黄芩苷对HL-60白血病细胞的诱导分化作用

目的： 观察中药单体黄芩苷(baicalin) 对人髓系白血病（AML）细胞株HL-60细胞的诱导分化作用。方法: 应用细胞形态学方法、细胞克隆形成试验、流式细胞术分析和NBT还原实验检测黄芩苷诱导HL-60细胞分化的能力。结果: 黄芩苷可诱导HL-60细胞向成熟阶段分化，低浓度黄芩苷可显著抑制HL-60细胞克隆的形成；HL-60细胞经黄芩苷处理后CD11b表达显著增高，CD33表达显著降低；NBT还原实验示黄芩苷处理组的分化成熟细胞阳性率明显高于未加药组。结论: 黄芩苷具有诱导HL-60白血病细胞向成熟粒细胞分化的作用。     

抗人DR5单克隆抗体——mDRA-6与顺铂协同杀伤白血病细胞HL-60作用研究

目的：观察抗死亡受体5（Death receptor 5,DR5）单克隆抗体--mDRA-6与顺铂（DDP）对HL-60细胞的协同杀伤作用.方法：DR5蛋白免疫BALB/c小鼠,融合筛选抗DR5杂交瘤细胞,制备抗DR5单抗--mDRA-6;流式细胞术测定顺铂对HL-60细胞表面DR5表达及细胞凋亡率;荧光显微镜下观察mDRA-6与顺铂协同作用下HL-60细胞形态变化;MTT法测定不同浓度的顺铂与mDRA-6对HL-60细胞存活的影响;琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6与顺铂联合对HL-60细胞DNA片段化的影响.结果：顺铂可诱导HL-60细胞表面DR5表达增加,mDRA-6与顺铂联用致HL-60细胞出现染色质浓缩、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成等细胞凋亡形态学变化;250 ng/ml的mDRA-6作用于HL-60细胞10小时,细胞凋亡率为16.61%;0.16 μg/ml的DDP作用于HL-60细胞10小时,细胞凋亡率为2.35%;二者联合作用后,HL-60细胞凋亡率增至57.10%;mDRA-6与DDP联合作用HL-60细胞,DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显“梯形”条带.结论：抗DR5单抗--mDRA-6与DDP对HL-60细胞具有强大的协同杀伤作用.     

佛波酯对人早幼粒白血病细胞系细胞分化和凋亡的诱导作用

目的: 探讨佛波酯(TPA)对人早幼粒白血病细胞系(HL-60)分化和凋亡的影响。方法: 利用TPA体外培养HL-60细胞, 依据形态学和细胞化学的变化, DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪等技术进行分析。结果: 7.2×10^-6 mol/L的TPA可使HL-60细胞出现向单核/巨噬细胞分化的形态特征, 随培养时间延长, 可见HL-60细胞核固缩、染色体断裂、凋亡小体形成等细胞凋亡的形态学改变。TPA处理24 h可使酸性非特异酯酶(α-NAE)的活性和四氮唑蓝(NBT)还原能力显著增强, DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的“梯子”状带纹。TPA处理0、24、48 h凋亡细胞百分数分别为(4.31±1.23)%、(15.10±1.31)%和(23.20±3.36)%, 在整个实验过程中细胞周期时相、Bcl-2蛋白含量无明显变化。结论: TPA可诱导HL-60细胞向单核/巨噬样细胞分化与凋亡, 且此凋亡过程可能与细胞周期时相、Bcl-2蛋白无关。     

乌苯美司下调c-myc表达与其增强全反式维甲酸诱导NB4细胞

目的： 了解氨肽酶抑制剂乌苯美司（bestatin）能否增强全反式维甲酸（ATRA）对NB4细胞的诱导分化作用，及此过程中NB4细胞c-myc mRNA表达水平的改变。 方法： MTT法检测药物抑制细胞生长的作用。流式细胞仪测细胞表面分化抗原CD11b及四氮唑蓝（NBT）还原实验检测NB4细胞的分化。RT-PCR检测细胞c-myc mRNA表达水平。 结果： 50 mg/L、75 mg/L、100 mg/L乌苯美司与10 nmoL/L ATRA联合处理72 h，均能明显增强NB4细胞的NBT还原能力，与10 nmoL/L ATRA组差异显著（P<0.05，P<0.01）。从48 h到96 h，100 mg/L乌苯美司时间依赖性地增强10 nmoL/L ATRA诱导NB4细胞的NBT还原能力，与相应时点10 nmoL/L ATRA组差异明显（P<0.01）。100 mg/L乌苯美司与10 nmoL/L ATRA联合应用72 h，NB4细胞CD11b表达率明显高于10 nmoL/L ATRA组（P<0.01）。50 mg/L、75 mg/L、100 mg/L乌苯美司与10 nmoL/L ATRA联合处理4 h，NB4细胞c-myc mRNA表达水平明显低于单用ATRA组（P<0.05，P<0.01）；药物联合应用各组NB4细胞的c-myc mRNA表达水平与NBT还原能力之间呈负相关（r=-0.917,P<0.05）。 结论： 乌苯美司可能通过下调NB4细胞c-myc mRNA的表达，从而增强ATRA诱导NB4细胞分化的作用。     

粒细胞集落刺激因子影响阿糖胞苷诱导HL-60白血病细胞凋亡的研究

目的：观察粒细胞集落刺激因子（G-CSF）对阿糖胞苷（Ara-C）诱导HL-60白血病细胞凋亡的调控作用。方法：应用细胞培养技术、细胞凋亡形态、二苯胺法DNA片段化定量和MTT法来观察HL-60白血病细胞的增殖、凋亡和细胞药敏的变化。结果：G-CSF有刺激HL-60白血病细胞的增殖的作用,其细胞集落为76.5±18.0,而对照组仅为46.5±13.5（P<0.01,n=5）。Ara-C（10 mg/L）作用于HL-60白血病细胞4 h,DNA片段率为32.3%±6.5%,同时加入G-CSF和Ara-C作用于HL-60白血病细胞4 h;DNA片段率为23.6%±7.2%,两组比较有非常显著性差异（P<0.01）。HL-60白血病细胞加入G-CSF后对Ara-C的IC₅₀（18.85±3.21）可看出比单用Ara-C（15.29±2.47）的敏感性低（P<0.05）。结论：G-CSF能刺激HL-60白血病细胞增殖;抑制Ara-C诱导HL-60白血病细胞的凋亡;能降低HL-60白血病细胞对Ara-C的敏感性。     

抗DR5单克隆抗体-mDRA-6对白血病细胞的凋亡诱导作用

目的:观察抗死亡受体5(DR5)单克隆抗体(mAb)-mDRA-6对白血病细胞的凋亡作用。方法:DR5蛋白免疫BALB/c小鼠,融合筛选抗DR5杂交瘤细胞,制备抗人DR5mAb-mDRA-6;荧光显微镜下观察mDRA-6作用下白血病细胞Jurkat、HL-60、K562的形态变化;MTT法测定不同浓度的mDRA-6对Jurkat、HL-60、K562细胞存活率的影响;通过FITC-Annexin V及PI标记细胞,以流式细胞术检测mDRA-6对Jurkat、HL-60、K562细胞凋亡率的影响。结果:mDRA-6导致Jurkat、HL-60细胞染色质浓缩、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;mDRA-6对Jurkat、HL-60细胞具有明显的杀伤作用,但对K562的杀伤作用较弱,25mg/L的mDRA-6作用12h,Jurkat、HL-60、K562细胞死亡率分别为88.76%,59.76%,5.18%。Annexin V及PI双染显示1mg/L的mDRA-6作用10h,Jurkat细胞凋亡率为86.06%,10mg/L的mDRA-6作用10h,HL-60细胞凋亡率为48.11%,但10mg/L的mDRA-6作用K562细胞10h,细胞凋亡不明显。结论:抗DR5mAb mDRA-6能够诱导白血病细胞凋亡,不同的白血病细胞株对mDRA-6的敏感性不同。     

天花粉蛋白诱导人类白血病细胞株HL-60细胞凋亡的研究

目的:研究单链核糖体失活蛋白天花粉蛋白(TCS)诱导人类白血病细胞株HL-60细胞发生凋亡的作用及放线菌酮(CHX)对此作用的影响。方法:采用流式细胞术分析及荧光显微镜观察研究TCS诱导HL-60细胞发生凋亡的情况。结果:流式细胞术分析表明TCS能够诱导HL-60细胞发生明显的凋亡现象,TCS(20mg/L)处理48h细胞凋亡百分率为48.7%±2.3%(x±s),明显高于对照组的凋亡率(6.3%±1.0%)(P＜0.05),而CHX(5mg/L)相同条件下诱导的凋亡率为65.3%±3.9%。TCS诱导的凋亡现象进一步为荧光显微镜的观察及DNA凝胶电泳所证实,TCS处理的细胞中有许多细胞呈现典型的凋亡细胞核形态改变,如染色体凝缩、核碎裂等;DNA凝胶电泳显示TCS处理的细胞呈典型的梯级格局。进一步研究表明预先以低浓度CHX(0.2mg/L)处理可显著加强TCS的作用,而在这个浓度下单独CHX并不诱导明显的细胞凋亡。TCS诱导HL-60细胞的凋亡呈时间和剂量依赖关系。结论:TCS能够诱导HL-60细胞发生明显的凋亡,CHX可加强这种作用。这些结果提示TCS诱导的凋亡不依赖于新的蛋白质合成。     

抗人DR5单克隆抗体mDRA-6对HL-60细胞的诱导凋亡作用

目的 观察抗死亡受体5(DR5)单克隆抗体nDRA-6对HL-60细胞的凋亡作用.方法 制备抗人DR5单克隆抗体mDRA-6;荧光显微镜下观察mDRA-6作用后HL-60细胞的形态变化;MTT法测定不同浓度mDRA-6在不同作用时间对HL-60细胞存活的影响;通过FITC-Annexin V及PI标记细胞,以流式细胞仪检测mDRA-6对HL-60细胞凋亡率的影响;琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6对HL-60细胞DNA片段化的影响.结果 mDRA-6导致HL-60细胞染色质浓缩、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;mDRA-6对HL-60细胞具有明显的杀伤作用,24ng/mL mDRA-6作用HL-60细胞10 h,细胞死亡率达21.2%;1μg/mL的mDRA-6作用8 h,可使HL-60细胞死亡44.1%;Annexin V及PI双染显示,10μg/mL mDRA-6作用2 h,HL-60细胞的凋亡率达48.1%;20μg/mLmDRA-6作用HL-60细胞3 h,DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显的"梯形"条带.结论 抗DR5单克隆抗体mDRA-6具有诱导HL-60细胞凋亡作用.     

重组人粒细胞集落刺激因子对HL-60细胞影响的研究

目的研究重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对HL-60细胞的影响。方法瑞氏染色观察细胞形态的变化,吖啶橙/溴化乙锭双染色观察凋亡情况,NBT和CD13测定观察成熟分化情况,MTT实验观察增殖活性。结果加入rhG-CSF 48 h后,HL-60细胞凋亡率升高,增殖活性下降,而且随着rhG-CSF浓度的升高,这种作用更加明显。成熟分化特征变化不明显。结论rhG-CSF有促进HL-60细胞凋亡并抑制其增殖的作用。     

维生素K3对HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的:观察维生素K₃(VK₃)对HL-60细胞凋亡的诱导作用。方法:通过形态学、DNA电泳、Annexin V标记法检测VK₃作用后HL-60细胞的凋亡发生情况。结果:2、5、10、20 μmol/L的VK₃作用于HL-60细胞48h后凋亡发生率分别为8.76%、9.7%、18.54%、75.4%;10 μmol/L的VK₃作用于HL-60细胞24、48、72、96 h后凋亡发生率分别为11.35%、18.54%、21.22%、37.54%。结论:VK₃能诱导HL-60细胞发生凋亡,并具有一定的量效和时效关系。     

Study on the synergic effect of all-trans retinoic acid combined with IFN-alpha on the proliferation and differentiation of HL-60 cells]

AIM: To investigate the synergic effect of all-trans retinoic acid (ATRA) combined with IFN-alpha on the proliferation and differentiation of HL-60 cells. METHODS: HL-60 cell's differentiation and apoptosis were assessed by NBT reduction and TUNEL in situ apoptosis assay kit. CYP26 mRNA expression was detected by in situ hybridization assay kit. Metabolism of ATRA was measured by high performance liquid chromatography. RESULTS: Either IFN-alpha or ATRA induced HL-60 cell differentiation and apoptosis, which was enhanced when combining ATRA with IFN-alpha. The level of ATRA and the expression of CYP26 were higher in HL-60 cells treated with both ATRA and IFN-alpha than in the cells treated with ATRA alone. CONCLUSION: ATRA has remarkable synergic effect with IFN-alpha on HL-60 cells, probably because IFN-alpha inhibits CYP26 mRNA expression and thus reduces the metabolism of ATRA.     

硫化砷诱导HL-60细胞凋亡中端粒酶活性和hTERT mRNA表达的改变

目的：探讨硫化砷在诱导急性非淋巴细胞白血病(APL)细胞株HL-60凋亡的同时，对端粒酶活性的影响及作用机制。方法：采用PCR—ELISA法测定端粒酶活性；半定量RT—PCR检测hTERT mRNA的表达；流式细胞仪分析细胞周期、细胞凋亡及CD11b表达。结果：用0．3～0．6mg/L的硫化砷作用72h，不能诱导HL-60细胞凋亡，将剂量增至1．5～3．0mg/L时，凋亡细胞的比率逐渐增高，同时伴随HL-60细胞端粒酶活性和hTERT mRNA表达受抑。随着硫化砷浓度的增高，HL—60细胞在G2／M期的比率渐增高。3．0mg/L的硫化砷作用72h，HL-60细胞CD11b的表达由1．27％升至6．07％，结论：硫化砷在诱导HL-60细胞凋亡的同时，下调其端粒酶活性。G2／M期细胞比率的增高可能与端粒酶活性降低相关。高浓度硫化砷72h可轻度诱导HL—60细胞分化。     

二烯丙基三硫诱导人髓样白血病HL-60细胞活性氧产生及其细胞毒性作用

目的：探讨二烯丙基三硫(DATS)诱导人白血病HL-60细胞产生活性氧(ROS)及其细胞毒性作用。方法: 用浓度为50、100、150、200 μmol/L DATS处理HL-60细胞1、3、6、12、24 h后，流式细胞计数法检测HL-60细胞内的ROS水平，NBT还原实验分析NADPH氧化酶的活性，分别用NADPH氧化酶特异性阻断剂apocynin与抗氧化剂NAC（N-acetyl-L-cystein）预处理30 min后，观察DATS对HL-60细胞产生活性氧的影响，分光光度法检测细胞质膜氧化产物丙二醛（MDA）与细胞蛋白氧化产物羰基化蛋白（protein carbonyl）。结果: DATS能诱导人白血病HL-60细胞产生ROS，当DATS处理细胞1-3 h 时，HL-60细胞产生ROS随DATS浓度的升高和处理时间的延长而升高，当浓度为150 μmol/L DATS处理细胞3h时，ROS的荧光强度达到最高峰，其后维持在一个较高水平。NADPH氧化酶活性与ROS的产生一致。HL-60细胞的脂质过氧化和羰基化蛋白浓度与DATS诱导ROS产生的趋势基本一致，都在3 h、150 μmol/L处理点达到最高值。应用NADPH氧化酶特异性阻断剂apocynin或抗氧化剂NAC后，能显著降低HL-60细胞ROS的产生和细胞损伤。结论: NADPH氧化酶是DATS诱导 HL-60 细胞产生ROS的主要酶系，ROS能氧化细胞质膜和蛋白质。     

视黄酸依赖反义cyclin D1对HL-60细胞分化效应研究

目的 检测视黄酸(Retinoic acid，RA)依赖反义cyclin D1表达载体转染HL-60细胞后启动的诱导分化效应，并探讨其分子机制。方法 成功构建视黄酸依赖反义cyclin D1表达载体，以脂质体转染HL-60白血病细胞，经NBT还原实验、免疫荧光检测CD14表面抗原表达、RT-PCR以及Western blot等方法观测视黄酸处理后细胞分化效应的发生以及Rb基因的mRNA和蛋白表达水平的改变。结果 反义eyelin D1转染和未转染的HL-60细胞经RA处理后，NBT还原能力明显增强、CD14表面抗原表达显著增加，Rb基因的mRNA和蛋白表达水平均有所降低，其中，以反义cyclin D1转染细胞经RA处理后变化更为明显。结论 RA及其诱导的反义cyclin D1可协同诱导HL-60细胞分化成熟，下调Rb基因表达可能是其分子机制之一。     

硫酸软骨素对HL60细胞增殖的影响及化疗增敏作用

目的观察硫酸软骨素(ChS)对HL60细胞增殖的影响,探讨其对肿瘤生长的作用及其在恶性肿瘤化疗中的应用价值。方法应用细胞计数法进行细胞计数;用MTT法测定细胞存活率;用酶联免疫检测仪测定各组细胞的酸性磷酸酶活性。结果硫酸软骨素<50mg/L时显著促进HL60细胞增殖(P<0·01),但>50mg/L时无影响;加入阿霉素(ADR)后,ChS组的细胞生存率均有不同程度的降低,ChS浓度>25mg/L时明显降低(P<0·01);加入ChS后各组细胞的酸性磷酸酶活性明显增强,75mg/L时最为显著。结论硫酸软骨素在适当浓度时对HL60细胞的增殖有促进作用;ChS可增强ADR对HL60细胞的杀伤作用。     

HL-60细胞双向分化过程中表面膜抗原的变化

RA和TPA能在体外诱导人的急性早幼粒白血病细胞系HL-60向成熟粒样细胞和单核-巨噬样细胞双向分化。本实验经细胞形态观察、α-NAE细胞化学染色和NBT还原反应证明。用间接免疫荧光法和FACS分析,诱导的HL-60细胞与国产十四种单克隆抗体的结合反应表明,其中六种单克隆抗体可以判定HL-60细胞分化方向。     

维甲酸诱导HL-60细胞向粒细胞分化时蛋白激酶C的作用

RA诱导HL-60细胞向粒系分化时,伴随有PK-C活力的两次升高。第一次是细胞接触RA的第一天;第二次是接触RA的第四天。细胞形态学分化和NBT还原细胞生成的资料提示第一次PK-C活力升高可能是诱导细胞分化的关键步骤,后一次则可能是细胞诱导分化的结果。RA导致酶活力的变化主要在胞质组分。三氟哌嗪事先处理细胞,再经RA诱导则无PK-CS力的升高,细胞分化亦受抑制。对RA诱导HL-60细胞向粒系分化时PK-C的作用进行了讨论。