射VEGF2C siRNA 抑制胃癌移植瘤VEGF2C 表达和肿瘤淋巴管生成的有效 性。方法　建立裸鼠胃癌皮下移植瘤模型随机分为4 组:VEGF2C siRNA 脂质体混合液组、单脂质体 组、单siRNA 组和PBS 组,对肿瘤进行原位注射干预,记录各实验组肿瘤体积变化,免疫组织化学法检 测各实验组肿瘤组织VEGF2C 的表达,并通过抗人CD31 和抗人L YVE21 单克隆抗体检测瘤体内血管 和淋巴管生成情况。结果　免疫组化显示干扰组肿瘤细胞VEGF2C 染色减弱,和对照组相比VEGF2C 表达下调68. 3 %( P < 0. 01) ,而胃癌组织中淋巴管密度(LVD) 值干预组和对照组分别为3. 2 ±1. 3 、9. 8 ± 2. 7 ,VEGF2C siRNA 干预组LVD 值下降至对照组的32. 7 %( P < 0. 01) ,而MVD 值无明显差异( P > 0. 05) 。结论　瘤内注射VEGF2C siRNA 能显著下调肿瘤组织内VEGF2C 的表达,有效抑制肿瘤生长 和瘤内淋巴管生成,而对肿瘤血管生成无影响。     

Canstatin基因导入抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长及血管生成

目的:探讨Canstatin基因导入对裸鼠人肝癌皮下移植瘤的生长及肿瘤血管形成的作用。方法:建立肝癌HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤模型并鉴定,运用Ad-Canstatin/GFP基因治疗,Western blot法检测转染后瘤组织内Canstatin蛋白的表达。治疗期间观察Canstatin对裸鼠及移植瘤生长的影响,用药后HE染色观察肝肾损害,计数外周血白细胞数目;免疫组织化学法检测瘤内微血管密度(microvascular density,MVD)及血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)的数目。结果:成瘤率100%。Ad-Canstatin转染组Canstatin蛋白表达增多;Ad-Canstatin组裸鼠食量大于两对照组(P<0.05)。同时排泄量、饮水量均少于两对照组(P<0.05)。体重生长曲线显示Ad-Canstatin组体重持续增加,两对照组体重后期出现不增或下降趋势。Ad-Canstatin组移植瘤瘤体积增长缓慢,治疗第10天,瘤体积小于两对照组(P<0.05);Ad-Canstatin组瘤重小于两对照组(P<0.05),抑瘤率:37.50%。Ad-Canstatin组肝、肾、造血系统未见异常。Ad-Canstatin组MVD、VM数目均少于两对照组(P<0.05)。结论:腺病毒介导Canstatin基因可通过抑制瘤内血管生成,从而抑制HepG2肝癌移植瘤的生长,实验期内未见明显不良反应。     

血管内皮生长因子-C干扰对人类结肠癌裸鼠移植瘤模型淋巴管生成的影响

 目的　构建携带有RNA干扰片段的腺病毒载体Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP,探讨人类结肠癌BALB／c裸鼠皮下移植瘤模型瘤内注射腺病毒载体Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP抑制血管内皮生长因子-C（VEGF-C）表达、结肠癌生长以及结肠癌淋巴管生成的效果。方法　选择针对人类VEGF-C mRNA的特异性siRNA靶序列,设计合成其相应的双链DNA,利用 BamHI、HindⅢ双酶切插入pDC316-EGFP-U6载体后构建穿梭质粒pDC316-VEGF-C siRNA-EGFP-U6,再与骨架质粒pBHGF35共转染293细胞,同源重组,酶切鉴定,包装扩增后得到重组腺病毒Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP-U6。裸鼠皮下注射LoVo细胞构建人类结肠癌皮下移植瘤模型24只,随机分为4组（每组6只）：以腺病毒、空病毒、裸siRNA以及PBS分别进行瘤内原位注射干预,计算肿瘤体积变化并绘制生长曲线,使用抗LYVE-1单抗和抗CD34单抗分别染色瘤内的血管和淋巴管,检测瘤内淋巴管和血管生成情况,计算微血管密度（MVD）,微淋巴管密度（LVD）。结果　腺病毒组肿瘤体积明显小于其他各组,腺病毒组与PBS对照组LVD 分别为8.47±2.1,17.35±4.7（P＜0.05）,腺病毒组与PBS对照组MVD分别为22.65±6.04,23.19±7.63（P＞0.05）。结论　实验设计并合成的腺病毒载体介导的VEGF-C siRNA,在人类结肠癌裸鼠移植瘤模型中,瘤内注射腺病毒载体能显著抑制移植瘤的生长和肿瘤淋巴管生成,而对肿瘤血管生长无显著影响。     

干扰素α-2b抑制肝癌裸鼠移植瘤的生长作用

目的:探讨干扰素α-2b对人肝细胞癌裸鼠皮下移植瘤模型中肿瘤组织环氧合酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)表达及肿瘤血管生成的抑制作用.方法:将32只人肝癌皮下移植瘤裸鼠随机分为4组,每组8只.实验按IFN-α-2b不同用量分为治疗A组(10 000IU/d),治疗B组(20 000IU/d),治疗C组(40 000IU/d),对照组注射生理盐水,连续用药35d,观察4组裸鼠肿瘤组织生长增殖状况.应用免疫组化方法检测肿瘤组织COX-2和VEGF的蛋白表达;CD34标记血管内皮细胞测定肿瘤微血管密度(MVD);应用TUNEL方法检测肿瘤细胞凋亡的变化.结果:干扰素-α-2b治疗组肿瘤重量和体积均显著低于对照组(P＜0.01),抑瘤率分别为27.78%,65.22%和49.64%;治疗组肿瘤组织COX-2和VEGF表达水平及MVD显著低于对照组(P＜0.01);治疗组肿瘤组织中凋亡细胞的比例明显增加,与对照组比较有显著性差异(P＜0.01).治疗B组肿瘤重量和体积、COX-2和VEGF表达水平及MVD、凋亡指数与A组和C组比较有显著性差异(P＜0.05),抑瘤效果显著;A组和C组比较,差异无显著性(P＞0.05).结论:干扰素-α-2b抑制荷瘤裸鼠肝癌细胞的生长,诱导肿瘤细胞凋亡,可能与其下调C0X-2和VEGF表达有关;干扰素-α-2b治疗肝癌呈一定的量效关系,中等剂量(20 000IU/d)抑瘤作用最明显.     

人内皮抑素转基因治疗B16黑色素瘤的实验研究

目的　研究瘤内直接注射携带人内皮抑素 (hEN)基因逆转录病毒包装的细胞株对体内B16黑色素瘤细胞生长的抑制作用。方法　修饰、鉴定hEN基因。构建含hEN基因的逆转录病毒载体pLNC hEN ,转染包装细胞株 ,筛选稳定转染该基因之PA317 pLNChEN细胞。建立小鼠B16黑色素瘤动物模型。瘤内直接注射PA317 pLNChEN细胞 ,分时间测量肿瘤体积 ,切取肿瘤 ,免疫组化检测肿瘤组织微血管密度 (MVD) ,TUNEL染色检测肿瘤组织中的凋亡细胞。结果　细胞接种后第 7～ 9天 ,全部小鼠均长出 2～ 3mm直径肿瘤。hEN基因转染后第 3,5 ,7,9天 ,转基因组肿瘤的平均体积 (mm3 )分别为 4 .6 7± 1.10、2 2 .2 5± 13.0 6、84 .17± 4 3.5和 15 5 .0 8± 81.1;空载体对照组分别为 136 .17± 30 .6 1、390 .17± 2 2 0 .4 7、10 2 1.6 7± 5 37.4 0和 2 92 0 .2 0± 2 2 0 .0 1,两组差异有显著性。转基因组和对照组的平均MVD分别为 8.0 0± 2 .2 8和 2 8.17± 5 .31,平均凋亡细胞数分别为 2 3.33± 3.83和 2 .33± 1.2 1,差异均有显著性。结论　瘤内注射携带hEN基因逆转录病毒包装的细胞 ,可抑制小鼠种植性B16黑色素瘤的微血管数目 ,促进肿瘤细胞凋亡 ,抑制肿瘤生长     

Survivin基因RNAi对子宫颈癌裸鼠移植瘤生长与凋亡的影响

目的：观察survivin基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长与凋亡的影响。方法：随机将BALB/c裸鼠分4组,分别注射转染携survivin RNAi重组质粒的HeLas2细胞、转染阴性对照质粒细胞HeLaNC、转染空质粒细胞HeLaU6 neo及宫颈癌HeLa细胞,建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型。观察survivin RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响;免疫组化法检测移植瘤组织中survivin蛋白的表达和微血管密度（MVD）,HE染色及TUNEL染色观察survivin RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤凋亡的影响。结果：成功建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型, HeLas2组裸鼠瘤重明显小于其他3组（P<0.05）;肿瘤生长抑制率为67.9%。免疫组化结果显示,HeLas2组裸鼠移植瘤组织中survivin蛋白表达显著下降; MVD值也显著降低（P<0.05）;HE染色、TUNEL染色结果显示,HeLas2组裸鼠移植瘤组织细胞凋亡明显增多（P<0.05）,AI值达(22.73±137)%。结论：Survivin基因RNAi可通过下调移植瘤组织survivin蛋白表达和降低其MVD抑制移植瘤生长并促进其凋亡。     

NRP-1单抗联合节律化疗对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制

目的：探讨NRP-1 单抗联合多西他赛节律化疗对胃癌裸鼠移植瘤的抗肿瘤疗效。方法：BALB/c裸鼠皮下接种胃癌BGC-823 细胞制备移植瘤模型,将荷瘤裸鼠以数字随机表法随机分为对照组、NRP-1 单抗组、节律化疗组(MCT)、联合组(NRP-1mAb+MCT),每组6 只。除对照组,其余各组于造模第8 天开始分别给予相应治疗,给药2 周,观察裸鼠一般状况,隔天测量裸鼠体重及肿瘤体积。裸鼠处死后称瘤质量,H-E 染色观察瘤组织形态,免疫组化检测裸鼠瘤组织中NRP-1 蛋白、VEGF、MVD表达。结果：联合组移植瘤的体积和质量显著低于其他各组[ （0.394±0.128）vs（0.748±0.152）、0.867±0.361）、（1.247±0.494）g;（0.613±0.223) vs (0.866±0.115)、(1.098±0.343)、(1.474±0.644) cm3。均P<0.05],抑瘤率较其他治疗组差异有统计学意义(P<0.05)。对照组癌组织细胞生长良好,血管丰富,给药组癌组织出现不同程度的片状坏死,血管成分减少。免疫组化染色显示,对照组NRP-1 表达明显高于治疗各组(P<0.05),联合组的NRP-1、VEGF、MVD表达均显著低于其余各组(P<0.05)。结论：NRP-1单抗联合多西他赛节律化疗可能通过下调NRP-1 表达而显著抑制BGC-823 胃癌移植瘤的生长及血管生成。     

反义肝素酶cDNA对裸鼠人胰腺癌移植瘤生长和血管生成的抑制作用

目的研究反义肝素酶cDNA对裸鼠人胰腺癌SW1990细胞移植瘤生长和血管生成的抑制作用。方法将反义肝素酶cDNA转染成功的人胰腺癌SW1990细胞注射于裸鼠皮下建立移植瘤模型。观察移植瘤生长曲线、抑瘤率,以免疫组化方法检测移植瘤肝素酶表达和肿瘤微血管密度,比较反义组、空载体组和空白对照组的差异。结果反义组成瘤时间晚,瘤体大小较对照组小,t=4.11,P=0.00,抑瘤率在第6周时达64.2%。反义组、空载组和空白组移植瘤的免疫组化染色评分(IHS)分别为3.8±1.2、9.5±2.3和10.2±2.0,反义组与对照组比较,IHS明显降低,t=6.72,P=0.00。MVD计数分别为18.6±2.2,33.3±5.3和34.9±3.2条,与对照组比较,MVD明显降低t=10.28,P=0.00。结论反义肝素酶cDNA抑制裸鼠人胰腺癌移植瘤生长和血管生成,有希望成为一种有效的胰腺癌基因治疗方法。     

榄香烯对裸鼠胃癌原位移植瘤血管生成的抑制作用

 目的 观察榄香烯对裸鼠胃癌原位移植瘤生长和血管生成的抑制作用。 方法 采用裸小鼠胃癌原位移植模型,随机分为0.9%氯化钠溶液(NS)组、5-Fu组、榄香烯组和联合组 ,腹腔注射给药。比较各组移植瘤瘤重的差异;免疫组织化学法检测肿瘤微血管密度 (Microvessel Density,MVD) 和VEGF、p53蛋白表达,RT-PCR法检测VEGF mRNA表达。 结果 联合组裸鼠胃癌移植瘤的瘤重显著低于NS组(P＜0.05);榄香烯组、联合组瘤组织MVD、VEGF蛋 白、p53蛋白及VEGF mRNA表达亦明显低于NS组(P＜0.05);各组移植瘤的瘤重与瘤组织MVD呈正 相关(r=0.669,P＜0.01)。 结论 榄香烯能抑制裸鼠胃癌原位移植瘤生长和血管生成,其机制可能与抑制裸鼠胃癌组织VEGF和突 变型p53的表达有关。     

坎地沙坦对小鼠肝癌移植瘤及新生血管生成的抑制作用

目的 探讨血管紧张素Ⅱ 1型受体拮抗剂坎地沙坦对小鼠肝癌移植瘤生长及血管生成的影响。方法 建立肝癌H22细胞小鼠移植瘤模型。将48只小鼠随机分为生理盐水组（0.2ml d1～d8）、低剂量坎地沙坦组（2mg／kg,0.2ml d1～d8）、高剂量坎地沙坦组（20mg／kg,0.2ml d1～d8）和氟尿嘧啶组（25mg／kg,0.2ml d1～d6）,每组12只。第9天处死小鼠取瘤组织,测瘤重,计算抑瘤率;免疫组化法检测移植瘤组织内血管内皮生长因子（VEGF）和CD34表达,测定微血管密度（MVD）。另取40只小鼠以相同条件进行平行实验,每组10只,观察小鼠的生存时间。结果 高剂量坎地沙坦组及氟尿嘧啶组的抑瘤率分别为35.3％和50.6％,均高于低剂量坎地沙坦组的20.7％,差异有统计学意义（P＜0.05）;与生理盐水组相比,低剂量（5.083±1.240）与高剂量坎地沙坦组（4.083±1.165）VEGF分值均显著降低（P＜0.05）,且高剂量组降低更明显（P＜0.05）;与生理盐水组相比,低剂量（20.633±2.171）与高剂量（17.150±2.713）坎地沙坦组MVD均显著降低（P＜0.01）,且高剂量组降低更明显（P＜0.05）;高剂量坎地沙坦组及氟尿嘧啶组小鼠的生命延长率分别为39.5％和30.6％,均高于低剂量坎地沙坦组的20.4％（P＜0.05）。结论 坎地沙坦可抑制小鼠肝癌移植瘤的生长,其机制可能与抑制肿瘤新生血管生成有关。     

Manumycin抗人肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤的作用及其对肿瘤血管生成的影响

背景与目的:法尼基转移酶抑制剂manumycin体内外抗胰腺癌、结肠癌和退行性甲状腺癌的研究已见报道。我们先前的体外研究发现,manumycin能抑制人肝癌HepG2细胞的增殖通路和生存通路。本研究拟探讨manumycin在裸小鼠体内的抗肝癌作用及其对肿瘤的血管生成的影响。方法:建立人肝癌HepG2细胞裸鼠移植瘤模型,接种后第8天按肿瘤大小随机分为5组:生理盐水对照组(20ml/kg)、阳性药对照组(CTX,25mg/kg)、0.1%Me2SO阴性对照组(20ml/kg)、manumycin低剂量组(2.5mg/kg)和高剂量组(5mg/kg)。测量各组肿瘤体积观察manumycin的体内抗瘤作用。采用免疫组化方法观察移植瘤的微血管密度(MVD),应用Westernblot法检测VEGF和b鄄FGF的蛋白水平变化,RT鄄PCR法检测VEGFmRNA的水平。结果:manumycin低剂量组和高剂量组的平均肿瘤体积比(V/V0)分别为0.68±0.09和0.59±0.04(n=5),与0.1%Me2SO阴性对照组(V/V0为1.38±0.21)相比,manumycin处理组肿瘤体积明显缩小(P<0.01)。与对照组相比较,manumycin处理组肿瘤组织MVD明显降低(P<0.01)。manumycin能明显抑制HepG2细胞及HepG2细胞裸鼠移植瘤VEGF蛋白的表达,而对b鄄FGF蛋白的表达影响不大。manumycin也明显抑制了HepG2细胞裸小鼠移植瘤VEGFmRNA的表达。结论:manumycin能明显抑制人肝癌HepG2细胞裸小鼠移植瘤的生长。下调VEGF表达,抑制肿瘤的血管生成可能是manumycin抗肿瘤作用的重要机理之一。     

人canstatin基因治疗人食管癌裸鼠移植瘤的实验研究

背景与目的：Canstatin是一种新内源性血管生成抑制剂,以往的研究显示canstatin能有效的抑制肿瘤的生长,作用甚至强于endostatin。本研究将探讨人canstatin基因对人食管鳞状细胞癌移植瘤模型的抑制作用。方法：应用人食管癌细胞株KYSE150建立移植瘤模型。将裸鼠随机分成3组：腺病毒携带的canstatin基因组（Ad—GFP—canstatin）、腺病毒携带的绿色荧光蛋白组（Ad—GFP）和磷酸盐缓冲液组（PBS）。治疗期间测量皮下移植瘤的长径和短径;30d后处死裸鼠,取下肿瘤行常规病理切片,观察药物的毒性反应;检测肿瘤组织中caspase-3、内皮细胞生长因子受体1（fetal liver kinase-1,Flk-1）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达和微血管密度（microvessel density,MVD）。结果：第二次注射病毒后3d,canstatin基因治疗组肿瘤体积显著小于其余两组（P〈0．05）,治疗第6天抑瘤率达到61％;HE染色显示：各组肿瘤组织中都有坏死．尤其在canstatin基因治疗组坏死更加明显;canstatin基因治疗组caspase-3表达高于空载体组和对照组（P〈0．05）;Flk-1的表达低于空载体组和对照组（P〈0．05）：VEGF的表达3组相比差异无统计学意义（P〉0．05）：canstatin基因治疗组MVD低于空载体组和对照组（P〈0．05）。结论：人canstatin基因对人食管癌移植瘤的生长具有抑制作用,作用机制可能是降低Flk-1的表达进而抑制肿瘤的血管生成,抑制肿瘤的生长。     

血管内皮生长因子及其受体双靶向阻断对膀胱癌细胞生长及血管生成的抑制作用

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(KDR)双靶向阻断对人膀胱癌T24细胞和裸鼠膀胱癌移植瘤生长的抑制作用.方法 构建VEGF siRNA和可溶性KDR(sKDR)表达质粒的共转染细胞系,采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法和流式细胞仪测定T24细胞的增殖和凋亡,采用免疫组化法检测裸鼠移植瘤组织中VEGF的表达、瘤间质微血管密度(MVD)和细胞DNA拓扑异构酶(Topo)Ⅱα的表达,采用原位末端标记(TUNEL)法检测裸鼠移植瘤中肿瘤细胞的凋亡.结果 MTT法检测结果显示,VEGF siRNA、sKDR和联合应用组细胞的生存率分别为56.3%±8.3%、42.6%±13.8%和32.5%±4.3%,均明显低于阴性对照组(97.3%±11.6%,P＜0.0001).流式细胞仪分析显示,VEGF siRNA、sKDR和联合应用组在G.期前均出现亚二倍体凋亡峰,凋亡率分别为5.1%±0.9%、4.2%±0.5%和8.8%±0.7%,均高于阴性对照组(0.9%±0.4%,P＜0.05),而且联合应用组的凋亡率还明显高于VEGF siRNA和sKDR组(P＜0.01).体内实验结果显示,VEGF siRNA、sKDR和联合应用组的肿瘤生长均受到不同程度的抑制,联合应用组从16 d开始肿瘤体积即明显小于阴性对照组(P＜0.05),28 d起肿瘤生长几乎处于停滞状态.免疫组化分析显示,联合应用组肿瘤组织中VEGF的表达水平为54.37±5.28,显著低于阴性对照组(141.66±8.59,P＜0.0001);瘤间质MVD仅为8.22±3.79,明显低于阴性对照组(61.76±5.28,P＜0.0001)和sKDR组(19.46±4.16,P=0.0089);瘤细胞增殖指数为1.5%±0.7%,显著低于阴性对照组(11.8%±5.2%,P＜0.0001);而凋亡率达到67.2%±8.5%,明显高于阴性对照组(8.7%±2.7%,P＜0.0001)、VEGF siRNA组(54.3%±4.8%,P=0.0492)和sKDR组(52.3%±6.4%,P=0.0293).结论 VEGF siRNA与sKDR单独应用均可不同程度地抑制肿瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡,但二者联合应用时靶向双位点的治疗效果更为显著.     

Experimental Study on Residual Tumor Angiogenesis after Cryoablation

Objective: To explore the mechanism and significance of tumor angiogenesis by observing changes of microvesseldensity (MVD) and expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in residual tumor tissuesafter cryoablation. Materials and Methods: A total of 18 nude mice xenograft models with transplanted lungadenocarcinoma cell line A549 were established and randomly divided into 3 groups when the maximum diameterof tumor reached 1 cm: control, cisplatin (DDP) and cryoablation. The nude mice were sacrificed after 21-dcryoablation to obtain the tumor tissues. Then immunohistochemistry was applied to determine MVD and theexpression of VEGF in tumor tissues. Results: The tumor volumes of control group, DDP group and cryoablationgroup were 1.48±0.14 cm3, 1.03±0.12 cm3 and 0.99±0.06 cm3 respectively and the differences were significant(P<0.01), whereas MVD values were 21.1±0.86, 24.7±0.72 and 29.2±0.96 (P<0.01) and the positive expressionrates of VEGF were 36.2±1.72%, 39.0±1.79% and 50.8±2.14% (P<0.01), respectively, showing that MVD wasproportional to the positive expression of VEGF (r=0.928, P<0.01). Conclusions: Cryoablation can effectivelyinhibit tumor growth, but tumor angiogenesis significantly increases in residual tumors, with high expressionof VEGF playing an important role in the residual tumor angiogenesis.     

沉默乙酰肝素酶基因对胃癌生物学行为的影响

目的 探讨乙酰肝素酶(HPA)沉默对人胃癌裸鼠移植瘤生长、转移和血管形成的影响.方法 利用人胃癌SGC-7901细胞和HPA被沉默的SGC-7901-HPA-细胞,分别建立6只裸鼠皮下移植瘤模型,观察成瘤的时间、肿瘤生长速度和体积.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分别检测皮下移植瘤组织中HPA mRNA和蛋白的表达,应用免疫组织化学SP法检测皮下移植瘤组织的微血管密度(MVD).将皮下移植瘤细胞分别注射入6只裸鼠腹腔,建立腹腔转移瘤,并观察成瘤情况.结果 SGC-7901细胞和SGC-7901-HPA-细胞在裸鼠皮下均能生长出移植瘤,分别在接种后第4天后和第7天后出现肉眼可见的肿瘤,接种SGC-7901-HPA-细胞的裸鼠移植瘤生长较慢,MVD为(11.35±1.94)个/高倍视野,明显低于接种SGC-7901细胞组[(20.69±1.20)个/高倍视野,P＜0.05].接种SGC-7901-HPA-细胞与接种SGC-7901细胞的裸鼠皮下移植瘤组织相比,HPA mRNA和蛋白的表达均降低.由SGC-7901细胞皮下移植瘤组织建立腹腔转移瘤的裸鼠,有3只成瘤,在肝脏、大网膜、肠系膜、右肾形成了4处转移灶,且体积较大.而接种SGC-7901-HPA-细胞皮下移植瘤组织的裸鼠,仅有1只在肝脏和右肾形成了转移灶,而且瘤体较小.结论 HPA沉默后抑制了人胃癌在裸鼠体内的生长、转移和血管形成,HPA有可能成为预防和治疗胃癌的一个新靶H点.     

人参皂苷Rg3、索拉非尼和奥沙利铂不同联合方式抗裸鼠肝癌移植瘤血管生成的作用研究

目的 观察人参皂苷Rg3、索拉非尼、奥沙利铂单药及联合对裸鼠人肝癌细胞移植瘤血管生成的作用并探讨其可能机制。 方法 以裸鼠人肝癌转移模型LCI-D20为观察对象,将60只荷瘤裸鼠随机分成8组,分别为人参皂苷Rg3组（A组）、奥沙利铂组（B组）、索拉非尼组（C组）、人参皂苷Rg3+索拉非尼组（D组）、人参皂苷Rg3+奥沙利铂组（E组）、奥沙利铂+索拉非尼组（F组）、人参皂苷Rg3+奥沙利铂+索拉非尼组（G组）和生理盐水对照组（H组）。肿瘤接种第11 d后开始给药,人参皂苷Rg3 5 mg／kg（1天1次）、奥沙利铂5 mg／kg（2天1次）,均用腹腔注射,索拉非尼30 mg／kg（1天1次）灌胃。给药14 d后处死裸鼠,剥离瘤体,检测各组瘤组织中微血管密度（MVD）,免疫组化染色和Western blotting检测各组瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）、缺氧诱导因子（HIF）-1α和VEGF受体（VEGFR）-2的表达。 结果 与H组比较,其余各组MVD均较低（P＜0.01）,VEGF蛋白阳性表达率均较低（P＜0.05）,HIF-1α蛋白阳性表达率均下降,但差异无统计学意义（P＞0.05）;A组、D组、E组的VEGFR-2蛋白阳性表达率显著低于H组（P＜0.05）。与H组比较,仅A组、B组、C组、D组、E组能显著下调瘤组织中VEGF、HIF-1α和VEGFR-2蛋白的表达（P＜0.05）。 结论 人参皂苷Rg3具有一定的抗血管生成作用,其机制可能与下调VEGF、HIF-1α、VEGFR-2及MVD的表达有关。人参皂苷Rg3分别与索拉非尼、奥沙利铂联合可以增强抗血管生成作用,但三药联合时抗血管生成作用反而减弱,提示可能存在其他抗肿瘤机制,值得进一步研究。     

膜型基质金属蛋白酶-1上调人乳腺癌细胞血管内皮生长因子的表达并诱导肿瘤血管新生

目的 研究膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)在肿瘤血管新生过程中的作用,探讨其诱导肿瘤血管新生的作用途径.方法 应用基因转染方法 ,将MT1-MMP导入人乳腺癌细胞系MCF-7细胞;应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光染色,比较转染前后肿瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化;通过裸鼠异种移植瘤模型,检测MT1-MMP对肿瘤生长速度、肿瘤组织微血管密度(MVD)和VEGF表达的影响.结果 在MT1-MMP稳定转染后的MCF-7细胞中,VEGF189、VEGF165和VEGF121 mRNA表达水平显著上调(P＜0.001).免疫荧光检测结果 显示,MT1-MMP组的VEGF蛋白免疫荧光强度为93.8±10.3,明显强于MCF-7组(42.9±5.3)和pcDNA3.1组(41.0±5.4,P＜0.001).裸鼠异种移植瘤模型结果 显示,MTI-MMP能够加快肿瘤生长速度.肿瘤组织MVD检测结果 显示,MT1-MMP能够显著提高肿瘤组织的MVD(P＜0.05).免疫组织化学染色结果 显示,VEGF在MT1-MMP组呈强阳性表达.结论 MT1-MMP能够通过上调肿瘤细胞VEGF表达水平而有效诱导肿瘤血管新生.MT1-MMP的这一作用途径可能为临床抗肿瘤研究及抗肿瘤药物开发提供新思路.     

表达抗-VEGF发夹状核酶腺病毒载体的构建及其对结肠癌生长的抑制作用

背景与目的：VEGF过表达提示结肠癌预后不良。本实验构建带有抗-VEGF发夹状核酶的复制缺陷型腺病毒，观察其对结肠癌VEGF表达及肿瘤生长的抑制作用。方法：将人工合成的抗-VEGF发夹状核酶DNA定向克隆至转移质粒pAdTrack—CMV多克隆位点，然后与病毒骨架质粒pAdEasy-1在细菌BJ5183中重组，在293a细胞中包装成完整病毒（命名为Ad-Rz）并复制扩增、纯化。RT-PCR检测病毒感染后抗-VEGF发夹状核酶在HT-29细胞中的表达、real-time PCR及ELISA检测其对VEGF mRNA及蛋白表达的抑制作用。观察Ad-Rz对HT-29细胞和裸鼠移植瘤生长的抑制作用，CD34标记检测肿瘤组织微血管密度（MVD）。结果：抗-VEGF发夹状核酶成功克隆至复制缺陷型腺病毒载体上。抗-VEGF发夹状核酶可在HT-29细胞中表达．Ad—Rz感染的HT-29细胞中VEGFmRNA的相对表达量大约为PBS组的45％（e〈0．05）。ELISA结果显示Ad—Rz感染后的细胞上清液中蛋白含量（A值）为0．455±0．35／百万细胞，低于PBS组（P〈0．05）。Ad—Rz对HT-29细胞的生长抑制无统计学意义（P〉0．05），但可显著抑制肿瘤组织内血管的形成（P〈0．05），Ad—Rz治疗的移植瘤增殖率低于PBS组，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：腺病毒载体介导的抗-VEGF发夹状核酶可有效抑制HT-29细胞VEGF的表达及移植瘤组织内血管的生成。     

SKI-Ⅱ联合顺铂对人胃癌裸鼠移植瘤抑制作用及其机制探讨

目的：研究鞘氨醇激酶-1（sphingosine kinase-1,SphKl）在胃癌裸鼠移植瘤血管生成中的作用及其作用机制。方法：建立人胃癌SGC7901裸鼠移植瘤模型后,将荷瘤小鼠随机分为4组,分别予以腹腔注射生理盐水、SKI-Ⅱ、顺铂和SKI-Ⅱ联合顺铂干预治疗,1次／周,共3周。每隔3d测1次肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率;蛋白质印迹法法检测瘤体中SphKl和VEGF的表达;免疫组化方法检测瘤体SphKl、VEGF和CD34的表达情况及计算瘤体内瘤体微血管密度（mierovessel densitv,MVD）。结果：与生理盐水组相比,3组治疗组均有抑制肿瘤生长作用,SKI-Ⅱ组和顺铂组抑瘤率分别为（48．694-1．39）％和（75．24±1．19）％;其中以SKI-1I联合顺铂组抑瘤作用最为明显,抑瘤率达（90．25±1．53）％,各组抑瘤率之间差异有统计学意义,F=1865,P〈0．001。免疫组化结果示,SKI- Ⅱ和SKI—Ⅱ联合顺铂组SphKl蛋白表达分别为（45．62±7．54）％和（20．50±5．96）％,VEGF蛋白表达分别为（45．38±7．82）％和（22．25±4．74）％,瘤体内的MVD为15．12±1．55和9．384-1．92,与对照组差异有统计学意义,P〈0．001。单用顺铂对SphKl表达（82．50±5．95）％）、VEGF的表达（83．25±4．40）％及瘤体内MVD（24．50±5．42）的影响差异无统计学意义,P〉0．05。Pearson相关分析显示,瘤体组织SphKl与VEGF的表达呈正相关,r=0．968,P〈0．001;瘤体组织MVD计数与VEGF表达呈正相关,r=0．862,P〈O．001。蛋白质印迹法检测结果示,SKI-Ⅱ及SKl-Ⅱ联合顺铂组可显著下调SphKl和VEGF的表达,P〈0．001,单用顺铂对SphKl和VEGF的表达差异无统计学意义,P值分别为0．083和0．165。结论：下调SphKl的表达后,可减少VEGF合成与分泌,并抑制肿瘤血管生成,可能是抑制裸鼠胃癌移植瘤生长的途径之一。