SARS-CoV S蛋白功能性受体ACE2在人、兔角膜、结膜中的表达

目的 SARS冠状病毒(SARS-CoV)的S蛋白介导了病毒与宿主细胞的结合。最近已鉴定出SARS-CoV S蛋白的功能性受体是血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme2，ACE2)。本研究检测了ACE2在人、兔眼结膜、角膜中的表达，由此来初步推断SARS-CoV由眼部入侵的可能。方法 分别采取：(1)成人眼球破裂伤摘除的眼角膜和结膜组织；(2)4～6月中期引产胎儿的眼角膜、结膜、心、肺组织；(3)兔眼角膜、结膜、心、肺组织；(4)培养的人结膜成纤维细胞和兔角膜上皮细胞。分别采用RT-PCR和免疫组化方法检测各组织、细胞中ACE2的表达。取尸体解剖的成人心、肺组织作为对照、结果 RT-PCR法在上述各种组织和细胞中均检测到ACE2的扩增条带，其中胎儿、成人和兔的角膜、结膜扩增条带较心、肺稍弱，兔各组织的扩增条带亮度与对应的人体组织的扩增条带亮度相近。ACE2免疫组化反应产物主要位于胞浆和胞膜，呈棕黄色或棕褐色．角膜和结膜的上皮细胞及角膜内皮细胞呈明显的阳性表达，角膜和结膜的成纤维细胞呈弱阳性表达，培养的人结膜成纤维细胞和兔角膜上皮细胞亦可见阳性表达。兔组织中的ACE2表达强度及组织定位与人相近。结论 本研究从mRNA和蛋白质水平证实了眼组织存在SARS冠状病毒S蛋白的功能性受体ACE2，由此初步推断SARS-CoV存在由眼部入侵的可能，为临床进一步研究SARS的防护和致病机制提供了线索。同时，为新西兰大白兔可能成为研究SARS-CoV入侵途径的动物模型提供了初步的实验依据。     

新型冠状病毒感染相关蛋白ACE2和TMPRSS2在人结膜组织中的表达及意义

目的探讨新型冠状病毒肺炎(COVID-19)病毒感染相关蛋白血管紧张素转换酶2(ACE2)和跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)在人眼部结膜组织中的表达及其临床意义。方法收集2019年6月至2020年6月于西安市人民医院眼科手术切除的人体结膜组织标本50例, 包括正常结膜组织10例、结膜乳头状瘤组织15例、结膜色素痣组织15例和结膜囊肿10例, 并收集10例因外伤摘除眼球的角膜组织作为对照。采用免疫组织化学法对不同眼表组织标本中ACE2和TMPRSS2阳性表达进行定位, 并对其表达强度进行比较。结果 ACE2和TMPRSS2均表达于正常结膜上皮细胞、结膜乳头状瘤上皮细胞、结膜色素痣上皮细胞和结膜囊肿囊壁细胞中, ACE2主要表达于结膜上皮的表层细胞和中间层细胞, 在基底层细胞和杯状细胞不表达, TMPRSS2表达于全层细胞, 二者在结膜组织中的阳性表达率均为100%;ACE2和TMPRSS2在正常结膜组织、结膜乳头状瘤、结膜色素痣和结膜囊肿中的表达强度比较, 差异均无统计学意义(均P>0.05);ACE2和TMPRSS2在角膜组织中均为弱阳性表达, 二者在不同结膜组织中中度阳性和...     

SARS-CoV S666蛋白与眼部ACE2受体的结合作用

目的研究SARS冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV)S666蛋白与眼部功能性受体-血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme2,ACE2)的结合作用。方法构建SARS-CoV S666蛋白融合基因pS666-EGFP,并在哺乳动物细胞(293T细胞)中表达;酶联免疫吸附实验及流式细胞仪检测法进行SARS-CoV S666蛋白与结膜、角膜细胞及心、肺组织的体外结合研究。结果构建了融合基因pS666-EG-FP,琼脂糖凝胶电泳、SDS-PAGE及Western Blot分析证明SARS-CoV pS666-EGFP融合基因构建正确,基因表达产物与理论推算值相符,相对分子量约为100.7×103。酶联免疫吸附实验结果经析因方差分析显示:S666-EGFP蛋白与角膜上皮细胞、结膜成纤维细胞、结膜上皮细胞及结膜、角膜组织的结合能力比EGFP蛋白强(有统计学差异,P<0·001)。流式细胞仪检测结果显示:结膜上皮细胞、结膜成纤维细胞、角膜上皮细胞与S666-EGFP蛋白结合,但与EGFP蛋白均无结合。上述细胞及组织的结合能力较vero E6细胞及心、肺组织的结合能力稍弱。结合反应能够被ACE2抗体所阻滞,证实其为特异性结合。结论SARS-CoV S666蛋白与结膜、角膜细胞能够结合,对了解SARS的病理机制及进一步研究SARS的防护和治疗具有一定的参考意义。     

血管紧张素Ⅱ1型受体及血管紧张素Ⅰ转化酶 基因多态与 2型糖尿病视网膜病变的关系

血管紧张素 转化酶 (angiotensin converting enzyme,ACE)基因第 16内含子中有一个 2 87碱基对的插入 /缺失(insertion/deletion,I/D)多态 ,缺失型纯合子 (deletion/dele-tion,DD) ACE活性水平增高 [1 ] ,导致局部血管紧张素 (angiotensin ,Ag )生成增加 ,刺激血管平滑肌增生和血管收缩 ,从而在血管疾病发生、发展中发挥重要作用。人体中 Ag 主要通过 1型 Ag 受体 (type1receptor of angiotensin ,AT1R)发挥作用 [2 ] 。我们应用多聚酶链反应 (polymerase chainreaction,PCR)和 PCR/d De1酶切技术 ,探讨了 AT1R基因A116 6 C多…     

新型冠状病毒相关眼部疾病的研究进展

2019年新型冠状病毒肺炎(COVID-19)自爆发以来已在短时间内呈现出全球大流行状态,新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的多种变异株具有高度传染性和致病性。SARS-CoV-2可能通过血管紧张素转化酶2(ACE2)和跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)的介导感染组织细胞从而引发不同疾病。呼吸道、心血管、胃肠道系统的临床疾病较为常见; 也有大部分患者以眼部症状为主诉就诊。相较于严重的全身系统疾病,眼部相关症状很容易被忽视。文章通过对SARS-CoV-2相关多种眼部疾病的发病机制和相关病例进行综述,旨在增强临床医师对SARS-CoV-2相关眼病的重视,避免延误病情,造成视力的不可逆损失,并为眼部疾病的预防和治疗提供新思路。     

SARS-CoV S蛋白功能性受体ACE2在人角膜、结膜中的表达

目的 检测人角膜、结膜中血管紧张素转化酶2(ACE 2)的表达,由此来初步推断重症急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒由眼部入侵的可能。 方法 取成人眼球破裂伤摘除的眼角膜和结膜组织及4~6个月中期引产胎儿的眼角膜、结膜、心、肺组织,分别采用RT-PCR和免疫组化方法检测组织中ACE 2的表达。取成人尸体解剖的心、肺组织作为对照。 结果 在上述各种组织中均检测到了ACE 2的表达。 结论 眼角膜、结膜是人体暴露于SARS冠状病毒的一个重要部位,研究结果从mRNA和蛋白质水平证实了眼部组织存在SARS冠状病毒S蛋白的功能性受体ACE 2,由此初步推断SARS-CoV存在由眼部入侵的可能,为临床进一步研究SARS的防护和致病机制提供了线索。     

血管紧张素转换酶抑制剂抑制小鼠视网膜新生血管的实验研究

目的:探讨血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitors,ACEI)对视网膜新生血管(retinal neov-ascularization,RNV)的抑制作用。方法:采用随机对照实验研究。选取7天龄C57BL/6J新生小鼠36只,随机分为2组:高氧组和ACEI组,每组18只。ACEI组和高氧组小鼠建立氧诱导视网膜病变模型,出氧箱后每日分别ip卡托普利10mg/kg和等量生理盐水,连续5d。采用荧光素血管灌注视网膜铺片观察视网膜血管形态学改变;制作视网膜组织切片并进行HE染色计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数;采用Western blot检测视网膜血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白的表达。结果:荧光素血管灌注视网膜铺片:高氧组可见大量新生血管丛,伴明显荧光渗漏,ACEI组较高氧组视网膜新生血管减少,荧光渗漏减轻。突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数:ACEI组较高氧组减少,差异具有统计学意义(P=0.00)。视网膜AngII蛋白表达水平:ACEI组较高氧组下调,差异具有统计学意义(P=0.00)。视网膜VEGF蛋白表达水平:ACEI组较高氧组下调,差异具有统计学意义(P=0.00)。结论:早期应用ACEI可一定程度抑制RNV形成。     

血管紧张素Ⅱ和血管内皮生长因子在视网膜新生血管中的表达及意义

目的:探讨血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在视网膜新生血管发生发展中的作用。方法:随机对照实验研究。选取7d龄C57BL/6J新生小鼠40只,随机分为2组:正常对照组和高氧模型组,每组20只,高氧模型组建立氧诱导视网膜病变模型。采用荧光素血管灌注视网膜铺片观察视网膜血管形态学改变;制作视网膜组织切片并进行HE染色计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数;采用Western blot检测视网膜Ang II和VEGF蛋白的表达。采用独立样本t检验和Pearson相关分析进行统计学分析,以P<0.05作为差异具有统计学意义。结果:荧光素血管灌注视网膜铺片:高氧模型组较正常对照组可见大量新生血管丛,伴明显荧光渗漏。突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数:高氧模型组(43.23±2.57)个较正常对照组(1.37±0.93)个明显增多,差异具有统计学意义(P=0.00)。视网膜Ang II蛋白表达水平:高氧模型组(0.365±0.004)较正常对照组(0.035±0.003)明显上调,差异具有统计学意义(P=0.00)。视网膜VEGF蛋白表达水平:高氧模型组(0.372±0.004)较正常对照组(0.049±0.007)明显上调,差异具有统计学意义(P=0.00)。结论:Ang II促血管生成的作用与VEGF存在明确的联系,Ang II通过上调VEGF参与视网膜新生血管的形成。     

血管紧张素Ⅱ在单基因遗传db/db糖尿病小鼠视网膜中的表达

目的研究血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)在C57BL／KsJ db／db糖尿病小鼠视网膜中的表达及其与病程的关系。方法选用2周龄db／db小鼠24只，其db／ 型同性同窝瘦型鼠为对照。取2月龄、6月龄、9月龄、12月龄C57BL／KsJ db／db糖尿病小鼠的眼球，制成石蜡切片，行免疫组织化学染色，进行免疫定位及用计算机一图像分析仪对视网膜神经节细胞层的AngⅡ进行灰度和面密度分析。结果在糖尿病早期db／db小鼠的视网膜中AngⅡ即有表达，并随病程的进展表达增强，AngⅡ主要表达在视网膜的神经节细胞层、内核层和视网膜血管。结论在糖尿病早期眼内的PingⅡ即已激活，AngⅡ可能参与糖尿病视网膜病变的发生与发展。     

肾素-血管紧张素系统在糖尿病视网膜病变中的研究进展

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病严重的微血管并发症之一,是目前发达国家成人致盲的主要原因。随着社会的进步和人民生活水平的提高,糖尿病的发病率日趋增多,已经成为危害人类健康的一种严重的侵犯全身多个系统的代谢病,其所引起的眼部并发症成为目前世界上主要的致盲眼病之一。因此,研究DR的发病机制,探讨其治疗途径,是当前眼科领域攻关的重要课题。最新的研究表明,眼部组织具有独立合成肾素-血管紧张素系统(rennin-angiotensin system,RAS)的能力,而且RAS参与了DR的发生发展,阻断RAS对于阻止和治疗DR可能具有重要价值。     

新型冠状病毒疫苗相关眼部病变的研究进展

2019年以来,新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染在世界范围内广泛流行,造成约7.7亿人感染和690万人死亡。目前针对SARS-CoV-2感染的疫苗已经成为预防重症SARS-CoV-2发生的主要方法。SARS-CoV-2疫苗对于预防重症SARS-CoV-2感染具有实质性保护作用,但使用SARS-CoV-2疫苗后会出现全身多处的不良反应。越来越多的研究表明SARS-CoV-2疫苗可引起眼部结膜、角膜、巩膜、葡萄膜、视网膜、视神经组织的病变,造成视觉功能的损害。文章主要回顾分析了SARS-CoV-2疫苗的分类和特性及其与眼部组织病变的相关研究,期望能更加深刻地认识SARS-CoV-2疫苗引起的眼部不良反应,为防治其造成的眼组织损伤和视功能损害提供一些理论性指导。     

严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)眼表感染研究进展

严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2,又称COVID-19)经眼表传播远较经口鼻传播困难,然而现有证据认为眼表传播仍是一条可能的途径,尤其对于医护人员.本文描述了SARS-CoV-2相关的眼表症状,阐释了眼表SARS-CoV-2入胞的可能机制和与眼表相关的SARS-CoV-2传播机制,并对现有的和未来可...     

Lysozyme Protects Against Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 Infection and Inflammation in Human Corneal Epithelial Cells

PurposeThe purpose of this study was to investigate the effects of lysozyme, an antimicrobial enzyme found in tears that protects the eye against pathogens, on pseudotyped severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) infection through corneal epithelial cells.MethodsThe expression of the angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) and transmembrane serine protease (TMPRSS2) in human corneal epithelial cells (HCECs) was measured by RT-PCR and Western blotting. The altered expression of the pro-inflammatory molecules induced by spike protein and lysozyme was analyzed by RT-PCR. Cell toxicity was tested by CCK8 assay. The cell entry of SAR-CoV-2 in HCECs and primary rabbit corneal epithelial cells (RbCECs) was detected by luciferase assay.ResultsACE2 and TMPRSS2 were highly expressed in HCECs. The spike proteins of SARS-CoV-2 stimulated a robust inflammatory response in HCECs, characterized by increased secretion of pro-inflammatory molecules, including IL-6, TNF-α, iNOS, and MCP-1, and pretreatment with lysozyme in HCECs markedly decreased the production of proinflammatory molecules induced by spike proteins. In addition, the inflammatory cytokine TNF-α enhanced the entry of SARS-CoV-2 into HCECs, which can be mitigated by pretreatment with lysozyme.ConclusionsIn this study, we analyzed the susceptibility of human corneal epithelial cells to SARS-CoV-2 infection and suggested the protective effects of lysozyme on SARS-CoV-2 infection.     

Multimodal image analysis of the retina in Hunter syndrome (mucopolysaccharidosis type II): Case report

Introduction: We report a case of retinal and posterior ocular findings in a 33-year-old man diagnosed with Hunter syndrome (Mucopolysaccharidosis type II) in a multimodal imaging way.

Case presentation: Our patient was complaining of blurred night vision for the past 3 years. He had not received any systemic treatment for Hunter syndrome. Vision acuity was 20/20 in both eyes and corneas were clear. Fundus examination revealed bilateral crowded and hyperemic optic nerve heads (elevated in the ocular ultrasound) and areas of subretinal hypopigmentation. There was hyperautofluorescence at the central fovea and perifovea, and a diffuse bilateral choroidal fluorescence in angiography. Macular SD-OCT showed a thinning of the external retina at the perifovea in both eyes. Visual field testing showed a bilateral ring scotoma. The full field ERG was subnormal, with a negative response in the scotopic phase. Visual Evoked Potencial test and cranial MRI were normal.

Conclusion: Our multimodal analysis reported here attempted to contribute to the knowledge of the natural history of GAG deposition in the eye, focusing on the retina and retinal pigment epithelium. Defining this natural history is essential for a proper comparison with Hunter patients receiving systemic treatment, thus determining if it can or cannot improve retinal function in humans with this disorder.     

重组人促红细胞生成素对急性高眼压兔眼视神经和视网膜超微结构的保护作用

目的:探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)对急性高眼压视网膜缺血所致的视神经和视网膜超微结构损害的保护作用。方法:将12只健康新西兰白兔平均分为模型组和EPO组。两组兔均任选1眼作为实验眼,用生理盐水前房灌注法造成急性高眼压模型。造模前第3d及造模结束时,EPO组兔皮下注射rhEPO100U/kg共两次。第7d进行视神经和视网膜的超微结构观察。结果:急性高眼压使视神经和视网膜的超微结构受到明显损害,全身使用rhEPO后这种损害显著减轻。结论:rhEPO能够减轻急性高眼压引起的视神经和视网膜超微结构损害。rhEPO可能成为新的视神经保护药物。