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1.
目的:探讨β-转生化因子(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)对内毒素诱发的葡萄膜炎(endotoxin-induceduveitis,EIU)的预防作用,方法:用生物凝胶P-60层析的方法从人血小板提取化TGF-β用其处理内毒素对大鼠点眼或腹腔注射,进行临床观察和比较,结果:用生物凝胶P-60层析获得了高纯度的TGF-β用其点眼或腹腔注射,使EIU的发生的推迟约4小  相似文献   

2.
转移生长因子β1在牛眼小梁网的表达   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的研究转移生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF-β1)与开角型青光眼的关系。方法用异硫氰酸胍法提取24只新生牛眼小梁网的总RNA,将TGF-β33质粒导入大肠杆菌HB101中充分扩增、BamHI酶切后,片段以α-32-P-dATP标记成cDNA(complementaryDNA)探针,RNA斑点杂交,放射自显影法观察和测定牛眼小梁网的TGF-β1mRNA的表达。结果牛眼小梁网中有TGF-β1mRNA的表达。结论房水中的部分TGF-β1由小梁细胞分泌。此结果可以作为利用分子生物学手段研究TGF-β1mRNA的异常合成、活化、清除及与开角型青光眼病理改变间关系的基础。  相似文献   

3.
THEREPAIROFEYELIDDEFECTWITHFREEHARDPALATEMUCOSALAUTOGRAFTZhaoGuangxi赵光喜LiBing李冰AbstractObjectiveToinvestigatethefreehardpalat...  相似文献   

4.
用放射免疫分析测定正常人眼和各种视网膜增殖性疾病玻璃体中的胰岛素样生长因子(insulin-likegrowthfactorI,IGF-I)水平共67例。测前用酸酒精提取法去除IGF结合蛋白。结果显示:各疾病组玻璃体IGF-I水平较对照组有不同程度升高。增殖性糖尿病视网膜病变(proliferativediabet-icretinopathy,PDR)组和视网膜中央静脉阻塞(centralretinalveinocclusion,CRVO)组的IGF-I水平显著高于对照组。PDR组玻璃体IGF-I水平升高,与其血清浓度增高呈显著正相关。玻璃体内IGF-I水平增高可能在视网膜增殖疾病发生发展中起重要作用。我们对照了提取结合蛋白后与自然玻璃体直接测定的差异,结合蛋白显著影响IGF-I的测定。  相似文献   

5.
用原位杂交技术对正常及糖尿病大鼠眼组织的胰岛素样生长因子Ⅰ基因(insulin-like growth factor-I,IGF-I)进行了研究。IGF-I基因在眼组织的表达呈区域性,视网膜内核层及神经节细腻表达最强;脉络膜、视网膜色素上皮细胞及外核层次之;巩膜最弱,角膜未见表达信号。糖尿病眼组织IGF-湛因表达显著增强(P〈0.05或P≤0.01)。结果表明:整个眼球组织形成了一个IGF-I旁分  相似文献   

6.
转化生长因子β1对角膜碱烧伤后机体免疫细胞功能的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
刘春民  徐锦堂 《眼科研究》2000,18(2):101-103
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对角膜三烧伤机体巨噬细胞和淋巴细胞功能的影响。方法 Balb/c鼠单眼角膜2度碱烧伤,治疗级于模型制作后1小时内球后注射TGF-β150ng联合腹腔注射TGF-β1 30ng。动态观察腹腔巨噬细胞天噬功能和循环淋巴细胞对促分裂原刺激的转化功能,并与对照组进行对照组(P〈0.05),淋巴细胞转化在植物血凝素(PHA)刺激时,3周内显著了低(P〈0.05),但  相似文献   

7.
转化生长因子β诱导晶状体上皮细胞凋亡   总被引:6,自引:0,他引:6  
目的 探讨转化生长因子β(PGF-β)对体外培养的牛眼晶状体上皮细胞凋亡的作用。方法 MTT法测定细胞经不同浓度TGF-β作用后的增殖情况;以TUNEL技术研究TGF-β作用不同时间后细胞凋亡的变化。结果 TGF-β可显著抑制晶状体上皮细胞的增殖,抑制率高达35%。原位凋亡测定显示TGF-β作用30min至8小时可明显诱导晶体上皮细胞凋亡,阳性细胞核由边缘着色逐渐变为整个核均匀 以。结论 转化生长  相似文献   

8.
田蓉  于颖  陈有信 《眼科新进展》2014,(12):1105-1109
目的 研究结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)在人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞的增生、迁移和上皮细胞-间充质细胞转变(epithelialmesenchymaltransition,EMT)中的作用。方法 采用CCK-8细胞计数试剂盒测定400ng?mL-1CTGF处理后的ARPE-19细胞以及稳定表达CTGFsiRNA或对照siRNA的ARPE-19细胞的增生情况。采用细胞划痕实验评估CTGFRNAi对ARPE-19细胞迁移的影响,同时测定稳定表达CTGFsiRNA或对照siRNA的ARPE-19细胞中CTGF、FN、MMP-2和α-SMA的表达水平以评估CTGF对于TGFβ1诱导的EMT作用。结果 400ng?mL-1CTGF处理组APRE-19细胞与未接受CTGF处理组细胞之间以及CTGFsiRNA处理组与阴性对照siRNA组之间的细胞倍增时间均存在显著差异(均为P<0.05)。正常培养ARPE-19细胞组修复划痕的时间(≤48h)显著少于CTGFRNAi靶向干扰处理组(≥72h)。以TGF-β1诱导EMT,CTGFsiRNA处理组与阴性对照组比较,CTGF、α-SMA、FN和MMP-2表达均显著下调。此外,外源性CTGF可单独诱导ARPE-19细胞α-SMA表达增加。结论 CTGF能够促进ARPE-19细胞增生,而CTGFRNAi不但能够显著抑制其增生还可显著抑制由划痕实验引发的ARPE-19细胞的迁移。此外,CTGF可通过上调α-SMA表达水平而增强ARPE-19细胞对于TGF-β1的反应,CTGFRNAi可使TGF-β1诱导的EMT减弱。  相似文献   

9.
生长因子对培养人眼视网膜色素上皮细胞增殖的调控作用   总被引:7,自引:0,他引:7  
目的探讨生长因子对人眼视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞增殖的调控作用。方法建立人眼RPE细胞培养体系,利用3H-TdR掺入法和细胞计数观察表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic-fibroblastgrowthfactor,b-FGF)、胰岛素样生长因子(insulin-likegrowthfactor,IGF-I)对培养RPE细胞的作用。结果(1)EGF,b-FGF,IGF-Ⅰ与对照组比较,可明显增强人眼RPE细胞DNA合成6.6~12.2倍,增强能力为EGF>b-FGF>IGF-Ⅰ。(2)当生长因子联合作用时,可数倍明显增强3H-TdR掺入,能较单一因子更有效地刺激人眼RPE增殖。结论结果提示,生长因子的协同作用可能是增殖性视网膜病变发生的重要机理之一。  相似文献   

10.
为测定内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)及其激动剂S6b(sarafotoxin)、拮抗剂BQ123对兔眼睫状体组织环磷酸腺苷(cyclica-denosine-monophoshate,cAMP)的影响,运用内源性蛋白结合法测定兔睫状体组织cAMP的含量。结果:单独使用ET-1、S6b以及两者联合应用均使睫状体cAMP升高,且呈剂量效应关系;单独应用BQ123未引起cAMP改变,但ET-1与BQ123共同作用,可有效地拮抗ET-1的升高cAMP效应。结论:ET-1可使兔睫状体组织cAMP升高;兔眼睫状体上有ETA亚型受体。  相似文献   

11.
Yuan L  Wei H 《中华眼科杂志》1998,34(5):376-378
目的 确定培养的牛眼小梁网细胞中细胞层和培养液中蛋白多糖(proteoglcan,PG0单链的种类和构成比。方法 在第3代牛眼小梁网细胞层和培养液中分别掺入^3H葡萄糖胺,用4mol/L盐酸胍提取PG单链,依次行葡聚糖凝胶(sephadex)G-50、二乙氨乙基葡聚糖纤维素(DEAE-sephacel)、经共价交联的琼脂糖凝胶(sepharose CL-6B)的柱层析、碱水解等,放射测量获得PG的  相似文献   

12.
青光眼血流动力学变化及其相关因素研究   总被引:5,自引:0,他引:5  
用彩色多普勒血流成像(colordopplerfolwimaging,CDFI)技术研究青光眼病人眼血流动力学变化及检测指标的可靠性。方法:采用美国Acuson-128XP型彩多普勒超声仪测量发性开角型青光眼(primaryopen-angleglaucoma,POAG)25例,原发性闭角型青光眼(primaryangle-closeglaucoma,PACG)30例和正常人30例的眼动脉(oph  相似文献   

13.
目的 构建靶向大鼠G蛋白偶联受体91(Gprotein-coupledreceptor91,GPR91)基因的小发夹RNA(smallhairpinRNA,shRNA)慢病毒载体,探讨GPR91受体对高糖诱导下血管内皮生长因子(vascularendothlialgrowthfactor,VEGF)释放的调节作用。方法 设计合成4对针对大鼠GPR91(NM_001001518)的特异性单链寡核苷酸链,两端分别引入AgeI和EcoRI酶切位点,退火后得到小片段带黏性末端的双链DNA,克隆入慢病毒载体pGCSIL-GFP,行聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)和DNA测序鉴定重组体。将各慢病毒shRNA干扰载体和辅助包装载体共转染293T细胞,收集病毒颗粒并行浓缩滴度检测。将各慢病毒载体转染RGC-5细胞后,Westernblot法筛选有效的慢病毒shRNA干扰载体。使用45mmol?L-1的高糖刺激RGC-5细胞24h,用ELISA法观察干扰GPR91后VEGF的表达情况。结果 PCR及DNA测序结果均显示慢病毒载体pGCSIL-GFP-shGPR91构建正确;包装病毒颗粒后,pGCSIL-GFP-shGPR91-1、2、3、4组病毒浓缩液的滴度依次为1.5×109 TU?mL-1、1.5×109TU?mL-1、3.0×109TU?mL-1、3.0×109TU?mL-1。将慢病毒颗粒感染RGC-5细胞后,Westernblot检测显示NC组GPR91蛋白(0.60±0.08)空白组(0.62±0.07)的表达无明显差异(F=49.03,P>0.05)。而与空白组相比,4个慢病毒载体组(0.48±0.05、0.34±0.06、0.30±0.04和0.11±0.06)均能不同程度沉默GPR91的表达,差异有统计学意义(F=49.03,P<001),其中pGCSIL-GFP-shGPR91-3干扰效率最高。ELISA结果显示空白组、高糖组、高糖+NC组、高糖+pGCSIL-GFP-shG-PR91-3组VEGF蛋白表达分别为(25.63±4.52)pg?mL-1、(72.74±8.24)pg?mL-1、(71.68±8.31)pg?mL-1和(46.77±621)pg?mL-1,表明GPR91病毒干扰载体可显著降低高糖引起的VEGF分泌,差异有统计学意义(F=30.852,P<0.01)。结论 本实验成功构建了靶向大鼠GPR91的shRNA慢病毒载体并进行病毒颗粒包装。所构建的慢病毒载体能够降低高糖作用下的VEGF表达,为进一步研究GPR91基因在糖尿病视网膜病变中的作用机制和动物基因治疗奠定基础。  相似文献   

14.
体外培养牛眼小梁细胞表达转化生长因子-β及其受体蛋白   总被引:8,自引:2,他引:6  
从蛋白质水平了解体外培养牛眼小梁细胞是否表达转化生长因子β及其受体。方法采用Supervision法对体外培养第3代牛眼小梁细胞进行TGF-β1,TGF-βR免疫组化的检测。结果小梁细胞TGF-β,-β2和TGF-βRⅠ,RⅡ,RⅢ免疫组化染色的阳性信号分别位于胞浆内和胞膜上,阴性对照未见阳性信号。结论牛眼小梁细胞表达TGF-β,TGF-βR蛋白。较之猪眼小梁细胞,牛眼小梁细胞更适用于今后研究TG  相似文献   

15.
姜发纲  魏厚仁 《眼科研究》1997,15(2):104-106
目的研究酸性成纤维细胞生长因子(acidicfibroblastgrowthfactor,aFGF)对睫状体色素上皮(pigmentedepithelial,PE)细胞的影响。方法将体外培养的牛眼PE细胞置于含不同浓度aFGF的培养液内,用倒置相差显微镜观察细胞的形态结构,通过细胞计数及MTT比色分析测定细胞的增殖。结果在aFGF作用下,PE细胞形态良好、增殖旺盛,而以10ngml-1的浓度效力最佳。结论aFGF有助于在PE细胞体外培养中获得更多的实验材料,或在临床用以治疗房水分泌减少的眼科疾病。  相似文献   

16.
目的 探究转化生长因子-β2(transforminggrowthfactor-β2,TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelial,RPE)层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达变化及意义。方法 使用不同浓度TGF-β2刺激RPE细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Westernblot、RT-PCR检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白(fibronection,FN)、神经钙粘连蛋白(nervecalciumadhesionpro-tein,N-Cadherin)的表达。采用RT-PCR检测不同浓度TGF-β2及不同时间TGF-β2(5μg·L-1)刺激RPE细胞后miRNA-29b的表达。结果 TGF-β2刺激后的RPE细胞形态呈纤维化改变。在一定浓度范围内(1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1),随着TGF-β2浓度的增加FN、N-Cadherin及相应mRNA随之增加,1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1组与对照组(0μg·L-1)相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。TGF-β2在一定浓度范围内(0μg·L-1、1μg·L-1、5μg·L-1)以剂量依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1组与对照组(0μg·L-1)相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01),在TGF-β2浓度为5μg·L-1时miRNA-29b表达量最低。TGF-β2在一定时间范围内(0h、3h、6h、12h)以时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,3h、6h、12h、24h、48h组与0h相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 一定范围内TGF-β2以剂量和时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b的表达,为进一步研究miRNA-29b与TGF-β2在RPE细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础。  相似文献   

17.
张兰兰  刘琼  于健  唐晓娟  徐静 《眼科新进展》2016,(11):1011-1015
目的 本研究探讨转化生长因子-β(transforminggrowthfactor,TGF-β)体外刺激豚鼠巩膜成纤维细胞,观察豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmus-cleactin,α-SMA)的表达。方法 原代培养豚鼠巩膜成纤维细胞并鉴定,MTT法检测豚鼠巩膜成纤维细胞的增殖,培养液分别加入20ng·mL-1 TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3,分别于12h、24h、48h、72h,Real-timePCR检测α-SMAmRNA,Western-blotting和免疫荧光化学法检测其蛋白表达。结果 与对照组相比,TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性(P<0.05),其中TGF-β1促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖作用最强(P<0.05);TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3均增加α-SMA的表达(均为P<0.001),TGF-β3促进α-SMA表达作用最强(P<0.001)。结论 TGF-β通过调控细胞外基质合成参与调控巩膜组织重塑。  相似文献   

18.
目的 观察Bevacizumab(贝伐单抗)对转化生长因子(transforminggrowthfactor,TGF)-β2诱导下的人Tenon囊成纤维细胞转分化的抑制作用,探讨抗新生血管药物抑制青光眼术后滤过泡瘢痕化的机制。方法 用含体积分数10%胎牛血清的DMEM高糖型培养基对人Tenon囊成纤维细胞株进行体外常规培养和传代。实验分为空白对照组、TGF-β2处理组(加入终浓度为10μg?L-1的TGF-β2DMEM完全培养基)及Bevacizumab干预组(加入10μg?L-1的TGF-β2和1.0g?L-1的BevacizumabDMEM完全培养基),置于37℃、体积分数5%二氧化碳培养箱中培养48h,并分别应用细胞免疫荧光染色技术和WesternBlot实验检测Bev-acizumab对TGF-β2刺激下人Tenon囊成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA)表达的影响。结果 α-SMA蛋白主要表达在细胞质中,免疫荧光染色结果显示TGF-β2处理组可以见到α-SMA的荧光表达,而Bevacizumab干预组α-SMA蛋白表达受到抑制。WesternBlot结果显示空白对照组、TGF-β2 处理组及Bevacizumab干预组α-SMA蛋白相对表达量分别为0.630±0.038、1.130±0.071和0.340±0.033,Bevacizumab干预组α-SMA蛋白相对表达量低于空白对照组和TGF-β2处理组(均为P<0.05)。结论 Bevacizumab可明显抑制TGF-β2诱导下人Tenon囊成纤维细胞α-SMA蛋白的表达,抑制成纤维细胞表型转化。  相似文献   

19.
表皮生长因子对牛眼小梁细胞c—fos基因表达的诱导   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的研究表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)对小梁细胞的作用。方法应用分子杂交技术研究EGF对体外培养的牛眼小梁细胞c-fos基因表达的诱导和3H胸腺核苷酸(3H-thymidineincorparation,3H-TdR)掺入法观察细胞DNA的合成。结果小梁细胞的3H-TdR掺入率随着EGF浓度不同而变化,浓度为20~150ng/ml时,细胞掺入率随浓度增加升高(P<0.01)。与对照组相比,EGF刺激停止生长的小梁细胞0.5小时后,c-fos基因开始表达,1小时后达高峰,至2小时后消失。不同浓度EGF刺激小梁细胞1小时后,c-fos基因表达呈浓度依赖性。结论实验结果表明EGF刺激小梁细胞增殖或进入生长状态,可能与c-fos基因产物的信号传递作用有关。  相似文献   

20.
目的 检测组织激肽释放酶(tissuekallikrein,TKLK)、血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和可溶性细胞间黏附分子-1(solubleintracellularadhensionmolecul-1,sICAM-1)在糖尿病视网膜病变(diabeticretinopathy,DR)患者血清中的变化,观察TKLK在低氧条件下对人视网膜微血管内皮细胞(humanretinalmicrovascularendothelialcells,HRMECs)中VEGF和ICAM-1表达的影响。方法 收集2型糖尿病患者60例,按照DR分期标准将患者分为糖尿病无DR组(DM组)、非增生性DR组(NPDR组)和增生性DR组(PDR组),收集同期在本院体检的志愿者作为对照组,每组20例。ELISA法检测血清中TKLK、VEGF和sICAM-1的水平。体外HRMECs分别进行常氧和低氧培养,不同浓度重组TKLK处理后,检测细胞增殖、凋亡以及VEGF和ICAM-1的表达。结果 DM、NPDR和PDR组患者血清中TKLK、VEGF和sICAM-1水平明显高于对照组,4组总体差异有统计学意义(F=28.805,P=0.002;F=32.041,P=0.002;F=26.169,P=0.001);PDR患者血清中TKLK、VEGF和sICAM-1水平显著高于DM和NPDR组(均为P<0.001)。TKLK与VEGF(r=0.623,P<0.01)和sICAM-1水平(r=0.598,P<0.01)均呈正相关。10μg?mL-1rhTKLK可显著抑制低氧诱导的HRMECs增殖以及VEGF和ICAM-1的表达,并可促进细胞凋亡(P<0.05)。结论 TKLK通过与VEGF和ICAM-1相互作用而影响DR的进展。  相似文献   

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