复方黄黛片含药兔血清对NB4细胞株作用的实验研究

目的观察复方黄黛片含药免血清对NB4细胞株的影响。方法以兔为实验血清的供体，以给药与否为分组依据，采用双道原子荧光法检测血清中砷剂的浓度，以细胞抑制率及调亡率为观察指标，对实验结果进行分析。结果（1）给药前、后兔血清中砷剂差异显著；（2）两组兔血清对NB4细胞株生长均有抑制作用，且对NB4细胞株生长的抑制作用具有一定的浓度及时间依赖性；（3）两组免血清均可诱导NB4细胞株发生凋亡，且该作用具有一定的浓度及时间依赖性。结论（1）复方黄黛片含药免血清可明显抑制人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株的生长，抑制作用呈一定的浓度、时间依赖性；（2）复方黄黛片含药兔血清可诱导人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株发生凋亡，该作用呈一定的浓度、时间依赖性；（3）中药血清药理学方法可用于深入研究复方黄黛片抗白血病的作用机理。     

复方黄黛片含药兔血清对NB4细胞株作用的研究

目的 研究复方黄黛片含药兔血清对NB4细胞株的作用.方法 以免为实验血清的供体,以给药与否及血清灭活与否为分组依据,采用双道原子荧光法检测血清中砷的浓度,以细胞抑制率及凋亡率为观察指标,对实验结果进行分析.结果 (1)给药前、后兔血清中砷剂浓度分别为(0.01±0.001)mg/L和(0.11±0.006)mg/L,差异显著;(2)四组兔血清对NB4细胞株生长均有抑制作用,且对NB4细胞株生长的抑制作用具有一定的浓度及时间依赖性;(3)四组兔血清均可诱导NB4细胞株发生凋亡,且该作用具有一定的浓度及时间依赖性.结论 (1)复方黄黛片含药兔血清可明显抑制人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株的生长、抑制作用呈一定的浓度、时间依赖性;(2)复方黄黛片含药兔血清可诱导人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株发生凋亡,该作用呈一定的浓度、时间依赖性;(3)中药血清药理学方法用于深入研究复方黄黛片抗白血病作用机理,能够较真实反映机体血药浓度下的作用及变化规律,能够全面展示复方黄黛片各组分的共同作用,具有可行性和科学性.     

莪芪抗瘤方剂（含药血清）诱导白血病HL-60细胞凋亡的实验研究

目的探讨中药复方莪芪抗瘤方剂（舍药血清）在体外对白血病HL-60细胞凋亡影响。方法运用中药血清药理学方法制备莪芪抗瘤方剂血清，四氮唑蓝比色法（MTT法）观察对莪芪抗瘤方剂（含药血清）对HL-60细胞的抑制率；应用形态学，流式细胞术，DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡的发生。 结果莪芪抗瘤方荆（含药血清）对HL-60细胞生长有抑制作用，这种作用呈时间依赖性，诱导人类早幼粒白血病细胞株HL-60凋亡。结论中药复方莪芪抗瘤方剂可诱导白血病HL-60细胞发生凋亡。     

莪芪抗瘤方剂诱导白血病HL-60细胞凋亡的血清药理学研究

目的研究中药复方莪芪抗瘤方剂在体外对白血病HL-60细胞凋亡的作用,并探讨凋亡发生与细胞内Ca2 、Caspase-3、Bcl-2的关系。方法通过血清药理学方法,选择10%浓度的含药血清与白血病HL-60细胞共同培育24、48、72、96h后,应用荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测凋亡峰(亚二倍体峰),用Fura-2荧光负载方法测定细胞内Ca2 浓度的变化。比色法检测凋亡相关基因Caspase-3活性变化。亲和免疫组化LSAB法检测HL-60细胞Bcl-2基因表达。结果10%浓度的含药血清处理组细胞体积缩小,细胞核固缩,膜起泡,核断裂及形成凋亡小体等,以72h最为明显;可见DNA含量低于G1期的凋亡细胞群,这群细胞的凋亡百分率随时间的递增而增加。10%浓度的含药血清处理组的细胞内Ca2 浓度也明显高于对照组(P<0.01),Caspase-3浓度明显高于对照组(P<0.01),Bcl-2基因表达明显低于对照组(P<0.05)。结论莪芪抗瘤方剂含药血清诱导白血病HL-60细胞发生凋亡,这种变化可能与细胞内Ca2 、Caspase-3水平上调及Bcl-2表达下调有关。     

含益髓灵兔血清诱导HL-60细胞凋亡与对Bcl-2抑制研究

目的：探讨中药复方益髓灵治疗白血病作用机理：方法：在已知益髓灵具有诱导HL-60细胞凋亡的基础上,通过血清药理学方法,选择含不同浓度益髓灵初提物的兔药血清,与人急性早幼粒白血病HL-60细胞共同孵育不同时间后,观察兔药血清对HL-60细胞凋亡的影响,并对其发生凋亡机制进行初步探讨。结果：益髓灵兔药血清有较强的诱导HL-60细胞凋亡作用,以10％兔药血清作用48h效果最好,并发现其诱导凋亡机制与抑制Bcl-2基因表达相关。结论：益髓灵进入动物体内也有诱导白血病细胞凋亡作用,其诱导白血病细胞凋亡是治疗白血病的关键机制之一。     

莪芪抗瘤方剂(含药血清)对白血病细胞凋亡相关基因Caspase-3活性的影响

大量的研究表明,细胞内凋亡相关基因Caspase-3活性变化对凋亡的诱导起重要作用[1]。我们在以往的研究发现,中药复方莪芪抗瘤方剂(含药血清)有抑制白血病HL-60细胞增殖和诱导其凋亡的作用[2],这种作用机理何在?本实验在观察莪芪抗瘤方剂(含药血清)诱导白皿病HL-60细胞凋亡作用的     

莪芪抗瘤方剂对白血病HL-60细胞的凋亡作用及对细胞内Ca2+水平的影响

目的:研究中药复方莪芪抗瘤方剂在体外对白血病HL-60细胞凋亡作用,并探讨凋亡发生与细胞内Ca2 浓度变化的关系。方法:通过血清药理学方法,选择10%浓度的含药血清与白血病HL-60细胞共同培育24,48,72,96 h后,应用荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测凋亡峰(亚二倍体峰),用Fura-2/AM荧光负载方法测定细胞内Ca2 浓度的变化。结果:10%浓度的含药血清处理组,细胞体积缩小,细胞核固缩,膜起泡,核断裂及形成凋亡小体等,以72 h最为明显;可见DNA含量低于G1期的凋亡细胞群,其凋亡百分率随时间的递增而增加;10%浓度的含药血清处理组的细胞内Ca2 浓度也明显高于对照组(P<0.01)。结论:莪芪抗瘤方剂含药血清诱导白血病HL-60细胞发生凋亡的作用可能与细胞内Ca2 水平上调有关。     

六神丸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:从细胞凋亡角度探讨六神丸治疗白血病的机理,为临床应用提供依据。方法:分别制备六神丸乙醇提取剂和六神丸含药血清,用MTT法检测六神丸对HL-60细胞增殖的抑制作用,吉姆萨染色观察细胞凋亡的形态学变化,原位末端标记(POD)法检测细胞凋亡现象。结果:六神丸乙醇提取剂对HL-60细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈现浓度依赖关系;中剂量组所得六神丸含药血清对HL-60细胞增殖的抑制作用优于低剂量组和高剂量组。吉姆萨染色显示六神丸乙醇提取剂和六神丸含药血清处理过的HL-60细胞均出现典型的凋亡形态。原位末端标记表明,六神丸乙醇提取剂诱导HL-60细胞凋亡在一定范围内呈现时间-浓度依赖关系;六神丸含药血清诱导HL-60细胞凋亡作用优于As_2O_3血清组和空白血清组(P<0.01)。结论:六神丸体外诱导HL-60细胞凋亡可能是六神丸治疗白血病的作用机制之一。     

莪芪抗瘤方剂对白血病HL-60细胞凋亡的作用及机理研究

目的：研究中药复方莪芪抗瘤方剂在体外对白血病HL-60细胞凋亡影响，并探讨凋亡发生的可能机制。方法：通过血清药理学方法，选择10％浓度的含药血清与白血病HL-60细胞共同培育24、48、72、96h后，应用荧光显微镜观察细胞形态，流式细胞仪检测凋亡峰（亚二倍体峰），用Fura-2荧光负载方法测定细胞内Ca^2＋浓度的变化；比色法检测凋亡相关基因Caspase-3活性变化。结果：10％浓度的含药血清处理组细胞体积缩小，细胞核固缩，膜起泡，核断裂及形成凋亡小体等，以72h最为明显；可见DNA含量低于G1期的凋亡细胞群，这群细胞的凋亡百分率随时间的递增而增加。10％浓度的含药血清处理组的细胞内Ca^2＋浓度也明显高于对照组（P〈0．01），Caspase-3基因活性明显高于对照组相（P〈0．01．P〈0．05）。结论：莪芪抗瘤方剂含药血清诱导白血病HL-60细胞发生凋亡，这种变化可能与细胞内Ca^2＋水平上调，Caspase-3活性增强有关。     

六神丸含药血清诱导HL-60细胞凋亡实验研究

目的:观察六神丸含药血清诱导白血病细胞凋亡,探讨六神丸治疗急性白血病的部分机制。方法:制备含药血清,用MTT法、胎盘蓝染色法观察六神丸对HL-60细胞的增殖抑制作用。用吉姆萨染色法观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪、原位末端标记法(TUNEL)定量检测细胞凋亡程度。结果:六神丸含药血清对白血病细胞有明显的抑制,且随药物血清浓度和培养时间的延长而增加,吉姆萨染色、流式细胞仪检测、原位末端标记检测均证明六神丸含药血清能诱导HL-60白血病细胞凋亡。结论:六神丸含药血清能诱导细胞凋亡,这可能是六神丸治疗白血病的机制之一。     

解毒化瘀含药血清抗白血病细胞及白血病多药耐药细胞的体外实验研究

目的:以解毒化瘀法立意,选取解毒化瘀中药复方,拟通过体外细胞培养证实其是否存在抗白血病细胞及多药耐药白血病细胞的作用。方法:采用MTT比色法,选择白血病细胞K562、HL-60及阿霉素诱导的白血病多药耐药细胞株K562/A、HL-60/A为靶细胞,观察不同浓度解毒化瘀含药兔血清对其细胞毒作用。结果:解毒化瘀含药兔血清对K562、HL-60及K562/A、HL-60/A均有明显的抑制作用,且对其细胞毒作用呈剂量依赖性。结论:解毒化瘀中药在抑制白血病细胞生长及白血病多药耐药细胞生长方面具有深入研究的价值。     

茅莓总皂苷诱导HL-60白血病细胞凋亡机制研究

目的:明确茅莓总皂苷(TSRP)在体外对HL-60细胞抑制增殖和诱导凋亡作用。方法:MTT法检测不同浓度TSRP对HL-60细胞的增殖抑制;使用DAPI和Annexin V-FITC/PI法观察TSRP诱导凋亡作用;RT-PCR法检测TSRP对HL-60细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9和Fas mRNA表达的影响。结果:MTT显示TSRP在浓度200、400、800 mg/L对HL-60细胞生长抑制呈剂量依赖性,浓度800mg/L时吸光度为(0.232±0.030),与空白对照组比较差异显著(P0.01)。DAPI显示TSRP在一定浓度内干预HL-60细胞后出现明显凋亡现象;Annexin V-FITC/PI凋亡检测显示经不同浓度TSRP处理后,HL-60细胞的早期凋亡率明显增加;RT-PCR检测到在一定浓度范围内,TSRP显著抑制细胞Bcl-2和Fas mRNA表达,同时Bax、Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达明显增加,以上均呈剂量依赖性。结论:在体外TSRP是通过Bcl-2和Fas途径诱导HL-60细胞凋亡,具有较好的临床应用前景。     

益气养阴解毒方联合5-FU对HepG2细胞Survivin和Caspase-3的影响

目的:现察益气养阴解毒方的含药血清与化疗药5-FU体外共同作用于肝癌HepG2细胞后,对细胞Survlvin的表达和Caspase-3活性的影响,从而探讨本益气养阴解毒方增强5-FU诱导HepG<,2>细胞凋亡的相关机制.方法:运用血清药理学方法制备大鼠的益气养阴解毒方的含药血清,分为中药含药血清组、化疗药物5-FU组和中药含药血清+5-FU组,并设不含药的空白大鼠血清为对照组,分别作用于HepG<,2>细胞,应用SP免疫细胞化学染色法及 western-blot检测各组细胞24h、48h、72h后Survivin蛋白的表达变化;应用DEVD-DNA降解法检测各组细胞2.4h、48h、72h后Cas-pase-3活性变化.鲒果:(1)各组作用24h、48h、72h后,中药含药血清组HepG<,2>细胞Survivin蛋白的表达量无明显变化(与对照组相比,P>0.05);5-FU组HepG<,2>细胞Survivin蛋白的表达量逐渐升高(与对照组相比,P<0.05),且具有时间依赖性;而中药含药血清+5-FU组细胞Survivin蛋白的升高水平与5-FU组相比明显降低(P<0.05).(2)作用24h、48h、72h后含药血清组HepG<,2>细胞Caspase-3的活性无明显变化(与对照组相比,P>0.05);作用48h、72h后,5-FU组HepG<,2>细胞Caspase-3的活性逐渐升高(与对照组相比,P<0.05);而中药含药血清+5-FU组细胞Caspase-3的活性升高更显著(与5-FU组相比,P<0.05).结论:益气养阴解毒方含药血清可能是通过降低5-FU诱导的凋亡抑制蛋白Survivin的表达,减弱Survivin对Caspase-3活性的抑制,从而促进细胞凋亡的,这可能是本方与化疗合用增效的重要机制之一.     

六神丸含药血清制备方法的优选研究

目的:以给药剂量和采血时间为切入点,探讨中药复方血清药理学的实验操作规范.方法:用MTT法测定不同给药剂量和不同采血时间制备的六神丸含药大鼠血清对HL-60细胞的生长抑制.结果:中剂量1小时的含药血清对HL-60细胞的生长抑制最明显.结论:中药复方血清药理学研究要注意给药剂量及取血时间的优选.     

定清片对人急性髓系白血病HL-60细胞侵袭力的影响

目的:探讨我院自制中药制剂定清片对急性髓系白血病HL-60细胞侵袭力的影响。方法:制备定清片含药血清,并以不同浓度含药血清对HL-60细胞进行体外干预,Transwell实验检测定清片含药血清对细胞侵袭力的影响,应用免疫印迹法(Western Bloting,简称WB)检测MMP-2、MMP-9基因的蛋白表达量。结果:与空白对照组比较,不同浓度定清片含药血清(5%、10%、20%)作用于HL-60细胞后,不仅对细胞的侵袭能力具有明显抑制作用(P0.05),还能下调MMP-2、MMP-9基因蛋白表达水平(P0.05),且随着药物浓度的增加,其抑制力及下调蛋白表达水平作用越强。结论:定清片可抑制HL-60细胞的浸润转移能力,其作用机制可能与抑制细胞侵袭能力及下调MMP-2、MMP-9蛋白表达相关。     

扶正消症方（含药血清）诱导SGC-7901细胞凋亡的实验研究

探讨中药复方扶正消症方(含药血清)在体外对胃癌SGC-790l细胞凋亡影响。方法：通过血清药理学方法，选择不同浓度的含药血清与胃癌细胞共同培育12、24、36、48h后，应用荧光显位镜观察细胞形态，流式细胞仪检测凋亡峰(亚二倍体峰)。结果：扶正消症方含药血清可诱导胃癌细胞SGC-790l凋亡，这种作用呈时间，剂量依赖性，随含药血清浓度的增加细胞凋亡率增高。结论：中药复方扶正消症方通过血清药理学方法可诱导胃癌细胞SGC-790l发生凋亡，这将为胃癌治疗提供有用的实验室依据。     

扶正抑瘤颗粒含药血清对小鼠肝癌细胞H22凋亡及细胞内Ca2+浓度的影响

目的:观察扶正抑瘤颗粒(FYK)含药血清诱导小鼠肝癌细胞H22凋亡的作用及其对细胞内钙离子浓度的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法:FYK含药血清孵育体外培养的小鼠肝癌H22细胞,电子显微镜观察FYK含药血清诱导H22细胞凋亡的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜测细胞内钙离子浓度的变化。结果:FYK含药血清能诱导小鼠肝癌H22细胞发生凋亡,同时使细胞内游离钙离子浓度升高,并与剂量和时间存在依赖性关系,细胞内钙离子浓度与相同时间点凋亡率呈正相关。结论:FYK含药血清可通过改变细胞内钙离子浓度诱导细胞发生凋亡,这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。     

六神丸含药血清制备的方法学研究

[目的]研究六神丸含药血清的制备,探讨六神丸血清药理学的实验方法。[方法]分不同的给药剂量、给药天数和不同的采血时间制备含药血清。用原子吸收法测定血砷含量;薄层色谱法定性检测六神丸含药血清中蟾酥成分。用四氮唑溴盐(MTT)法确定最佳血清制备方案。[结果]血砷含量随着给药剂量、给药天数增加和采血时间的延长而升高;薄层色谱表明六神丸含药血清中有蟾酥成分。六神丸含药血清对人髓系白血病细胞株-60(HL-60)细胞的抑制率,随给药剂量、天数增加、采血时间的延长而升高,且随着含药血清的添加量而升高。[结论]中药血清药理学含药血清的制备应区分不同的中药,采用相应的方案。     

益气养阴方对急性白血病细胞HL-60增殖和细胞形态的影响

目的:观察益气养阴方对急性白血病细胞HL-60增殖和细胞形态的影响。方法:制备益气养阴方含药血清,并设立对照组、低、中、高剂量含药血清,对急性白血病细胞HL-60进行培养。利用MTT比色检验法、Wright-Gimsa染色检测法分别检测细胞增殖和细胞形态变化。结果:与对照组比较,益气养阴方对HL-60细胞有一定抑制作用(P0.01);低剂量组HL-60细胞形态变化不明显,中剂量组少数细胞出现变化,高剂量组变化最明显。结论:益气养阴方能够抑制急性白血病细胞HL-60增殖和诱导白血病细胞分化。     

喜树碱衍生物SN-38对人白血病细胞系HL-60增殖及凋亡作用的实验研究

目的:观察喜树碱衍生物SN-38对人白血病细胞系HL-60细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,并探讨其可能的作用机制。方法:采用CCK法检测SN-38对HL-60细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;特异性荧光底物检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性;观察不同种类Caspase抑制剂对SN-38诱导HL-60细胞的增殖和凋亡作用的影响。结果:CCK法显示SN-38明显抑制HL-60细胞增殖,流式细胞凋亡分析及Caspase抑制剂研究,显示SN-38通过内源性Caspase信号通路诱导HL-60细胞凋亡。结论:SN-38通过内源性Caspase信号通路抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡。