阿魏酸钠对氧糖剥夺所致星形胶质细胞损伤的保护作用及机制研究

目的:观察阿魏酸钠对氧糖剥夺所致的体外培养星形胶质细胞损伤的保护作用,并探讨其机制。方法:原代培养星形胶质细胞分为对照组、氧糖剥夺组、氧糖剥夺+阿魏酸钠组(50,100,200 mol/L)、P38MAPK通路抑制剂SB203580组、氧糖剥夺+SB203580组。阿魏酸钠组细胞在氧糖剥夺前加入不同浓度的阿魏酸钠作用24 h,p38MAPK特异性阻断剂SB 203580(20μmol/L)在氧糖剥夺前1 h加入。将各氧糖剥夺组星形胶质细胞在无糖DMEM培养基、1%O2的培养条件下进行6 h时长的氧糖剥夺,进行如下实验:(1)倒置相差显微镜下观察星形胶质细胞形态学改变。(2)用乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、MTT法检测星形胶质细胞的损伤情况及细胞活力。(3)Hoechst 33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变。(4)Western blot方法观察磷酸化P38和活化的caspase-3蛋白表达的改变。结果:离体培养的星形胶质细胞经过氧糖剥夺处理6 h,细胞发生肿胀,突触回缩,呈空泡样改变,细胞活力明显下降,LDH漏出率增加,凋亡细胞百分比较正常对照组明显增加,SB203580可逆转以上改变。Western blot结果显示,磷酸化P38MAPK和活化的caspase-3蛋白表达也明显增加。氧糖剥夺前24 h加入阿魏酸钠(50,100,200μmol/L)可不同程度逆转以上改变。结论:阿魏酸钠能明显抑制氧糖剥夺所致的体外培养星形胶质细胞的损伤,这种作用与其抑制p38 MAPK信号转导通路有关。     

银杏叶提取物对氧糖剥夺诱导的体外培养大鼠星形胶质细胞损伤的影响

目的应用体外培养的大鼠脑皮层星形胶质细胞,观察银杏叶提取物（EGb761）对氧糖剥夺再复氧导致细胞损伤的影响,并探讨其作用机制。方法以连二亚硫酸钠和无糖DMEM液造成化学性氧糖剥夺（OGD）模型模拟体内脑缺血再灌注损伤。利用WST-1法检测细胞活性、细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）检测细胞损伤程度、GFAP染色及Hoechst 33258染色观察细胞形态变化和凋亡,免疫蛋白印迹法测定bcl-2、bax、cas-pase-3蛋白的表达。结果 OGD处理90 min再复氧24 h能使细胞存活率明显下降,LDH漏出量增高,细胞形态损伤性改变、凋亡细胞增多,并能下调bcl-2/bax比值和上调caspase-3表达。而给予EGb761可逆转上述变化,减轻细胞损伤。结论 EGb761对OGD/R诱导的星形胶质细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与调整bcl-2/bax比值、抑制caspase-3激活对抗细胞凋亡有关。     

刺五加多糖对氧糖剥夺诱导神经元氧化损伤的保护作用

目的 探讨刺五加多糖对氧糖剥夺诱导神经元氧化损伤的保护作用.方法 培养PC12细胞,采用氧糖剥夺(OGD)及厌氧袋相结合法建立缺血诱导神经细胞继发损伤模型,电镜观察细胞形态,应用比色法测定细胞外液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、MDA含量和SOD酶活力.结果 与模型组比较,刺五加多糖干预后PC12细胞氧化损伤明显减轻,细胞SOD酶活力提高,细胞内MDA含量及LDH释放量降低.结论 刺五加多糖对OGD引起的神经元样细胞的损伤具有保护作用,其作用机制可能与刺五加多糖具有抗氧化、清除自由基的作用有关.     

三七总皂苷对氧糖剥夺损伤的小鼠星形胶质细胞谷氨酸摄取的影响

目的：探讨三七总皂苷对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的星形胶质细胞谷氨酸摄取能力的影响。方法：体外培养ICR小鼠大脑皮层星形胶质细胞,分为正常组、模型组(OGD 6 h/R 24 h)和三七总皂苷组(OGD 6 h/R 24 h+20μg·mL^-1)。免疫细胞荧光染色鉴定GFAP标记星形胶质细胞;采用CCK-8法检测星形胶质细胞活力,同时检测细胞外液LDH的释放;采用生化法检测细胞Na⁺-K⁺-ATPase活性、细胞谷氨酸摄取率;Western Blot法和RT-PCR法检测细胞GLT-1、GS mRNA表达及蛋白水平变化。结果：经特异性蛋白GFAP鉴定,细胞呈阳性表达。OGD/R损伤后,星形胶质细胞活力降低,LDH释放增多(P<0.01)。细胞对谷氨酸的摄取率明显降低(P<0.01),Na⁺-K⁺-ATPase活性降低,同时GLT-1和GS mRNA表达和蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。三七总皂苷干预后,细胞活力明显增强(P<0.05),LDH...     

芹菜素对氧糖剥夺损伤小胶质细胞的抗炎作用

目的探讨芹菜素对氧糖剥夺(OGD)损伤后复氧复糖(OGD/R)小胶质细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)产生的影响。方法将原代培养的小胶质细胞随机分为正常组、二甲基亚砜(DMSO)组及芹菜素(10、25、50μmol/L)组,其中DMSO组和芹菜素组小胶质细胞进行OGD8h,之后加入相应药物培养基,观察24h后,收集细胞上清,用双抗夹心酶联免疫吸附法检测上清中IL-1β、TNF-α含量。结果24h后DMSO组细胞上清中IL-1β、TNF-α含量增多(P0.01)。芹菜素组TNF-α、IL-1β分泌量明显低于DMSO组。芹菜素可以抑制OGD后小胶质细胞的炎症反应,且呈剂量依赖性。结论芹菜素可以通过减少OGD/R小胶质细胞中IL-1β、TNF-α的产生而发挥神经保护作用。     

栝楼桂枝汤对氧糖剥夺诱导的HT22细胞损伤保护作用机制研究

目的研究栝楼桂枝汤(GLGZD)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)诱导的小鼠海马HT22神经细胞损伤的保护作用机制。方法将HT22细胞分为正常组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。正常组在完全培养基,37℃、5%CO₂恒温培养箱中培养;模型组经OGD/R诱导损伤,完全培养基培养24 h后,将完全培养基更换无糖EBSS培养基后,置于1%O₂、5%CO₂、94%N₂低氧培养工作站培养90 min,再将无糖EBSS培养基更换为完全培养基,放置于37℃、5%CO₂恒温培养箱复氧培养24 h,复氧复糖;低、中、高剂量组在经OGD/R诱导损伤,复氧复糖过程中分别于完全培养基中加入50、100、200μg/mL GLGZD药液。CCK-8法检测各组细胞生长活力,根据细胞生长活力百分比,筛选GLGZD最佳干预浓度为200μg/m L。后续将HT22细胞分为正常组、模型组、GLGZD组,正常组和模型组细胞处理同前,GLGZD组在经OGD/R诱导损伤,复氧复糖过程中于完全培养基中加入200μg/...     

心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧星形胶质细胞神经营养因子分泌的影响及对神经元的保护作用

[目的]探讨心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)处理的星形胶质细胞(C8-D1A)神经生长因子分泌的影响,以及研究心脑舒通药物处理的OGD/R胶质细胞条件培养液对神经元细胞(Neuro-2A)的保护作用。[方法] CCK-8检测心脑舒通对正常培养和OGD/R胶质细胞活力的影响;酶联免疫吸附(ELISA)法检测心脑舒通对OGD/R胶质细胞的脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质源性神经营养因子(GDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)释放的影响;CCK-8检测心脑舒通处理的胶质细胞条件培养液对OGD/R神经元细胞活力的影响。[结果] 1)心脑舒通对正常培养的胶质细胞活力无显著影响,但可以提高OGD/R后胶质细胞的增殖活力。2)0.1μg/mL心脑舒通可以显著提高OGD/R胶质细胞BDNF的释放。3)0.1μg/mL心脑舒通药物处理的胶质细胞条件培养液可提高OGD/R神经元的存活能力。[结论]心脑舒通对OGD/R损伤后的胶质细胞有一定保护作用,其处理后的胶质细胞条件培养液对神经元有一定的保护作用。     

芦荟苷对PC12细胞氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用

目的探讨芦荟苷对PC12细胞氧糖剥夺再灌注损伤是否具有保护作用。方法将PC12细胞随机分为正常组、模型组、尼莫地平组、芦荟苷低、中、高剂量组,采用氧糖剥夺再灌注损伤模型,通过采用2-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)检测细胞存活率,紫外分光光度计检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,荧光分光光度计测定细胞内活性氧(ROS)含量;运用激光共聚焦显微镜(CLSM)测定PC12细胞线粒体膜电位水平(MMP);通过生化方法测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与正常组相比,芦荟苷(10,20,和40μg/ml)可以显著升高细胞存活率,降低细胞内乳酸脱氢酶漏出率、活性氧含量和线粒体膜电位水平,并且降低丙二醛和升高超氧化物歧化酶活性。结论芦荟苷对PC12细胞氧糖剥夺再灌注损伤具有明显的保护作用。     

人参炔醇对氧糖剥夺神经细胞损伤的保护作用

目的:探讨人参炔醇对氧糖剥夺(OGD)致神经细胞损伤的保护作用。方法:体外培养PC12细胞,分为正常对照组、OGD组、人参炔醇组、尼莫地平组,加入含0.5 mmol.L-1 Na2SO4的无糖Earle’s液建立OGD损伤模型,以人参炔醇(10,20mg.L-1)、尼莫地平(100μmol.L-1)处理。采用荧光显微镜观察细胞形态,Hoechst和PI双染流式细胞分析仪检测凋亡率,测定培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性与细胞Ca2+浓度,观察人参炔醇对OGD致PC12细胞损伤的保护作用。结果:人参炔醇能够减少OGD损伤PC12细胞LDH的释放(P<0.05,P<0.01),抑制Ca2+的过量产生(P<0.05,P<0.01)、显著减少细胞凋亡及坏死(P<0.05,P<0.01)。结论:人参炔醇对OGD致神经细胞损伤具有保护作用。     

巴利森苷A对氧糖剥夺/复糖复氧损伤的HT22细胞的保护作用

目的：探讨巴利森苷A(PA)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的HT22细胞的保护作用。方法：将HT22细胞随机分为6组,分别是空白组(Control组)、OGD/R组、依达拉奉(EDA)组、PA低剂量组(40μmol·L^-1)、PA中剂量组(80μmol·L^-1)、PA高剂量组(160μmol·L^-1)。以连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄)10 mmol·L^-1合并无糖DMEM培养基造成氧糖剥夺培养2 h,然后恢复为无血清高糖DMEM培养2 h作复糖复氧处理,以建立体外OGD/R模型。EDA和PA组自氧糖剥夺前24 h即加入相应药物的浓度,一直持续到复糖复氧结束。采用MTT比色法检测细胞存活率;乳酸脱氢酶(LDH)法测定细胞损伤率;采用试剂盒法检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞内的活性氧(ROS)水平;Western blot法检测各组细胞缺氧诱导因子通路相关蛋白HIF-...     

异甘草素对氧糖剥夺/复糖复氧损伤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的研究异甘草素对氧糖剥夺/复糖复氧损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。方法细胞SH-SY5Y建立OGD/R损伤细胞模型。NC Nrf2-siRNA、siRNA-Nrf2质粒转染SH-SY5Y细胞,并培养48 h,20μmol/L异甘草素预处理2 h后构建OGD/R损伤,24 h后继续加入20μmol/L异甘草素再培养24 h。OGD/R损伤48 h后,测定细胞活力,LDH水平,caspase-3、caspase活性,ROS、MDA、SOD、GSH水平;RT-PCR检测Bcl-2、Bax、NQO1、HO-1 mRNA表达;Western blot检测HO-1蛋白表达。结果 OGD/R诱导SH-SY5Y细胞活力降低,caspase-3、caspase活性升高,ROS、MDA水平升高,SOD、GSH-Px水平降低,Bcl-2、NQO1、HO-1 mRNA及HO-1蛋白表达降低,Bax mRNA表达增高(P<0.01);经异甘草素干预后,OGD/R SY5Y细胞活力升高,caspase-3、caspase活性降低,ROS、MDA水平降低,SOD、GSH水平及Bcl-2、NQO1、HO-1...     

川芎嗪对皮质神经元在氧糖剥夺损伤中的保护作用

目的:探讨川芎嗪对培养大鼠皮质神经元在氧糖剥夺损伤中的保护作用及可能机制。方法:原代培养新生大鼠皮质神经元,利用氧糖剥夺建立皮质神经元缺血再灌损伤模型。应用四甲基偶氮唑盐(MTT)测定细胞活力。应用乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)试剂盒分别检测LDH、SOD活性及MDA含量。应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:氧糖剥夺损伤后细胞存活率降低,LDH释放上升,SOD活性下降,MDA含量明显增加,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。川芎嗪可浓度依赖性地提高细胞的存活率和SOD水平,减少LDH释放和MDA含量,抑制细胞凋亡(P<0.05)。结论:川芎嗪对培养大鼠皮质神经元在氧糖剥夺损伤中有保护作用,其保护机制可能与葛根素稳定细胞膜,减轻氧化损伤,及抑制细胞凋亡有关。     

梓醇对过氧化氢诱导的星形胶质细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究梓醇对过氧化氢(H_2O_2)诱导的大鼠脑星形胶质细胞氧化性损伤的保护作用.方法:采用1,10,100μmol·L~(-1)的梓醇预处理星形胶质细胞24 h后,再用300 μmol·L~(-1) H_2O_2损伤细胞.倒置显微镜观察各组细胞形态变化,MTT法检测细胞存活率的改变,比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量变化以及细胞内的超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-P_X)活性变化和丙二醛(MDA)的含量变化.结果:梓醇可明显改善细胞的形态变化,提高了星形胶质细胞的存活率,维持了细胞膜的完整性,并对H_2O_2诱导的星形胶质细胞内T-SOD,GSH-P_X活性降低和MDA含量升高有显著的抑制作用.结论:梓醇对H_2O_2诱导的星形胶质细胞氧化性损伤具有保护作用.     

淫羊藿苷对氧糖剥夺所致PC12细胞损伤的保护作用

目的研究淫羊藿苷对氧糖剥夺PC12细胞所致炎症损伤的保护作用。方法采用PC12细胞复制氧糖剥夺2 h细胞损伤模型。实验分成6组,即正常组,模型组,尼莫地平组(10-5mol·L-1),淫羊藿苷高、中、低剂量组(10-5,10-6,10-7mol·L-1)。将淫羊藿苷各剂量组预给药1 h加氧糖剥夺期间给药2 h后,用MTT法检测细胞活力,ELISA法检测细胞上清液的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-lβ(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量。结果淫羊藿苷各剂量组均能显著降低氧糖剥夺PC12细胞上清液的TNF-α、IL-1β、IL-6含量,提高细胞的活力,与模型组比较,差异均有显著性意义(P0.05,P0.01)。结论淫羊藿苷能减轻氧糖剥夺PC12细胞所致的炎症损伤,具有细胞保护作用。     

黄芪黄酮对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞的保护作用

目的:研究黄芪黄酮对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞的作用。方法:取对数期PC12细胞,随机分为5组:正常组、模型组(氧糖剥夺/复氧复糖组)、黄芪黄酮低(0.001 mg/mL)、中(0.01 mg/mL)、高(0.1 mg/mL)剂量组。其中,模型组和黄芪黄酮低、中、高剂量组氧糖剥夺2 h后复氧复糖24 h,黄芪黄酮低、中、高剂量组在复氧复糖的同时予以黄芪黄酮不同剂量处理。用倒置相差显微镜观察PC12细胞的形态变化,MTT法和CCK-8法检测细胞的存活率。结果:正常组细胞状态良好,贴壁生长,细胞突起明显,各个突起之间交织在一起,细胞整体折光性较强,细胞表面光滑;与正常组相比,模型组部分细胞漂浮,突起收缩,细胞折光性差,细胞存活率明显降低(P0.05);与模型组相比,黄芪黄酮低、中、高剂量组细胞状态均有明显好转,突起可见,细胞存活率均有升高(P0.05);与黄芪黄酮低剂量组相比,黄芪黄酮中、高剂量组细胞状态较好,细胞存活率升高(P0.05);黄芪黄酮中剂量组与高剂量组之间差异不明显(P0.05)。结论:黄芪黄酮可改善氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞的生长状态,减轻细胞损伤,提高细胞存活率,发挥保护作用,且黄芪黄酮中、高剂量组的保护作用优于低剂量组。     

阿魏酸对不同时间点糖氧剥夺诱导脑微血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨阿魏酸(Ferulic acid,FA)对不同时间点糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)诱导脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)氧化损伤的保护作用。方法采用混合气体的方法(95%N2+5%CO2)建立OGD体外模型,通过MTT法检测细胞活力、流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生量,硫代巴比妥酸显色法检测细胞丙二醛(methane dicarboxylic aldehyde,MDA)水平,氮蓝四唑显色法检测细胞总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。结果 OGD对BMEC细胞造成的氧化损伤程度呈时间依赖性,FA能显著提高被损伤的细胞存活率,减少ROS的生成量,明显降低细胞内MDA的水平,并提高SOD活性。结论 FA对不同时间点OGD诱导BMEC细胞氧化损伤具有良好的保护作用,其作用机制可能与缓解细胞氧化应激状态有关。     

心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧损伤原代神经元的保护作用

[目的]探讨心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤的原代神经元细胞活力及微管相关蛋白2(MAP-2)表达的影响.[方法]取新生24 h内SD大鼠的大脑皮质进行神经元原代培养,并通过免疫荧光法进行MAP-2目的蛋白鉴定;建立神经元OGD/R损伤的体外模型,CCK-8检测不同浓度的心脑舒通胶囊对体外正常培养和OGD...     

毛蕊异黄酮对氧糖剥夺再灌注BV2 小胶质细胞极化的影响

目的 探讨毛蕊异黄酮对氧糖剥夺再灌注BV2小胶质细胞极化的影响。方法 将对数生长期BV2细胞随机分为6组：正常组、模型组、尼莫地平组(5μg·mL^-1)、毛蕊异黄酮高剂量组(20μg·mL^-1)、毛蕊异黄酮中剂量组(10μg·mL^-1)、毛蕊异黄酮低剂量组(5μg·mL^-1)。氧糖剥夺3 h后,各给药组换成含药的完全培养基,复氧6 h。采用CCK-8法检测细胞活力;测定细胞上清液中的一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-10含量;免疫荧光双染法检测BV2细胞极化;WesternBlot法检测BV2细胞的iNOS、CD206蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组的BV2细胞活力显著降低(P<0.01),NO、TNF-α、IL-1β水平明显升高(P<0.05),IL-10水平明显降低(P<0.05);免疫荧光双染检测中M1型小胶质细胞标记物iNOS表达显著增强(P<0.01);Western Blot检测中iNOS蛋白表达明显上调(...     

磷酸川芎嗪通过激活AMPK对HT22细胞在氧糖剥夺损伤中的保护作用

目的观察磷酸川芎嗪在离体水平对糖氧剥夺(OGD)诱导HT22细胞损伤的保护作用。方法磷酸川芎嗪(5、10、15μg/mL)预处理HT22细胞24 h,OGD处理4 h,HT22细胞分为空白对照组、模型组、5μg/mL磷酸川芎嗪组、10μg/mL磷酸川芎嗪组及15μg/mL磷酸川芎嗪组。CCK-8法检测HT22细胞存活率,荧光显微镜下观察神经元形态改变,利用荧光酶标仪检测各组细胞2-脱氧荧光葡萄糖(2-NBDG)的摄取能力,利用Western blot检测AMPK、p-AMPK蛋白表达。结果从细胞形态学上,磷酸川芎嗪对OGD损伤HT22细胞具有保护用;15μg/mL磷酸川芎嗪保护OGD诱导损伤的活性最大。对2-NBDG摄取量的影响,与剂量呈正相关。AMPK磷酸化随磷酸川芎嗪浓度的增加而增加。结论磷酸川芎嗪可能通过激活AMPK对HT22细胞在氧糖剥夺损伤中发挥重要的保护作用。     

红景天总黄酮对H_2O_2诱导神经元及胶质细胞损伤的保护作用

目的研究红景天总黄酮提取物(TFR)对H_2O_2诱导神经元及胶质细胞损伤的保护作用。方法通过H_2O_2(200μg/m L)损伤原代神经元及胶质细胞建立脑组织氧化应激损伤模型,采用MTT(噻唑蓝)法检测在TFR预保护下细胞的存活率,Hoechst 33258染色观察TFR对细胞抗凋亡的作用,通过测定超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)的水平评价TFR对细胞抗氧化保护的作用。综合两种细胞各项指标数据,对比分析TFR对两种细胞保护作用的差异。结果中剂量(10μg/m L)和高剂量(100μg/m L)TFR保护组细胞存活率均显著高于H_2O_2损伤组,而且细胞凋亡显著减少,高剂量组神经元的存活率显著高于胶质细胞。TFR具有抗氧化保护作用,高剂量(100μg/m L)下对神经元的保护作用显著高于胶质细胞。结论 TFR能够显著降低H_2O_2诱导神经元和胶质细胞的损伤,在高剂量(100μg/m L)组中,TFR对神经元的保护作用显著高于胶质细胞。