人腹膜间皮细胞的分离培养

目的体外培养的人腹膜间皮细胞（ＨＰＭＣ）是研究腹膜功能的有用模型,我们为此建立了一种改良消化法,以从人大网膜分离腹膜间皮细胞。方法用０．２％胰蛋白酶－０．０２％ＥＤＴＡＮａ２消化人大网膜组织碎片,细胞悬液经１００目筛网滤过后进行培养：瑞士姬姆萨染色观察细胞形态,计算细胞纯度：免疫组化（ＡＢＣ法）鉴定细胞。结果分离培养的细胞光镜下呈铺路鹅卵石状,纯度达９５％以上。细胞表面标志鉴定显示角蛋白、波形蛋白抗原阳性,第Ⅷ因子相关抗原、白细胞ＣＤ４５抗原阴性,证实分离培养的确是ＨＰＭＣ。结论胰蛋白酶消化法是一种简单实用的分离ＨＰＭＣ的方法。     

人腹膜间皮细胞的分离培养

目的体外增减的人腹膜间皮细胞（ＨＰＭＣ）是研究腹膜功能的有用模型,我们为此建立了一种改良消化法,以从人大网膜分离腹膜间皮细胞。方法用０．２％胰蛋白酶－０．０２％ＥＤＴＡＮa2消化大网膜组织碎片,细胞悬液经１００目筛网滤过后进行培养;瑞士姬姆萨染色观察细胞形态,计算细胞纯度;免疫组化（ＡＢＣ法）监定细胞。结果分离培养的细胞光镜下呈铺路长鹅卵石状,纯度达９５％以上。细胞表面标志监定显示角蛋白、波形蛋白抗     

人类关节滑膜A型和B型细胞的分离和体外培养

目的 建立一种有效分离、培养高纯度人类关节滑膜Ａ、Ｂ型细胞的方法。方法 胶原酶的胰蛋白酶联合消化入关节滑膜组织碎片,细胞悬液经１２０目筛网滤过,与ＣＤ１４ｍｉｃｒｏｂｅａｄｓ混合孵育后通过磁性ＭＡＣＳ分离柱收集非粘附细胞及粘附细胞进行培养。用光镜、电镜、细胞免疫化学、流式细胞仪法鉴定该两种细胞类型。结果 分离培养的滑膜细胞纯度达９８％以上;粘附细胞具有巨噬细胞的特性,抗ＣＤ６８、ＣＤ１４阳性,符合巨噬细胞样滑膜细胞（Ａ型细胞）的特征;非粘膜附细胞具有成纤维细胞的特性,抗Ｖｉｍｅｎｅｉｎ、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ阳性,符合成纤维细胞样滑膜细胞（Ｂ型细胞）的特征。结论 胶原酶和胰蛋白酶联合消化,免疫磁柱法是一 角切有效的分离人类关节滑膜Ａ、Ｂ型细胞的方法。     

人类关节滑膜A型和B型细胞的分离和体外培养

目的建立一种有效分离、培养高纯度人类关节滑膜Ａ、Ｂ型细胞的方法。方法胶原酶和胰蛋白酶联合消化人关 节滑膜组织碎片,细胞悬液经 １２０目筛网滤过,与 ＣＤ１４ ｍｉｃｒｏｂｅａｄｓ混合孵育后通过磁性 ＭＡＣＳ分离柱收集非粘附细 胞及粘附细胞进行培养。用光镜、电镜、细胞免疫化学、流式细胞仪法鉴定该两种细胞类型。结果分离培养的滑膜细胞 纯度达９８％以上;粘附细胞具有巨噬细胞的特性,抗ＣＤ６８、ＣＤ１４阳性,符合巨噬细胞样滑膜细胞（Ａ型细胞）的特征; 非粘附细胞具有成纤维细胞的特性,抗Ｖｉｍｅｎｔｉｎ、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ阳性,符合成纤维细胞样滑膜细胞（Ｂ型细胞）的特征。结 论胶原酶和胰蛋白酶联合消化,兔疫磁柱法是一种确切有效的分离人类关节滑膜Ａ、Ｂ型细胞的方法。     

改良的胶原酶滑膜细胞分离培养法

目的 探讨一种改良的滑膜细胞培养法。方法 修剪、收集关节滑膜层,依次以胶原酶、0.2%胰蛋白酶、0.2%胰蛋白酶-0.02%EDTANa2消化,100目筛网过滤,D-hanks液洗网后培养,行显微镜、电镜、ABC法免疫组化鉴定。结果 培养的细胞具有成纤维细胞样形态和特征,免疫组化染色示vimentin阳性、CD68阴性,纯度达98%以上,符合B型滑膜细胞特点。结论 改良的胶原酶消化法是一种有效的滑膜细胞培养方法。     

兔成骨细胞两种分离方法的比较

比较了两种分离兔骨外膜成骨细胞的方法。结果表明：原分离方法（先用０．１２５％胰蛋白酶消化３０ｍｉｎ,再用０．１％胶原酶消化２ｈ）对成骨细胞破坏严重,培养成活率仅为１２．５％（１／８）。而新的分离方法（先用０．１％胶原酶消化１ｈ,再用０．１２５％胰蛋白酶消化３ｍｉｎ）对成骨细胞破坏甚微,培养存活率可达８７．５％（７／８）。     

C—erbB—2和组织蛋白酶D在食管癌中的表达及相关性研究

目的：研究Ｃ－ｅｒｂＢ－２和组织蛋白酶Ｄ（Ｃａｔｈ－Ｄ）表达与食管癌分级、浸润、转移和预后的关系,以及ＣｅｒｂｂＢ－２表达与Ｃａｔｈ－Ｄ表达的相互关系。方法：应用微波－ＳＰ免疫组化法：检测６５例食管鳞状细胞癌组织中Ｃ－ｅｒｂＢ－２和ＰＣＡＮ表达水平。结果：在食管癌中Ｃ－ｅｒｂＢ－２和Ｃａｔｈ－Ｄ表达阳性率分别为５０．８％和６４．６％。ＣｅｒｂＢ－２和Ｃａｔｈ－Ｄ表达与肿瘤分级、浸润、淋巴结转移和预     

三种培养原代滑膜成纤维细胞方法的比较

［摘要］目的　比较3种体外分离培养原代类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞（RASFs）的方法,寻求获得快速有效的培养途径．方法　将来自关节镜RA滑膜切除术的滑膜组织分别采用胶原酶消化法、改良组织块法、双酶消化法进行培养．采用倒置相差显微镜观察细胞形态及生长特性,以Vimentin组织化学法进行鉴定．台盼兰计数培养14d后所得活细胞数目．结果　3种原代分离培养方法均可成功培养出RASFs,符合RASFs的形态特征,Vimentin阳性细胞＞95%,其中:胶原酶消化培养法分离的RASFs16-20d细胞汇合度可达70%,约４周汇合度95%;改良组织块法分离的RASFs10～14 d细胞汇合度可达70%以上;双酶消化法分离的RASFs约４周细胞汇合度达85%．处理相同数量滑膜组织获得活细胞数目比较,改良组织块法组为（1.60±0.08）×106个,胶原酶消化法组（1.41±0.08）×106个,双酶消化法组（1.19±0.05）×106个,差异有统计学意义（P＜0.05）．培育原代RASFs细胞所需时间比较,胶原酶消化法需（267.50±16.58）min,双酶消化法需（183.75±11.08）min,改良组织块法需（149.10±13.71）min,差异有统计学意义（P＜0.05）．结论　改良组织块培养法能最大限度地利用滑膜组织,获得最多数量原代RASFs细胞,是建立体外RA细胞模型最高效、快捷的方法．     

差速贴壁及克隆化培养人胚成肌细胞及其移植恒河猴的实验性研究

６个水囊引产４～５个月龄人胚肢体肌组织，采用０．１％Ⅱ型胶原酶和０．１２５％胰蛋白酶二步消化法，分离肌卫星细胞，在含胎肌条件培养液（ＨＦＭＥ）的培养基中，差速贴壁及克隆纯化，电镜及Ｄｅｓｍｉｎ免疫细胞化学鉴定纯度后，Ｒｕｂｂｅｒｐｏｌｉｃｅ刮除收集，按１．６×１０６个细胞／ｋｇ体重，间隔０．５ｃｍ点均匀移植于恒河猴肱二头肌组织中。结果表明，该方法培养的成肌细胞纯度达９６％以上，移植后血清肌浆酶ＬＤＨ及ＣＰＫ与移植前相近（Ｐ＞０．０５），肌组织活检未见明显坏死，表明成肌细胞移植无宿主肌纤维损伤作用；移植后１周ＣＤ４／ＣＤ８比值大于２，补体Ｃ４短暂下降，但Ｔａｃ各值未超过移植前，２周后ＣＤ４／ＣＤ８比值恢复到正常水平，表明恒河猴对移植人的成肌细胞有排异反应，但可以耐受。移植后１周肌组织中可以检出Ｄｅｓｍｉｎ（＋）成肌细胞生长及移植后２周的ＡＯ（＋）的嗜碱性再生肌纤维，此后早期呈ＨＬＡ－ＤＲ（＋）的ＣＤ３（＋）、ＣＤ８（＋）细胞几尽消退。     

雷公藤单体T_4对类风湿关节炎患者周围血单个核细胞及滑膜细胞产生肿瘤坏死因子的影响

观察了经雷公藤单体Ｔ_４处理２ｈ后对正常人和类风湿关节炎（ＲＡ）患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）及ＲＡ患者消化的滑膜单个细胞（ＲＡ－ＤＳＳＣ）分泌ＴＮＦ的影响。在３５ｎｇ／ｍｌ浓度下，正常人ＰＢＭＣ（ｎ＝１０）及ＲＡ－ＰＢＭＣ（ｎ＝６）Ｔ_４处理组产生ＴＮＦ活性水平明显低于对照组（Ｐ＜０．００１）。延长Ｔ_４作用时间至６ｈ，ＲＡ－ＰＢＭＣＴ_４处理组ＴＮＦ活性水平下降更为明显（Ｐ＜０．００１），表明Ｔ_４可抑制ＰＢＭＣ体外产生ＴＮＦ活性水平，其对ＲＡ－ＰＢＭＣ作用不同时间的抑制率分别为２５．５４％及４０．５１％（Ｐ＜０．０１），说明Ｔ_４抑制作用可能与作用时间有关。同时Ｔ_４亦可抑制ＲＡ－ＤＳＳＣ体外产生ＴＮＦ活性水平（Ｐ＜０．０１），提示Ｔ_４有望成为一新的植物性治疗ＲＡ药物。     

一步及半巢式PCR检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH重排的比较

目的：建立一种简便有效的方法,来检测Ｂ细胞非霍奇金淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）石蜡包埋组织的免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排。方法：以ＩｇＨ的第三互补决定簇区（ＩｇＨ－ＣＤＲ３）为标志,用消化煮沸法和酚－氯仿法提取３６例Ｂ－ＮＨＬ及１０例扁桃体炎的石蜡包埋组织的基因组ＤＮＡ,比较两进行一步及半巢式聚合酶链反应（ＳｎＰＣＲ）,聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染后检测克隆性ＩｇＨ重排的结果。结果：Ｂ－ＮＨＬ组,３４例经酚－氯仿法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ检测克隆性ＩｇＨ－ＣＤＲ３重排的阳性率分别为２６．５％和７６．５％（Ｐ〈０．０５）;２７例经消化煮沸法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７．４％和６６．７％（Ｐ〈０．０５）;２５例同时用上述２种方法提取ＤＮＡ,ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７６％和６８％（Ｐ〉０．０５）。对     

涎腺肿瘤中C—erbB—2,PCNA和p16蛋白的表达及临床病理学意义

目的：探讨抑癌基因ｐ１６、原癌基因Ｃ－ｅｒｂＢ－２、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）在涎腺肿瘤中的异常表达与肿病理生物学特征间的关系及临床意义,为涎腺恶性肿瘤有效防治提供实验科学依据。方法：应用免疫组化ＬＳＡＢ法检测涎腺恶性肿瘤３０例、涎腺多形性腺瘤３１例及涎腺非肿瘤组织１４例的Ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ及ｐ１６蛋白的表达及变化。结果：多形性腺瘤中Ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ、ｐ１６阳性率分别为３８．７％、７１．０％、７７．４％,均低于涎腺恶性肿瘤阳性率７６．７％、８６．７％、８０．０％,但仅Ｃ－ｅｒｂＢ－２两者间Ｐ〈０．０５。涎腺恶性肿瘤中ＰＣＮＡ与Ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｐ１６间无相关性（Ｐ〉０．０５）。结论：（１）免疫组化法检测抑癌基因ｐ１６、原癌基因Ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ在细胞内的表达可对良恶性病变从分子水平进行     

BACTEC—460在结核菌快速培养中的应用

目的 探讨ＢＡＣＴＥＣ－４６０在结核菌快速培养中的应用，方法 应用ＢＡＣＴＥＣ－４６０检测结核杆菌，并与涂片和改良罗氏培养法（Ｌ－Ｊ）进行比较。结果 １０６８份临床标本ＢＡＣＴＥＣ培养阳性２６９份（２５．２％）阳性报告时间平均１２．５天，培养污染２７份（２．５％）ＢＡＣＴＥＣ阳性率比涂片高１８．４％，比Ｌ－Ｊ法高１０．４％，差异有高度显著性（Ｐ〈０．０５），ＢＡＣＴＥＣ快速药敏试验表明总耐药率为５     

乳腺癌组织中CD44v6,C—erbB—2的表达及其意义

该文利用免疫组化法对６例乳腺癌患者进行ＣＤ４４ｖ６，Ｃ－ＥＲｂＢ－２检测。结果发现：ＣＤ４４ｖ６的阳性表达与乳腺癌的腋窝淋巴结转移及与Ｃ－ｅｒｂＢ－２的阳性表达密切相关（Ｐ＜０．０１）。提示ＣＤ４４ｖ６可作为乳腺癌淋巴结转移的预测指标。     

Bcl—2和Bax蛋白表达与非小细胞肺癌临床病理特性的关系

探讨Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ蛋白表达与非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）临床病理特征的关系。方法应用免疫组化ＳＰ法检测了３０例正常肺组织和６１例ＮＳＣＬＣ中Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ蛋白的表达。结果ＮＳＣＬＣ组织中Ｂｃｌ－２蛋白表达率（５７．３８％）显著高于正常肺组织（１３．３３％）（Ｐ〈０．０１）,而ＮＳＣＬＣ组织中Ｂａｘ蛋白表达率（４５．９０％）显著低于正常肺组织（８０．００％）（Ｐ〈０．０１）,鳞癌和腺癌中Ｂｃｌ     

人髁突软骨细胞培养方法探讨

目的探讨人胚髁突软骨细胞培养方法。方法分离出人胚髁突软骨组织,分别采用组织块培养法、传统两次酶消化法、改良酶消化法进行髁突软骨细胞原代培养,倒置相差显微镜下进行细胞形态学观察,甲苯胺蓝和HE染色鉴定软骨细胞。结果倒置相差显微镜观察发现,采用组织块培养法,未见细胞从组织块爬出;而传统的两次酶消化法可获细胞数为10^5／mL,但使用的胶原酶浓度高,消化时间较长;改良的Ⅱ型胶原酶消化联合胰蛋白酶法,对原代髁突软骨细胞分离取得了优良而稳定的效果,可收获细胞数为10^7／mL。结论改良的Ⅱ型胶原酶消化联合胰蛋白酶法是一种良好的人髁突软骨细胞培养的方法。     

脐带血、成人外周血的干祖细胞检测及CFU-GM与CD34~+细胞百分率相关性研究

本文利用桥联酶标ＡＰＡＡＰ技术，用ＣＤ３４＋单抗ＱＢＥＮＤ１０标记脐血和外周血造血干细胞，同时采用体外半固体培养法检测脐血和外周血ＣＦＵ－ＧＭ产率血，并对两者的相关性进行了分析。结果表明：（１）体外培养ＣＦＵ－ＧＭ产率，脐血为９６．０６±６３．３７，外周血为７．２４±６．２０，两者差异显著，Ｐ＜０．０１。（２）ＣＤ３４＋细胞百分率，脐血为１．６９±１．０６％，外周血为０．００６５＋０．００４７％，两者差异显著，Ｐ＜０．０１。（３）脐血ＣＦＵ－ＧＭ产率与ＣＤ３４＋细胞百分率呈正相关，Ｒ＝０．７５９，Ｐ＜０．０１，回归方程Ｙ＝０．０１２７Ｘ＋０．４６４９。外周血不相关Ｒ＝０．０４４７，Ｐ＜０．０５。提示采用桥联酶标法检测ＣＤ３４＋细胞百分率可以代替ＣＦＵ－ＧＭ用于预测脐血造血重建能力，由于该法简便、快速、敏捷，不需昂贵设备，值得推广和应用     

Th1/Th2细胞在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

目的了解慢性ＨＢＶ感染者外周血单核细胞（ＰＤＭＣ）中ＣＤ４~＋Ｔ细胞内ＩＬ－４和ＩＦＮ－γ的表达情况,以测定Ｔｈ０／Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞的百分数,探明Ｔｈ１、Ｔｈ２细胞在慢性ＨＢＶ感染中的作用。方法常规分离ＰＢＭＣ,在ＰＭＡ、ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ、莫能菌素的刺激下,采用流式细胞检测（ＦＡＣＳ）对慢性ＨＢＶ感染者ＰＢＭＣ中ＣＤ４~＋Ｔ细胞内ＩＬ－４和ＩＦＮ－γ表达进行分析。结果正常对照组,２．３％－１８.６％的ＣＤ４~＋Ｔ细胞为Ｔｈ１细胞,０.９％－９．２％为Ｔｈ２细胞;在慢性ＨＢＶ感染者外周血单个ＣＤ４~＋Ｔ细胞中,以Ｔｈ０细胞居多：而Ｔｈ１细胞则随着慢性乙型肝炎肝脏炎症活动的加剧而明显增多,在炎症活动明显的慢性乙型肝炎患者中,Ｔｈ１细胞百分数明显高于炎症活动呈静止状态的慢性乙型肝炎;Ｔｈ２细胞在慢性ＨＢＶ感染的不同阶段则较为恒定,但明显高于对照组。结论Ｔｈ１细胞与炎症活动呈正相关,Ｔｈ２细胞可能与ＨＢＶ感染的慢性化相关联。     

大鼠肝窦状隙细胞内吞高密度脂蛋白-2的逆向胞饮作用

研究肝细胞选择性摄取高密度脂蛋白（ＨＤＬ２）胆固醇酯的机制。大鼠肝窦状腺细胞与异硫氰酸荧光标记无ＡｐｏＥ－ＨＤＬ２ＦＩＴＣ－ＨＤＬ２培养后，测定细胞结合、内吞与释放荧光强度。结果：细胞与ＦＩＴＣ－ＨＤＬ２３７℃培养３ｈ，细胞结合与内吞的荧光强度分别为８．８９±０．８７和５．３５±０．６９。细胞进一步３７℃培养２ｈ，细胞释放的三氯醋酸（ＴＣＡ）沉淀和ＴＣＡ可溶性荧光强度分别为２．９６± ０．５３和０．２８± ０．１５。乙酰咪唑修饰ＨＤＬ２，阻断其与细胞受体相互作用后的细胞结合与内吞分别为１．１５±０．３８和０．７７±０．１７，细胞释放的ＴＣＡ沉淀和ＴＣＡ可溶性荧光强度分别为０．４３±０．１６和０．０５±０．０４。结论：①细胞内吞ＨＤＬ２中８５．５％通过受体途径，１４．５％通过非特异性途径；②进入细胞内ＨＤＬ２颗粒中载脂蛋白（Ａｐｏ）没有经过溶酶体途径分解。而通过逆向胞饮途径释放出胞外。     

LAK细胞治疗慢性活动型乙型肝炎的疗效与机理研究

目的观察淋巴因子激活杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）治疗慢性活动型乙型肝炎（ＣＡＨ）的疗效，探讨治疗机理。方法ＬＡＫ细胞治疗４０例患者，治疗前、疗程结束时，分别检测ＨＢＶＭ，ＡＬＴ，Ｔ细胞亚群，Ｂ细胞，ＩＬ－２，ｍＩＬ－２Ｒ，ＮＫ及ＬＡＫ细胞活性。疗程结束１ａ复查ＨＢＶＭ。对照组４０例。结果ＬＡＫ治疗组疗程结束时，ＨＢｅＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ转阴率分别为２２．５％和４０．０％，与对照组相比差异显著（Ｐ均＜０．００１）。疗程结束１ａ复查ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ转阴率分别达４０．０％和６８．６％。治疗后患者ＣＤ＋４细胞数及ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比值，ＩＬ－２水平及ｍＩＬ－２Ｒ表达，ＮＫ细胞及ＬＡＫ细胞活性均较治疗前明显升高（Ｐ均＜０．０１）。尤以ＨＢｅＡｇ转阴者，ＩＬ－２升高更显著（Ｐ均＜０．００５）。结论ＬＡＫ细胞疗法有增强免疫功能、调节免疫紊乱和清除乙肝病毒的效用，但主要不是ＬＡＫ细胞的溶细胞作用。