食欲刺激素抑制血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞活性氧生成及内皮素1表达

目的研究食欲刺激素（Ghrelin）在不同浓度下对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）体外诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）活性氧（ROS）生成和内皮素1（ET-1）表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞，用AngⅡ和Ghrelin联合干预细胞18h后，采用流式细胞术测定细胞内ROS水平，放射免疫方法测定ET-1含量，用RT0-PCR法测定ET-1mRNA表达。结果AngⅡ明显增加HUVECs的ROS生成[（21．4±2．2）比（2．9±0．9）10μmol／L]和ET-1分泌（111．3±7．9比43．2±9．7）ng／L，P〈0．05；Ghrelin对基础ROS及ET-1分泌无影响，但在10^-8～10^-6mol／L范围内剂量依赖性地抑制AngII诱导ROS生成[（14．2±0．7）、（10．4±1．4）和（6．6±0．5）10^-7mol／L]及ET-1分泌[（119．3±7．2）、（101．5±2．8）和（72．3±8．8）ng／L]与AngⅡ组（40．5±12．7）ng／L比较，P均〈0．05；RT—PCR显示AngⅡ明显增加ET-1mRNA表达，此作用可为Ghrelin所抑制，且在10^-8～10^-6mol／L浓度范围呈浓度依赖性。结论Ghrelin能够抑制AngⅡ诱导的HUVECs ROS的生成，ET-1的释放及ET-1 mRNA表达，且在一定的浓度范围内（10^-8～10^-6mol／L）呈浓度依赖性。     

二丙酸倍氯米松和布地奈德对白细胞介素13激活的肺成纤维细胞的影响

目的观察吸入型糖皮质激素二丙酸倍氯米松（BDP）和布地奈德（BUD）对白细胞介素13（IL-13）激活的肺成纤维细胞的影响。方法IL-13加入培养的肺成纤维细胞，采用噻唑蓝法、免疫组织化学法、免疫印迹法、逆转录聚合酶链反应、ELISA等方法检测细胞增殖、α-肌动蛋白（α-SMA）表达及分泌白细胞介素6（IL-6）、嗜酸粒细胞趋化因子（eotaxin）的变化，观察BDP和BUD的作用。结果加入20ng／ml的IL-13后，成纤维细胞分泌IL-6明显增加[（20±2）ng／L和（140±8）ng／L]，eotaxin也明显增加[（64±25）ng／L和（334±51）ng／L]。10^-8mol／L～10^-5mol／L的BDP组和BUD组IL-6表达水平[（112±3）ng／L～（53±2）ng／L和（55±14）ng／L～（32±6）ng／L]比IL-13组明显下降，IL-6 mRNA表达比IL-13组明显减少，细胞上清液中eotaxin水平[（297±59）～（226±43）ng／L和（287±59）～（183±43）ng／L]比IL-13组明显降低。IL-13诱导成纤维细胞表达α-SMA mRNA及蛋白明显增加，并促进成纤维细胞增殖（1．5±0．2）倍。BDP组和BUD组对IL-13诱导的α-SMA mRNA及蛋白的表达无显著影响，并明显具有协同IL-13促进成纤维细胞增殖的作用。结论BDP和BUD对IL-13刺激成纤维细胞的作用具有多重调节效应。BDP和BUD抑制IL-13诱导成纤维细胞合成、释放炎症介质IL-6和eotaxin的作用，有利于改善气道上皮下纤维化，但对于IL-13促进成纤维细胞转化为肌成纤维细胞及其增殖方面起负面影响。     

同型半胱氨酸诱导人单核细胞分泌趋化因子的氧化应激机制的实验研究

目的探讨同型半胱氨酸（Hcy）诱导人单核细胞分泌趋化因子的致炎症作用及其氧化应激的机制,明确大剂量叶酸在这一过程中的潜在作用。方法用Hcy（100μmol／L）和叶酸（5μmol／L）处理人单核细胞24h。使用酶联免疫吸附实验检测单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、IL-8水平（n=8）。应用激光共聚焦显微镜探测单核细胞内氧自由基（ROS）的表达。使用细胞色素C还原法评价单核细胞内NADPH氧化酶活性。结果Hey显著增加了单核细胞对趋化因子MCP-1的分泌[对照组（1．88±0．51）ng／ml比Hey处理组（4．36±0．72）ng／ml,P〈0．05],而叶酸显著抑制了Hcy诱导的单核细胞分泌MCP-1[Hey处理组（4．36±0．72）ng／ml比Hey与叶酸共同处理组（2．40±0．60）ng／ml,P〈0．05]。此外,Hey显著增加了单核细胞对趋化因子IL-8的分泌[对照组（4．9±1．9）ng／ml比Hey处理组（12．7±1．5）,P〈0．05],而叶酸明显抑制了这一过程[Hey处理组（12．7±1．5）比Hey与叶酸共同处理组（7．2±1．9）ng／ml,P〈0．05]。Hcy（100μmol/L）显著增加了单核细胞ROS产生[对照组100％比Hey处理组（443．0±60．9）％,P〈0．05],叶酸（5μmol／L）抑制了Hcy诱导的单核细胞ROS产生[Hey处理组（443．0±60．9）％比Hey与叶酸共同处理组（133．0±34．7）％,P〈0．05]。Hey显著增加了单核细胞NADPH氧化酶的活力[对照组100％比Hey处理组（520±80）％,P〈0．05],叶酸（5μmol／L）及NADPH氧化酶的抑制剂DPI明显降低了Hcy诱导的人单核细胞NADPH氧化酶的活性[Hcy处理组（520±80）％比Hcy与叶酸共同处理组（310±70）％比Hcy与DPI共同处理组（280±40）％,P〈0．05]。结论Hcy可能通过活化NADPH氧化酶的途径,诱导ROS的产生及分泌趋化因子,叶酸可能通过降低NADPH氧化酶活性这一途径抑制Hcy诱导的ROS的产生及趋化因子的分泌。提示Hcy可能通过诱导炎症的机制促进动脉粥样硬化的发展,叶酸可能通过降低Hcy水平以外的抗氧化机制,对动脉粥样硬化发挥潜在的有益作用。     

9-顺式维甲酸部分抑制脂多糖诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7向树突样细胞分化

目的探讨激活视黄醇类X受体对脂多糖诱导巨噬细胞向树突状细胞分化的影响及其机制。方法小鼠巨噬细胞系RAW264.7经脂多糖诱导48h后分化为树突样细胞,观察同时给予视黄醇类X受体激动剂9-顺式维甲酸对脂多糖诱导分化的干预作用并检测细胞内活性氧的生成,相差显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测与树突状细胞免疫成熟和激活有关的细胞表面标志物(CD40、CD86和CD83),CM-H2DCFDA荧光探针测定细胞内活性氧浓度。结果9-顺式维甲酸部分抑制脂多糖诱导出现的树突样细胞形态改变,使被脂多糖诱导上调的细胞表面标志物CD40、CD86和CD83分别下降约50%、40%和38%,作用表现剂量依赖性;脂多糖引起细胞内活性氧浓度显著升高(平均荧光强度98.9±9.6比12.3±1.8,P<0.05),9-顺式维甲酸在10-8mol/L和10-7mol/L剂量水平分别降低平均荧光强度到69.4±5.8和37.0±4.2,较脂多糖单独处理组差异有显著性(P<0.05)。结论激活视黄醇类X受体能够部分抑制脂多糖诱导巨噬细胞向树突状细胞分化,其机制可能与减轻细胞氧化应激损伤有关。     

去氢表雄酮通过Akt信号通路诱导肝癌细胞凋亡和细胞周期阻滞

目的 研究去氢表雄酮（DHEA）及其代谢物去氢表雄酮硫酸酯（DHEAs）对HepG2和HT-29细胞抑制增殖、促进凋亡及诱导细胞周期阻滞的作用。方法 应用MTT比色法检测不同浓度（1、10、50、100、200μmol／L）的DHEA或DHEAs与HepG2和HT-29细胞孵育8、24、48、72 h对两种细胞系的生长抑制作用;应用流式细胞术检测不同浓度的DHEA或DHEAs对细胞凋亡及细胞周期的变化;采用Western blot检测细胞内磷酸化Akt（Ser473,Thr308）蛋白的水平。结果 （1）不同浓度DHEA作用细胞24h时,HepG2的存活率24h时分别为92．7％±0．9%、84．7％±1．2％、62．4％±0．8％、49．5％±0．8％和50．7％±0．3％,HT-29细胞的存活率分别为92．5％±0.4％、89．5％±0．7％、80．5％±1．1％、67.5％±1.5％和70．6％±0．6％,与对照组相比,DHEA明显抑制HepG2和HT-29两种细胞的生长。在浓度为100μmol／L作用24 h时作用明显,而DHEAs对HepG2及HT-29细胞的增殖无明显影响。（2）100μmol／L的DHEA显著抑制两种细胞周期进程, HepG2细胞G0／G1期细胞比例显著升高,可以达到68．4％±2．0％,而对照组为48．6％±1．2％。HT-29细胞在100μmol／L时的G0／G1期的比率为90．3％±2．7％,而对照组仅为59．0％±1．2％,S及G2／M期细胞明显减少。（3）100μmol／L DHEA作用24 h时能显著诱导HepG2细胞凋亡（凋亡率为18．6％±2．2％）,而DHEAs却无此作用。（4）HepG2细胞在100μmol／L和200μmol／L DHEA作用24 h后,磷酸化Akt（Thr^308）、磷酸化Akt（Set^473）蛋白表达显著降低,这种作用在应用PI3K抑制剂和PI3K激活剂后分别被增强和消除。结论 DHEA对HepG2和HT-29两种肿瘤细胞系均具有较强的抗增殖作用。而对于不同的肿瘤细胞系,DHEA可能通过调节Akt的信号通路来诱导细胞凋亡,还可能通过阻滞细胞周期,使其阻滞在G0／G1期。DHEAs对细胞的生长没有明显的作用。     

氨氯吡咪对预收缩大鼠胸主动脉血管环的作用及其机制探讨

目的观察氨氯吡咪（AM）对预收缩大鼠胸主动脉血管环的舒张作用并探讨其可能机制。方法采用离体血管环灌流方法,在用KCl（6&#215;10^-2mol／L）或去甲肾上腺素（NE,1&#215;10^-6mol／L）预收缩的去内皮或内皮完整的离体大鼠主动脉环上加入AM,观察其对大鼠主动脉血管环的作用及加入不同工具药后对其舒张血管的影响。结果AM（1&#215;10^-6mol／L-3&#215;10^-5mol／L）对基础状态的大鼠胸主动脉血管环无作用;对KCI（6&#215;10mol／L）和NE（1&#215;10^-6mol／L）预收缩的内皮完整或去内皮的胸主动脉血管环有浓度依赖性的舒张作用,对内皮完整血管环的舒张作用强于去内皮的血管环。一氧化氮合酶抑制剂L—NAME及部分钾离子通道阻断剂四乙胺（TEA,1&#215;10^-2mol／L）、氯化钡（BaCl2,1&#215;10^-3mol／L）预处理对AM诱导的动脉环舒张作用具有明显的抑制效应。结论AM的血管舒张作用具有内皮依赖性,其与内皮NO的合成有关;同时AM可能涉及血管平滑肌细胞的钙激活钾通道和内向整流钾通道的激活。     

激活视黄醇类X受体对氧化型低密度脂蛋白诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7凋亡的影响

目的探讨激活视黄醇类X受体对氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡的影响及其机制。方法小鼠巨噬细胞系RAW264.7经氧化型低密度脂蛋白处理24h诱导凋亡,同时观察给予视黄醇类X受体特异性配体9-cisRA或SR11237对氧化型低密度脂蛋白诱导凋亡的干预作用,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪PI单染法和DAPI染色检测细胞凋亡,CM-H2DCFDA荧光探针测定细胞内活性氧浓度。结果RAW264.7细胞经氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理24h后细胞活力较对照组下降约60,细胞凋亡百分率较对照组升高约75,10-8mol/L和10-7mol/L9-cisRA及10-7mol/LSR11237能够显著抑制氧化型低密度脂蛋白诱导引起的细胞活力下降和凋亡(P<0.05)。给予氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)4h后细胞内活性氧水平显著升高约17倍以上,如联合给予9-cisRA(10-7mol/L)或SR11237(10-6mol/L),平均荧光强度分别下降约52和28,较氧化型低密度脂蛋白单独处理组有显著性差异(P<0.05)。结论激活视黄醇类X受体能够抑制氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡,其机制可能与减轻细胞氧化应激损伤有关。     

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺功能的影响

目的探讨重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体一抗体融合蛋白（rhTNFR：Fc）对大鼠慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型肺功能的影响。方法48只大鼠随机分为正常对照组、COPD组、rhTNFR：Fc干预组（简称干预组）及假干预组。单纯吸烟法建立COPD模型，干预组皮下注射rhTNFR：Fc进行干预，假干预组皮下注射空白模拟制剂。酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中的肿瘤坏死因子α（TNF—α）浓度。肺组织切片行苏木精一伊红染色观察形态学改变，定量测定肺平均内衬间隔和平均肺泡数，用小动物肺功能仪测定系统测定肺功能。结果COPD组0．3秒用力呼气容积占用力肺活量比值（FEV。／FVC）和呼气峰流速（PEF）[（65．1±8．4）％和（18．801．6）ml／s]显著低于正常对照组[（85．6±5．9）％和（47．2±7．3）mt／s]和干预组[（77．7±2．7）％和（38．2±3．3）mL／s]，假干预组FEV。／FVC和PEF[（65．4±9．8）％和（19．0-1-1．9）mL／s]显著低于干预组。COPD组血清中TNF-α浓度[（118±34）ng／L]显著高于正常组[（74±16）ng／L]和干预组[（79±14）ng／L]，假干预组血清中TNF—α浓度[（120±39）ng／L]显著高于干预组；COPD组BALF中TNF—α浓度[（155±28）ng／L]显著高于正常对照组[（79±28）ng／L]。COPD组肺平均内衬间隔[（77±29）×10^-6m／个]显著高于正常对照组[（44±7）×10^-6m／个]，其平均肺泡数[（232±97）×10^6个／m^2]显著低于正常对照组[（393±24）×10^6个／m^2]和干预组[（379±33）×10^6个／m^2]。假干预组平均肺泡数[（213±99）×10^6个／m^2]显著低于干预组[（379±33）×10^6个／m^2]。COPD组＋假干预组血清和BALF中TNF—α浓度与PEF和FEV。／FVC均呈显著负相关。结论TNF—α与吸烟大鼠的COPD形成有关，并影响其肺功能；rhTNFR：Fc对延缓肺功能损害具有一定的作用。     

血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂对胰腺癌细胞的抑制作用

目的探讨选择性血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂ZD7155在体外对胰腺癌细胞PaTu8988的抑制作用及其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定浓度为5×10^-11、5×10^-10。、5×10^9、5×10^-8、5×10^-7和5×10^6mol／L的ZD7155在同一时间点和5×10^-8mol／LZD7155在不同作用时点对人胰腺癌细胞系PaTu8988的影响，应用流式细胞仪检测ZD7155作用前后PaTu8988细胞周期变化，电镜观察ZD7155对PaTu8988细胞凋亡的影响以及ZD7155对PaTu8988细胞形态的影响。结果MTT显示ZD7155的抑制率随着浓度增大、时间延长而增加。浓度分别为5×10^-11、5×10^10、5×10^-9、5×10^-8、5×10^-7和5×10^6mol／L的ZD7155在与PaTu8988细胞作用48h后，对其的抑制率分别为9％、18％、30％、51％、60％和78％。相同浓度（5．0×10^-8mol／L）的ZD7155在与PaTu8988作用后12、24、36、48、60和72h对其抑制率分别为15％、25％、36％、51％、67％和85％。ZD7155对人胰腺癌细胞系PaTu8988细胞周期S期有明显抑制作用，而且呈剂量依赖性。经与ZD7155共同孵育的细胞电镜下可见细胞核染色质边集、凋亡小体形成，而且随浓度升高而愈明显，细胞形态学未发生改变。结论ZD7155在体外能抑制胰腺癌细胞生长和增殖，其作用机制可能与其抑制细胞周期S期以及诱导细胞凋亡有关，且无明显细胞毒性作用。     

缺氧诱导因子1α在非离子造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡中的作用及其机制

目的：应用缺氧诱导因子1α（hypoxia—induciblefactor-1α，HIF-1d）诱导剂氯化钴上调HIF-1α水平，观察其对非离子造影剂碘必乐诱导的HK-2细胞凋亡的作用和机制。方法：体外培养的HK-2细胞，分为阴性对照组、碘必乐阳性对照组（296mgl／ml，12h）、不同剂量及作用时间的氯化钴预处理与碘必乐共同作用组（氯化钻浓度为5、25、50、100μmol／L，分别预处理0h、1h、2h、4h、6h、12h）。通过流式细胞仪测定细胞凋亡率，Hoechst33258染色观察细胞捌1’：的形态学变化，WesternBlot方法榆测HIF-1α、Caspase-3和凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平。结果：（1）流式细胞仪检测结果表明，50μmol／L氯化钴预处理4h、6h和12h点与阳性对照组相比细胞凋亡率明显降低（10．95％，8．65％，8．61％vs22．06％，P〈0．05），其中6h、12h点较4h点对细胞凋亡的抑制作用更强（P〈0．05），而6h和12h点之间差异无统计学意义（P〉0．05）。100μmol／L与50μmol／L氯化钴预处理相同时间（6h、12h）细胞凋亡率差异无统计学意义（P〉0．05）；（2）Hoechst33258染色结果发现，与阳性对照组相比，50μmol／L氯化钴预处理6h和12h凋亡细胞明显减少，其它时间点与阳性对照组差异无统计学意义。（3）WesternBlot检测方法表明，50μmol／L氯化钻预处理1h以上即可引起HIF-1α表达增高，6h点表达最高（0．373&#177;0．032），12h点较前下降（0．285&#177;0．048）。与阳性对照组相比，50μmol／L氯化钴预处理4h、6h、12h，细胞内Caspase-3水平明显降低（P〈0．05，0．346&#177;0．037，0．294&#177;0．062，0．179&#177;0．051vs0．501&#177;0．039）。Bel-2表达水平明显增加（P〈0．05，0．275&#177;0.052，0．324&#177;0．046，0．337&#177;0．039vs0．099&#177;0．025）。结论：HIF-1α对非离子造影剂碘必乐诱导的人近端肾小管卜皮细胞凋亡有明显的抑制作用，其作用机制可能与下调Caspase-3和上调抗凋亡蛋白Bcl-2有关。     

9-顺式维甲酸抑制佛波酯诱导人单核细胞系THP-1向巨噬细胞分化

目的探讨视黄醇类X受体特异性激动剂9-顺式维甲酸对佛波酯诱导人单核细胞系THP-1向巨噬细胞分化的影响。方法体外培养人单核细胞系THP-1,经佛波酯诱导分化为巨噬细胞,同时给予9-顺式维甲酸对佛波酯诱导分化进行干预,通过相差显微镜观察细胞形态,MTT比色法检测细胞贴壁率,流式细胞仪检测与单核/巨噬细胞分化有关的细胞表面标志物CD11b和CD36的表达。结果9-顺式维甲酸干预后梭形、分支状细胞明显减少,与佛波酯单独作用组相比细胞贴壁率减少50%(P<0.01),细胞表面标志物CD11b和CD36分别减少50%和28%(P<0.01)。结论视黄醇类X受体特异性激动剂9-顺式维甲酸可明显抑制佛波酯诱导人单核细胞系THP-1向巨噬细胞分化。     

Oxidized low-density lipoprotein induces differentiation of RAW264.7 murine macrophage cell line into dendritic-like cells

Dendtritic cells (DCs) are potent antigen-presenting cells and have an important role in the pathogenesis of atherosclerosis. Recent data suggests oxidized low-density lipoprotein (oxLDL) promotes the transition of a differentiating monocyte to a mature dendritic cell. In this study, we examined whether oxLDL could induce the differentiation of mature macrophages into DCs. After 48 h treatment with oxLDL, RAW264.7 cells increased in cell size and exhibited dendritic morphology. At the optimal oxLDL dose (10 μg/ml), approximately 74% of RAW264.7 cells differentiated into dendritic-like cells. Flow cytometric analysis detected dendritic cell surface markers (CD83, CD40, CD86, MHC Class II, and CD1d), and their expression increased in a dose- and time-dependent manner. Moreover, oxLDL-treated RAW264.7 cells showed functional changes including reduced endocytic activity, increased allostimulatory activity, and IL-12 production. The findings of the present work demonstrate that RAW264.7 cells, incubated with oxLDL, acquire some dendritic cell features.     

氧化型低密度脂蛋白协同机械牵张力促进巨噬细胞ERK1/2活化

目的探讨机械牵张力、氧化型低密度脂蛋白单独或共同存在时对巨噬细胞ERK1/2磷酸化的影响。方法用墨汁染色法对体外培养的巨噬细胞株RAW 264.7进行鉴定;用硫酸铜氧化天然低密度脂蛋白获得氧化型低密度脂蛋白,并用琼脂糖凝胶电泳进行鉴定和定量。体外培养静息状态的巨噬细胞分别给予氧化型低密度脂蛋白、机械牵张力以及机械牵张力+氧化型低密度脂蛋白处理不同时间和强度,收集的细胞蛋白用免疫印迹法检测细胞内ERK1/2磷酸化水平。结果巨噬细胞株RAW 264.7可吞噬墨汁,镜下细胞内有墨汁斑块或墨汁颗粒存在,或者有淡染呈云雾状的黑色物质存在。硫酸铜可氧化天然低密度脂蛋白成氧化型低密度脂蛋白,琼脂糖凝胶电泳显示天然低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白泳道在血浆β脂蛋白处出现单一的条带,并且氧化型低密度脂蛋白的迁移率明显较天然低密度脂蛋白高。氧化型低密度脂蛋白和机械牵张力刺激可分别引起细胞内ERK1/2活性增加,呈时间和强度依赖性;与氧化型低密度脂蛋白组和机械牵张力组相比,氧化型低密度脂蛋白和机械牵张力共同处理可使ERK1/2磷酸化明显增加。结论氧化型低密度脂蛋白、机械牵张力单独作用均可激活细胞内ERK1/2,而两者共同存在时可协同促进细胞内ERK1/2信号。为高血压时巨噬细胞如何参与动脉粥样硬化形成的机制探讨提供有用资料。     

黄芪多糖对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的 探讨黄芪多糖(APS)对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响.方法采用体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导,建立泡沫细胞模型.用油红O染色在光镜下鉴定泡沫细胞形态及变化.再以不同浓度APS(0 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L)作用泡沫细胞24 h;以100 mg/L APS作用泡沫细胞不同时间(0 h、6 h、12 h、24 h、48 h)后,酶比色法检测泡沫细胞内胆固醇的含量.结果①巨噬细胞经ox-LDL诱导48 h后转化为泡沫细胞.②与对照组相比,10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L的APS作用于巨噬细胞源性泡沫细胞24 h后,细胞内胆固醇含量均明显减少(P＜0.01).③与对照组相比,100 mg/L的APS作用于巨噬细胞源性泡沫细胞6 h、12 h、24 h、48 h,细胞内胆固醇含量均明显减少(P＜0.01).结论①巨噬细胞经ox-LDL诱导后,有大量泡沫细胞形成.②APS可减少RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量.     

黄芪多糖对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出及PPARγ表达的影响

目的 以RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,观察不同浓度黄芪多糖（APS）对细胞内胆固醇流出及PPARγ表达的影响,探讨可能作用机制.方法 将RAW264.7细胞诱导分化为泡沫细胞,用油红O染色法鉴定.不同浓度APS作用泡沫细胞48 h后,液体闪烁计数仪检测胆固醇的流出率,并用RTPCR及ELISA测定PPARγ的基因及蛋白表达.结果 ①巨噬细胞经氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导48 h后转化为泡沫细胞.②与对照组相比,不同浓度APS干预组泡沫细胞的胆固醇流出率上升（P＜0.01）,且在一定浓度范围内呈剂量依赖性.③与对照组相比,不同浓度APS干预组泡沫细胞内PPARγ的基因表达上调（P＜0.01）,且在一定浓度范围内呈剂量依赖性.④与对照组相比,20、50、100 mg/L浓度APS干预组泡沫细胞内PPARγ的蛋白表达增加（P＜0.01）.结论 ①经ox-LDL诱导后,巨噬细胞分化为泡沫细胞,细胞内脂质大量增加.②APS促进巨噬细胞内胆固醇流出,可能与上调细胞内PPARγ的表达有关.     

丹参酮ⅡA对泡沫细胞胆固醇平衡的影响

目的通过体外细胞实验阐明丹参酮ⅡA对泡沫细胞胆固醇平衡的影响。方法体外培养小鼠RAW264.7细胞,以氧化型低密度脂蛋白诱导为泡沫细胞模型,并用不同浓度的丹参酮ⅡA进行处理,通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶比色法定量检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯的变化,荧光定量PCR和WesternBlot检测细胞中CD36、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、肝脏X受体α(LXRα)、过氧化体增殖物激活型受体α(PPARα)及PPARγ的mRNA和蛋白表达。结果 0～20 mg/L的丹参酮ⅡA对泡沫细胞增殖活力无明显影响,20 mg/L丹参酮ⅡA干预后,泡沫细胞内胆固醇酯与总胆固醇的比值显著降低,细胞内脂质累积减少,并上调AB-CA1、LXRα和PPARα的mRNA和蛋白表达,但对CD36表达无明显作用。结论丹参酮ⅡA能抑制泡沫细胞的形成,其机制可能是通过诱导PPARα、LXRα和ABCA1表达,促进胆固醇的外排。     

PPARs激动剂对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的 探讨PPARs激动剂吡格列酮对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响.方法 首先用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）将体外培养的RAW264.7巨噬细胞诱导分化为泡沫细胞,然后进行油红O染色,并在光镜下鉴定泡沫细胞形态及变化;再以不同浓度吡格列酮（0 μmol/L、5 μmol/L、10μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L）作用泡沫细胞24h,以30 μmol/L的吡格列酮作用0h、6h、12h、24 h、48 h;最后酶法检测泡沫细胞内胆固醇的含量.结果 ①50 mg/Lox-LDL诱导巨噬细胞48 h后分化为泡沫细胞.②与对照组相比,不同浓度吡格列酮作用后泡沫细胞内胆固醇含量均减少,差异有统计学意义（P＜0.01）,且呈剂量依赖性.③与对照组相比,30 μmol/L的吡格列酮作用6h、12 h、24 h、48 h后,泡沫细胞内胆固醇含量均减少,差异有统计学意义（P＜0.01）,且呈时间依赖性.结论 PPARs激动剂吡格列酮能够减少泡沫细胞内胆固醇含量,且呈剂量和时间依赖性。     

A study of bronchoalveolar lavage analysis in patients with diffuse panbronchiolitis--the results of low dose and long term erythromycin treatment

Cellular analysis including lymphocyte surface markers in BALF in 17 patients with DPB (14 male; 36 female) was performed. The total number of cells increased remarkably, especially the percentage of neutrophils (72.9 +/- 14.1%). On the contrary the percentage of alveolar macrophage decreased (15.4 +/- 8.9%). The CD4/CD8 ratio in DPB was also significantly decreased to 0.73 +/- 0.38% when compared with normal healthy nonsmokers. Five patients with low dose and long term EM treatment were analyzed. Total cell counts as well as the neutrophil percentage (7.3 +/- 4.0%) decreased significantly. On the other hand the percentage of alveolar macrophage increased to 76.6 +/- 0.6%, which was almost similar to those obtained from normal healthy volunteers. Therefore it is concluded that both clinical and BALF findings improved concordantly after EM treatment.     

A soluble factor produced by macrophages mediates the neurotoxic effects of HIV-1 Tat in vitro.

OBJECTIVES: There is now a strong consensus that the neurotoxic properties of HIV-1 are likely to be mediated by an indirect mechanism in which neurones are damaged by infected mononuclear cells. The aim of this study was to determine the ability of HIV-1 Tat to induce neurotoxic properties in a murine macrophage cell line RAW264.7. DESIGN: Simple culture systems using dissociated neurones may not provide the appropriate microenvironment in which to observe the complex cell-cell interactions that occur in the brain. We have therefore developed a more physiological model in which rat organotypic hippocampal slices are co-cultured with the murine macrophage cell line RAW264.7. Effects of Tat were studied by using a stable Tat expressing RAW264.7 cell line or by addition of recombinant Tat protein to co-cultures. METHODS: Organotypic hippocampal slices prepared from 8-10 day rat pups were grown on membrane inserts that were placed into six-well plates on which RAW264.7 cells were growing as an adherent monolayer. Cell death in the slices was assessed using propidium iodide. Specific astrocytic (glial fibrillary acidophilic protein; GFAP) and neuronal (microtubule-associated protein; MAP2) markers were visualized by immunocytochemistry. RESULTS: RAW264.7 cells that either expressed or were exposed to HIV-1 Tat protein, produced a soluble factor that caused profound degeneration in brain slice cultures involving loss of both glial cells and neurones. By contrast treatment of slice cultures with Tat in the absence of RAW264.7 cells was not neurotoxic. CONCLUSIONS: The neurotoxic properties previously attributed to HIV-1 Tat are likely to be mediated via induction of macrophage derived soluble factor(s).