γ-分泌酶抑制剂干预对鼠心脏成纤维细胞平滑肌肌动蛋白-α及MMP-1/TIMP-1表达的影响

目的:探讨γ-分泌酶抑制剂(DAPT)抑制Notch信号通路对心肌成纤维细胞(CFs)平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)的表达及细胞外基质(ECM)降解平衡变化的影响。方法:采用胰酶消化法和差速贴壁法分离和纯化SD乳鼠CFs进行体外培养,将CFs分为正常组(N组,培养时不加干预药物)和尾加压素Ⅱ组(U组,加UⅡ10~(-8) mol/L)和DAPT+尾加压素Ⅱ组(D组,同时加入UⅡ10~(-8) mol/L和DAPT 75μmol/L),培养干预48h后采用RT-PCR法测基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、α-SMA和Notch蛋白胞内段(Notch1)mRNA的表达;Western Blot检测α-SMA及Notch1蛋白的表达。结果:U组TIMP-1、α-SMA及Notch1的mRNA表达水平明显高于N组(均P0.01),MMP-1mRNA的表达和MMP-1mRNA/TIMP-1mRNA比值低于N组(均P0.01);D组TIMP-1、α-SMA、Notch1的mRNA表达以及α-SMA和Notch1蛋白的表达均较U组下调(均P0.01),MMP-1mRNA的表达和MMP-1mRNA/TIMP-1mRNA比值较U组上调(P0.01);但D组上述指标与N组相比差异无统计学意义。结论:DAPT可通过阻断Notch信号通路抑制尾加压素Ⅱ诱导的CFs表型转换,激活胶原降解途径,并可重调MMP-1/TIMP-1平衡,此作用有助于抑制心肌纤维化。     

Notch信号通路阻断对SH-SY5Y细胞α3神经型尼古丁受体水平的影响

目的研究Notch信号通路阻断对SH-SY5Y细胞α3神经型尼古丁受体(nAChR)水平的影响。方法用Notch信号通路阻断剂DAPT阻断细胞Notch信号通路后用Real Time PCR和Western印迹方法分别检测细胞中α3神经型尼古丁受体mRNA和蛋白水平的变化。结果 Notch信号通路阻断之后α3神经型尼古丁受体蛋白和mRNA表达都增加。结论 DAPT能抑制SH-SY5Y细胞Notch信号转导通路,Notch信号转导通路的活化可能与神经细胞α3神经型尼古丁受体的正常分泌及胆碱能信号传递密切相关。Notch信号通路阻断也可能通过减少γ-分泌酶导致SHSY5Y细胞中Aβ1⁴2/43的表达量减少,最终通过反馈调节导致α3神经型尼古丁受体水平表达增加。     

表达持续活化型ALK3抑制大鼠肝星状细胞活化

背景肝纤维化与肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSCs)上皮细胞间充质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)相关, TGF-β1在其中起着重要的作用,而BMP7能够拮抗TGF-β1,目前主要研究的是TGF-β/BMPs-Smad信号通路, ALK3属于BMPs的持续活化Ⅰ型受体,在肝纤维化分子研究机制中较少运用.目的观察大鼠HSCs中稳定表达持续活化型ALK3时Smad1磷酸化及纤维化相关基因E-cadherin、α-SMA、col1A2等表达情况,探讨BMP-7信号转导在肝纤维化发生发展过程中拮抗TGF-β1信号及其抗肝纤维化机制.方法建立体外培养大鼠HSCs (HSC-T6)持续活化型ALK3的稳定表达细胞株, MTT检测细胞的增殖; RT-PCR检测col1A2等相关分子mRNA水平; Western blotting检测Samd1、E-cadherin、α-SMA、col1A2蛋白表达和Smad1磷酸化;显微镜下观察细胞形态.结果稳定表达持续活化型ALK3的HSC-T6细胞增殖受到抑制, Smad1磷酸化显著升高,α-SMA, col1A2表达下调, E-cadherin表达上调.结论 BMP-7信号转导通过增强Samd1的磷酸化而拮抗TGF-β1致纤维化作用,抑制大鼠HSCs的活化.     

氧化苦参碱对转化生长因子-β1促肝星状细胞活化及跨膜信号转导影响

目的观察低浓度氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞(HSC)培养活化和转化生长因子-β1,(TGF-β1)促活化作用影响,并探讨该作用与TGF-β1受体后信号通路的关系.方法原代分离培养2d HSC,MTT法检测低浓度氧化苦参碱(0.25～8 mg/L)对HSG细胞毒作用(作用12 h)和增殖影响(作用48 h),或给予TGF-β1(5 ng/m1)和/(或)氧化苦参碱(2 mg/L)干预,相差显微镜观察HSC形态变化,分别以RT-PCR或Western blot法检测TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体、Smad 2/3、Smad 7以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和/(或)蛋白表达.结果氧化苦参碱(0.25～8 mg/L)对HSC无明显细胞毒作用,大于8 mg/L能抑制HSC增殖.氧化苦参碱(2 mg/L)抑制TGF-β1诱导HSC激活时的α-SMA表达和形态转化,伴随TGF-β1受体mRNA表达升高,Smad 7 mRNA表达上调及TGF-β1mRNA表达下降(与单纯TGF-β1处理组相比,分别上升1.25、0.87倍或下降1.92倍,P均＜0.05),但不影响TGF-β1Ⅱ型受体和Smad 3 mR-NA表达.Western blot检测Smad 2/3、Smad 7蛋白表达,与RT-PCR结果相似.氧化苦参碱对单纯培养激活的HSC有类似作用.结论低浓度氧化苦参碱(2 mg/L)上调Smad 7表达并抑制TGF-β1表达、上调TGF-β1Ⅰ型受体、恢复正常的TGF-β1跨膜信号转导,抑制HSC培养活化和TGF-β1促活化作用.     

外源性转化生长因子β1对大鼠原代肝星状细胞活化的影响

目的探讨大鼠原代肝星状细胞(HSC)体外培养过程中,不同时期外源性转化生长因子β1(TGF-β1)对其活化的影响及相关因素的变化.方法分离大鼠原代HSC,于无包被的塑料培养板上分别培养2,3,4,5,6,7 d时予TGF-β15 μg/L处理24 h,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,应用Western blot法检测处理前后细胞α-肌动蛋白(α-SMA)的变化,及活化过程中TGF-β1Ⅱ型受体(TβR-Ⅱ)的表达.结果HSC在体外培养过程中,不同培养时间对TGF-β1的刺激活化作用反应不同.TGF-β1处理后,对培养2,3,4,5 d HSC的活化有促进作用,以对培养第3天的细胞作用最明显,其α-SMA表达增加78.05%,而培养6,7 d的HSC的形态和α-SMA变化不明显.培养第7天的HSC比培养第3天的细胞TβR-Ⅱ表达增高(3.30±0.83 vs 1.55±0.38,P＜0.05).结论TGF-β1对处部分活化状态中某阶段细胞的活化具有促进作用.完全活化的细胞对TGF-β1的刺激活化作用不敏感,原因与TβR-Ⅱ的表达量无关.     

调控Notch信号对肝星状细胞活化的影响

目的 探讨肝星状细胞(HSC-T6)内是否存在功能激活的Notch信号分子以及调控Notch信号转导对HSC-T6活化的影响. 方法 用PCR方法检测Notch信号分子mRNA在HSC-T6细胞内的表达,TaqMan探针检测转化生长因子(TGF)β 1刺激HSC-T6后Notch信号分子的表达变化.细胞免疫荧光法检测Notch3和Jagged1在HSC-T6内的表达定位.用携带Notch3胞内域(ICD)的真核表达质粒pcDNA3.1-N3ICD和特异性干扰Notch3的siRNA(Notch3-siRNA)分别转染HSC-T6细胞,Western blot检测Notch3、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)和Ⅰ型胶原的表达变化.对数据采用t检验和方差分析. 结果 HSC-T6细胞内存在功能激活的Notch信号转导.TGF β 1(2.0 ng/ml)刺激HSC-T6导致Jagged1、Notch3和HES-1的mRNA水平明显上调,分别提高了2.9、3.2、2.2倍,F值分别为2543.482,287.982和1719.851,P值均＜0.01.pcDNA3.1-N3ICD转染后促使HSC-T6合成α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白增加,较对照组分别提高了5.8倍和4.5倍,t值分别为13.157和9.810,P值均＜0.01;相反,Notch3- siRNA明显抑制HSC-T6表达α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白,较对照组分别下降了约90％和84％,t值分别为19.863和10.376,P值均＜0.01.而且,Notch3-siRNA能拮抗TGFβ1诱导HSC-T6表达α-SMA和Ⅰ型胶原的作用.结论 Notch信号通路可能通过调控肝星状细胞的活化参与肝纤维化的形成,选择性地干预Notch3信号转导可能成为抗肝纤维化的新途径.     

外源性转化生长因子β1对大鼠原代肝星状细胞活化的影响

目的:探讨大鼠原代肝星状细胞(HSC)体外培养过程中,不同时期外源性转化生长因子β1(TGF-β1)对其活化的影响及相关因素的变化.方法:分离大鼠原代HSC,于无包被的塑料培养板上分别培养2,3,4,5,6,7 d时予TGF-β15 μg/L处理24 h,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,应用Western blot法检测处理前后细胞α-肌动蛋白(α-SMA)的变化,及活化过程中TGF-β1Ⅱ型受体(TβR-Ⅱ)的表达.结果:HSC在体外培养过程中,不同培养时间对TGF-β1的刺激活化作用反应不同.TGF-β1处理后,对培养2,3,4,5 d HSC的活化有促进作用,以对培养第3天的细胞作用最明显,其α-SMA表达增加78.05%,而培养6,7 d的HSC的形态和α-SMA变化不明显.培养第7天的HSC比培养第3天的细胞TβR-Ⅱ表达增高(3.30±0.83 vs 1.55±0.38,P＜0.05).结论:TGF-β1对处部分活化状态中某阶段细胞的活化具有促进作用.完全活化的细胞对TGF-β1的刺激活化作用不敏感,原因与TβR-Ⅱ的表达量无关.     

Notch通路对乙醛激活大鼠肝星状细胞株的增殖及转分化的影响

目的观察Notch通路对乙醛激活大鼠肝星状细胞株HSC-T6增殖并转分化为肌成纤维细胞的影响。方法 HSC-T6细胞常规培养及乙醛处理,加入Notch途径特异性阻断剂DAPT和TGF-β/ALK5途径特异性阻断剂SB-431542,分为空白组、单阻断组及双阻断组;MTT法检测细胞增殖;ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白(TIMPⅠ)、纤维黏连素(FN)的表达;RT-PCR检测Notch途径节点分子RBP-JK、Hes1及效应蛋白Smad3表达量;Western印迹检测细胞内效应蛋白α-SMA的表达。结果 MTT检测发现乙醛刺激明显增强HSC活性(P<0.05),阻断组明显下调(P<0.05);ELISA结果表明乙醛刺激后TIMP I和FN的表达明显上调(P<0.05),阻断组明显下调(P<0.05);RT-PCR检测Hes1乙醛刺激后上调明显(P<0.05),阻断组RBP-JK、Hes1及Smad3明显下调(P<0.05),双阻断组Hes1及Smad3下调更明显(P<0.05);Western印迹检测结果显示乙醛刺激明显促进α-SMA表达(P<0.05),阻断组明显下调(P<0.05),双阻断组下调更明显(P<0.05)。结论 Notch通路明显影响乙醛对肝星状细胞的增殖及转分化为肌成纤维细胞。     

以MNNG刺激GES-1细胞构建上皮间充质化细胞模型

[目的]探究N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基(N-methy-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)刺激胃黏膜上皮细胞GES-1构建上皮间充质化(EMT)细胞模型及其机制。[方法]用MNNG不同的浓度梯度处理GES-1细胞,光学显微镜观察细胞形态变化;CCK8检测MNNG体外处理GES-1后MNNG对GES-1细胞增殖的影响;Transwell检测细胞的迁移和侵袭能力;实时荧光定量PCR法和Western印迹法检测MNNG刺激GES-1细胞前后与EMT相关的钙粘蛋白(N-cadherin)和转录因子(Snail,Twist)的mRNA及蛋白水平的表达。RT-PCR检测STAT3抑制剂WP1066组与MNNG处理组N-cadherin及Twist的mRNA的变化,同时用Western印迹法检测STAT3/Snail信号通路中p-STAT3、STAT3及Snail的蛋白水平的变化。[结果]MNNG刺激胃黏膜上皮细胞GES-1的EMT化的最佳浓度为0.4μmol/L;刺激后的GES-1细胞变形,边界模糊,并呈岛样生长;最佳浓度的MNNG能明显促进GES-1细胞的增殖、迁移和侵袭;细胞内N-cadherin、Snail、Twist的mRNA表达及蛋白表达明显上调(P0.05),STAT3和P-STAT3的蛋白表达亦上调;STAT3抑制剂WP1066处理后P-STAT3及Snail蛋白表达均下调,N-cadherin及Twist的mRNA水平亦明显下调(P0.05)。[结论]MNNG可能通过STAT3/Snail信号通路刺激GES-1细胞,增加与EMT相关蛋白(N-cadherin)及转录因子(Snail,Twist)mRNA和蛋白的表达,成功构建了体外人胃黏膜细胞上皮间充质化模型。     

Notch信号通路调控巨噬细胞极化在大鼠纤维化型饲鸽者肺的作用

目的 探讨Notch信号通路调控巨噬细胞极化方向与大鼠纤维化型饲鸽者肺的关系。方法 选取正常SD大鼠(Ctrl组),通过观察病理、CT,检测纤维化标记物构建纤维化型过敏性肺炎大鼠模型(M组),予以γ分泌酶(DAPT)抑制Notch信号通路(M+DAPT组),通过荧光定量PCR技术检测阻断Notch信号通路对巨噬细胞极化方向的影响。结果 正常大鼠气道内滴注致敏原冻干粉20周后，病理及CT可见纤维化形成，且α-SMA、TGF-β1表达水平增高，证实造模成功；M组与Ctrl组比较：纤维化型过敏性肺炎大鼠肺组织Notch信号通路关键蛋白配体，DLL1、DLL4、JAG1、JAG2及受体Notch1、Notch2的蛋白表达水平增高；应用DAPT抑制Notch信号通路后DLL4、JAG1、JAG2及受体Notch1均下降(P<0.05);M组较Ctrl组比较：M1型巨噬细胞标记基因肿瘤坏死因子(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达量下降；M2型巨噬细胞标记基因甘露糖受体C2(Mrc2)、重组人精氨酸酶1(Arg-1)mRNA表达量升高(P<0.05),应用DAPT抑...     

肝星状细胞SSeCKS的表达及其在肝纤维化中的作用

目的 了解src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)在肝星状细胞(HSC)活化中的变化和作用.方法 (1)分离正常大鼠的HSC,以实时定量PCR检测其在体外培养过程中SSeCKS mRNA的表达变化,以蛋白质印迹法和细胞免疫荧光法检测HSC中SSeCKS蛋白的表达变化.(2)制作肝纤维化的大鼠模型,以免疫荧光法检测肝组织内SSeCKS和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化及定位.结果 初分离的HSC表达低水平的SSeCKS mRNA,经培养活化后SSeCKS的表达增强.在纤维化肝组织中,SSeCKS阳性细胞增多,阳性细胞多分布于肝窦周围,与α-SMA阳性细胞的分布一致.结论 在体外活化过程中HSC中SSeCKS表达增强.SSeCKS可能参与HSC在肝脏炎症和纤维化中的作用.     

瘦素对乙醛诱导肝星状细胞活化过程中Ⅰ型胶原及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的:观察瘦素对乙醛诱导肝星状细胞(HSC)活化过程中α-SMA和I型胶原表达的影响,旨在从体外探讨瘦素在酒精性肝病中的可能作用。方法:采用SD大鼠肝脏原位灌流消化的方法获得并原代及传代培养HSC,分乙醛(200μmol/L)处理组,瘦素(100nmol/L)处理组及联合处理组(乙醛200μmol/L加瘦素100nmol/L)。用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA(α-平滑肌肌动蛋白)mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞α-SMA表达量,ELISA法检测培养上清中TGF-β1及Ⅰ型胶原含量。结果:①乙醛处理组中TGF-β1和Ⅰ型胶原基因及蛋白表达量明显高于空白对照组(P<0.05),α-SMA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);②瘦素处理组TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);③联合处理组TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA表达量明显高于对照组(P<0.05),但TGF-β1、Ⅰ型胶原表达量与乙醛处理组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:在乙醛诱导肝星状细胞活化过程中,瘦素能协同上调α-SMA的表达;但对TGF-β1及Ⅰ型胶原的表达无影响,Ⅰ型胶原和α-SMA的表达可能是依赖于不同的调控机制来实现。     

五灵胶囊调节TGF-β/Smad信号通路蛋白对胶原Ⅰ、Ⅲ型表达的影响

目的探讨五灵胶囊(WL)调节肝纤维化大鼠肝组织及星状细胞(HSC)TGF-β/Smads信号转导蛋白对胶原Ⅰ和Ⅲ型(COL-Ⅰ、COL-Ⅲ)表达的影响.方法SD大鼠以高脂低蛋白饲养、饮用10%乙醇,皮下注射40%CCl4,隔4天注射1次,连续6周制备肝纤维化模型,灌胃给予WL 3.86 g/kg和秋水仙碱0.1 mg/kg治疗1月;另体外分离HSC,以不同剂量的WL与HSC培养24 h, 最后3 h加入TGF-β1 10 ng/ml.实验结束后镜检肝细胞变性和肝组织纤维化程度,同时ELISA法测定血清COL-Ⅰ、COL-Ⅲ和培养液COL-Ⅰ含量,RT-PCR检测肝组织COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGF-β1 mRNA的表达. Western blot检测肝组织及HSC内COL-Ⅰ、ProCOL-Ⅰ、LN、α-SMA、ERK、p-ERK、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2/3、Smad7蛋白表达.结果WL组大鼠肝细胞变性和肝纤维化程度明显减轻,血清COL-Ⅰ、COL-Ⅲ含量增加, COL-Ⅰ、COL-Ⅲ mRNA表达降低.Western blot结果显示,WL能明显下调肝组织α-SMA、LN、p-ERK、TβRⅠ、COL-Ⅰ、ProCOL-Ⅰ蛋白表达,对ERK、TβRⅡ、Smad2/3、Smad7蛋白表达无影响;显著下调HSC α-SMA 、TβRⅡ、p-ERK、Smad7表达,呈浓度依赖性抑制HSC分泌COL-Ⅰ.结论WL抑制肝纤维化大鼠肝组织COL-Ⅰ、COL-Ⅲ合成并增加COL-Ⅰ降解,其作用位点是下调肝组织和HSC TGF-β/Smad、Ras/ERK信号通路蛋白p-ERK、TβRⅡ表达.     

TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞间质转化及其机制探讨

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肺泡上皮细胞-间质细胞转化(EMT)过程及信号传导通路。方法体外培养肺腺癌细胞系A549细胞,以TGF-β1进行干预;采用Western blot免疫印迹法检测干预前后细胞标志物蛋白及信号传导蛋白P-Smad2/3、Snail1、Snail2的表达;采用RT-PCR检测干预前后细胞标志物mRNA表达;采用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化。结果 TGF-β1干预后,随着时间的延长,A549细胞上皮细胞标志物E-cad和CK19蛋白及mRNA表达下调(P0.05);间质细胞标志物α-SMA、Vimentin蛋白及mRNA表达上调(P0.05);信号传导蛋白P-Smad2/3、Snail1表达上调(P0.05);倒置相差显微镜观察TGF-β1干预后A549细胞由干预前的鹅卵石状变为梭形,如同肌纤维母细胞。结论 TGF-β1可诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化,其机制可能与P-Smad2/3、Snail1信号传导通路有关;TGF-β1可能是通过诱导肺泡上皮细胞间质转化的细胞效应,最终导致肺泡上皮细胞凋亡和纤维组织形成。     

EGFR在TGFβ1诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化中的作用

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)在转分化因子β1(TGFβ1)体外诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化中的作用。方法体外培养Ⅱ型肺泡上皮细胞系细胞-A549细胞,以TGFβ1刺激,倒置相差显微镜观察细胞形态学的变化;收集不同时段的细胞,应用RT-PCR检测TGFβ1干预前后E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达变化;Western blot观察E-cad、α-SMA和信号转导蛋白EGFR表达的变化。结果倒置相差显微镜观察到TGFβ1刺激后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌成纤维细胞;TGFβ1刺激A549细胞能导致E-cadherin mRNA和蛋白表达下调;α-SMA mRNA和蛋白表达上调;磷酸化EGFR(p-EGFR)表达上调。结论 TGFβ1能在体外诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转分化,其机制与EGFR信号通路的活化相关。抑制EGFR的活化可能为临床防治肺纤维化提供新的途径。     

胃泌素对胃癌细胞EMT和Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响

目的探讨高表达胃泌素(gastrin)对胃癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响及可能机制。方法用gastrin过表达质粒pcDNA3-gastrin及空载体pcDNA3.1转染胃癌细胞SGC-7901、MKN45,48 h后收集细胞蛋白,Western印迹检测鉴定gastrin表达,检测EMT相关标志物E-钙黏蛋白(cadherin)、N-cadherin、Snail及wnt/β-连环蛋白(catenin)信号通路相关基因wnt3α、β-catenin、c-myc的蛋白表达变化。结果在SGC-7901、MKN45细胞中成功过表达gastrin。与pcDNA3.1空载体转染组相比,pcDNA3.1-gastrin转染SGC-7901、MKN45细胞中上皮标志蛋白E-cadherin表达下调,间质标志蛋白N-cadherin、Snail表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);同时Wnt/β-catenin通路蛋白相关蛋白wnt3α、β-catenin及其下游基因c-myc的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达gastrin能够激活Wnt/β-catenin信号通路和促进胃癌细胞SGC-7901和MKN45发生EMT。     

姜黄素激活PPARγ下调肝星状细胞α-SMA和Ⅰ型胶原的基因表达

[目的]研究姜黄素抑制大鼠肝星状细胞（HSC）活化作用与过氧化物酶体增殖因子活化受体γ（PPARγ）信号转导途径之间的关系。[方法]肝脏原位灌流酶消化、Nycodenz密度梯度离心方法分离培养大鼠HSC，并使用姜黄素对细胞进行相应处理，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色分析法检测姜黄素对细胞增殖的影响。收集裂解细胞并抽提细胞总RNA，采用半定量RT-PCR检测姜黄素处理对α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原的基因表达水平的影响。[结果]姜黄素在10-50μmol／L范围内呈剂量依赖性抑制体外培养大鼠传代HSC的增殖，且能在基因水平显著降低α-SMA（P〈0．05）和Ⅰ型胶原的基因表达水平（P〈0．01）。这些作用均可以被PPARγ特异性阻断剂GW9662阻断。[结论]姜黄素抑制HSC增殖、活化和合成Ⅰ型胶原的作用依赖于PPARγ信号转导途径的激活。     

氧化苯砷体外对大鼠原代肝星状细胞活化的阻抑作用研究

目的探讨氧化苯砷(PAO)对肝星状细胞(HSC)活化的影响。方法采用密度梯度离心法提取SD大鼠原代HSC,在倒置显微镜下观察HSC形态的改变;以25、50、100、150和200 nmol/L浓度PAO处理活化的HSC-T6细胞,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法评估PAO的细胞毒性;分别以25、50、100 nmol/L浓度的PAO处理离体培养4 d的HSC 72 h,并设对照组,采用Western blot和Real-time PCR法检测各组细胞α-SMA和I型胶原m RNA和蛋白表达。结果原代HSC离体培养过程中α-SMA表达量逐渐升高,与培养1 d时(0.762±0.062)比,培养4 d时其α-SMA蛋白表达【(1.51±0.045),P0.05】显著升高;PAO在25~100 nmo/L浓度范围内对活化的HSC无明显的细胞毒性,但能浓度依赖性抑制活化的HSCα-SMA和I型胶原m RNA水平和蛋白表达。结论离体培养4 d时,HSC呈初始活化状态。PAO在25~100 nmol/L范围可浓度依赖性地阻抑离体培养的HSC的自发激活,提示PAO有潜力成为一类新型的抗肝纤维化药物。     

转化生长因子-β1促进miR-181a表达诱导肝星状细胞-T6细胞活化

目的观察转化生长因子-β1(TGF-β1)对miR-181a表达的影响,以及miR-181a对体外培养的肝星状细胞(HSC)-T6细胞的作用。方法 TGF-β1处理HSC-T6细胞后,检测miR-181a和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。miR-181amimics转染HSC-T6细胞后,Western印迹检测α-SMA和Ⅰ型胶原a2链(collagenⅠa2,ColⅠA2)蛋白表达,CCK-8计数法检测细胞增殖。结果 TGF-β1处理组细胞中miR-181a和miR-181b表达量较对照组细胞明显升高,miR-181a转染组细胞中α-SMA和ColIA2表达量明显高于对照组细胞,miR-181a对HSC-T6增殖无明显影响。结论在HSC-T6中,TGF-β1促进miR-181a表达,miR-181a可促进HSC-T6细胞活化和分泌胶原,进一步明确了TGF-β1促进HSC-T6活化的机制。