幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagM基因的克隆、表达及抗体制备

目的:构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori) NCTC 11637 IV型分泌系统cagM(HP0537)全长编码基因的原核表达载体,分析其抗原性并制备抗体.方法:应用PCR技术从H.pylori基因组扩增 cagM基因片段,TA克隆后测序分析,并构建表达载体pET-28a(+)-cagM,转化 E.coli BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE及鉴定表达蛋白,表达蛋白以 Ni2+-NTA 柱进行纯化,用软件分析其抗原性后,免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA检测多克隆抗体效价.结果:测序结果表明cagM基因全长1 131 bp(基因库登录号为GU269568),编码376个氨基酸,与基因库中已知菌株J99,26695和G27的氨基酸同源性为98%～99%;诱导表达后经SDS-PAGE检测表明,在43 700处发现一条新生条带,Ni2+-NTA柱纯化后为单一条带,软件分析表明其抗原性较强,免疫家兔制备的多克隆抗体效价为1∶ 1.6×105.结论:首次成功克隆并表达了H.pylori pNCTC 11637 cagM基因,并制备了其抗体,为以后进一步研究其生物学功能以及H.pylori相关疾病的检测与治疗奠定了基础.     

幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagX基因的克隆及生物信息学特征预测

目的:构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H. pylori)NCTC 11637 IV型分泌系统cagX(HP0528)全长编码基因的原核表达载体。方法:用PCR方法从H.pylori基因组DNA中扩增cagX编码基因片段,将cagX克隆至pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α,再将其定向插入pET32a( )载体中,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析表达结果,并进行序列测定和生物信息学预测。结果:克隆幽门螺杆菌NCTC 11637cagX基因全长1569 bp(基因库登录号为EF608160),编码522个氨基酸,融合蛋白的相对分子质量约为80.5 kD。与基因库公布的其他H. pylori菌株基因序列的核苷酸同源性为96%~99%。预测结果显示H. pylori11637,26695,J99间二级结构有一定差异,但抗原性相同。结论:成功克隆并表达了H. pyloriNCTC 11637cagX基因,并对其生物学特征进行了预测,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。     

幽门螺杆菌cag1基因缺陷株的构建与鉴定

目的：构建幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）细胞毒素相关基因致病岛（cytotoxin associated gene pathogenicity island,cag PAI）中的第1个编码基因hp0520/cag1基因缺陷株,为进一步研究cag1基因在cag PAI中的功能奠定基础。方法：使用同源重组技术,通过PCR扩增出cag1基因两侧同源臂序列,酶切纯化后分别连接于带卡那霉素抗性标志的载体两端,构建成cag1基因自杀质粒。将该质粒通过电穿孔导入受体野生株中,通过抗性筛选与PCR验证得到cag1基因缺陷株,与人胃上皮GES-1细胞共培养后,与野生株比较,观察细胞形态变化。结果：成功敲除H.pylori cag1基因,获得cag1基因缺陷株;与野生株相比,cag1基因缺陷株破坏细胞的能力降低。结论：成功获得幽门螺杆菌cag1基因缺陷株;cag1基因缺失后H.pylori对GES-1细胞的毒力减弱。     

幽门螺杆菌及其CagA基因株感染与胃癌的相关性

目的 :探讨幽门螺杆菌 (Hp)及其 Cag A+ 基因株感染与胃癌的相关性。方法 :选取胃癌 4 6例 ,萎缩性胃炎 35例 ,正常对照 30例 ;应用组织学方法检测 Hp感染率 ,以 EL ISA法检测血清 Hp Cag A+ 基因株感染率 ;根据 L auren病理分型将胃癌组分为肠型 30例 (6 5 .2 % )和弥散型 16例 (34.8% )。结果 :胃癌组、萎缩性胃炎组的 Hp及其 Cag A+ 基因株感染率均显著高于正常对照组 (P <0 .0 5～ 0 .0 0 0 0 1) ,胃癌组 Hp Cag A+ 基因株感染率显著高于萎缩性胃炎组 (P <0 .0 5 )。结论 :萎缩性胃炎和胃癌的发生与 Hp及其 Cag A+基因株感染有关 ,动态随访 Hp Cag A+基因株的萎缩性胃炎患者可能有助于早期发现胃癌     

重视幽门螺杆菌耐药株的研究

现已公认,幽门螺杆菌(Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)与慢性胃炎、消化性溃疡病、ＭＡＬＴ淋巴瘤和胃癌密切相关。所以,Ｈｐ感染的治疗一直是胃肠病研究中最热门的课题。随着抗生素在Ｈｐ根除治疗中的广泛应用,Ｈｐ耐药株的发生率不断上升,以致当前Ｈｐ根除难度愈来愈大,特别是对甲硝唑的耐药株在迅速增加。应用不久的克拉霉素亦开始耐药,导致Ｈｐ根治的失败。要重视Ｈｐ耐药株的研究,首先应该寻找导致Ｈｐ耐药株产生的原因和探讨其发生机制,并且要研究如何避免和克服Ｈｐ耐药株的产生,这是在Ｈｐ根治研究中亟待解决的问题。一…     

幽门螺杆菌国内流行株动物模型的建立

目的建立国内幽门螺杆菌（Hp）流行株的动物模型,研究Hp流行株感染小鼠的胃黏膜改变,为进一步治疗提供更好的动物模型。方法60只SPF级C57BL/6小鼠,分为正常组和模型组,每组30只。模型组经口灌服VacAs1、CagA、iceA阳性的临床分离株,距末次灌胃后5、10、15、20、25、30周分6批处死,取标本行快速尿素酶试验,Giemsa染色法观察Hp在胃黏膜上的定植情况,HE染色观察小鼠胃黏膜的病理变化。结果正常组小鼠的胃窦、胃体及十二指肠黏膜的尿素酶试验,Giemsa染色结果均阴性,模型组在距末次灌胃后5、10、15、20、25、30周Hp定植率分别为60%、80%、100%、100%、100%、100%。至30周模型组慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠化、异型增生、胃癌发生率分别为100%、60%、0%、0%、0%。结论成功建立了HpVacAs1、CagA、iceA阳性的国内流行株感染C57BL/6小鼠的模型,并明确了其感染小鼠后各阶段的胃黏膜病理改变。     

幽门螺杆菌亚型cagA+基因株与胃癌的关系

目的：探讨幽门螺杆菌（Ｈｐ）细胞毒素相关基因Ａ阳性株（ｃａｇＡ＾＋株）与胃癌的关系。方法：通过多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测９２例胃癌和２４例浅表胃炎组织石腊标本Ｈｐ和ｃａｇＡ＾＋亚型株的感染。结果：①Ｈｐ感染在胃癌和慢性浅表胃炎间无差异,而ｃａｇＡ＾＋株感染是前者高于后者（Ｐ〈０．０５）;②Ｈｐ感染早期胃癌地进展期癌、胃窦癌高于贲门癌、肠型胃癌高于弥漫型癌（Ｐ〈０．０５）。然而只有肠型胃癌ｃａｇＡ＾     

内蒙古地区幽门螺杆菌iceA基因型的分布

目的:研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)iceA基因型与胃十二指肠疾病的关系,旨在寻找内蒙古地区Hp iceA基因型的分布特点。方法:从164例胃十二指肠疾病(包括CSG 32例,CAG 70例,PUD32例,GC 30例)患者的胃黏膜活检组织中分离培养并经系统鉴定确认为Hp者,传代培养2 d扩增细菌。用标准方法提取Hp基因组DNA,进行PCR扩增检测Hp iceA基因的表达情况。iceA基因与疾病关系的分析采用χ2检验,P<0.05认为有统计学意义。结果:在164例临床分离的Hp菌株中,iceA基因的检出率为56.71%,iceA 1基因的检出率为39.63%(65/164),iceA 2基因的检出率为30.49%(50/164),iceA1的检出率高于iceA 2,差异有统计学意义(P<0.05)。在各疾病组中,iceA 1检出率分别为CSG 40.63%,CAG37.14%,PUD 43.75%,GC 40.00%,iceA 2检出率分别为CSG28.13%,CAG28.57%,PUD31.25%,GC33.33%,iceA 1和iceA 2基因在各组疾病中的检出率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Hp临床分离株的基因型以iceA 1为主,Hp感染后其iceA基因型不能预示感染的个体将更有可能发生何种胃十二指肠疾病,iceA基因不能作为Hp毒力强弱的指标。     

不同幽门螺杆菌临床分离株的菌体蛋白

了解不同幽门螺杆蓖的菌体蛋白构成及其免疫印迹条带与胃十二指肠的疾病的关系。方法：将６株幽门螺杆菌临床分离株的菌体蛋白进行十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳，以免疫印迹技术分析其免疫原性；以６株Ｈｐ菌体收白的等量混合物为抗原，检测了６２例胃十二指肠疾病患血清抗Ｈｐ－ＩｇＧ的免疫印迹条带。     

幽门螺杆菌CagA基因的克隆

目的 为在大肠杆菌表达幽门螺杆菌ＣａｇＡ蛋白,建立ＥＬＩＳＡ法检测ＣａｇＡ抗体,克隆幽门螺杆菌ｃａｇＡ基因片段。方法 根据ｃａｇＡ基因序列,设计引物ＰＣＲ扩增ｃａｇＡ基因片段,用Ｔ－Ａ克隆的方法将ＰＣＲ产物克隆入质粒载体ｐＧＥＭ－Ｔ,并转化大肠杆菌ＪＭＩ１０９。结果 经蓝白斑筛选,ＰＣＲ及限制性内切酶酶切分析,获得ｃａｇＡ基因片段的克隆,序列测定结果与文献报道一致。结论 ＰＣＲ产物可采用Ｔ－Ａ法克     

幽门螺杆菌VacA基因型与耐药性分析

目的 探讨幽门螺杆菌(H.pylori)VacA基因型在各种胃肠疾病中的分布及其对常用抗生素的敏感性.方法 从胃十二指肠疾病患者胃黏膜标本中分离培养H.pylori,用PCR测定VacA基因型,并采用琼脂稀释法进行对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑3种抗生素的药物敏感性试验.结果 108株H.pylori菌株,VacA s1a阳性85株(78.7%),VacA s1b阳性22株(20.4%),VacA m1阳性29株(26.9%),VacA m2阳性77株(71.3%),VacA s1a/m2阳性66株(61.1%),未发现s2型菌株.其中,慢性胃炎患者VacA s1a阳性率为65.4%(34/52),消化性溃疡患者VacA s1a阳性率为90.0%(36/40),胃癌患者VacA s1a阳性率为93.8%(15/16).对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑的耐药率分别为18.5%、5.6%、65.7%,对阿莫西林耐药的20株菌株中,19株为VacA s1a型.结论 H.pylori菌株VacA基因型绝大多数为s1a/m2型,该型菌株存在于各种胃肠疾病中.本地区幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药率较低,对甲硝唑的耐药率较高,而对阿莫西林耐药的菌株多数为VacA s1a型.     

幽门螺杆菌的vacA基因亚型及其致病性

自 198 3年Warren和Marshall首先从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜活检标本中分离到幽门螺杆菌 (Helicobactepy lori,Hp)以来 ,已有大量研究显示慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌及胃黏膜淋巴组织淋巴瘤的发生发展与Hp感染密切相关[1,2 ] 。 1994年世界卫生组织将Hp列为 1类致癌物[3] 。Hp感染十分普遍 ,在发达国家人群中 ,Hp感染率为 3 0 % -5 0 % ,发展中国家为 60 % - 70 % ,但仅有 15 %Hp感染者出现临床症状。Hp感染者是否发病与Hp菌株的毒力、宿主遗传易感性、环境等诸多因素有关。随着分子生物学的迅速发展 ,人们已成功地测定出该菌的基…     

Barret食管与幽门螺杆菌Cag基因型的关系

目的探讨本地区Barret食管与Hp-CagA感染的相互关系。方法采用病例对照研究,病例组为Barret食管52例,对照组为同期普查的内镜检查正常的健康人群50例。结果Hp-CagA-IgG总的阳性率为32%,其中Barret食管组0.5%,健康人为20%,Barrett食管Cag-A阳性率低于健康人群（χ2=5.67,p〈0.05）。结论本地区Hp-Cag阳性的Hp感染与Barret食管可能相关。     

Barret食管与幽门螺杆菌Cag基因型的关系

目的 探讨本地区Barret食管与Hp-CagA感染的相互关系.方法 采用病例对照研究,病例组为Barret食管52例,对照组为同期普查的内镜检查正常的健康人群50例.结果 Hp-CagA-IgG总的阳性率为32%,其中Barret食管组0.5%,健康人为20%,Barrett食管Cag-A阳性率低于健康人群(X2=5.67,p<0.05).结论 本地区Hp-Cag阳性的Hp感染与Barret食管可能相关.     

幽门螺杆菌VacA基因型与胃疾病

目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)VacA基因型在各种胃肠疾病中的分布及关系.方法:从胃十二指肠疾病患者胃粘膜标本中分离培养H.pylori,PCR测定VacA基因型.结果:108株H.pylori菌株,VacA s1a阳性为85株(79%),VacA s1b阳性22株(20%),VacA m1阳性29株(27%),VacA m2阳性77株(71%),VacA s1a/m2阳性66株(61.1%),未发现s2型菌株.其中,慢性胃炎患者VacA s1a阳性率为65.4%(34/52),消化性溃疡患者VacA s1a阳性率为90%(36/40),胃癌患者VacA s1a阳性率为94%(15/16).结论:H.pylori菌株VacA基因型绝大多数为s1a/m2型,该型菌株存在于各种胃肠疾病中,无s2型.     

用PCR扩增16Sr RNA基因鉴定幽门螺杆菌的细胞壁缺陷型

目的：探讨幽门螺杆菌及其稳定L型的检测与鉴定方法。方法：用抗生素诱导、滤菌器过滤、非高渗透压培养基培养获得幽门螺杆菌稳定L型纯培养物,对幽门螺杆菌及其稳定L型进行16SrRNA基因的PCR扩增及序列测定。结果：幽门螺杆菌及其稳定L型的16SrRNA基因PCR扩增产物经1%琼脂糖电泳,在紫外检测仪下可见550 bp的DNA条带,测序结果经NCB I B last分析比对,基因同源性可达100%。结论：16SrRNA基因PCR检测可用于幽门螺杆菌L型及其他形态变异的菌种鉴定。     

幽门螺杆菌致病相关基因的研究

作为人的胃、十二指肠疾病发生发展中重要的致病菌,幽门螺杆菌(Hp)由于其特有的生存方式、多变的基因结构特征、感染结局的多样性、与人类共生和进化的密切关系等等,而成为当前研究的热点。Hp致病机理的研究、特别是Hp感染与胃癌发生相关的分子机制研究,是目前Hp研究的主要方面,也是近年生物学进展较快的领域之一。