IL-4诱导CD8~+T细胞分化为IL-10分泌性CD8~+T细胞

目的体外诱导CD8+T细胞,以期诱导分化出一种IL-10分泌性CD8+调节性T细胞,为用细胞疗法进行自身免疫性疾病的预防及治疗奠定基础。方法以tiger转基因小鼠(以其GFP+细胞代表IL-10+细胞)为实验动物,流式细胞仪分选幼稚CD8+T细胞,然后在细胞培养体系中加入ConA或抗CD3以及IL-2,IL-4加或不加,培养48 h对细胞进行诱导分化,继而,细胞继续扩大培养,至96 h时,加入佛波酯和离子霉素对细胞进行再刺激6 h,流式检测CD8+T细胞GFP的产生情况。同时,为验证IL-4对IL-10分泌性CD8+T细胞的诱导分化作用,在培养体系中加入抗IL-4,流式检测CD8+T细胞IL-10的表达情况。结果经流式细胞仪检测幼稚CD8+T在未经诱导分化时不产生IL-10;而在ConA或抗CD3的刺激及IL-4的诱导下,幼稚CD8+T可分化为IL-10分泌性细胞,且其比例分别占CD8+T细胞的31.16%(ConA组)和32.20%(抗CD3组);培养体系中加入抗IL-4后,IL-10分泌性CD8+T细胞的分化被抑制,其比例降为11.2%。结论 IL-10分泌性CD8+T细胞可由CD8+T诱导分化而来,IL-4是诱导IL-10产生的关键细胞因子。     

Immunoinformatics prediction of overlapping CD8+ T-cell,IFN-γ and IL-4 inducer CD4+ T-cell and linear B-cell epitopes based vaccines against COVID-19 (SARS-CoV-2)

At the beginning of the year 2020, the world was struck with a global pandemic virus referred to as SARS-CoV-2 (COVID-19) which has left hundreds of thousands of people dead. To control this virus, vaccine design becomes imperative. In this study, potential epitopes-based vaccine candidates were explored. Six hundred (6 0 0) genomes of SARS-CoV-2 were retrieved from the viPR database to generate CD8⁺ T-cell, CD4+ T-cell and linear B-cell epitopes which were screened for antigenicity, immunogenicity and non-allergenicity. The results of this study provide 19 promising candidate CD8⁺ T-cell epitopes that strongly overlap with 8 promising B-cells epitopes. Another 19 CD4⁺ T-cell epitopes were also identified that can induce IFN-γ and IL-4 cytokines. The most conserved MHC-I and MHC-II for both CD8⁺ and CD4⁺ T-cell epitopes are HLA-A*02:06 and HLA-DRB1*01:01 respectively. These epitopes also bound to Toll-like receptor 3 (TLR3). The population coverage of the conserved Major Histocompatibility Complex Human Leukocyte Antigen (HLA) for both CD8⁺ T-cell and CD4⁺ T-cell ranged from 65.6% to 100%. The detailed analysis of the potential epitope-based vaccine and their mapping to the complete COVID-19 genome reveals that they are predominantly found in the location of the surface (S) and membrane (M) glycoproteins suggesting the potential involvement of these structural proteins in the immunogenic response and antigenicity of the virus. Since the majority of the potential epitopes are located on M protein, the design of multi-epitope vaccine with the structural protein is highly promising though the whole M protein could also serve as a viable epitope for the development of an attenuated vaccine. Our findings provide a baseline for the experimental design of a suitable vaccine against SARS-CoV-2.     

CD28+、CD86+、CD80+T淋巴细胞及血浆IL-18在ITP患儿中的检测价值

目的探析淋巴细胞CD28、CD86、CD80共刺激分子阳性表达及白介素18(IL-18)在特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病过程中的作用。方法分析45例ITP患儿的临床资料,选取同期接受健康体检的45例健康儿童作为对照组,比较两组儿童的基线资料、淋巴细胞CD28、CD86、CD80阳性表达率及IL-18浓度,相关性分析CD86+、CD80+及IL-18与血小板水平间的关系。结果两组儿童基线资料差异无统计学意义(P0.05)。ITP组的CD86+、CD80+百分比以及IL-18水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.01),而两组的CD28+百分值差异无统计学意义(P0.05)。CD86+及CD80+与血小板水平相关性不明显(P0.05),而IL-18含量与血小板水平呈明显负相关性(P0.05)。结论 ITP患儿外周血淋巴细胞CD86、CD80表达过度,其血浆IL-18影响了ITP的发病过程。     

儿童免疫性血小板减少症IL-27、CD4~+CD45RA~+T及CD4~+CD45RO~+T细胞变化

目的检测免疫性血小板减少症患儿外周血细胞因子IL-27、CD4~+T细胞表面抗原CD45RA和CD45RO表达的变化,探讨其在ITP发病过程中的作用。方法新诊断ITP患儿35例,正常体检儿童35例作为对照,ELISA法检测血清IL-27水平、流式细胞术法检测外周血CD4~+T细胞CD45RA和CD45RO的表达率,采用t检验、直线相关分析进行比较。结果血清IL-27浓度ITP组(195.35±70.30)ng/L,对照组(301.25±125.40)ng/L,差异有统计学意义(P0.01);CD4~+CD45RA+T细胞表达率ITP组(26.34±5.58)%,对照组(30.56±5.35)%;CD4~+CD45RO~+T细胞表达率ITP组(55.12±7.85)%,对照组(48.45±6.74)%,差异均有统计学意义(P0.01);血清IL-27水平与外周血小板计数无相关性(r=0.202,P=0.575)。结论 IL-27、CD4~+CD45RA+T细胞和CD4~+CD45RO~+T细胞介导的细胞免疫异常可能参与了ITP发病。     

支气管哮喘患儿CD4~+CD25~+Foxp3~+IL-10~+ T淋巴细胞水平变化和意义

目的:探讨对尘螨过敏的轻度持续支气管哮喘患儿淋巴细胞增殖情况及CD4+CD25+Foxp3+IL-10+ T淋巴细胞水平变化。方法:选择30例对尘螨过敏的轻度持续支气管哮喘患儿作为实验组,同时选择30例健康儿童作为对照组。分离所有入选者的外周血淋巴细胞,给予户尘螨浸出液刺激48 h后检测淋巴细胞增殖的刺激指数以及CD4+CD25+Foxp3+IL-10+ T淋巴细胞水平变化。结果:支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞接受户尘螨浸出液刺激后淋巴细胞增殖的刺激指数显著高于对照组(P<0.01),支气管哮喘患儿CD4+CD25+Foxp3+IL-10+ T淋巴细胞水平显著低于对照组(P<0.01)。结论:支气管哮喘患儿接受过敏原刺激后发生明显的增殖反应,支气管哮喘患儿存在CD4+CD25+Foxp3+IL-10+ T淋巴细胞功能障碍。     

In vitro derivation of interferon-γ producing, IL-4 and IL-7 responsive memory-like CD4(+) T cells

CD4⁺ memory is critical for successful protection against pathogenic challenge. As such, understanding the heterogeneity of cells that arise and survive after initial stimulation of naïve CD4⁺ T cells will aid in the design of more successful vaccines. In previous studies, in vivo experimental systems have been extensively used to generate functional memory responses by lymphocytes. Here, we have attempted to develop an in vitro experimental system to generate memory CD4⁺ T lymphocytes. CD4⁺ T cells stimulated through the antigen receptor complex were examined for their memory-like characteristics after 3 weeks of cell culture. A subset of surviving cells expressed high levels of CD44 and low levels of CD45RB (CD44^hiCD45^lo), a phenotype that is similar to bonafide memory CD4⁺ T cells. In vitro generated memory-like CD4⁺ T cells secreted higher levels of IFN-γ, with rapid kinetics, upon re-stimulation than their naïve counterparts. In addition, these memory-like CD4⁺ T cells did not produce either IL-2 or IL-4 but readily proliferated when cultured in the presence of IL-7 and IL-4. These observations suggest that CD4⁺ cells surviving the expansion phase of immune response produce a Th1-signature cytokine and retain responsiveness to IL-4, a Th-2 cytokine, as well as to a well described survival factor, interleukin-7.     

CD4+ CD25+ Treg、IL-10、TGF-β水平与子宫内膜癌发生发展的相关性

近几年,越来越多的证据表明[1],在肿瘤形成过程中除了细胞的癌基因和抑癌基因活化和失活,机体免疫监视系统的逃逸也是不容忽视的重要因素,肿瘤细胞可以通过某些途径逃逸或者抑制机体免疫反应而确保其自身的发生发展.而Treg是一群具有免疫抑制功能的负调控细胞,它们在维持外周免疫耐受,预防自身免疫疾病的发生过程中起着重要作用.     

肝硬化患者血CD14~+CD16~+单核细胞分泌TNF-α、IL-10功能的研究

[目的]研究分析肝硬化患者外周血CD14+CD16+单核细胞分泌TNF-α、IL-10的功能特点。[方法]采用流式细胞术检测不同浓度的LPS刺激外周血单核细胞分泌细胞因子TNF-α及IL-10水平。[结果]肝硬化患者外周血单核细胞分泌TNF-α水平增加,失代偿期肝硬化组TNF-α、IL-10的水平随着LPS浓度的增加升高不明显。[结论]肝硬化患者肝脏储备功能越差,则CD14+CD16+单核细胞频率越高,促炎因子增加,其频率及生物学功能与病情的严重性有密切关系。     

Reciprocal changes in CD11c+CD11b+ and CD11c+CD8α+ dendritic cell subsets determine protective or permissive immune response in murine experimental VL

CD11c⁺CD8α⁺ and CD11c⁺CD11b⁺ dendritic cells are two major subsets of murine splenic CD11c⁺ DCs which play a crucial role in T cell priming and shaping Th1/Th2 responses, but their role in the context of experimental visceral leishmaniasis (VL) is poorly understood. Herein, we showed that L. donovani infection in Balb/c mice preferentially decreased the population abundance of CD11c⁺CD11b⁺ DCs and increased relative abundance of splenic CD11c⁺CD8α ⁺DCs. During infection, splenic CD11c⁺CD11b⁺ DCs induced Th1 differentiation whereas CD11c⁺CD8α⁺ DCs promoted Th2 differentiation. Additionally, treatment of infected mice with miltefosine as experimental control exhibited host defense allowing the restoration of CD11c⁺CD11b⁺ population and decrease in CD11c⁺CD8α⁺ subset. Furthermore, reciprocal regulation of immune accessory surface molecules, Sema4A and OX40L critically determined Th1/Th2 response induced by these DC subsets during VL. L. donovani infection significantly induced OX40L expression and slightly downregulated SEMA 4A expression in CD11c⁺CD8α⁺ DCs whereas miltefosine treatment significantly downregulated OX40L expression along with pronounced upregulation of SEMA 4A expression in CD11c⁺CD11b⁺ DCs. SiRNA mediated knockdown of SEMA 4A markedly reduced CD11c⁺CD11b⁺ driven IFN-γ, TNF-α and IL-12 synthesis in miltefosine treated mice whereas functional blocking of OX40L decreased CD11c⁺CD8α⁺ induced IL-10, IL-4 and TGF-β synthesis in L. donovani infected group. Vaccination of Balb/c mice with antigen-pulsed + CpG-ODN-activated DC subsets revealed that only antigen-pulsed CD11c⁺CD11b⁺ DCs eliminated parasite load in visceral organ and restored protective Th1 cytokine response. Collectively, our results suggest that differential regulation of splenic CD11c⁺ subsets by L. donovani is essential for disease progression and specific subtypes may be exploited as prophylactic measures against visceral leishmaniasis.     

CD4+CD25+T细胞研究新进展

CD4 CD25 T细胞是新近才被认识的一类免疫调节细胞,在胸腺中产生,主要发挥抑制性免疫调节功能,表达IL-10 mRNA,细胞表面表达IL-2受体a链(CD25),在维持机体内环境的稳定、抗感染免疫、抗肿瘤免疫、诱导移植耐受及自身免疫性疾病等方面发挥重要作用。     

CD4+CD25+T细胞与复发性流产

CD4+CD25+T细胞是一类具有免疫调节功能的细胞.正常情况下在体内发挥免疫抑制作用.该类细胞分泌白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子β(TGF-β),表达CD25(IL-2Rα)、叉头蛋白(FOXP3蛋白)及细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)分子等,通过细胞间直接接触或细胞因子间接方式广泛参与自身免疫耐受、肿瘤免疫、移植免疫.妊娠类似同种异体移植,妊娠时脱落人母体循环的胎儿抗原刺激CD4+CD25+T细胞的产生并在母胎界面形成免疫耐受微环境,防止胎儿受到母体排斥.CD4+CD25+T细胞数量或功能失调则会导致各种疾病的发生,如自身免疫病,移植物抗宿主病,流产等.在复发性流产患者体内CD4+CD25+T细胞数目及功能明显下降.实验表明增强CD4+CD25+T细胞数量或功能可以阻止移植物抗宿主病和治疗复发性流产.     

淋巴瘤患者外周血T细胞CD88+CD28-、CD4+CD25+的表达及意义

目的 探讨恶性淋巴瘤患者外周血T细胞CD88+CD28-、CD4+CD25+的表达及意义.方法 采用流式细胞术检测35例恶性淋巴瘤患者外周血T细胞CD88+CD28-、CD88+CD28-、及CD4+CD25+.结果 恶性淋巴瘤患者外周血T细胞CD88+CD28-、CD88+CD28-、CD4+CD25+与正常对照差异有统计学意义(P<0.01);治疗有效后三者趋于正常(P>0.05);而无效组与正常时照组相比差异仍有统计学意义(P<0.01).结论 恶性淋巴瘤患者外周血T细胞CD88+CD28-、CD88+CD28-、及、CD4+CD25+表达异常,不同治疗效果表达不同,恶性淋巴瘤患者有免疫功能异常,治疗有效后免疫功能恢复正常.     

CD4+、CD8+及CD4+/CD8+对胃癌患者病情发生发展影响研究

目的探讨CD4+、CD8+及CD4+/CD8+对胃癌患者病情发生发展的影响。方法选取2017年6月～2018年10月于遂宁市中心医院接受治疗的胃癌患者213例为胃癌组,检测治疗前后患者血液中CD4+、CD8+及CD4+/CD8+的变化情况,并观察术后感染情况;同时选取健康志愿者98例作为健康对照组。结果治疗前,胃癌组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平显著低于健康对照组(P 0.05),治疗后,CD4+、CD8+、CD4+/CD8+表达水平明显上升,差异有统计学意义(P 0.05)。胃癌组治疗后出现感染患者CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平明显低于未感染者,差异有统计学意义(P 0.05)。结论 CD4+、CD8+及CD4+/CD8+表达水平在胃癌病情的发生发展中起重要作用,监测其水平变化对胃癌患者的病情演变及预后具有十分重要的指导意义。     

淋巴细胞CD3+、CD4+和CD19+作为难治性支原体肺炎预测指标研究

目的分析普通肺炎支原体肺炎(MPP)与难治性支原体肺炎(RMPP)的临床特点、淋巴细胞亚群、血清水平,探索RMPP的预测指标。方法对100例MPP患儿的临床资料进行回顾性分析,其中普通MPP患儿65例、RMPP患儿35例,比较两组的临床特点、淋巴细胞亚群、血清水平等各项身体指标,采用ROC曲线对RMMP患者的特异性指标进行有效评估。结果淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD19+、CD56+按实际检测结果计数以及血清乳酸脱氢酶(LDH)、C反应蛋白(CRP)、免疫球蛋白E(IgE)水平两组比较差异显著(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,T淋巴细胞(CD3+、CD4+)、B淋巴细胞(CD19+)按实际检测结果计数诊断普通MMP和RMPP的曲线下面积分别为0.867、0.912、0.849,其敏感性分别为89%、91%、89%,特异性分别为76%、72%、5%。结论 CD3+、CD4+、CD19+按实际检测结果计数可作为儿童RMPP的预测指标。     

慢性乙型肝炎患者CD8~+CD28~+T/CD8~+CD28~-T比值变化及临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎患者CD8+CD28+T/CD8+CD28-T比值变化及临床意义。方法 流式细胞仪测定正常对照、慢性乙型肝炎患者CD8+CD28+T/CD8+CD28-T的百分数,并计算CD8+CD28+T/CD8+CD28-T比值,慢性乙型肝炎组根据HBV-DNA含量分为两组,低病毒载量组(HBV-DNA<106拷贝/ml)和高病毒载量组(HBV-DNA>106拷贝/ml),并分别计算CD8+CD28+T/CD8+CD28-T比值。结果慢性乙型肝炎患者组CD8+CD28+T/CD8+CD28-T比值与正常对照组相比明显降低,两者差异有统计学意义(P<0.01);慢性乙型肝炎高病毒载量组CD8+CD28+T/CD8+CD28-T比值低于低病毒载量组(P=0.039),两组差异有统计学意义。结论 慢性乙型肝炎患者CD8+CD28+T/CD8+CD28-T比值下降可能是病毒不能清除,而长期存在的原因之一。     

CD4+CD25+Foxp3+细胞在哮喘大鼠发病的作用

目的观察在哮喘大鼠中CD4+CD25+调节性T细胞Foxp3表达的变化,分析支气管哮喘的发病机制,并为临床的治疗提供新方向。方法随机将16只雄性的Wistar大鼠分为正常对照组和哮喘组,每组各8只。哮喘组:用卵白蛋白(OVA)使大鼠致敏,并予以雾化吸入刺激;正常对照组:等量生理盐水处理。最后一次激发后,采用HE染色评价大鼠肺组织病理形态学改变;免疫组化染色分析Foxp3表达量;ELISA法测定肺泡灌洗液(BALF)IL-4及IFN-γ水平。结果哮喘组BALF中细胞因子IL-4明显高于盐水对照组,IFN-γ含量也升高,但IFN-γ/IL-4水平下降,即IFN-γ相对不足;哮喘组肺组织内Foxp3明显增高,说明体内CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘发作时出现异常分布的现象。结论 CD4、CD25和Foxp3+三者共同调节性T细胞,与支气管哮喘的发病机制密切相关,并打破Th1/Th2原有的平衡机制。     

湖南省苗族健康人群外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞正常参考值研究

目的了解并建立湖南省苗族健康人群外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞正常参考值。方法应用FACSCalibur流式细胞仪检测10-19岁、20-29岁、30-39岁、40-49岁、50-59岁5个年龄组共360名健康苗族人的CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞数值。结果10-59岁组苗族人群外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞绝对数和CD4＋／CD8＋比值分别为（1426．71±462．92）个／μL、（787．54±258．36）个／μL、（589．86±242．91）个／μL和1．46±0．50;10～19岁年龄组的CD3＋、CD8＋T淋巴细胞计数均明显高于30岁以上年龄组（F分别为10．80、8．51,均P〈0．05）,CD4＋T淋巴细胞计数明显高于50-59岁组（F=7．03,P（0．05）;不同性别间上述指标无差异（t分别为0．98、0．80、0．88、0．16,均P〉0．05）。结论建立不同民族的CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞正常参考值有助于临床诊断。     

初治肺结核患者CD3~+、CD4~+、CD8~+ T淋巴细胞计数分析

目的通过分析初治肺结核患者CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞计数结果,透视初治肺结核患者的细胞免疫状况。方法对111例初治肺结核患者的全血样本进行CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞计数(/μl),依性别和<20、21～、31～、41～、51～、61～、71～、>81岁等8个年龄组别对计数结果进行分析。结果 (1)CD3+T淋巴细胞计数:男性各年龄组别结果分别为986±473、892±287、954±388、893±529、761±432、758±336、714±372和332±183,低于正常值者分别占66.67%、50.00%、87.50%、68.75%、72.73%、81.82%、85.71%和66.67%(总计72.29%);女性各年龄组别结果分别为1418±0、902±354、1039±515、712±399、584±271、778±234、723±234和107±0,低于正常值者分别占0、66.67%、50.00%、100.00%、100.00%、100.00%、75.00%和100.00%(总计75.00%)。(2)CD4+T淋巴细胞计数:男性各年龄组别结果分别为604±328、482±186、565±231、535±340、454±275、422±221、443±230和270±129,低于正常值者分别占66.67%、35.71%、37.50%、37.50%、36.36%、63.64%、57.14%和66.67%(总计46.99%);女性各年龄组别结果分别为896±0、474±202、626±335、446±311、333±208、426±182、460±280和66±0,低于正常值者分别占0、33.33%、33.33%、100.00%、100.00%、100.00%、75.00%和100.00%(总计64.29%)。(3)CD8+T淋巴细胞计数:男性各年龄组别结果分别为309±132、315±124、298±141、300±209、227±122、282±133、231±151和46±35,低于正常值者分别占83.33%、57.14%、100.00%、81.25%、81.82%、63.64%、85.71%和66.67%(总计77.11%);女性各年龄组别结果分别为463±0、323±134、314±169、189±49、196±104、286±91、220±149和28±0,低于正常值者分别占0、66.67%、33.33%、100.00%、100.00%、100.00%、100.00%和100.00%(总计75.00%)。结论初治肺结核患者多有CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞计数偏低,尤以老年龄组患者为甚,初治肺结核患者的低细胞免疫状态值得临床关注。     

CD4+CD25+Treg细胞与HBV/HIV感染

摘要:CD4+CD25+Treg细胞是体内重要的免疫调节细胞,可抑制HBV感染导致的免疫病理损伤,在乙肝病人的病情发展中起重要作用。HIV主要感染并破坏CD4+T细胞,从而导致病人免疫抑制。由于CD4+CD25+Treg细胞表面存在CD4分子,HIV也可感染并破坏CD4+CD25+Treg细胞,导致体内Treg细胞数量减少,免疫调节功能下降。若HBV/HIV混合感染,CD4+CD25+Treg细胞计数有可能作为病人免疫功能状态和病情进展与否的指标,CD4+CD25+Treg细胞的数量和功能状态在HIV/HBV混合感染患者的免疫治疗过程中是应该考虑的一个因素。     

膀胱癌组织CD4~+、CD8~+及CD20~+淋巴细胞表达及其临床病理意义

目的探讨膀胱癌组织中CD4~+、CD8~+及CD20~+淋巴细胞浸润情况及其与膀胱癌病理分级和临床分期的关系。方法应用免疫组织化学二步法检测34例膀胱癌患者组织中CD4、CD8及CD20分子的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果 34例膀胱癌组织中,CD4、CD8和CD20染色阳性率分别为100.0%、85.3%和64.7%,CD4、CD8阳性率均明显高于CD20(P0.05)。CD4分子在所有膀胱癌组织标本中均呈阳性表达;CD8分子在不同病理分级和临床分期组的表达差异均无统计学意义(P0.05),但其阳性率随病理分级及临床分期的增加有下降的趋势;CD20分子在不同病理分级组中的表达差异无统计学意义(P0.05),其阳性率随临床分期增加有升高的趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。结论膀胱癌组织以T淋巴细胞浸润为主,且CD8~+T细胞可能在其中发挥更为积极的作用,炎症细胞浸润可能是膀胱癌变过程中的早期事件。