胃癌RUNX3基因甲基化及其蛋白表达临床意义的研究

目的:观察胃癌组织中RUNX3基因启动子区甲基化状态及其对蛋白表达的影响,并分析甲基化及蛋白表达与临床病理特征的关系。方法:采用甲基化特异性定量PCR检测胃癌组织及相应癌旁正常组织中RUNX3的甲基化状态。应用Western Blot法检测RUNX3蛋白表达情况。结果:162例胃癌组织及相应癌旁组织中RUNX3基因甲基化阳性率分别为77.8%(126/162)、38.9%(63/162)(P<0.001)。RUNX3蛋白表达下调/缺失率分别为81.5%(132/162)、12.3%(21/162)(P<0.001)。RUNX3基因甲基化阳性率与胃癌的临床分期、组织分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移具有相关性(P<0.05),RUNX3蛋白表达与胃癌的组织分化程度、淋巴结转移具有相关性(P<0.05)。结论:RUNX3甲基化及其蛋白表达与胃癌的发生发展关系密切,并且甲基化影响其蛋白表达。     

肝细胞癌和癌旁肝组织中PIAS1蛋白表达及其临床意义

目的探讨肝细胞癌(HCC)和癌旁肝组织中信号转导和转录激活因子1(STAT1)抑制因子(PIAS1)的表达及其临床意义。方法利用两步法免疫组织化学技术检测PIAS1蛋白在HCC及其癌旁肝组织的表达。结果PIAS1蛋白在HCC中的阳性率和阳性强度均低于癌旁肝组织(P<0.01);HCC中PIAS1蛋白的表达强度与患者的性别和肿瘤的大小无关(P>0.05),但与肿瘤细胞的分化程度明显相关(P<0.01)。分化越差,表达越弱。结论提示检测PIAS1蛋白对判断HCC的预后具有一定意义,纠正PIAS1蛋白的表达有可能成为HCC基因治疗新策略。     

肝细胞肝癌患者ZHX2、GPC3、H19基因表达水平及其相关关系

目的研究舟山海岛地区肝细胞肝癌(HCC)组织与相应癌旁肝组织新型转录抑制因子锌指和同源框2(ZHX2)基因、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)mRNA和长链非编码RNA(IncRNA)H19基因的表达差异及其与临床病理特征的关系。方法收集17例原发性肝癌患者手术切除肿瘤组织及相应癌旁肝组织,反转录实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测ZHX2、GPC3 mRNA和H19基因表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果 ZHX2基因mRNA在HCC中表达明显低于癌旁肝组织,而GPC3基因mRNA在HCC中表达则明显高于癌旁肝组织,差异有统计学意义(P0.05)。HCC患者ZHX2 mRNA表达与GPC3呈负相关,GPC3mRNA表达与血清AFP水平呈正相关,差异有统计学意义(r=-0.626 8,r=0.536 7,P0.05),而且GPC3 mRNA表达增高患者多伴有乙型肝炎病毒感染(P0.05)。结论肝细胞肝癌组织中ZHX2与GPC3具有明显相关性,ZHX2可能通过调控GPC3参与肝细胞肝癌的发生发展。     

原发性肝癌组织芯片中RASSF1A的表达及临床意义

[目的]探讨RAS相关区域家族IA(RASSF1A)蛋白在原发性肝细胞癌(HCC)组织芯片中的表达及其临床意义.[方法]98例HCC,89例非癌肝组织及24例癌旁肝组织构建组织微阵列.应用免疫组化技术检测RASSF1A蛋白的表达水平,并分析其与HCC临床病理特征的关系.[结果](1)组织微阵列利用率为97.16%(205/211);(2)RASSF1A蛋白明确定位于肝细胞胞浆内;(3)HCC组织中的RASSF1A蛋白的阳性率为39.58%(38/96).明显低于非癌组织组57.65%(49/85,P=0.015)及癌旁肝组织组66.67%(16/24,P=0.017);(4)HCC中临床TNM分期Ⅰ,Ⅱ期RASSF1A阳性率为57.38%(35/61),明显高于Ⅲ,Ⅳ期8.57%(3/35,P=0.000);(5)HCC中无转移组RASSF1A阳性率为63.64%(28/44),明显高于转移组4.88%(2/41,P=0.000);(6)RASSF1A蛋白表达在＜50岁组(16/54,29.63%),AFP≥400 μg/L组(14/55,25.45%),有门脉癌栓组(3/31,6.98%),包膜浸润组(16/64,25%)及多个结节组(5/31,16.13%)明显低于≥50岁组(22/42,52.38%,P=0.024),AFP＜400 μg/L(24/41,58.54%,P=0.002),无门脉癌栓组(35/65,53.85%,P=0.000),无包膜浸润组(22/32,68.75%,P=0.000)及单个结节组(33/65,50.77%,P=0.000),与性别、有无肝硬化、HCC分化程度及肿瘤大小无关(P＞0.05).[结论]应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的,具有快速、方便、经济、准确的特点.RASSF1A表达缺失在HCC的发生发展中起重要作用;检测RASSF1A蛋白指标有助于HCC诊断和判断患者预后.     

抑癌基因PTEN与pAkt在肝细胞肝癌中表达及其意义

目的研究肝细胞癌（HCC）中抑癌基因第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因（PTEN）与磷酸化丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶B（pAkt）表达及其意义。方法采用免疫组化S—P法检测65例HCC及癌旁组织中FFEN与pAkt表达并分析两者与肝癌患者年龄、临床分期、病理类型及侵袭转移性之间关系。结果HCC中PTEN蛋白阳性率明显低于癌旁肝组织，且随HCC恶性程度、侵袭转移性升高而显著下降（P〈0．05）；pAkt在HCC中表达率明显高于癌旁肝组织，且其表达率随HCC恶性程度、侵袭转移性升高而增加（P〈0．05）；肝癌及癌旁组织中，FFEN与pAkt表达均呈负相关（P〈0．01）。结论PTEN与pAkt表达与肝癌组织恶性程度相关，联合检测PTEN与pAkt在癌组织中表达情况，可作为肿瘤预后评估指标之一。     

肝硬化、肝细胞肝癌中PTEN的表达及其临床意义

目的:探讨PTEN在肝硬化、肝癌组织中的表达及其临床意义.方法:用S-P免疫组织化学方法分别检测71例肝细胞性肝癌(HCC)15例肝硬化及10例正常肝脏PTN蛋白表达.结果:10例正常肝组织中PTEN蛋白均为阳性表达.HCC中PPTEN蛋白的阳性率为69.0%(49/71),明显低于肝硬化组(93.3%)及正常肝组织(100%)(P<0.01).PTEN蛋白在高分化、中分化、低分化肝细胞性肝癌中的阳性率分别为73.5%、69.6%和57.1%,肝细胞性肝癌中PTEN蛋白阳性表达率与肿瘤的组织分化及其它临床病理因素无关(P>0.05).肝癌PTEN蛋白阳性表达率与有无合并肝硬化无关(P>0.05).结论:PTEN表达缺失在肝细胞性肝癌的发生和发展过程中发挥重要作用,检测PTEN蛋白表达有助于肝细胞性肝癌的诊断.     

CD44和nm-23在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨CD44与nm-23在肝细胞癌(HCC)中的表达及其与HCC分化、浸润、转移的关系。方法采用组织芯片和免疫组织化学(SP法)检测40例HCC组织中CD44和nm-23的表达。结果40例HCC中CD44与nm-23的阳性率分别为77.5%(31/40)、55.0%(22/40);癌组织中有22例表达nm-23,癌周肝组织中有5例表达,nm-23在肝细胞癌组织中的表达明显高于癌周肝组织(P<0.0001)。CD44表达与HCC的分化程度、包膜状况无关(P>0.05),而与肿瘤大小及转移密切相关(P<0.05)。nm-23表达与HCC的分化程度无关(P>0.05),而与HCC的大小、包膜状况和转移密切相关(P<0.05)。结论CD44与nm-23的表达与HCC的浸润转移密切相关,CD44可作为临床HCC预后评估的重要参考指标,nm-23可以作为判断HCC转移的标志。     

Survivin在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 研究肝细胞癌(HCC)中Survivin的表达及其与临床指标的关系.方法 应用免疫组织化学SP法检测HCC组织及相应癌旁组织Survivin蛋白的表达,TUNEL法检测细胞凋亡指数(AI).结果 75% 的肝癌组织表达Survivin蛋白,而癌旁及正常肝癌组织内均阴性表达.阳性表达率与肝内转移(42.9% 和92.3%)、门静脉癌栓形成(47.1%和95.7%)及肿瘤大小(89.3%和47.1%)有关;30例Survivin表达阳性癌组织的AI为(1.558±0.628)%,显著低于Survivin表达阴性癌组织(4.738±0.954)%,(P<0.05).结论 Survivin可能通过对凋亡的抑制而参与肝癌发生、发展.     

叉头框转录因子J和核转录因子κB在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的探讨肝细胞肝癌(HCC)中叉头框转录因子J(FOXJ1)和核转录因子κB(NF-κB)的表达情况及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化En Vision法检测60例HCC组织和30例癌旁组织中FOXJ1和NF-κB蛋白的表达特点,分析HCC组织中FOXJ1和NF-κB表达的相关性及与临床病理特征的关系。结果 HCC组织中FOXJ1和NF-κB蛋白阳性表达率分别为70. 00%(42/60)和78. 33%(47/60),均显著高于癌旁组织的20. 00%(6/30)和16. 67%(5/30),差异有统计学意义(P 0. 05)。FOXJ1和NF-κB表达均与分化程度、门静脉癌栓及临床分期密切相关(P 0. 05)。FOXJ1和NF-κB在HCC中的表达呈正相关(r=0. 362,P 0. 05)。结论 FOXJ1和NF-κB蛋白表达升高参与HCC的发生、发展过程。     

原发性肝癌T淋巴细胞浸润和精氨酸酶-1表达的相关性研究

目的观察原发性肝细胞癌(HCC)和癌旁组织中T淋巴细胞浸润和及其和精氨酸酶-1(Arg-1)之间的关系。方法利用肝癌组织芯片和免疫组化方法,检测原发性肝癌和癌旁组织中CD3、CD4、CD8和Arg-1蛋白的表达。纳入分析的共41例HCC、36例癌旁组织。结果 CD3、CD4、CD8和Arg-1在肝癌组织中的表达明显低于癌旁组织,癌旁组织中CD3的表达和淋巴结转移及血HBsAg阳性相关,未发现Arg-1的表达和T细胞标志物之间有明显的相关性。结论 HCC中T细胞浸润和Arg-1表达减少,癌旁组织中T细胞浸润和Arg-1表达增多可能和肝脏局部炎症反应和抗肿瘤免疫功能下调有关。     

肝癌组织中转化生长因子beta1表达与Treg浸润的关系及临床意义

目的 探讨肝癌组织中转化生长因子beta1表达与Treg浸润的关系及临床意义.方法 采用免疫组织化学染色的方法检测213例肝癌组织、癌旁肝组织中TGF-β和Foxp3表达.结果 肝癌组织中TGF-β低表达组92例,高表达组121例,高表达阳性率为56.81％;癌旁组织中TGF-β低表达组44例,高表达组169例,高表达阳性率为79.34％,癌组织和癌旁高表达率差异有统计学意义(P=0.0000).肝癌组织中Foxp3细胞平均密度为2.76个/HP,癌旁极少见或未见.肝癌组织中TGF-β与Foxp3表达呈正相关(r=0.221,P=0.027).肝癌组织中TGF-β和Foxp3表达在患者血浆AFP浓度高水平组高于低水平组(P=0.017 6, 0.028 1).结论 TGF-β在肝癌瘤旁组织较之肝癌组织表达更为明显,而Treg侵润则与之不相符,在肝癌组织中TGF-β的表达,与肿瘤局部组织中的Treg侵润具有一定的正相关性,与临床特征相关联可见患者血清AFP水平与TGF-β及Foxp3表达具有一定的相关性.     

环氧化酶-2基因在肝细胞癌中的表达及其意义

目的探讨环氧化酶-2（COX-2）在肝细胞癌发生发展中的作用及其意义.方法用免疫组织化学的方法检测41例肝细胞癌组织、16例乙型肝炎后肝硬化组织及5例正常肝脏组织中COX-2蛋白的表达情况,并分析COX-2蛋白表达与肝细胞癌临床生物学特征的关系.结果COX-2蛋白在肝细胞癌和肝硬化组织中的表达率分别为61.0%（25/41）和56.3%（9/16）,正常肝脏组织中无表达,与以上各病变组织COX-2蛋白表达差异有显著性（P＜0.05）;而在肝硬化组织与肝细胞癌组织COX-2蛋白表达差异无显著性（x^2=0.11,P＞0.05）.COX-2蛋白表达与肝细胞癌组织分化程度、癌肿转移状况有关（x^2=10.3,4.81,P＜0.05）.结论COX-2蛋白在肝硬化、肝细胞癌组织中表达上调,在肝细胞癌发生发展过程中可能起重要作用.     

热休克蛋白70(HSP70)在食管鳞癌组织中的表达和意义

目的 探讨热休克蛋白70（HSP70）在食管鳞癌中的表达及其意义。方法 收集食管鳞癌手术切除及活检标本90例，用免疫组化方法研究其HSP70的表达情况。结果 癌组织、癌旁组织与相应正常食管黏膜组织中HSP70表达阳性率分别为87．8％（79／90）、15．0％（3／20）和13．3％（2／15），食管鳞癌组织HSP70表达阳性率明显高于癌旁组织及正常食管黏膜组织（P〈0．01），提示HSP70可能参与了食管鳞癌的发生。在不伴有淋巴结转移的食管鳞癌病例中HSP70阳性率为80％，而在淋巴结转移病人中HSP70阳性率为95．0％，差异有统计学意义（P=0．040），提示HSP70表达高低与淋巴结转移有关。结论 HSP70可能参与了食管鳞癌的发生和淋巴结转移．是否能作为判断食管鳞状细胞癌预后的指标值得进一步研究。     

PTEN基因细胞间黏附分子与肝细胞发生发展侵袭转移关系的研究

目的探讨PTEN基因和ICAM-1与肝细胞发生、发展、侵袭转移的关系及临床意义。方法应用组织芯片技术和免疫组化SABC法对46例手术切除的经病理确诊为肝细胞癌变的标本进行实验研究。结果正常肝细胞组织中PTEN有4例呈强阳性表达,ICAM-1均呈阴性表达。肝细胞癌变患者PTEN基因阳性率为65.2%(30/46),而ICAM-1阳性率为58.7%(27/46),癌旁组织中PTEN基因和ICAM-1阳性率分别为90.9%(30/33),87.8%(29/33),两者表达与患者年龄、性别、肿瘤大小及AFP是否阳性无关,而与肝细胞癌变的病理分级,包膜及癌栓的有无关系密切。其中PTEN与HBsAg是否阳性无关,ICAM-1与HBsAg是否阳性关系密切。结论 PTEN基因具有抑制肝细胞的癌变发生、发展、侵袭转移的作用,而ICAM-1对肝细胞的癌变、发生、发展、侵袭转移具有促进作用。本研究发现两者在肝细胞的癌变、发生、发展、侵袭转移过程中两者呈负相关。     

环氧酶2、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白及人类表皮生长因子受体2与胃癌预后的相关性

目的：分析环氧酶2（COX-2）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）及人类表皮生长因子受体2（HER2/neu）与胃癌患者预后的相关性,为胃癌临床诊断和治疗提供实验依据。方法应用免疫组织化学染色方法对浙江省人民医院2008年4月至2010年4月期间诊治的80例胃癌患者手术样本进行分析,比较胃癌组织与癌旁正常胃组织中COX-2、mTOR及HER2/neu蛋白的表达差异。应用Spearman秩相关分析、Kaplan-Meier法、Log-rank检验以及多因素Cox风险比例回归模型描述和推断COX-2、mTOR及HER2/neu蛋白与胃癌病理分期及预后的相关关系。结果80份胃癌癌体组织样本中COX-2、mTOR、HER2/neu蛋白的阳性表达率分别为57.5%（46份）、36.3%（29份）和63.8%（51份）,明显高于配对癌旁正常胃组织（u=5.643、3.528和4.642, P 均<0.01）;COX-2和HER2/neu 蛋白表达水平和胃癌分期之间均呈正相关（rs=0.257、u=2.284, P<0.05; rs=0.382、u=3.395,P<0.01）;COX-2和HER2/neu蛋白阳性表达患者的总体生存情况和无复发生存情况明显劣于阴性表达患者（P均<0.05）;COX-2蛋白的表达水平是胃癌总体生存时间的独立预测因素（风险比=1.643,95%CI：1.085~2.489,P<0.05）。结论 COX-2、mTOR 和 HER2/neu 蛋白均参与了胃癌的发生或发展;COX-2和HER2/neu蛋白与胃癌的病理分期和总体生存时间相关;COX-2蛋白表达可作为胃癌预后的独立预测因子。     

人体肝癌和正常肝脏细胞内硒与氧化应激机制的初步探讨

目的　探讨微量元素硒和氧化应激水平在肝癌发展中的作用。方法　采集了数例肝癌晚期切除样品及其癌旁正常组织 ,测定了正常肝脏组织和癌组织不同细胞器中硒的含量以及超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)、硫氧还蛋白还原酶 (TrxR)活性及谷胱甘肽 (GSH)和蛋白总巯基的含量。结果　Se在肝癌溶酶体 (P <0 0 5 )、微粒体 (P <0 0 5 )、细胞质中的含量高于正常肝组织 ,几种抗氧化酶酶的活性和巯基含量均高于正常肝。癌细胞中的Se含量要明显高于相应的癌旁周围正常肝细胞 ,尤其是细胞核、线粒体和细胞质。癌细胞线粒体、细胞质中几种抗氧化酶的活性以及巯基含量均高于相应的癌旁正常肝细胞。结论　癌细胞代谢旺盛 ,摄取更多的营养物质 ,从而造成周围正常细胞营养素的缺乏 ,抗氧化能力的下降 ,其机制还有待进一步研究     

肝细胞癌中信号传导与转录活化因子-3表达与细胞凋亡的关系

目的 探讨信号传导与转录活化因子-3（STAT3）在肝细胞癌发生发展中的作用及其与细胞凋亡的关系。方法 应用免疫组织化学法检测52例原发性肝癌、17例癌旁组织和12例良性病变肝组织中STAT3与Bcl-xL的蛋白表达情况,同时采用原位末端标记法（TUNEL法）测定52例癌组织中细胞凋亡的表达并计算凋亡指数。结果 STAT3蛋白在肝癌组织、癌旁组织和良性病变肝组织中的阳性率分别为69．23％（36／52）、52．94％（9／17）和25．00％（3／12）;Bcl-xL蛋白在肝癌组织、癌旁组织和良性病变肝组织中的表达率分别为65．38％（34／52）、41．18％（7／17）和16．67％（2／12）。STAT3表达阳性的肝癌组织的平均凋亡指数明显低于阴性组（P〈0．05）。结论 STAT3高表达可能是肝癌发病机制中的早期事件,STAT3基因可能通过直接或间接促进Bcl-xL的表达,抑制细胞的凋亡,从而在肿瘤的发生发展过程中起重要作用。     

肝癌细胞中抑制Galectin-3基因表达对细胞增殖及侵袭能力的影响及机制研究

目的 探讨Galectin-3基因在肝癌细胞中的表达及抑制其表达对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及机制。 方法 RT-PCR检测人肝癌细胞MHCC-97H、HepG2、SMCC-7721及人正常肝细胞HL-7702中Galectin-3基因的mRNA表达;Control、NC-siRNA、Galectin-3-siRNA转染HepG2细胞,48 h后Western blot检测各组细胞中Galectin-3、MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1的蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和侵袭能力。 结果 MHCC-97H、HepG2、SMCC-7721细胞中Galectin-3的mRNA表达均显著高于正常肝细胞HL-7702中的Galectin-3的mRNA表达,差异有统计学意义(P<0.01),Galectin-3在HepG2细胞中的表达最高,选择作为后续的研究对象;转染siRNA后能显著抑制Galectin-3基因的表达;Galectin-3-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达均低于对照组和NC-siRNA组,差异有统计学意义(P<0.01)。 结论 抑制肝癌细胞中Galectin-3基因表达能显著降低癌细胞的增殖及侵袭能力,其机制与Notch1信号通路的调控有关。     

脂肪酸合成酶作为癌症治疗靶点的生物信息学分析

目的 基于生物信息学探究脂肪酸合成酶（FASN）在癌症中的作用，为将FASN作为肿瘤诊断生物标志物和防控靶点提供线索。方法 从癌症基因组图谱TCGA数据库中获取10967份样本资料，采用cBioPortal和GEPIA肿瘤基因分析工具，探究FASN基因在癌症病人中的序列变化和表达情况，并进一步分析FASN在肿瘤组织和正常组织间的表达差异；从GEO数据库获取非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）病人的样本数据，分析FASN在NAFLD诱发肝细胞癌疾病进程中的作用；采用String数据库检索FASN相关蛋白并进行富集功能注释。结果 FASN基因在10967份癌组织样本中的改变率为4.60%，在肝细胞癌、膀胱癌等多种实体瘤中表达上升；FASN在NAFLD组和对照组的表达值为9.78±0.74和8.99±1.21（P<0.05），在重度脂肪变性和轻度脂肪变性患者的表达值为791.89±420.59和562.85±432.87（P<0.05）；FASN相关蛋白的生物学功能主要为介导蛋白间结合、调节催化酶活性以及调控能量代谢。结论 FASN与多种癌症的发生发展密切相关，靶向抑制FASN有希望成为肝细胞癌的治疗策略。     

联合检测runt相关转录因子3蛋白和基质金属蛋白酶-9表达在结直肠腺癌中的临床意义

目的 检测结直肠腺癌中runt相关转录因子3（RUNX3）蛋白及基质金属蛋白酶（MMP）-9的表达情况,分析其在结直肠腺癌组织中表达与临床病理参数之间的关系.方法 采用免疫组织化学法检测RUNX3蛋白及MMP-9在结直肠腺癌及癌旁正常组织的表达情况.结果 结直肠腺癌组织中RUNX3蛋白阳性表达率38.33％ （23/60）,明显低于癌旁正常组织的86.67％（26/30）,差异有统计学意义（P＜0.0l）;结直肠腺癌组织中MMP-9阳性表达率76.67％（46/60）,明显高于癌旁正常组织的26.67％（8/30）,差异有统计学意义（P＜0.01）;结直肠腺癌组织中RUNX3蛋白表达与TNM分期、肠壁浸润深度、淋巴结转移、肝转移及腹腔微转移负相关（P＜0.05）;而MMP-9表达与TNM分期、肠壁浸润深度、淋巴结转移、肝转移及腹腔微转移呈正相关（P＜0.05）;二者在结直肠腺癌组织中表达存在明显的相关性（r=-0.0007,P=0.000）.结论 RUNX3蛋白及MMP-9表达异常与结直肠腺癌的发生和发展密切相关,检测结直肠腺癌中两者的表达可作为临床早期诊断、监测转移及预后情况的依据.