hnRNP B1及hnRNP B1小干扰RNA对肺癌作用的研究进展

异质性胞核核糖核蛋白(hnRNP)B1是肺癌的早期重要分子标志.RNA干扰是通过特异降解靶基因mRNA从而达到转录后基因沉默的一种全新的基因阻断技术.它广泛存在于动物和植物中,在防御外源基因入侵和自身基因异常表达中起重要作用.hnRNP B1小干扰RNA能抑制肺癌细胞增殖,有望成为早期肺癌基因治疗的合理策略之一.     

hnRNP B1及hnRNP B1小干扰RNA对肺癌作用的研究进展

异质性胞核核糖核蛋白(hnRNP)B1是肺癌的早期重要分子标志.RNA干扰是通过特异降解靶基因mRNA从而达到转录后基因沉默的一种全新的基因阻断技术.它广泛存在于动物和植物中,在防御外源基因入侵和自身基因异常表达中起重要作用.hnRNP B1小干扰RNA能抑制肺癌细胞增殖,有望成为早期肺癌基因治疗的合理策略之一.     

hnRNP B1小干扰RNA在肺癌诊治中的研究进展

核内不均一核糖核蛋白B1(hnRNP B1)在肺癌各种组织类型中均有表达,是诊断早期肺癌灵敏度很高的指标.小干扰RNA在细胞内能介导RNA干扰效应,识别特异性mRNA,沉默同源基因表达,成功阻断RNA的表达,由mRNA编码的与疾病有关的任何蛋白都可以被小干扰RNA选择性清除.hnRNP B1特异性的小干扰RNA在体内可以稳定的表达,并且能特异、高效地抑制肺癌细胞hnRNP B1基因的表达,有望成为肺癌基因治疗的合理策略之一.     

hnRNP B1特异性小干扰RNA对肺癌细胞及p53表达影响的研究进展

核内不均一核糖核蛋白(hnRNP)B1的高表达是肺癌频发早期事件,可能与细胞分化失调控有关. p53是目前公认的一种抑癌基因,当细胞受到各种信号刺激引起基因应激反应时,p53蛋白被磷酸化而变构从而被活化,抑制细胞的分裂、增殖和诱导细胞凋亡,防止细胞的恶性转化.应用RNA干扰技术中的小干扰RNA使hnRNP B1基因沉默,能使p53基因的活性增强,从而抑制细胞的恶性转化.本文就hnRNP B1特异性小干扰RNA对肺癌细胞p53基因表达影响的研究进展作一综述.     

hnRNP A2/B1、LN-R在非小细胞肺癌的表达及临床意义

目的　探讨异质性细胞核核糖蛋白 A2 / B1 ( hn RNP A2 / B1 )、层粘连蛋白受体 ( L N- R)表达对非小细胞肺癌 ( NSCL C)的诊断价值及与 NSCL C临床病期、淋巴结转移的关系。方法　采用免疫组织化学方法检测 83例原发性 NSCL C、 32例肺良性肿瘤及 2 0例正常肺组织的 hn RNP A2 / B1 、 L N- R表达。结果　 NSCL C组 hn-RNP A2 / B1 、L N- R表达阳性率分别为 79.5 % ( 6 6 / 83)和 6 7.5 % ( 5 6 / 83) ,明显高于肺良性肿瘤组及正常肺组 (P <0 .0 5 ) ,肺良性肿瘤组阳性率与正常肺组无差异 ( P >0 .0 5 )。有淋巴结转移者 hn RNP A2 / B1 、 L N- R阳性率分别为 88.0 %和 76 .0 % ,明显高于无淋巴结转移者 ( 6 6 .7%、 5 4 .5 % ) ( P <0 .0 5 ) ; ～ 期 hn RNP A2 / B1 、 L N-R阳性率 ( 89.1%、 80 .4 % )明显高于 ～ 期患者阳性率 ( 6 7.6 %、 5 1.4 % ) ,P <0 .0 5。结论　hn RNP A2 / B1 、L N- R表达对 NSCL C诊断、预测病情及判断淋巴结转移均具有重要的临床价值。     

RNA干扰技术的研究进展

随着后基因组时代的到来 ,相应基因的功能研究就显得日益重要。目前使用的手段有基因敲除和RNA干扰等。RNAi是近年来发展起来的新技术 ,被美国科学杂志评为 2 0 0 1年十大科技突破之一 ,现已成为分子生物学研究中最为活跃的热点。它具有特异 ,高效和持久等特点 ,在分析和研究目     

RNA干扰的研究进展

RNA干扰（RNAi）是指细胞中导入与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA（dsRNA）,可致该mRNA发生特异性降解从而导致基因表达沉默的现象．因基因沉默现象发生在转录后水平,故又称为转录后基因沉默（PTGS）。目前,RNAi已经成为研究基因功能的有力工具,并有望在肿瘤基因治疗、遗传性疾病以及病毒性感染治疗等方面发挥重要作用。     

RNA干扰在治疗学研究进展

RNA干扰(RNAi)是一种转录后基因沉默(post-transcrip-tipnal gene silencing,PTGS)现象,是外源性双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)导入细胞后在Dicer酶的作用下生成21～23 nt的小干扰BNA(small interference BNA,siBNA),导致蛋白质的翻译过程终止,干扰了基因表达.细胞利用RNAi及时调节蛋白质水平,据此选择性降解特异蛋白以减慢或停止受累细胞的疾病进程.     

RNA干扰技术抑制非小细胞肺癌表皮生长因子受体的表达

目的　观察RNA干扰技术是否能有效抑制非小细胞肺癌 (NSCLC)细胞株SPC A 1细胞表皮生长因子受体 (EGFR)的表达。方法　体外化学合成EGFR序列特异性双链RNA(dsRNA) ,与Lipofectamine 2 0 0 0结合后转染细胞 (分 4个组 ,A组 :加入无血清DMEM 5 0 0 μl;B组 :加入Lipofectamine2 0 0 0稀释液 2 5 0 μl及无血清DMEM 2 5 0 μl;C组 :加入非特异性dsRNA/Lipofectamine复合物 5 0 0 μl;D组 :加入dsRNA EGFR/Lipofectamine复合物 5 0 0 μl) ,用Westernblot和流式细胞仪检测EGFR表达。流式细胞仪测细胞周期 ,结合集落形成、化疗敏感性分析观察SPC A 1细胞生物学特性的改变。结果　与A组比较 ,D组EGFR数量减少了 71 31% (P <0 0 0 1) ,B组和C组分别降低了 9 0 %和 16 2 % (P >0 0 5 )。与A组比较 ,D组细胞生长抑制了 78 3% ,集落形成抑制了 6 6 8%。D组G0 G1期细胞百分数较A组增加了 17 4 8% ,D组进入S期的细胞百分数较A组减少了 19 2 0 %。据Origin 6 0计算的IC50 ,dsRNA EGFR可将细胞对顺铂的敏感性提高约 7倍。结论　dsRNA EGFR可有效抑制SPC A 1细胞EGFR表达 ,将更多的细胞阻滞在G0 G1期 ,抑制细胞增生 ,提高细胞对顺铂的敏感性 ,RNA干扰技术为NSCLC基因治疗提供了新策略。     

小干扰RNA沉默信号转导和转录激活因子1对支气管哮喘小鼠气道炎症的调控作用研究

目的研究信号转导和转录激活因子1(STAT1)在支气管哮喘(简称哮喘)小鼠肺组织的表达,探讨STAT1特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对哮喘小鼠气道炎症的调控作用。方法构建STAT1特异性发夹样RNA干扰重组体质粒,用脂质体转染γ干扰素(IFN-γ)刺激后的人气道上皮细胞(16HBE),检测其干扰活性。24只BALB/c小鼠随机分为PBS组、PG-HK组和STAT1组。用新鲜配制的OVA混悬液(100mg OVA和100mg氢氧化铝干粉加入1ml生理盐水制成)腹腔注射致敏和OVA溶液滴鼻,用已构建好的转染效率较高的STAT1siRNA于第26天至第29天滴入实验组,另两组分别用等容量的生理盐水或随机构成的RNAi片段滴鼻,末次滴鼻后5h处死取支气管肺泡灌洗液计数浸润的细胞数(特别是嗜酸粒细胞)及检测IFN-γ、白介素4(IL-4)的水平,肺组织做免疫组织化学染色及HE切片染色。结果 STAT1靶向RNA干扰重组体成功构建,并能够高效转染人气道上皮细胞。STAT1特异性siRNA真核表达载体可抑制人气道上皮16HBE细胞中STAT1的表达。STAT1siRNA能减轻哮...     

质粒表达型小分子干扰RNA对人肾小管上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1抑制作用的研究

目的研究质粒表达型小分子干扰RNA(siRNA)对人肾小管上皮细胞(HKC)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的抑制作用。方法2002年2～7月对同济大学附属东方医院针对人MCP-1 mRNA67、116、142位点设计并合成的3对MCP-1siRNA序列,构建MCP-1特异性siRNA真核表达载体pRNAT-MCP-1-Ⅰ、pRNAT-MCP-1-Ⅱ、pRNAT-MCP-1-Ⅲ,以脂质体法转染至HKC,转染24h后分别采用实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot技术检测HKC内MCP-1 mRNA、蛋白表达。结果siRNA表达载体的转染效率为60%,与正常对照组相比,3组不同质粒表达型siRNAMCP-1 mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01)。结论siRNA能高效抑制HKC的MCP-1基因表达,提示siRNA在防治肾间质纤维化中具有潜在作用。     

Bmi-1-siRNA对乳腺癌MCF-7细胞体外增殖的抑制作用

目的探讨Bmi-1-siRNA对乳腺癌MCF-7细胞体外增殖的作用及机制。方法将不同浓度的Bmi-1-siRNA转染MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖情况,免疫细胞化学技术检测转染72h后MCF-7细胞内Bmi-1、端粒酶逆转录酶（hTERT）、细胞增殖相关核抗原Ki-67蛋白的表达。结果Bmi-1-siRNA对MCF-7细胞的生长抑制率明显升高,且随浓度增高而升高（P〈0．05）;MCF-7细胞中Bmi-1、hTERT、Ki-67蛋白表达明显降低（P〈0．05）。结论Bmi-1-siRNA可有效抑制MCF-7细胞的增殖,其机制为降低Bmi-1 mRNA及Bmi-1、hTERT蛋白的表达。     

抗hRNPB1单克隆抗体结合131I对肺癌小鼠靶向治疗的实验研究

目的 观察^131I-抗hnRNP B1MAb、抗hnRNP B1MAb对肺癌小鼠移植瘤的靶向治疗作用。方法 用常规氯胺-T法合成^131I-抗hnRNP B1MAb,皮下接种肺癌细胞7d后,将肺癌小鼠随机分成5组,每组6只。分别经尾静脉注射,Ⅰ组：^131I-抗hnRNP B1MAb11.1MBq/只单次治疗,Ⅱ组：^131I-抗hnRNP B1MAb2×11.1MBq/只强化治疗,Ⅲ组：Na^131I11.1MBq/只,Ⅳ组：抗hnRNP B1MAb50μg/只,Ⅴ组：生理盐水0.12ml作为对照组。干预后每周测量一次小鼠肿瘤的长径及短径,4周后处死小鼠,分离肿瘤并称其质量,计算抑瘤率,肿瘤组织做苏木素伊红（HE）染色检查。结果 治疗结束时,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组小鼠肿瘤的平均体积分别为（3869±192）mm^3、（1987±149）mm^3、（6922±532）mm^3、（6962±509）mm^3、（6957±521）mm^3,其中I组、Ⅱ组与Ⅴ组肿瘤平均体积相比差异具有统计学意义（P〈0.05）,而I组、Ⅲ组治疗结束时肿瘤平均体积与Ⅴ组相比较无统计学意义（P〉0.05）。治疗结束时各组小鼠平均体质量差异无统计学意义（P〉0.05）。Ⅰ组强化组及Ⅱ组的抑瘤率分别为69.88%和41.35%。各治疗组小鼠未发现明显的不良反应。结论 抗hnRNP B1MAb结合^131I对小鼠肺癌的生长具有显著抑制作用,抑制作用呈量效关系,未发现明显的毒副作用。单纯抗hnRNP B1MAb及Na^131I未出现明显抑制肿瘤生长的作用。     

siRNA沉默Annexin-1基因对膀胱癌T24细胞生物学特性的影响

目的观察RNA干扰技术沉默Annexin-1基因表达对膀胱癌T24细胞增殖能力的影响。方法针对Annexin-1基因不同部位设计并化学合成3对不同的靶向小干扰RNA(siRNA),脂质体介导瞬时转染膀胱癌T24细胞,转染后应用半定量RT-PCR和Western印迹法检测Annexin-1mRNA和蛋白的改变,透射电镜观察细胞凋亡情况,用MTT法检测沉默Annexin-1表达对膀胱癌T24细胞增殖的影响。结果转染siRNA后膀胱癌T24细胞Annexin-1mRNA和蛋白水平显著下降(P0.05),转染siRNA沉默Annexin-1基因表达后膀胱癌T24细胞出现典型凋亡细胞,增殖能力显著下降(P0.05)。结论 RNA干扰Annexin-1基因后其mRNA和蛋白水平显著下降,诱导了膀胱癌T24细胞凋亡,并且抑制细胞的增殖。     

小干扰RNA有效抑制乙型肝炎病毒的动物实验

目的 以乙型肝炎病毒（HBV）S区为靶位，观察小干扰RNA（siRNA）在动物体内抗HBV的效果。方法 以流体动力学法建立HBV感染的动物模型，将pcDNA3．1-HBV和细胞体外实验证明有效的siRNA尾静脉共注射Balb／c小鼠，用时间分辨免疫荧光分析法（IFMA）检测小鼠血清中HBsAg，用定量聚合酶链反应法（FQ-PCR）检测血清HBV DNA，用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测HBV S-mRNA，用免疫组织化学法检测肝组织HBsAg和HBcAg。结果 在小鼠体内，siRNA能有效抑制HBsAg的分泌，降低HBVDNA的滴度，免疫组织化学结果也证实HBsAg、HBcAg刚性细胞数明显减少，干扰效果至少持续3d，而无关siRNA则无抑制作用。结论 在动物体内靶向HBV S区的siRNA能有效特异抑制HBV。