188例慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗不同阶段耐药突变的分析

目的定量分析拉米夫定治疗不同时期耐药突变的变化规律,为及时调整治疗方案提供依据。方法将接受拉米夫定治疗的188例患者根据治疗时间进行分组,采用实时荧光PCR方法定量检测各组患者血清HBV DNA水平和酪氨酸-甲硫氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(YMDD)变异。结果拉米夫定治疗后血清HBV DNA水平>104cop ies/m l的患者中,治疗时间少于6个月者6例,其中1例发生突变;6个月~12个月者26例,其中14例发生突变;12个月~24个月者38例,其中26例发生突变;24~36个月者38例,全部出现YMDD变异。各组之间YMDD变异发生率比较差异有显著性(P<0.05)。结论对拉米夫定治疗6个月以上而没有达到病毒学完全应答的患者进行YMDD变异检测,有助于及时调整治疗方案。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者3年疗效观察

目的初步探讨LAM长期治疗HBeAg阳性和HBeAg阴性的两组慢性乙型肝炎(CHB)患者生化学、病毒学指标的变化及临床转归的差异。方法对63例诊断为CHB的患者均给予拉米夫定100mg,每日一次,进行3年的随访观察,动态检测患者的HBV血清标志物,HBV DNA,ALT、AFP、YMDD变异、B超等指标。结果拉米夫定治疗HBeAg阳性和HBeAg阴性的CHB患者3年时,HBeAg阳性组ALT复常率、HBV DNA阴转率、肝细胞癌发生率及HBsAg阴转率分别为64.7%、64.7%、0%、0%;HBeAg阴性组ALT复常率、HBV DNA阴转率、肝细胞癌发生率及HBsAg阴转率分别为70.4%、77.8%、0%、0%。两组间ALT复常率、HBV DNA阴转率、肝细胞癌发生率及HBsAg阴转率两组差异均无统计学意义(P0.05);HBeAg阳性组YMDD变异率(43.3%)显著高于HBeAg阴性组(18.2%),x2=4.720,P0.05;HBeAg阴性组肝硬化患者(37.0%)显著高于HBeAg阳性组(5.9%),x2=3.866,P0.05。结论拉米夫定治疗HBeAg阳性CHB患者较HBeAg阴性患者更容易发生YMDD变异,HBeAg阴性CHB患者较HBeAg阳性患者更易发生肝硬化。     

拉米夫定耐药变异株在急性HBV感染者中的流行调查

目的:调查YMDD变异株在急性HBV感染(AHB)中的流行情况,为指导AHB的防治提供依据.方法:收集HBV感染者321例(HBV DNA≥1.0×107copies/L),其中未开始治疗的AHB患者100例和拉米夫定治疗(100 mg/d)不同时期的CHB患者221例.采集外周血标本,用荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法(FH-PCR-MC)检测血清HBV YMDD及其变异,统计分析HBVYMDD变异在两组中的分布.结果:在AHB组,只检出HBV YMDD野生型,未检出变异型.而在CHB组,YMDD变异检出率为63.4%,其中YIDD占52.1%,YVDD占37.9%,YIDD+YVDD混合变异占10.0%:1年内、1-2年、2-3年、3-4年和4年以上疗程YMDD变异率分别为45%,66%,77%,75%和40%,YMDD变异检出率在两组中差异显著(X2=112.3,P=0.00).结论:目前在用拉米夫定治疗的CHB患者中仍有较高比率的YMDD变异株存在,但尚未发现该变异株在AHB患者中流行.     

HBeAg阳性和阴性慢性乙型肝炎患者YMDD的变异

目的研究YMDD变异在HBeAg阳性和HBeAg阴性乙型肝炎病毒（HBV）感染者中发生的情况.方法对我科接受拉米夫定治疗的247例慢性乙型肝炎患者进行定期随访,检测肝功能和HBV病毒学指标,利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）检测YMDD变异,利用实时定量PCR检测HBV DNA定量以及利用Abbott试剂检测HBV标志物,对比分析HBeAg阳性和HBeAg阴性患者中YMDD变异的发生情况.结果247例患者中共有42例出现YMDD变异,YMDD变异的累积发生率随着时间的延长逐年增加.与治疗前HBeAg阴性患者相比,治疗前HBeAg阳性患者YMDD变异的发生率明显高于治疗前HBeAg阴性患者.结论HBeAg阳性患者YMDD变异年累积发生率高于HBeAg阴性患者.     

拉米夫定抗乙型肝炎病毒感染中YMDD变异类型及时间研究

目的 研究拉米夫定抗乙型肝炎病毒(HBV)感染中P基因发生YMDD变异的类型和出现时间。方法 取拉米夫定治疗过程中HBV DNA由阴性再次转为阳性33例患者及HBV DNA始终保持阳性达一年或一年以上2例患者的血清,经PCR扩增HBV的P基因,对扩增产物进行测序及用3个限制性内切酶分析HBVP基因的YMDD变异。 结果 14例出现YMDD变异,其中6例YVDD变异,4例YIDD变异,3例YI/VDD混合变异,1例YI/MDD变异。变异出现时间平均为(11.07±3.65)个月,最短5个月,最长7个月。其中YIDD为(10.00±1.41)个月,YVDD为(11.67±4.41)个月,YI/VDD为(13.33±3.31)个月,三种变异类型的出现时间差异无显著性(F=0.543,P>0.05)。3例YMDD变异后拉米夫定加量至200mg/d,未能消除变异病毒。 结论 拉米夫定抗HBV感染后变异有多种形式,包括YIDD、YVDD、YI/VDD、YI/MDD。变异发生时间一般在治疗后(11.07±3.65)个月。变异类型与用药时间无关。     

多种方法研究乙型肝炎病毒多聚酶变异

以DNA测序结果为标准,采用寡核苷酸芯片技术和基于荧光定量聚合酶链反应(FQ—PCR)的UniArray技术分析24例使用拉米夫定治疗12个月以上的慢性乙型肝炎(CHB)患者YMDD变异的情况,检测HBV DNA和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,以探讨上述两种方法检测YMDD突变的价值及     

基因芯片技术检测在乙型肝炎病毒基因突变分析中的应用

目的:探讨DNA芯片在乙型肝炎病毒基因突变分析中的应用及临床意义。方法:用基因多态性检测芯片检测HBV DNA阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者血清前C区1896/1814位点、基本核心启动子区(BCP区)1762/1764位点及P区528/552位点突变情况,并与血清转氨酶、血清HBV DNA复制程度、血清e系统进行对比分析。结果:未接受抗病毒药物拉米夫定治疗的12例HBsAg( )、HBeAg( )、HBeAb(-)的患者血清中未检测到病毒变异,其他患者中未检测到P区基因变异;30例接受拉米夫定治疗48-96周后的HBV DNA阳性患者中,有19例患者检测到YMDD变异,并出现血清转氨酶升高,HBV DNA复制再度活跃。结论:前C区、BCP区突变较多的出现在HBeAb( )的患者中并与HBeAg的阴性表型相关,BCP区突变与HBeAg/HBeAb血清学转换密切相关,而P区528/552位点突变更多的出现在接受拉米夫定治疗后的患者中,与拉米夫定耐药相关且加重肝损害;基因芯片技术检测乙型肝炎病毒多位点变异对临床判断病情具有一定的参考意义。     

拉米夫定联合苦参素治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎70例

[目的]观察拉米夫定联合苦参素治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)的临床疗效。[方法]将140例CHB患者随机分为2组,治疗组70例给予拉米夫定联合苦参素治疗;对照组70例单服拉米夫定疗程均1 a。比较2组治疗后血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)复常率,HBeAg/抗-HBe转换率,HBeAg、HBV DNA转阴率,YMDD突变率。[结果]治疗组治疗后12个月血清HBeAg/抗-HBe转换率、HBeAg转阴率、YMDD突变率分别为35.7%、47.1%、12.9%;对照组分别为17.1%、27.1%2、8.6%,2组差异有统计学意义(P0.05),2组ALT、AST的复常率比较均P0.05,HBV DNA转阴率P0.05。[结论]拉米夫定联合苦参素治疗HBeAg阳性CHB疗效优于单用拉米夫定治疗。     

拉米夫定联合左旋咪唑涂布剂治疗慢性乙型肝炎的临床研究

目的:研究拉米夫定联合左旋咪唑涂布剂治疗慢性乙型肝炎的效果,HBV YMDD变异的发生率及停药后远期持续应答率.方法:随机将慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者分成治疗组及对照组,对照组患者单用拉米夫定,治疗组在应用拉米夫定基础上加用左旋咪唑涂布剂.治疗前、治疗结束时,采用统一方法检测两组患者的配套肝功能,HBV DNA定量,HBV-M;疗程中每3个月检测上述指标各1次并记入患者档案.对疑有HBV DNA变异者,采用统一方法检测YMDD变异及前C区变异.并对停药后的远期疗效进行追踪观察.比较两组的生化学应答,病毒核酸应答,病毒血清学应答,并评价其综合疗效,HBV YMDD变异率及远期持续应答率.结果:治疗组治疗结束时生化学、病毒核酸,病毒血清学完全应答率分别达87.7%、90.4%、41.3%;其综合疗效评价完全应答率也达27.4%;停药后6个月及1年持续应答率分别达62.75%、52.94%,HBV YMDD变异率为9.59%.结论:拉米夫定联合左旋咪唑涂布剂治疗慢性乙型肝炎疗效明显优于单用拉米夫定者,并可减少HBV YMDD变异率,值得临床进一步推广验证.     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎失败的相关因素分析

目的探讨拉米夫定治疗慢性乙型肝炎（CHB）失败的相关因素。方法回顾性分析224例拉米夫定治疗CHB患者的临床资料,根据其疗效分为失败组和成功组,比较两组年龄、性别、用药前ALT、HBV DNA水平、治疗24周后HBV DNA阴转、规则用药、HBeAg性质及HBV YMDD变异等因素。结果拉米夫定治疗失败96例,成功128例;与成功组比较,失败组治疗前ALT水平、治疗24周后HBV DNA阴转率、HBeAg阳性患者治疗中阴转和血清转换率低（P〈0.01）,治疗前HBV DNA水平和HBV YMDD变异率高,患者不规则用药（P〈0.01）,两组在年龄和性别间的差异无显著性意义（P〉0.05）。结论ALT、HBV DNA基线水平,治疗24周后HBV DNA阴转、用药规则,HBV YMDD变异及治疗后HBeAg性质改变均是影响拉米夫定治疗CHB疗效的相关因素。     

拉米夫定治疗前后乙型肝炎病毒P区基因的动态变化

目的研究拉米夫定治疗前后慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒P基因区的变异情况。方法从5例慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗前和治疗12个月的血清标本中，扩增目的片段，阳性结果双酶切后克隆至JM105感受态细胞。每份标本随机挑取20个阳性克隆，以错配聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析法检测YMDD基因序列，出现变异者进行双向测序。结果5例慢性乙型肝炎患者在拉米夫定治疗12个月后，其中2例HBVDNA为阴性，2例HBVDNA转阴后又转阳，测序结果提示出现M5521变异；1例HBVDNA始终阳性，和治疗前一样存在D553G的变异。结论D553G变异可能是慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗无效的原因之一，拉米夫定治疗后出现的乙型肝炎病毒基因组P区YMDD变异是抗病毒药物诱导的结果。     

Effect of SEN virus coinfection on outcome of lamivudine therapy in patients with hepatitis B

AIM: Interactions between hepatitis B virus (HBV) and other viral hepatitis infections are well known, whether the newly discovered SEN virus (SENV) has any effect on lamivudine antiHBV activity is unclear. Our aim was to clarify the effect on treatment outcome of coinfection with SEN virus in patients with hepatitis B during lamivudine therapy. METHODS: Nested polymerase chain reaction (PCR) amplification was used to detect SENV-D and SENV-H strains in serum from 45 patients with chronic hepatitis B treated with lamivudine 100 mg daily for 12 mo. HBV DNA load was detected with fluorescence quantitative PCR (FQ-PCR) and YMDD (tyrosine, methionine, aspartate, aspartate) motif mutation of HBV DNA was investigated with cDNA microarray. RESULTS: SENV DNA was detected in 5 of 45(11.1%) cases after 12 mo they received lamivudine treatment. SENV-D and SENV-H were 4.4% and 6.7% respectively. HBV DNA failed to respond to lamivudine therapy in 4 of 5 SENV coinfected patients while only 10 of 40 patients became SENV positive and the difference was statistically significant. Response of ALT and HBeAg to lamivudine had no significant difference between coinfection patients and single HBV infection ones. CONCLUSION: Coinfection with SEN virus in chronic hepatitis B patients may adversely affect the outcome of lamivudine treatment.     

YMDD mutations in patients with chronic hepatitis B untreated with antiviral medicines

AIM: To polymerase P region (YMDD) mutations of hepatitis B virus gene (HBV DNA) in patients with chronic hepatitis B (CHB) untreated with antiviral medicines and to explore its correlation with pre-c-zone mutations, HBV genotypes and HBV DNA level, and to observe its curative effect. METHODS: A total of 104 cases (38 cases in group of familial aggregation and 66 cases in group of non-familial aggregation) were randomly chosen from 226 patients with CHB who did not receive the treatment of lamivudine (LAM) and any other antivirus drugs within the last one year. Their serum YMDD mutations were detected by microcosmic nucleic acid and cross-nucleic acid quantitative determination, HBV genotypes by PCR-microcosmic nucleic acid crossELISA, HBV DNA quantitative determination and fluorescence ration PCR analysis, hepatitis B virus markers (HBVM) by ELISA. LAM was taken by 10 patients with YMDD mutations and its curative effect was observed. RESULTS: Twenty-eight cases (26.9%) had YMDD mutations, of them 11 cases (28.9%) were in familial aggregation group (38 cases) and 17 cases (25.8%) in nonfamilial aggregation group (66 cases) with no significant difference between the two groups. Twenty-seven point one percent (16/59) cases were positive for HBeAg YMDD mutations, and 26.7% (12/45) cases were negative for HBeAg and positive for anti-HBe. There was also no significant difference between the two groups. Different YMDD incidence rate existed in different HBV genotypes. HBV DNA level did not have a positive correlation with the incidence of YMDD mutations. LAM was effective for all patients with mutations. CONCLUSION: Wild mutant strains in HBV and their incidence rate have no significant difference between familial aggregation and non-familial aggregation. It may have no significant relationship between YMDD mutations and pre-c-zone mutations. HBV DNA level may not have a positive correlation with YMDD mutations. LAM is clinically effective for CHB patients with YMDD mutations.     

乙型肝炎病毒多聚酶变异与拉米夫定治疗反应

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）多聚酶酪氨酸－蛋氨酸－天氧氨酸－天冬氨酸（YMDD）基序变异对拉米夫定抗病毒疗效的影响。方法 对19例拉米夫定治疗（100mg/d）48周时血清病毒核酸阳性的慢性乙型肝炎患者,采用聚合酶链反应（ PCR）产物直接测序技术,检测其血清中HBV多取和酶（YMDD）变异情况,并观察其血清HBV DNA和丙氨酸转氨酶（ALT）水平。结果 在检出YMDD变异株的10 例患者（4例为YV^550DD型,均伴L^526→M突变,6例为YI^550DD型）,至52周为止,共5例出现HBV DNA突发（分枝DNA信号扩增法）,其中2例伴ALT再高。追踪其治疗前血清均未发生上述变异。而在未检出YMDD变异的9例患者中,1例出现DNA突发后又阴转,而另1例治疗过程中HBV DNA未阴转、ALT始终波动于正常值上下的患者,发现多聚酶其他部位的变异^473→R,D^477→N,D^480→N,L^491→M)治疗前后相同。结论 乙型肝炎病毒多聚酶（ YMDD）变异与药物诱导相关,发生变异者较无变异者疗效降低;在拉米夫定治疗过程中,该变异的检测将有助于其疗效监测。     

乙型肝炎病毒YMDD联合前C变异及其临床意义

目的：研究拉米夫定治疗过程中乙型肝炎病毒（HBV）前C区，P区YMDD基序变异及其对疗效的影响。方法：对5例拉米夫定（100mg/d)治疗过程中HBeAg血清转换而HBV DNA仍阳性的慢性乙型肝炎患者，采用聚合酶链反应（PCR）产物直接测序方法分析HBV前C、P区的基因序列，结果：5例患者前C区均发现有G1896A变异，其中3例HBeAg血清转换前未发现此变异，2例已有此变异，同时5例患者在拉米夫定治疗后检测出YMDD变异，变异类型均为M5521，其中有1例在出现M5521变异40周后变为M552V变异，有2例M5521联合L528M变异，5例患者中有1例治疗无反应，另4例在治疗过程中HBV DNA突发，结论：拉米夫定治疗过程中YMDD变异的出现可导致HBV DNA突发，而前C区G1896A变异可致HBeAgbe阴转，因此在治疗过程中出现HBeAg血清转换后需结合HBV DNA检测，排除前C区变异的可能。     

拉米夫定治疗乙型肝炎病毒B、C基因型疗效比较

目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)基因型对拉米夫定抗病毒疗效的影响。 方法 回顾调查235例拉米夫定治疗组和对照组患者的临床资料。 结果 135例患者接受拉米夫定抗病毒治疗,对照组100例。HBV优势基因型是B型和C型,拉米夫定治疗组有效率分别为92.9％和75.9％(x2=6.628,P<0.05),对照组有效率分别为9.8％和8.5％(P>0.05);YMDD变异发生率治疗组为3.6％和16.5％(x2=5.508.P<0.01)。结果发现,B基因型、丙氨酸氨基转移酶升高、HBV DNA低水平是抗病毒应答预测因素。 结论B基因氆HBV对拉米夫定的应答率优于C型,YMDD变异发生率低于C型,基因型是影响拉米夫定疗效和决定变异的重要因素之一。     

拉米夫定加肝络欣治疗慢性乙型肝炎疗效及对YMDD变异的影响

观察拉米夫定加肝络欣联合治疗慢性乙型肝炎的疗效及对慢性乙型肝炎病毒P基因(YMDD)变异的影响。收集乙型肝炎病毒(HBV)HBeAg、HBVDNA阳性的慢性乙型肝炎患者6 7例,分为拉米夫定加用肝络欣组(A组)、单用拉米夫定组(B组)。分别检测血清HBeAg、抗-HBe、HBVDNA ,肝脏生化指标和基因YMDD变异。在治疗5 6周时,拉米夫定联合肝络欣组HBeAg/抗-HBe转换率(39. 4 % ) ,优于拉米夫定组(P <0 .0 5 )。HBVDNA阳性率及YMDD变异率都比拉米夫定组低(P <0 . 0 5 )。拉米夫定联合肝络欣能在一定程度上提高治疗慢性乙型肝炎的疗效并可减少YMDD变异。     

YMDD motif mutations in chronic hepatitis B antiviral treatment naïve patients: a multi-center study

ObjectiveThis study aimed to determine the natural prevalence of variants of tyrosinemethionine- aspartic acid-aspartic acid (YMDD) motif in patients with chronic hepatitis B (CHB), and to explore its relation with demographic and clinical features, hepatitis B virus (HBV) genotypes, and HBV DNA levels.MethodsA total of 1,042 antiviral treatment naïve CHB patients (including with lamivudine [LAM]) in the past year were recruited from outpatient and inpatient departments of six centers from December 2008 to June 2010. YMDD variants were analyzed using the HBV drug resistance line probe assay (Inno-Lipa HBV-DR). HBV genotypes were detected with polymerase chain reaction (PCR) microcosmic nucleic acid cross-ELISA, and HBV deoxyribonucleic acid (DNA) was quantitated with real-time PCR. All serum samples underwent tests for HBV, HCV, and HDV with ELISA.ResultsYMDD variants were detected in 23.3% (243/1042) of CHB patients. YMDD mutation was accompanied by L180M mutation in 154 (76.9%) patients. Both wild-type HBV and YMDD variant HBV were present in 231 of 243 patients. Interestingly, 12 patients had only YIDD and/or YVDD variants without wild YMDD motif. In addition, 27.2% (98/359) of HbeAg-positive patients had YMDD mutations, which was higher than that in HbeAg-negative patients (21.2%, 145/683). The incidence of YMDD varied among patients with different HBV genotypes, but the difference was not significant. Moreover, the incidence of YMDD in patients with high HBV DNA level was significantly higher than that in those with low HBV DNA level.ConclusionMutation of YMDD motif was detectable at a high rate in CHB patients in this study. The incidence of YMDD may be correlated with HBeAg and HBV DNA level.     

乙型肝炎病毒YMDD及e抗原相关多重变异及其临床意义

目的 研究拉米夫定治疗慢性乙型肝炎期间HBVYMDD基序、影响HBeAg分泌的多重变异情况与临床的关系。方法 采用基因芯片技术对拉米夫定治疗9～30个月的慢性乙型肝炎患者进行YMDD基序、G1896A、A1814C、A1762T和G1764A(BCP双突变)单碱基变异检测。结果 102例慢性乙型肝炎患者拉米夫定平均治疗18个月时,22例发生YMDD变异,其中8例发生多重变异,包括G1896A3例、A1814C2例、G1896A A1814C、BCP双突变、BCP双突变 G1896A多重变异各1例,单纯YMDD变异和前5例联合变异均为HBeAg阳性,而后3例多重变异则为HBeAg阴性,其中1例多重变异继续治疗3个月后转变为单纯YMDD野生株阳性,同时伴有HBeAg的复阳。结论 拉米夫定治疗过程中存在YMDD及HBeAg相关多重变异的优势病毒株可能是HBVDNA复阳、同时伴有HBeAg阴转的原因之一,拉米夫定治疗过程中,HBeAg阴性时应监测其可能的相关变异。     

拉米夫定治疗过程中乙型肝炎病毒多聚酶变异的检测

目的建立拉米夫定治疗过程中乙型肝炎病毒多聚酶变异的检测方法,对该部位变异类型、发生率及其与病毒滴度的关系进行初步分析。方法拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者164例,在其中治疗64周时HBVDNA阳性的101份血清中,选择9份血清进行分析。设计台成一对引物SI、A1,采用聚台酶链反应法扩增得到包括YMDD基序（motif）的部分P区基因,片断长926bp,对扩增片断的部分校苷酸（约500bp）进行序列分析。HBVDNA定量用分枝DNA信号扩增祛。结果在9例患者中,发现YMDD（酪氨酸－蛋氨酸－天门冬氨酸－天门冬氨酸）基序变异的5例,占56％,其中M（蛋氨酸）－I（异亮氨酸）3例,M（蛋氨酸）－V（缬氨酸）2例,后者合并D（天门冬氨酸）→G（甘氨酸）变异1例。在2例血清HBVDNA低滴度（＜100MEq／ml）患者中未发现YMDD基序变异,7例中、高滴度（＞300ME／ml）患者中5例发现YMDD基序变异,占71％。结论拉米夫定是一种新的治疗慢性乙肝较有潜力的抗病毒药物,若能在治疗过程中对HBVDNA滴度变化及病毒变异发生进行监测,可指导临床的合理用药及联台用药。