hG－CSF cDNA重组逆转录病毒的构建

通过ＤＮＡ重组技术，将不含非编码区的人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ重组入逆转录病毒质粒ｐＬＸＳＮ中。重组质粒转染ＰＡ３１７细胞后，经Ｇ４１８筛选，抗性克隆细胞培养上清液能成功地感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，使之在筛选培养基中形成典型的Ｇ４１８抗性克隆。该克隆细胞染色体中成功地整合了ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ，并且表达了有生物学活性的ｈＧ－ＣＳＦ产物。     

hG—CSF cDNA重组逆转录病毒的构建

通过ＤＮＡ重组技术，将不含非编码区的人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ重组入逆转录病毒质粒ｐＬＸＳＮ中。重组质粒转染ＰＡ３１７细胞后，经Ｇ４１８筛选，抗性克隆细胞培养上清液能成功地感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，使之在筛选培养基中形成典型的Ｇ４１８抗性克隆。该克隆细胞染色体中成功地整合了ｈＧ－ＣＳＦ ｃＤＮＡ，并且表达了有生物学活性的ｈＧ－ＣＳＦ产物。     

人血小板生成素在大肠杆菌中的高效表达

目的：人血小板生成素（ＴＰＯ）在大肠杆菌中的高效表达。方法：利用ＰＣＲ技术,扩增出了（１－１７４个氨基酸的）人血小板生成素ｃＤＮＡ,并将其克隆到ｐＧＥＸ－１λＴ载体中,构建了融合蛋白表达质粒。重组子用限制性内切酶酶切鉴定。表达产物ＳＤＳ－聚丙烯胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）。结果：限制性内切酶酶切鉴定表明重组子含有正确的（１－１７４氨基酸）ＴＰＯｃＤＮＡ片段;表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ相对分子质量     

人白细胞介素15基因的分离及其在大肠杆菌中的克隆与表达

目的：分离编码人ｈＩＬ－１５的ｃＤＮＡ并大肠杆菌中克隆与表达，方法：采用ＰＨＡ刺激人外周血白细胞提取ｍＲＮＡ，并利用ＲＴ－ＰＣＲ方法获得ｈＩＬ－１５的ｃＤＮＡ将其定向插入ＰＵＣ１９载体中，ＤＮＡ序列分析表明分离的ｈＩＬ－１５的序列与文献报道一致，以ｐＢＶ２２０为表达载体构建并筛选出重组于ｐＢＶｈＩＬ－１５；重组子转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α菌株，经４２℃诱导表达。结果：相对分子质量为１４０００的ｈＩＬ     

HLA—DR基因的克隆及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达

获得表达ＨＬＡ－ＤＲ基因的小鼠墨色素瘤细胞，方法应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人Ｂ淋巴瘤细胞Ｒａｊｉ中克隆了ＨＬＡ－ＤＲ３α和β链ｃＤＮＡ，并经测序证实。将其分别插入至真核表达载体ｐＬＸＳＮ和ｐＣＥＰ４中，用脂质体转上鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６，然后用Ｇ４１８和Ｈｙｇ双重筛选。     

脂多糖刺激肺血管内巨噬细胞环氧合酶-2表达的意义

探讨脂多糖（ＬＰＳ）对肺血管内巨噬细胞（ＰＩＭ）环氧合酶－２（ＣＯＸ－２）的作用及意义。方法改良法分离、培养猪ＰＩＭ，以ＬＰＳ（１０μｇ／ｍｌ）刺激，反转录滞麦链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＣＯＸ－２ｍＲＮＡ的变化；经染色法观察ＣＯＸ－２酶蛋白的改变；放射免疫分析法（ＲＩＡ）测定前列腺素Ｅ２）（ＰＧＥ２）变化，以间接显示ＣＯＸ活性的改变。结果ＬＰＳ刺激后，ＰＩＭ ＣＯＸ－２ｍＲＮＡ和酶蛋白表达ＰＧＥ２     

红细胞生成素3''''-增强子调节缺氧时内皮细胞血栓素合酶基因表达

目的：研究缺氧对人脐静脉内皮细胞珠ＥＣ－３０４ＴＸＳ基因的影响及ＥＰＯ３′增强子在其中的作用。方法：将红细胞生成素（ＥＰＯ）３′－增强子野生片断及点突变片断，借脂质体转入人脐静脉内皮细胞株ＥＣ－３０４，用半定量ＲＴ－ＰＣＲ测定常氧与缺氧条件下培养６小时的细胞血栓素合酶（ＴＸＳ）ｍＲＮＡ。结果：ＥＣ－３０４常氧培养有ＴＸＳ基因表达缺氧６小时ＴＸＳ基因表达明显增强；而细胞导入野生ＥＰＯ３′－增强子片断可阻断缺氧诱导ＴＸＳ基因表达增强，而点突变片断无此作用。结论：在ＴＸＳ基因序列中，可能存在类似ＥＰＯ３′－增强子片断，缺氧诱导ＴＸＳ基因表达增强可能主要通过缺氧诱导因子－１与ＴＸＳ基因序列中类似ＥＰＯ３′－增强子片断结合。     

中国人冠心病载脂蛋白B基因EcoRI酶切多态性的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）研究１００例正常人和１０３例冠心病人载脂蛋白Ｂ（ａｐｏＢ）基因ＥｃｏＲＩ酶切位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）。结果表明：（１）正常人和冠心病人均以Ｅ＋等位基因为主，绝大数为纯合子Ｅ￣＋Ｅ￣＋基因型；（２）冠心病组中少见Ｅ等位基因相对频率为０．１１，明显高于正常对照组的０．０４（Ｐ＜０．０１）；（３）冠心病组中脂蛋白（ａ）水平≥０．３ｇ／Ｌ者，Ｅ￣－等位基因频率明显高于相应的低水平者，两者间关联的机制还不明了；（４）对ＥｃｏＲＩ酶切位点的核苷酸序列分析，Ｅ－等位基因系ｃＤＮＡ１２６６９位核昔酸Ｇ→Ａ突变所致，原有的ＥｃｏＲＩ酶切点消失。     

普卡霉素抑制静脉移植物C-myc在mRNA水平的表达

本实验旨在研究普卡霉素 (光辉霉素 ,ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ)抑制Ｃ ｍｙｃ基因在ｍＲＮＡ水平的过量表达对静脉移植物内膜增生的作用。1　材　料1.1　主要试剂　普卡霉素 ( 1ｍｇ ,Ｓｉｇｍａ)、Ｃ ｍｙｃｃＤ ＮＡ探针 (长度 1.4ｋｂ ,酶切点ＥｃｏＲＩ/ＣｌａＩ ,北医大癌基因诊断研究室 )、Ｄｉｇ标记及检测试剂盒(ＢｅｏｈｒｉｎｇｅｒＭｅｎｎｈｅｉｍ ,Ｇｅｒｍａｎ)、蛋白酶Ｋ、ＤＥＰＣ、ＳＳ ＤＮＡ(Ｓｉｇｍａ)。1.2　主要仪器　手术显微镜 (ＳＸＢ 1型 ,10× ,上海)、显微手术器械 (上海 )、低温切片机 (Ｌｅｉｃａ ,Ｊａｐａ…     

红细胞生成素3′—增强子调节缺氧时内皮细胞血栓素合酶基因表达

目的：研究缺氧对人脐静脉内皮细胞珠ＥＣ－３０４ＴＸＳ基因的影响及ＥＰＯ３′增强子在其中的作用。方法：将红细胞生成素（ＥＰＯ）３′－增强子野生片断及点突变片断，借脂质体转入人脐静脉内皮细胞株ＥＣ－３０４，用半定量ＲＴ－ＰＣＲ测定常氧与缺氧条件下培养６小时细胞血栓素合酶（ＴＸＳ）ｍＲＮＡ。结果：ＥＣ－３０４常氧培养有ＴＸＳ基因表达缺氧６小时ＴＸＳ基因表达明显增强；而细胞导入野生ＥＰＯ３′－增强子片断可     

文摘

文摘·核医学·０４４对１２３Ｉ┐β┐ＣＩＴ和１２３Ｉ┐ＩＰＣＩＴ作为非人类灵长目多巴胺转运蛋白ＳＰＥＣＴ放射性示踪剂的比较〔英〕／ＳｃａｎｌｅｙＢＥ…∥ＥｕｒＪＮｕｃｌＭｅｄ．－１９９５，２２（１）．－４～１１已有报道，用放射性示踪剂１２３Ｉ－β－Ｃ...     

可溶性E—选择素cDNA基因克隆及其真核表达

从ｐＵＣ１８／Ｅ－选择素重组质粒经ＰＣＲ扩增得到可溶性Ｅ－选择素ｃＤＮＡ基因，将此基础插入到痘苗病毒表达载体ｐＪＳＡ１１７５的Ｓｍａ Ｉ位点，构建了正向表达质粒ｐＪＳＡ１１７５．可溶性Ｅ－选择素，采用脂质供共转染的方法，将上述质粒转染ＴＫ＾－１４３细胞。     

rG-CSF受体CRH的基因克隆及在原核中的高效表达

目的：研究受体与配体作用机制以及粒细胞集落刺激因子受体（Ｇ－ＣＳＦＲ）结合肽类似物的筛选,表达ｒＧ－ＣＳＦＲ胞外ＣＲＨ区。方法：利用逆转录－聚合酶锭反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术从小鼠白血病细胞（ＮＦＳ－６０）扩增出ｒＧ－ＣＳＦＲ胞外ＣＲＨ区的ｃＤＮＡ片段,通过基因重组将该片段克隆于谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）融合表达载体ｐＧＥＸ－１λＴ中。结果与结论：克隆片段与文献报道的ｒＧ－ＣＳＦＲ序列完全一致,连续产物转化大肠杆菌ＢＬ－２１,经ＩＰＴＧ诱导可获得大量稳定表达的ＣＲＨ－ＧＳＴ融合蛋白。     

弓形虫主要表面抗原基因克隆的初步研究

根据已发表的弓形虫主要表面抗原Ｐ３０基因序列，自行设计合成一对寡核苷酸引物。利用ＰＣＲ技术获取Ｐ３０抗原基因整个开放阅读框架的碱基序列。ＰＣＲ产物经ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切后，与经同样两种内切酶切割的质粒载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ连接构成重组质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ－Ｐ３０，转化大肠杆菌ＤＨ５α。通过遗传标记筛选、ＰＣＲ扩增及酶切分析对重组子进行了初步的鉴定，构建了弓形虫主要表面抗原Ｐ３０基因克隆，为进一步选择真核系统或原核系统体外表达该抗原，用于临床弓形虫病的免疫学诊断及弓形虫病的预防打下了必要的基础。     

AN ANALYSIS OF 281 HOSPITALIZED CASES INJURED IN BICYCLE TRAFFIC ACCIDENTS

ＡＮＡＮＡＬＹＳＩＳＯＦ２８１ＨＯＳＰＩＴＡＬＩＺＥＤＣＡＳＥＳＩＮＪＵＲＥＤＩＮＢＩＣＹＣＬＥＴＲＡＦＦＩＣＡＣＣＩＤＥＮＴＳＺＥＮＧＳｉ－ｑｉｎｇ（曾四清），ＸＩＡＬｉ－ｈｕａ（夏丽华），ＬＩＵＸｉａｏ－ｘｉａｎ（刘筱娴），ＳＨＩＪｕｎ－ｘｉｎ（...     

^60Co辐射事故5名受照者外周血T细胞抗原受体基因的…

在低熔点琼脂糖胶内制备人淋巴细胞基因组ＤＮＡ，两种限制性核苷酸内切酶对低熔点胶块内的样本ＤＮＡ进行完全消化，以人Ｔ淋巴细胞抗原受体（ＴＣＲ）的α和β链ｃＤＮＡ为探针，对５名４．５年前全身受＾６０Ｃｏ大剂量受照者外周血淋巴细胞基因组ＤＮＡ进行印迹杂交分析。结果发现经ＨｉｎｄⅢ内切酶消化的样本ＤＮＡ，正常对照与受照者比较，两种ｃＤＮＡ探针的杂交结果无明显区别，经ＥｃｏＲＩ内切酶消化的ＤＮＡ样本，４名受     

不同水平呼气末正压对ARDS患者中心静脉压的影响

呼气末正压（ＰＥＥＰ）已被广泛用于急性呼吸窘迫综合征（ＡＲＤＳ）的机械通气治疗,而中心静脉压（ＣＶＰ）监测则在ＡＲＤＳ治疗过程中也起着重要作用。ＣＶＰ可受多种因素的影响。本文拟探讨不同水平ＰＥＥＰ对ＣＶＰ的影响及其意义。１　临床资料患者,女,４８岁,因严重双肺肺炎、感染性休克而并发ＡＲＤＳ,即给予呼吸机辅助呼吸（机型为纽邦－２００）,同时给予ＰＥＥＰ１５ｃｍＨ２Ｏ。用美国ＡＲＲＯＷ深静脉导管从右锁骨下静脉置入测定ＣＶＰ,导管尖端经Ｘ线证实达右心房。先测定在有ＰＥＥＰ时ＣＶＰ数值,然后撤除ＰＥＥＰ…     

海拔4300m世居藏族和移居汉族青年氧自由基代谢对比研究

目的：探讨高原世居藏族和移居汉族青年体内自由基代谢的差异;方法：对世居西藏阿里地区的２０名藏族士兵和移居该地区的２０名汉族士兵检测红细胞压积（ＨＣＴ）、红细胞超氧化物歧化酶（ＲＢＣ－ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）、全血和血浆谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＨＳ－ＰＸ）、维生素Ｃ（Ｖｃ）和维生素Ｅ（ＶＥ）的活性或含量;结果：世居藏族青年ＲＢＣ－ＳＯＤ、血浆ＧＨＳ－ＰＸ活性和ＶＥ含量均高于移居汉族青年（Ｐ〈０．０１     

p53基因cDNA突变及其蛋白高表达与大肠癌预后关系

１００份大肠癌组织，用ＲＴ－ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测Ｐ５３基因ＣＤＮＡ突变；ＰＡｂ１８０１单抗免疫组化检测Ｐ５３基因蛋白搞表达并对大肠癌术对后病人作５年生存随访，比较上述２结果与大肠癌预后的关系，１００例大肠癌中，ＲＴ－ＰＣＲ－ＳＳＣＰ显示５１例大肠癌Ｐ５３基因ＣＤＮＡ突变，ＰＡｂ１８０１阳性率６２％，Ｐ５３基因ＣＤＮＡ突变和Ｐ５３基因蛋白高表达与Ｄｕｋｅｓ分期无关，Ｐ５３基因ＣＤＮＡ突变与Ｐ５３基因     

丙型肝炎病毒核心蛋白可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达

利用分子生物学技术,构建表达丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白的人源单链可变区抗体（ＳｃＦｖ）的原核表达载体,并在大肠杆菌ＪＭ１０９中表达可溶性的ＨＣＶ－ｃｏｒｅ－ＳｃＦｖ。以重组的ＨＣＶ核心蛋白为包被抗原,利用噬菌体抗体库的表面展示技术,筛选到含有ＨＣＶ－ｃｏｒｅ－ＳｃＦｖ基因的噬菌体克隆。从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒,经ＮｃｏⅠ／Ｎｏｔ Ⅰ酶切鉴定,该ＳｃＦｖ基因由７５０ｂｐ组成。将其亚克隆到ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ表达载体中,转化大肠杆菌ＪＭ１０９,提取质粒进行ＤＮＡ序列测定,符合ＳｃＦｖ的重链可变区和轻链可变区基因结构特点。ＩＰＴＧ诱导转化的大肠杆菌ＪＭ１０９,在其培养上清中获得了可溶性ＨＣＶ－ｃｏｒｅ－ＳｃＦｖ的表达。酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）证实表达的ＨＣＶ－ｃｏｒｅ－ＳｃＦｖ进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡ