EGCG对裸鼠移植瘤中人口腔表皮样癌耐药细胞凋亡的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)增敏长春新碱(VCR)对人口腔表皮样癌多药耐药细胞株KBV200裸鼠移植瘤的抑瘤作用及与瘤细胞凋亡的关系.方法:采用KBV200接种于裸鼠皮下,建立耐药肿瘤模型;2周后,EGCG和VCR腹腔注射,联合处理2周;免疫组化法检测瘤组织Bcl-2,Bax的表达;TUNEL法检测细胞凋亡; 流式细胞仪进行细胞周期分析;透射电镜观察瘤组织细胞超微结构的改变.结果:EGCG联合VCR处理治疗后瘤重、肿瘤相对体积明显低于对照组和VCR组(P<0.05),且与EGCG的剂量呈正相关;低、中、高EGCG联合 VCR组Bcl-2的表达明显低于VCR组(P<0.01);低、中、高EGCG联合 VCR组Bax蛋白的表达明显高于VCR组(P<0.01);TUNEL法低、中、高EGCG联合 VCR组凋亡指数明显高于VCR组,与EGCG呈剂量依赖关系; 流式细胞技术显示低、中、高EGCG联合 VCR组G2/M期细胞高于VCR组(P<0.01); 电镜下三个联合用药组瘤组织中可见较多典型的细胞凋亡的形态学表现.结论:EGCG在体内具有增敏VCR对KBV200移植瘤的杀伤作用.机制可能是通过下调Bcl-2蛋白,上调Bax蛋白的表达,从而促进肿瘤细胞的凋亡.     

扶正祛邪中药复方含药血清抗白血病细胞HL60及HL60/VCR细胞的体外实验研究

目的通过体外实验观察扶正祛邪中药复方含药血清对急性早幼粒白血病细胞HL60及长春新碱诱导的耐药细胞株HL60/VCR细胞的生长抑制率。方法采用四氮唑蓝(MTT)比色法,选择白血病敏感细胞株HL60细胞以及长春新碱诱导的白血病多药耐药细胞株HL60/VCR细胞为靶细胞,观察不同浓度(5%、10%、15%、20%、25%)扶正祛邪含药兔血清对其的生长抑制率。结果扶正祛邪含药兔血清对HL60/VCR及HL60均有明显的抑制作用,且其对HL60/VCR的细胞毒作用呈剂量依赖性。结论扶正祛邪复方中药具有一定的抑制白血病细胞及耐药细胞的作用。     

肠复方对裸鼠肠癌原位移植瘤抑制作用研究

目的:研究肠复方对裸鼠肠癌原位移植瘤的抑制作用。方法:采用瘤块接种法建立裸鼠大肠癌原位移植瘤模型。将造模成功的100只裸鼠按随机数字表法分入模型组(A组)、肠复方低剂量组(B组)、肠复方中剂量组(C组)、肠复方高剂量组(D组)和氟尿嘧啶(5-Fu)组(E组),每组20只,各组内随机分为两组(A1、A2、B1、B2、C1、C2、D1、D2、E1、E2组)。模拟临床给药,分别干预4周。干预过程中记录裸鼠体重变化并观察裸鼠生长状态。A1、B1、C1、D1、E1组干预结束后处死裸鼠,采集标本,记录瘤质量,计算抑瘤率和肝转移率。A2、B2、C2、D2、E2组继续饲养,记录荷瘤裸鼠生存时间。结果:肠复方各剂量组裸鼠生长状态明显优于模型组和5-FU组;肠复方各剂量组和5-FU组裸鼠体质量优于模型组,有统计学差异(P0.01,P0.05);肠复方各剂量组和5-FU组瘤质重低于模型组,差异有统计学差异(P0.01,P0.05);肠复方各剂量组小鼠平均生存时间明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.01,P0.05);肠复方高、中剂量组及5-FU组肝转移抑瘤率明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:中药肠复方可以稳定患瘤裸鼠体质量、改善生长状态、降低瘤质量,同时中药肠复方能够延长患瘤裸鼠生存时间,降低肝转移率。     

抑制P13K/PKB通路逆转胃癌耐药的作用及其机制

目的 观察抑制PI3K/PKB信号通路对胃癌耐药性的逆转作用,并探讨其可能机制. 方法 通过体内外实验方法检测长春新碱(vincristine,VCR)及联合LY294002(PI3K/PKB通路抑制剂)埘SGC7901/VCR细胞的生长抑制作用;采用Western blot及RT-PCR分别检测细胞中PKB、磷酸化PKB的蛋白表达水平及MDR1、Bax、Bcl-2基因表达水平;流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果 LY294002能明显增加SGC7901/VCR细胞对VCR的敏感性,促进VCR诱导细胞凋亡,使其耐药指数从40.45降至8.50;LY294002可明显降低耐药细胞中磷酸化PKB的蛋白表达和MDR1、Bcl-2的基因表达水平(P<0.01),促进Bax的基因表达(P<0.01);体内实验显示联合用药组的裸鼠移植瘤大小明显小于VCR组(P<0.01). 结论 抑制PI3K/PKB通路可逆转胃癌耐药,其机制可能与降低耐药基因MDR1的表达以及调控相关凋亡基因Bax和Bel-2的表达有关.     

罗格列酮逆转人胃癌祼鼠移植瘤对丝裂霉素耐药的作用

目的观察PPARγ激动剂罗格列酮（ROS）能否逆转人胃癌SGC7901/VCR细胞裸鼠移植瘤对丝裂霉素（MMC）的耐药作用。方法建立人胃癌SGC7901/VCR细胞裸鼠移植瘤模型,将48只裸鼠随机分为6组：空白对照组（生理盐水0.2 mL灌胃）、MMC组（MMC 2.5 mg/kg腹腔注射）、ROS组（ROS100 mg/kg灌胃）、MMC＋ROS中剂量组（MMC2.5 mg/kg腹腔注射＋ROS 50 mg/kg灌胃）、MMC＋ROS高剂量组（MMC 2.5 mg/kg腹腔注射＋ROS 100 mg/kg灌胃）、MMC＋CSA组（MMC2.5 mg/kg腹腔注射＋CSA 50 mg/kg灌胃）。每组8只裸鼠;用药40天后,观察各组裸鼠体重和移植瘤体积变化,计算抑瘤率,绘制移植瘤的生长曲线;HE染色观察移植瘤的组织形态。结果处死前各组裸鼠体重差异无统计学意义（P〉0.05）;空白对照组、MMC组移植瘤瘤体积和抑瘤率差异无显著性（P〉0.05）,ROS组、MMC＋ROS中剂量组、MMC＋ROS高剂量组、MMC＋CSA组与空白对照组、MMC组比较移植瘤瘤体积和抑瘤率差异均有显著性（P〈0.05）。结论罗格列酮可抑制人胃癌SGC7901/VCR细胞祼鼠移植瘤瘤体生长,罗格列酮可部分逆转人胃癌SGC7901/VCR细胞祼鼠移植瘤对丝裂霉素的耐药性。     

左金丸通过ABCB1/P-gp途径对裸鼠人结肠癌多药耐药的抑制作用

目的:探讨左金丸对人结肠癌多药耐药细胞(HCT-116)/奥沙利铂(L-OHP)的抑制作用及其可能机制。方法:建立裸鼠人结肠癌皮下移植瘤耐药模型,随机分为空白对照(生理盐水)组、阳性对照(L-OHP)组、左金丸组,以及左金丸低、中、高剂量联合L-OHP组。分别给予相应药物连续干预28 d,每组留下半数荷瘤裸鼠观察生存期;其余裸鼠于末次给药后12 h,剥取肿瘤,测量、计算抑瘤率,并用免疫组织化学法检测肿瘤组织中P-糖蛋白(P-gp)表达,用qRT-PCR法检测多药耐药基因ABCB1的mRNA表达。结果:左金丸高剂量联合L-OHP组荷瘤小鼠的中位生存时间明显长于其他各组(P0.05);而在抑瘤率方面,左金丸低、中、高剂量联合L-OHP组的抑瘤率均显著高于L-OHP组(P0.01),且高剂量组优于低、中剂量组(P0.05),呈剂量依赖性。左金丸联合L-OHP干预后,肿瘤组织内P-gp和ABCB1基因表达明显降低(P0.01),并且随着左金丸浓度的增加,其抑制作用也加强,具有剂量依赖性。结论:左金丸可抑制人HCT-116/L-OHP结肠癌多药耐药细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,延长裸鼠的中位生存时间,其作用机制可能与下调肿瘤组织中P-gp和ABCB1 mRNA的表达有关。     

P388 / VCR 耐药细胞株裸鼠腹水瘤模型的建立

目的 建立P388/VCR细胞白血病多药耐药动物模型,为白血病耐药机制的研究及筛选有效逆转白血病多药耐药的药物奠定基础.方法 体外培养P388/VCR细胞,分别取对数生长的白血病细胞,在无菌条件下给裸鼠腹腔直接接种2.5×107 个/mL、1×107个/mL、5×106 个/mL细胞,0.2 mL/只,观察肿瘤、腹水的形成情况,收集腹水离心制成细胞悬液,检测其耐药倍数;并采取裸鼠外周血、腹水及胸骨骨髓涂片,吉姆萨染色,显微镜下观察细胞形态,按细胞形态计算白血病细胞百分比,了解肿瘤细胞的浸润情况.结果 （1）裸鼠腹腔注射P388/VCR耐药细胞量分别为2.5×107个/mL、1×107 个/mL、5×106 个/mL,其瘤块形成率分别为100％、100％、83.3％,平均形成天数分别是6.17 d、9.08 d、10.42 d,腹水形成率均为100％,平均形成腹水时间分别是5.42 d、6.58 d、8.25 d,接种细胞后平均存活时间分别是14 d、17.17 d、18.42 d;（2）MTT法测定体外培养P388/VCR细胞及其移植腹水瘤细胞的耐药倍数分别为7.6倍与5.7倍;（3）外周血、腹水及胸骨骨髓涂片均有白血病细胞浸润,每张涂片均有有核细胞且大于200个.结论 以P388/VCR细胞建立的裸鼠耐药腹水瘤模型,裸鼠外周血、腹水及骨髓全部被白血病细胞所浸润,且仍保持近似体外的耐药活性,为耐药机制和逆转研究提供了良好的体内模型.     

中药复方君子汤联合阿霉素逆转白血病K562/VCR细胞多药耐药及诱导凋亡的机制研究

【目的】探讨中药复方君子汤(FFJZ)联合阿霉素(DOX)逆转白血病K562/VCR细胞多药耐药及诱导凋亡的机制。【方法】采用CCK8法检测细胞耐药性及耐药性逆转作用;采用流式细胞术检测细胞总凋亡率和早期凋亡率;采用实时荧光定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测多药耐药基因1(MDR1)、P糖蛋白(P-gp)、乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的基因表达水平;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白表达。【结果】CCK-8检测结果显示:无细胞毒性的FFJZ(6 mg/m L)、DOX(5 mg/m L)单独用药可显著降低K562/VCR的半数抑制浓度指数(IC_(50))(P0.05),两药联合应用对K562/VCR逆转指数显著高于单独应用(P0.05)。流式细胞术结果显示:作用浓度为4、6 mg/m L的FFJZ联合DOX(5 mg/m L)能够提高K562/VCR细胞总凋亡率和早期凋亡率,与DOX对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。RT-PCR结果显示:FFJZ联合DOX应用可下调MDR1、BCRP、P-gp m RNA表达,与DOX对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);FFJZ联合DOX应用可上调Bax m RNA、下调Bcl-2 m RNA表达,与DOX对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。Western blot结果显示:FFJZ联合DOX与对照组比较,Bax蛋白表达显著上调(P0.05),Bcl-2蛋白表达显著下调(P0.05),与Bax、Bcl-2 m RNA表达一致。【结论】无细胞毒性的FFJZ、DOX对K562/VCR细胞耐药性均有逆转作用,两药联合应用具有明显的协同效应,其机制可能与其上调促凋亡基因Bax和下调抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。     

新加良附方联合5-Fu对裸鼠胃癌移植瘤Bax/Bcl-2表达的影响

目的观察新加良附方联合5-Fu对人胃癌细胞(SGC-7901)裸鼠移植瘤生长抑制作用及对肿瘤组织Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。方法建立移植性人胃癌细胞(SGC-7901)裸鼠移植瘤模型,随机分为模型对照组、5-FU组及新加良附方高、中、低剂量组、联合给药组。连续给药10d。计算肿瘤抑制率,检测Bax/Bcl-2蛋白表达。结果联合给药组抑瘤率为70.07%,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与5-Fu组和新加良附高剂量比较,联合给药组抑瘤率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);联合给药组上调肿瘤组织Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与5-Fu组和新加良附高剂量组比较,联合给药组Bax蛋白表达升高明显(P<0.05),Bcl-2蛋白表达下降明显(P<0.05)。结论联合给药组抑瘤率高于单独给药组,在下调Bcl-2、上调Bax表达方面优于单独给药组,显示两药协同作用的优势。     

复方浙贝颗粒联合阿霉素对K562/A02移植瘤抑瘤率影响研究

目的观察复方浙贝颗粒联合阿霉素对多药耐药细胞K562/A02裸鼠移植瘤抑制率的影响。方法将多药耐药K562/A02细胞接种于BALB/c-nu裸鼠腋前皮下构建移植瘤模型,分别测实验各组肿瘤体积,实验结束后处死小鼠,剥离肿瘤称重,并依据公式计算抑瘤率。结果复方浙贝颗粒各剂量组的肿瘤、瘤重与空白对照组比较,有统计学意义（P＆lt;0.05）;复方浙贝颗粒高、中剂量组肿瘤体积、瘤重与阿霉素对照组比较,有统计学意义（P＆lt;0.05）。结论复方浙贝颗粒（高、中剂量）伍用阿霉素能够明显增加阿霉素对多药耐药细胞（K562/A02）移植瘤杀伤的敏感性。     

复方浙贝颗粒联合顺铂对L1210/CDDP移植瘤小鼠的抑瘤作用及相关凋亡蛋白的影响

目的探讨复方浙贝颗粒联合顺铂(CDDP)对L1210/CDDP移植瘤小鼠的抑瘤作用及瘤体组织相关凋亡蛋白的影响。方法将急性淋巴细胞白血病多药耐药细胞株L1210/CDDP细胞接种于DBA/2小鼠腋前皮下构建多药耐药移植瘤模型,成模后按随机数字表法将移植瘤小鼠分成模型组、阳性药物(CDDP)组、高剂量CZBG联合CDDP组、中剂量CZBG联合CDDP组、低剂量CZBG联合CDDP组、中剂量CZBG组,分组当天给药;治疗结束后,计算实验各组的抑瘤率,应用免疫组织化学检测各组移植瘤的BCL-2及BAX蛋白表达情况。结果与模型组及顺铂组比较,各剂量CZBG联合CDDP组均能提高急性淋巴细胞白血病耐药细胞株L1210/CDDP移植瘤的抑制率(P0.05);与阳性药CDDP组比较,高剂量CZBG联合CDDP组具有较高的抑瘤率(P0.05)。与模型组及阳性药CDDP组比较,中、高剂量CZBG联合CDDP组能降低BCL-2表达(P0.05),提高BAX表达及BAX/BCL-2比值(P0.05)。结论 CZBG联合CDDP能提高急性淋巴细胞白血病耐药细胞株移植瘤的肿瘤抑制率,其机制可能是通过调节BAX/BCL-2凋亡途径来逆转多药耐药性,从而增加肿瘤细胞对药物的敏感性,起到协同增效的作用。     

吉祥草中甾体皂苷RCE-4对宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 观察吉祥草中甾体皂苷RCE-4对宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 采用传统方法分离鉴定RCE-4.将0.3 mL Caski(4×107/mL)细胞悬液接种于裸鼠右侧后腿背部皮下,建立宫颈癌移植瘤模型,然后按瘤体积大小随机分为模型组、紫杉醇(10 mg/kg)和RCE-4(25、50、100 mg/kg)组,1次/d给药,连续4周,末次给药的次日处死裸鼠,称量裸鼠体质量、瘤质量,测量肿瘤体积,计算抑瘤率.光镜下观察移植瘤组织形态学变化,TUNEL染色测定细胞凋亡率,免疫组化检测肿瘤组织中COX-2表达,荧光定量PCR测定移植瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达,计算Bcl-2/Bax值,Western blot检测移植瘤组织中Survivin蛋白表达.结果 RCE-4(25、50、100 mg/kg)可明显降低宫颈癌裸鼠移植瘤的体积和瘤质量(P ＜0.05,P＜0.01),上调Bax、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和COX-2、Survivin蛋白表达及Bcl-2/Bax值(P ＜0.05,P＜O.01).结论 RCE-4对宫颈癌裸鼠移植瘤的生长具有显著抑制作用,其机制可能与其上调Bax、Caspase-9、Caspase-3的表达和下调Survivin、Bcl-2、COX-2的表达有关.     

复方阿胶浆对移植性lewis肺癌组织凋亡蛋白Bcl-2/Bax表达的影响

目的 观察复方阿胶浆联合化疗对移植性lewis肺癌组织凋亡蛋白表达的影响.方法 构建lewis肺癌移植瘤模型,随机分为模型对照、环磷酰胺、复方阿胶浆、复方阿胶浆(大、中、小剂量)联合环磷酰胺共6组.给药结束后,取瘤组织石蜡包埋、切片,免疫组化法检测Bcl-2/Bax蛋白表达,图像分析软件测量平均光密度.结果 实验各组均能下调Bcl-2蛋白表达水平,上调Bax蛋白表达,降低Bcl-2/Bax比值,与模型对照组比较,有统计学意义(P＜0.01～0.05);与环磷酰胺组比,复方阿胶浆大剂量联合环磷酰胺可下调Bcl-2表达,复方阿胶浆中剂量联合环磷酰胺能够上调Bax表达,复方阿胶浆大、中剂量联合环磷酰胺可下调Bcl-2/Bax比值,均有统计学意义(P＜0.01～0.05).结论 复方阿胶浆可能通过影响Bcl-2/Bax蛋白表达,从而诱导肺癌细胞凋亡,伍用化疗可能增强化疗药物的抗凋亡效应.     

生脉注射液对裸鼠人胃癌SGC7901/VCR细胞移植瘤生长及P-gp表达的影响

目的 观察生脉注射液对裸鼠人胃癌SGC7901/VCR细胞移植瘤生长及P-gP表达的影响.方法 建立裸鼠人胃癌SGC7901/VCR细胞皮下移植瘤模型,将裸鼠随机分为生理盐水组、5-FU组、5-FU 异搏定组、5-FU 生脉组、生脉组,观察裸鼠生长状态,计算移植瘤平均瘤重及抑瘤率,检测P-gP表达.结果 5-FU TG生脉组瘤重、瘤体积与生理盐水组、5-FU组、生脉比较,P<0.05,均有统计学意义;抑瘤率(57.96%)明显高于5-FU组(11.66%);5-FU 生脉组瘤重与5-FU 异搏定组比较有统汁学意义(P<0.05),抑瘤率(57.96%)高于5-FU 异搏定组(27.56%).5-FU 生脉组P-gp表达与生理盐水组、5-FU组、生脉组比较,P<0.05,均有统计学意义;5-FU 生脉组与5-Fu 异搏定组比较,P>0.05,无统计学意义;单药生脉组与生理盐水组比较,P<0.05,有统计学意义.结论 以上实验结果表明生脉注射液能抑制裸鼠人胃癌SGC7901/VCR细胞移植瘤生长,降低P-gP表达.     

葛根素注射液逆转人胃癌裸鼠原位移植瘤多药耐药性的实验研究

目的研究葛根素注射液对人胃癌裸鼠原位移植瘤多药耐药性的逆转作用,并初步探讨其机理.方法50只BALB/c无胸腺裸鼠,建立人胃腺癌耐药细胞SGC-7901/VCR原位移植耐药模型,在模型建立次日随机分为生理盐水组、5-FU组、5-FU 葛根素组、5-FU 异博定组、葛根素组,共给药3周,10周后拉颈处死.比较各组局部浸润、远处脏器(肝脾)及淋巴结转移情况,并称取瘤重计算各组抑瘤率.应用免疫组化检测各组胃癌组织中P-gl及MlRP蛋白的表达情况.结果化疗组脏器转移率均较生理盐水组明显降低,有显著性差异(P＜0.05),葛根素组与生理盐水组相比无显著性差异.5-FU 葛根素组的抑瘤率(34.25%)高于5-FU组(11.02%),P-gp、MRP蛋白表达明显低于5-FU组,P＜0.05,但远处脏器转移率与5-Fu组相比无统计学意义.而葛根素组抑瘤率、远处脏器转移率与生理盐水组比较无统计学意义,但P-gp、MRP蛋白表达与生理盐水组比较有显著差异,P＜0.05.结论葛根素能够逆转裸鼠原位移植瘤的多药耐药性,其逆转机理与促使P-gp、MRP表达减少有关.     

肠复方对裸鼠人大肠癌原位移植瘤增殖和凋亡影响

目的:研究肠复方对人大肠癌增殖和凋亡的影响。方法:采用瘤块接种法建立人大肠癌裸鼠原位移植瘤模型,将造模成功的50只裸鼠随机分组至肠复方高、中、低剂量组,氟尿嘧啶(5-Fu)组和模型对照(NS)组,每组10只。给药4周后,取下瘤体。采用HE染色,在光镜下观察细胞凋亡形态,TUNEL法原位缺口末端标记检测细胞凋亡,免疫组化原位检测细胞增殖细胞核抗原PCNA表达状态。结果:与模型对照组比较,肠复方高、中、低剂量组与氟尿嘧啶组瘤体细胞均有不同程度凋亡,其中肠复方高剂量组、中剂量组,5-FU组与模型对照组差异有统计学意义(P0.01),肠复方低剂量组与模型对照组差异有统计学意义(P0.05)。与模型对照组相比,肠复方中剂量组、5-FU组PCNA的表达均有所降低,与模型对照组差异有统计学意义(P0.05)。肠复方高剂量组明显抑制细胞PCNA的表达,与模型对照组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:肠复方能够诱导肠癌原位移植裸鼠移植瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖,可能为肠复方抑瘤作用的机制之一。     

复方菝葜颗粒对非小细胞肺癌A549细胞Bcl-2和Bax基因表达的影响

目的:观察复方菝葜颗粒(compound rhizoma smilacinus granule,CRSG)对非小细胞肺癌A549细胞Bcl-2和Bax mRNA表达水平的影响,探讨CRSG抑制非小细胞肺癌的作用机制.方法:雄性SD大鼠30只,随机分为两组,每组15只.一组灌服复方菝葜颗粒,2次/d;另一组灌服等剂量的蒸馏水,第6次灌胃后的2 h提取血清.A549细胞株随机分为中药实验组、西药对照组、正常对照组,分别加入10%的含药血清、顺铂3 μg/mL和10% SD大鼠血清,培养48h后收集细胞,RT-PCR测定Bcl-2和Bax mRNA的表达水平.结果:各组细胞培养48 h后中药实验组、西药对照组细胞Bcl-2 mRNA表达下调,Bax mRNA表达上调, Bcl-2/Bax比值则显著降低,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01). 结论:非小细胞肺癌A549细胞存在Bcl-2 mRNA高表达、Bax mRNA低表达,复方菝葜颗粒干预后可使Bax mRNA表达量显著增加,Bcl-2 mRNA表达及Bcl-2/Bax比例显著降低,这可能是其对非小细胞肺癌发挥抑瘤作用的分子机制之一.     

联合转染Survivin和Bcl-2反义寡核苷酸对裸鼠胆囊癌生长的抑制作用

目的探讨联合转染Survivin和Bcl-2反义寡核苷酸（AsODN）对裸鼠胆囊癌生长抑制作用。方法建立裸鼠胆囊癌皮下移植瘤模型,选择36只裸鼠随机分为3组：对照组、正义寡核苷酸（sODN）组和AsODN组,裸鼠瘤体内分别注射PBS、Survivin和Bcl-2sODN、Survivin和Bcl-2AsODN,12d后处死裸鼠,测量瘤体体积及质量,计算抑瘤率;苏木精-伊红染色观察瘤体组织学变化;免疫组织化学方法检测Survivin及Bcl-2蛋白的表达。结果AsODN组裸鼠瘤体平均体积显著低于对照组、sODN组（F=24.469,q=8.802、7.569,P〈0.01）,其体积抑瘤率为55.53%,sODN组为9.90%;AsODN组裸鼠瘤体平均质量显著低于对照组、sODN组（F=25.376,q=3.168、20.737,P〈0.01）,其质量抑瘤率为56.24%,sODN组为8.47%。AsODN组瘤体中可见大量的凋亡细胞。免疫组化证实AsODN组Survivin表达明显降低,同sODN组相比差异有显著意义（F=15.103,q=5.883、7.191,P〈0.01）;Bcl-2表达亦明显降低,同sODN组相比差异有显著性（F=6.632,q=4.793、4.030,P〈0.05）。结论联合转染Survivin和Bcl-2AsODN可下调Survivin和Bcl-2表达,诱发细胞凋亡,从而抑制裸鼠胆囊癌种植瘤的生长。     

软坚散结方对肾透明细胞癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的:探究软坚散结方对肾透明细胞癌(ccRCC)细胞(7860细胞系)裸鼠移植瘤生长抑制作用及对肿瘤组织Notch及凋亡信号通路相关基因蛋白的影响。方法:通过成功建立7860细胞裸鼠移植瘤模型,分为模型组、DAPT组(γ-secretase抑制剂)、软坚散结方组,分别给药4周后,检测各组瘤重,瘤体积;HE染色观察肿瘤细胞的形态变化;免疫组化检测肿瘤组织中Notch1、NICD、Bcl-2、Bax蛋白表达;RT-PCR检测Notch1、Bcl-2、Bax mRNA含量。结果:与模型组比较,软坚散结方组、DAPT组均可显著降低裸鼠体内肿瘤质量,缩小肿瘤体积,降低Notch1、Bcl-2 mRNA表达和Notch1、NICD、Bcl-2阳性率,升高Bax表达及阳性率(P0.05);与DAPT组比较,软坚散结方组可降低裸鼠体内肿瘤质量、瘤体积、Bcl-2表达及NICD、Bcl-2性率,升高Bax表达及阳性率(P0.05),差异有统计学意义。结论:软坚散结方可抑制7860细胞裸鼠移植瘤生长,其机制可能与靶向作用Notch信号通路从而诱导细胞凋亡相关。     

红景天苷对人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响及对MAPK/ERK1/2信号通路的调控作用

目的:研究红景天苷对人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的作用,并研究其对丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK1/2)信号通路的调控作用。方法:培养人肺癌A549细胞制备浓度为3×10~7 mL~(-1)的细胞悬液,取200μL皮下注射于裸鼠右前肢腋窝皮下。待注射部位出现肿瘤结节时,为建模成功。挑出肿瘤结节大小均为5 mm左右裸鼠共40只,随机分为5组:阴性对照组、阳性对照组、红景天苷高剂量组、红景天苷中剂量组和红景天苷低剂量组,每组8只。阳性对照组裸鼠腹腔注射3 mg·kg~(-1)顺铂,每3天注射1次;红景天苷高剂量组、中剂量组、低剂量组裸鼠分别腹腔注射红景天苷50 mg·kg~(-1)、25 mg·kg~(-1)、12.5 mg·kg~(-1),每天1次;阴性对照组裸鼠注射等体积的生理盐水,每天1次。连续给药2周。取肿瘤组织称取质量,计算瘤体生长抑制率;通过苏木精伊红(HE)染色观察瘤体组织病理变化;通过末端标记法观察肿瘤细胞凋亡情况并计算凋亡指数;通过RT-qPCR检测肿瘤细胞中ERK1/2、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、c-Myc、Bcl-2和Bcl-2相关蛋白X(Bax)mRNA相对表达量;通过蛋白免疫印迹检测肿瘤细胞中ERK1/2、cyclinD1、c-Myc、Bcl-2和Bax蛋白表达水平及p-ERK1/2水平。结果:各组瘤质量比较显示:阳性对照组和红景天苷中剂量组比较,差异无统计学意义(P0.05),其余各组间比较,差异均有统计学意义(P0.05);其中组间两两比较显示:阴性对照组红景天苷低剂量组阳性对照组和红景天苷中剂量组红景天苷高剂量组。各组抑瘤率比较显示:阳性对照组和红景天苷中剂量组比较,差异无统计学意义(P0.05),其余各组间比较,差异均有统计学意义(P0.05);组间两两比较显示:红景天苷高剂量组阳性对照组和红景天苷中剂量组红景天苷低剂量组阴性对照组。HE染色结果比较显示:阴性对照组肿瘤组织可见明显异型细胞,细胞核分裂象多,细胞密度大且排列无序,阳性对照组和红景天苷各剂量组表现出核分裂象减少,细胞死亡,其中红景天苷高剂量组与其他组比较,细胞核分裂象最少,细胞密度最低、坏死最严重。各组细胞凋亡数和凋亡指数比较显示:阳性对照组和红景天苷中剂量组比较,差异无统计学意义(P0.05),其余各组间比较,差异均有统计学意义(P0.05),其中组间两两比较显示:红景天苷高剂量组阳性对照组和红景天苷中剂量组红景天苷低剂量组阴性对照组。RT-qPCR和蛋白免疫印迹结果比较显示,各组ERK1/2 mRNA和蛋白表达量比较,差异无统计学意义(P0.05);cyclinD1、c-Myc、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平及p-ERK1/2水平结果显示,阳性对照组和红景天苷中剂量组比较,差异无统计学意义(P0.05),其余各组间比较,差异均有统计学意义(P0.05),其中组间两两比较显示:阴性对照组红景天苷低剂量组阳性对照组和红景天苷中剂量组红景天苷高剂量组。Bax mRNA和蛋白表达水平结果显示,阳性对照组和红景天苷中剂量组比较,差异无统计学意义(P0.05),其余各组间比较,差异均有统计学意义(P0.05),两两比较:红景天苷高剂量组阳性对照组和红景天苷中剂量组红景天苷低剂量组阴性对照组。结论:红景天苷可抑制人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长,破坏肿瘤细胞结构,促进肿瘤细胞凋亡,推测其机制可能与抑制MAPK/ERK1/2信号通路,上调Bax mRNA和蛋白表达水平,下调cyclinD1、c-Myc、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平,降低p-ERK1/2水平有关。