鬼臼毒素衍生物CIP-36诱导KBV200细胞凋亡

目的：研究鬼臼毒素衍生物CIP-36对多药耐药人口腔鳞状上皮癌细胞KBV200的抗肿瘤活性及其作用机制。方法：MTT法考察CIP-36对KBV200体外增殖的抑制作用;Giemsa染色、DNA ladder和流式细胞仪等方法进行细胞凋亡检测;免疫荧光法观察CIP-36对细胞骨架的作用;western-blot法检测CIP-36对KBV200细胞P-gp表达的影响。结果：CIP-36对KBV200细胞有明显的抑制作用,IC50值为（2.06±0.38）μmol/L,能够诱导细胞产生凋亡小体和DNAladder。流式细胞检测到了细胞凋亡峰,并观察到细胞周期出现S/G2＋M期阻滞。Western-blot结果显示P-gp表达降低,并且观察到CIP-36可破坏KBV200细胞的细胞骨架。结论：CIP-36可能通过降低P-gp的表达,破坏细胞骨架等多靶点克服KBV200细胞株的多药耐药性。     

鬼臼毒素衍生物CIP-36诱导KBV 200细胞凋亡

目的：研究鬼臼毒素衍生物CIP-36对多药耐药人口腔鳞状上皮癌细胞KBV 200的抗肿瘤活性及其作用机制。方法：MTT法考察CIP-36对KBV 200体外增殖的抑制作用;Giemsa染色、DNA ladder和流式细胞仪等方法进行细胞凋亡检测;免疫荧光法观察CIP-36对细胞骨架的作用;western-blot法检测CIP-36对KBV 200细胞P-gp表达的影响。结果：CIP-36对KBV 200细胞有明显的抑制作用,IC₅₀值为（2.06±0.38）μmol / L,能够诱导细胞产生凋亡小体和DNA ladder。流式细胞检测到了细胞凋亡峰,并观察到细胞周期出现S/G₂+M期阻滞。Western-blot结果显示P-gp表达降低,并且观察到CIP-36可破坏KBV 200细胞的细胞骨架。结论：CIP-36可能通过降低P-gp的表达,破坏细胞骨架等多靶点克服KBV 200细胞株的多药耐药性。     

鬼臼毒素衍生物CIP-36抗肿瘤多药耐药的机制

研究鬼臼毒素衍生物CIP-36对耐药人口腔鳞状上皮癌细胞KBV200的抗肿瘤活性及其作用机制。采用MTT法观察CIP-36对多种肿瘤细胞和正常细胞的体外抑制作用以及对KB和KBV200细胞生长曲线的作用,Hoechst荧光染色进行细胞凋亡检测,RT-PCR检测CIP-36对KB及KBV200细胞p53、p21、caspase-3、bax、mdr-1和bcl-2的mRNA表达的影响,免疫组织化学检测观察CIP-36对KBV200细胞P-gp表达的影响。结果表明,CIP-36对多种肿瘤细胞均有较好的抑制作用,且对耐药株细胞均有明显抑制作用。荧光染色结果显示,CIP-36可诱导KBV200细胞凋亡。同时CIP-36可剂量依赖性地增加KBV200及KB细胞的p53、p21、caspase-3及bax的mRNA表达,同时降低mdr-1和bcl-2的mRNA表达,与对照组比较差异均有统计学意义。免疫组织化学检测结果显示,CIP-36显著降低KBV200的P-gp表达。提示CIP-36可能通过影响多个与肿瘤耐药相关基因和蛋白的表达来克服肿瘤细胞株的多药耐药性。     

新的微管抑制剂YB-13诱导HeLa细胞凋亡及其机制

目的研究吲哚3-草酰胺衍生物YB-13在体外试验中诱导宫颈癌细胞株(HeLa细胞)发生凋亡及其作用机制。方法采用MTT法、细胞生长曲线、细胞集落、荧光显微镜、DNAladder和流式细胞仪等方法进行凋亡检测,用RT-PCR方法检测凋亡过程中相关基因表达的变化;间接免疫荧光观察YB-13对细胞骨架的影响,观察YB-13对微管蛋白聚合和解聚。结果吲哚3-草酰胺衍生物YB-13在体外试验中对HeLa细胞的杀伤力强,荧光显微镜观察到了凋亡小体;DNAladder法检测到凋亡时DNA降解形成的梯带,流式细胞仪检测到了细胞凋亡峰,同时观察到细胞周期的变化。在凋亡过程中,凋亡相关基因bcl-2家族中bcl-2表达下调而bax表达上调;实验观察到YB-13能影响HeLa细胞的细胞骨架,并且YB-13可影响微管蛋白聚合和解聚。结论YB-13在体外试验中能诱导HeLa细胞发生凋亡,其作用机制可能与bax基因表达上调、bcl-2基因表达下调以及对微管蛋白的抑制作用有关。     

博宁霉素克服人肿瘤细胞多药耐药性的机制

目的:研究博来霉素族新抗生素博宁霉素能否克服肿瘤细胞的多药耐药性。方法:选用耐多柔比星的人乳腺癌MCF-7细胞(MCF-7/DOX)、耐长春新碱的人口腔上皮癌KB细胞(KBV200)及其相应的敏感细胞。MTT法检测细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期的变化以及细胞内活性氧自由基的水平;DNA特异染料Hoechst 33342染色检测染色质凝集;Western blot检测蛋白的表达。结果:MTT法检测到博宁霉素抑制MCF-7/DOX和敏感MCF-7细胞的IC50值分别为0.17和0.10μmol·L-1;抑制KBV200和敏感细胞的IC50值分别为0.38和0.21μmol·L-1。耐药细胞对博宁霉素没有交叉耐药性。博宁霉素使耐药细胞停滞在G2/M期,细胞内活性氧自由基水平增加,染色质发生凝集,引起细胞凋亡,Western blotting检测到降低多药耐药相关蛋白P-糖蛋白的含量。结论:博宁霉素能克服肿瘤细胞的多药耐药性,其作用机制与引起细胞凋亡和降低P-糖蛋白表达有关。     

氯化两面针碱体外对人口腔鳞癌多药耐药细胞KBV200的抗癌活性

目的探讨氯化两面针碱对多药耐药癌细胞的抗癌作用。方法应用MTT比色法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞周期,Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡,酶联免疫吸附法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3)含量。结果氯化两面针碱(0.75,1.5,3,6和12mg·L-1)浓度依赖性地降低人口腔鳞癌多药耐药细胞KBV200的存活率,作用48h时IC50值为(2.43±0.19)mg·L-1;氯化两面针碱(0,3,6和9mg·L-1)与KBV200细胞作用48h,细胞凋亡率依次为(1.6±0.4)%,(2.3±0.7)%,(14.0±2.5)%和(8.3±2.2)%;氯化两面针碱6mg.L-1可使KBV200细胞caspase3含量升高,3mg·L-1作用12,24和48h可增加KBV200细胞G2/M期细胞比例。结论氯化两面针碱对多药耐药KBV200细胞具有抑制生长、促进凋亡和阻滞细胞周期的作用,可能是对多药耐药癌细胞敏感的一种中药活性成分。     

土槿乙酸衍生物PBA-D1诱导Hela细胞凋亡及其机制

目的研究土槿乙酸衍生物PBAD1体外能否诱导宫颈癌细胞株(Hela细胞)发生凋亡及其发生机制。方法采用MTT、SRB、细胞生长曲线、细胞集落、荧光显微镜检测凋亡细胞、DNAladder、流式细胞仪等方法进行凋亡检测,用Westernblot方法检测凋亡过程中相关基因表达的变化。结果土槿乙酸衍生物PBAD1在体外试验中对Hela细胞的杀伤力强,荧光显微镜观察到了凋亡小体;DNAladder法检测到凋亡时DNA降解形成的梯带,流式细胞仪检测到了细胞凋亡峰,同时观察到细胞周期的变化。在凋亡过程中,凋亡相关基因p53基因表达明显增高,而bcl2表达下调。结论PBAD1体外能诱导Hela细胞发生凋亡,其机制可能与p53基因表达上调及bcl2基因表达下调有关。     

环孢素A诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡以及对P糖蛋白表达的影响

目的研究环孢素A(cyclosporin A,CsA)诱导人胃癌MGC80-3细胞的凋亡作用以及对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响,探讨细胞凋亡与P-gp表达的关系。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度CsA处理24、48、72h对MGC80-3细胞增殖的抑制作用,吖啶橙/溴化乙啶(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)染色和An-nexin-V-FITC/PI双染分别于荧光显微镜和流式细胞仪(flowcytometry,FCM)分析CsA处理48 h后凋亡细胞形态的改变并计算细胞凋亡率,Western blot法检测MGC803细胞P-gp的表达。结果 CsA对人胃癌MGC80-3细胞增殖有抑制作用,在0～25.0μmol·L-1浓度范围和24～72 h时间范围内CsA对胃癌MGC80-3细胞增殖抑制作用与药物浓度和作用时间呈现明显依赖关系。AO/EB染色和Annexin V-FITC/PI双染FCM检测显示CsA处理MGC80-3细胞48 h后通过荧光显微镜观察可见细胞出现形态不规则、核染色质固缩等细胞凋亡形态学的改变,提高CsA作用剂量,导致细胞凋亡率增加,与control组相比差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。Western blot表明CsA下调了MGC80-3细胞P-gp的表达,蛋白表达量呈现浓度依赖性降低(P<0.05或P<0.01)。结论 CsA能诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡和下调P-gp的表达,其诱导细胞凋亡作用可能与P-gp的表达相关。     

雄黄微生物提取液对K562／ADM细胞P-糖蛋白和多药耐药基因表达的影响

目的：研究雄黄微生物提取液（RBS）诱导K562／ADM细胞凋亡的作用,并探讨其对P-糖蛋白（P-gP）和多药耐药基因（MDRI）表达的影响。方法：采用“微生物浸出”法制备RBS,并以H3AsO3作为阳性对照,AnnexinV—PI双染法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞P—gP表达率;逆转录聚合酶链技术（RT-PCR）检测细胞MDRImRNA表达水平。结果：RBS可诱导多药耐药白血病细胞发生典型凋亡,抑制P-gp的表达,下调MDRI mRNA表达水平。在含砷量相同的条件下,RBS诱导效应明显强于H3AsO3。结论：诱导细胞凋亡、下调P-gp／MDRI蛋白的表达,可能是雄黄逆转白血病耐药的重要分子机制。     

土槿乙酸衍生物PB-LY体外抗肿瘤作用及其机制研究

目的通过研究土槿乙酸衍生物PB-LY对肿瘤细胞的影响,探讨PB-LY的抗肿瘤活性及其作用机制。方法采用MTT法和绘制细胞生长曲线等方法检测PB-LY对多种肿瘤细胞的抑制作用;采用荧光染色、DNAladder和流式细胞术等方法检测PB-LY诱导肿瘤细胞凋亡的作用;采用RT-PCR法检测PB-LY对肿瘤细胞相关凋亡基因Caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA表达的影响。结果PB-LY作用于多种肿瘤细胞的IC50在1.35μmol.L-1～3.68μmol.L-1之间,且有明显的量效关系,能够诱发肿瘤细胞产生凋亡小体、DNAladder和细胞凋亡峰,上调相关促凋亡基因Caspase-3和Bax的表达,同时协同下调抑凋亡基因Bcl-2的表达。结论PB-LY能抑制肿瘤细胞的生长,同时影响肿瘤细胞内相关促凋亡和抑凋亡基因的表达,从而诱导肿瘤细胞发生凋亡。     

茯苓乙醇提取物的分离纯化及抗KBV200细胞多药耐药活性

目的对茯苓的乙醇提取物进行分离纯化,并对所得的单体化合物进行抗KBV200细胞多药耐药活性的检测。方法采用薄层色谱、柱色谱、葡聚糖凝胶分离、高效液相色谱等方法及波谱技术对茯苓的乙醇提取物进行分离纯化和结构鉴定;利用MTT法检测各化合物对KBV200细胞多药耐药性的逆转作用。结果从茯苓乙醇提取物中分离并鉴定出8个三萜类化合物。在浓度为12.5 mg/L时,8个化合物对KBV200的多药耐药性均有一定的逆转作用,其中化合物3（去氢土莫酸）的逆转作用最强,其逆转倍数为12.6。结论茯苓中的三萜类化合物具有逆转KBV200细胞多药耐药性的作用。     

赛赓啶对 KBV200细胞多药抗性的逆转作用

研究赛赓啶对KB_V200细胞多药抗性的逆转作用及逆转机制。在KB_V200细胞,采用MTT法,测出赛赓啶对长春新碱、阿霉素和鬼臼乙叉甙耐药的逆转系数分别为5.5,2.0和1.9,而对5-氟尿嘧啶、美法仑的细胞毒性作用无明显影响,表明赛赓啶为多药抗性逆转剂。荧光分光光度法测定表明,赛赓啶可使KB_V200细胞内阿霉素蓄积量增加。流式细胞荧光测定显示赛赓啶可增加罗丹明123的蓄积并减慢其外排。免疫细胞化学及狭缝杂交表明赛赓啶不影响KB_V200细胞的P-糖蛋白染色深度和 mdr1 RNA 表达水平。以上结果提示赛赓啶的多药抗性逆转机制是抑制P-糖蛋白泵的功能。     

野生型p53基因促进长春新碱诱导的细胞凋亡

为探讨VCR与p53介导的细胞凋亡的关系,将野生型p53基因导入一个内源性p53基因重组的多药耐药细胞系 KB_V200,经抗性筛选和杂交鉴定获得外源性p53基因稳定表达的转染细胞系KB_V200-p53。VCR处理细胞后,经电镜及荧光显微镜观察表明KB_V200-p53细胞呈现凋亡的典型形态学特征;而流式细胞术结果显示经600nmol·L^-1的VCR作用24h,KB_V200-p53细胞和KB_V200细胞的凋亡百分数分别为42.4%和8.4%。结果提示野生型p53基因能促进VCR诱导的细胞凋亡,肿瘤细胞对VCR的耐药性可能与细胞内p53基因失活有关。     

儿茶素对耐药人口腔表皮样癌细胞KBV200凋亡的影响

目的　研究两种儿茶素ECG、EGCG对耐药人口腔表皮样癌细胞KBV2 0 0的促凋亡作用。方法　MTT法检测药物对细胞的毒性作用 ,用形态学观察法、TUNUL法、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪PI染色法观察细胞凋亡。结果　 30mg·L-1ECG或 8mg·L-1EGCG联合 0 0 2 4mg·L-1长春新碱 (VCR)可用形态学观察、免疫组化法、琼脂糖凝胶电泳法见到细胞凋亡改变 ,而对照组无此类改变或改变不明显。结论　两种儿茶素在低细胞毒剂量时可促进长春新碱对耐药口腔表皮样癌细胞KBV2 0 0的细胞凋亡作用。     

KB细胞耐药株的建立及其耐药机制的探讨

用对长春新碱(VCR)敏感的KB细胞为亲本,通过诱变剂甲基磺酸乙酯刺激,然后在培养液中加入浓度递增的CVR,得到耐药细胞株KB_V200。此细胞株对VCR的耐受程度约为KB细胞的175倍。对其它抗肿瘤药物如紫杉醇、秋水仙碱和阿霉素等也有不同程度的交叉耐药性。进一步研究表明,KB_V200对³H-VCR的蓄积明显减少,且耐药基因(mdr1)表达增加。钙通道阻滞剂维拉帕米(Ver)可增加KB_V200对³H-VCR的蓄积和对VCR的敏感性。这些结果提示,KB_V200耐药的机制可能是由于mdr1基因表达增加,产生过量的p-糖蛋白,使药物外排增多所致。     

苦参碱与3种抗肿瘤药物联合作用对KBV200耐药细胞株细胞周期的影响

目的:探讨苦参碱分别与3种常用抗肿瘤药物长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)合用对KBV200耐药细胞株细胞周期的影响。方法:将培养后的KBV耐药细胞分为对照组、抗肿瘤药物组及其与苦参碱合用组,采用流式细胞仪检测、分析各组细胞周期的变化及凋亡情况。结果:与抗肿瘤药物单用组比较,苦参碱与VCR、ADM合用组细胞处于不同周期的细胞比例及凋亡数均无明显变化;苦参碱与DDP合用组G0~G1期细胞数下降、G2~M期细胞数升高。结论:推测苦参碱逆转KBV200细胞对VCR和ADM的耐药作用可能与细胞周期及凋亡无关;苦参碱能轻度增强DDP的细胞毒作用。