姜黄素对人肾癌786-O细胞凋亡和侵袭的影响

目的:通过体外实验研究姜黄素对人肾癌786-O细胞凋亡和侵袭影响的可能机制,为肾癌的临床药物治疗提供理论依据.方法:体外培养人肾癌786-O细胞,以5、10、20、40 μmol/L姜黄素处理48 h后,采用流式细胞技术(FCM)、DNA琼脂糖凝胶电泳和TUNEL技术等方法观察786-O细胞凋亡率;用Western blot法研究不同浓度姜黄素对786-O细胞的MMPs表达影响.结果:不同浓度姜黄素处理的人肾癌786-O细胞,细胞的凋亡率随姜黄素浓度的增大而增加;DNA琼脂糖凝胶电泳分析,随浓度增大可见凋亡特征性的DNA梯形条带更加清晰.Western blot蛋白电泳条带显示,随姜黄素浓度的逐渐增加,MMP2和MMP9条带的灰度逐渐降低.结论:姜黄素可以诱导人肾癌786-O细胞的凋亡,细胞凋亡率随姜黄素浓度的增大而增加;姜黄素可以通过下调MMP2和MMP9的蛋白表达,发挥抗侵袭作用.     

异甘草素对人肾透明细胞癌786-O细胞抗癌作用及分子机制

目的:研究异甘草素(isoliquiritigenin,ISL)对人肾透明细胞癌786-O细胞的抗癌作用,并探讨其可能存在的分子机制。方法:通过噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)比色法检测ISL(0,10,25,50,75,100μmol·L~(-1))对786-O细胞增殖的作用;细胞划痕和Transwell实验检测ISL对786-O细胞迁移、侵袭能力的影响;吖啶橙染色,Ad-GFP-LC3转染实验观察细胞自噬状态;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白的表达,并分析磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)信号通路变化,探讨其可能的作用机制。结果:MTT比色法结果显示,与空白组比较,ISL能够明显抑制786-O细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖性(P0.05);划痕和Transwell实验结果表明,与空白组比较,ISL能够抑制785-O细胞的迁移和侵袭(P0.05);吖啶橙染色和Ad-GFP-LC3转染实验表明ISL能够诱导786-O细胞发生自噬。此外,与空白组比较,ISL能够诱导细胞内自噬标志物-Ⅱ(LC3-Ⅱ),自噬相关蛋白Beclin1,Atg5蛋白表达(P0.05),并显著下调p62蛋白表达(P0.05),当加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)可逆转上述现象(P0.05);同时ISL能够抑制Akt,m TOR的磷酸化水平(P0.05),加入抑制剂LY294002和雷帕霉素(rapamycin,Rap),LC3-Ⅱ,Beclin1,Atg5蛋白表达明显上调(P0.05),p62蛋白表达明显下调(P0.05)。结论:ISL能够抑制肾透明细胞癌786-O细胞的增殖、迁移和侵袭,并通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路诱导细胞发生自噬。     

软坚散结胶囊含药血清诱导人肾透明细胞癌7860细胞凋亡

目的:研究软坚散结胶囊对人肾透明细胞癌7860细胞系抑制和诱导凋亡的作用。方法:分别采用CCK-8检测细胞的生长抑制率,流式细胞仪、激光共聚焦显微镜观察软坚散结含药血清处理7860细胞后细胞凋亡和细胞周期阻滞的发生。结果:软坚散结胶囊低、中、高剂量含药血清均能抑制7860细胞增殖(P0.05),其抑制率与作用时间及血清含药浓度相关。中、高剂量含药血清处理7860细胞48h后凋亡率显著高于对照组(P0.05),同时低、中、高剂量含药血清处理7860细胞48 h后,G0/G1期细胞明显较对照组增加(P0.01),提示软坚散结胶囊可促进细胞凋亡,并且将细胞生长周期阻滞于G0/G1期。激光共聚焦显微镜下可见经染色的凋亡细胞增多且细胞出现凋亡形态学改变。结论:软坚散结胶囊对人肾透明细胞癌7860细胞有抑制作用,机制可能与抑制细胞生长、阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。     

姜黄素对人食管癌耐药细胞逆转作用的实验研究

目的研究姜黄素对食管癌耐药细胞的作用及作为食管癌多药耐药逆转剂的可能性。方法采用20、40、80μmol/L姜黄素作用体外培养Eca-109/Taxol细胞及Eca-109细胞,倒置显微镜观察姜黄素对Eca-109/Taxol细胞作用的形态变化,CCK-8法检测姜黄素对两种细胞的增殖抑制率并计算姜黄素的逆转效应。流式细胞术检测姜黄素对Eca-109/Taxol细胞的凋亡率及测定罗丹明123在癌细胞内的蓄积。采用全自动酶标仪检测Caspase-3活性、免疫细胞化学法检测P-gp在癌细胞中的表达。结果 Eca-109/Taxol细胞经不同浓度姜黄素作用后,细胞生长变慢、细胞变圆,部分细胞悬浮于培养液中。随着姜黄素浓度的增高,对Eca-109/Taxol细胞生长抑制作用逐渐增强。姜黄素对Eca-109/Taxol细胞具有明显的耐药逆转作用,10μmol/L姜黄素逆转2.50倍,40μmol/L姜黄素逆转6.83倍,且在一定浓度范围内呈剂量依赖性。姜黄素与低浓度Taxol联合应用,可使Eca-109/Taxol细胞中Caspase-3活力提高。流式细胞仪检测显示,随姜黄素浓度的增加,癌细胞的凋亡率逐步增高,20μmol/L姜黄素作用24 h后凋亡率为(13.6±1.3)%,80μmol/L姜黄素凋亡率为(43.5±1.6)%,组间比较,差异有统计学意义(P0.01),同时可使Eca-109/Taxol细胞内Rho123的蓄积增高(P0.01);20μmol/L姜黄素对Eca-109/Taxol细胞作用24 h可明显抑制P-gp在Eca-109/Taxol细胞中的表达。结论姜黄素对Eca-109/Taxol细胞生长具有抑制作用,可以较强地逆转癌细胞对Taxol耐药性,可能是食管癌临床化疗中较好的耐药逆转药物。     

藤黄酸对肾透明细胞癌凋亡及铁死亡的影响

目的 探讨藤黄酸对肾透明细胞癌凋亡及铁死亡的影响。方法 使用不同浓度藤黄酸干预786-O及ACHN细胞24 h, CCK-8法检测细胞活力以筛选合适的作用浓度。流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)和线粒体活性氧(mitoROS)水平,铁离子比色法检测试剂盒检测游离铁水平变化,Western blot法检测凋亡蛋白(Bcl-2、Bax)和铁死亡蛋白(FTH1、GPX4)表达。结果 藤黄酸能够抑制786-O、ACHN细胞活力,并浓度依赖性地升高细胞凋亡率和ROS、mitoROS、游离铁水平(P<0.05,P<0.01)。添加铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)后可在一定程度上恢复藤黄酸诱导的ROS、mitoROS、游离铁水平变化(P<0.05,P<0.01)。藤黄酸干预后,786-O、ACHN细胞的铁死亡标志性蛋白FTH1和GPX4表达均降低(P<0.05,P<0.01),且Fer-1部分恢复了FTH1和GPX4蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论 藤黄酸可能通过下调Bcl-2/Bax比值诱导肾透明细胞癌凋亡,并通过抑制...     

姜黄素诱导食管癌Eca-109细胞凋亡机制的研究

目的 观察姜黄素诱导食管癌Eca-109细胞凋亡,并初步探讨其作用机制.方法 通过CCK-8法检测姜黄素不同浓度、不同时间点作用于Eca-109细胞的增殖抑制率.应用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性.流式细胞技术检测细胞早期凋亡.免疫细胞化学法检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达情况.结果 随浓度增加时间延长各组细胞生长抑制率有明显增高,且呈剂量浓度依赖性,组间差异有显著性(P＜0.01).Caspase-3活性检测发现:姜黄素20μmol·L-1、40μmol·L-1作用24 h后OD值与对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术检测到姜黄素作用后,细胞凋亡率明显升高.免疫细胞化学染色显示,随着姜黄素浓度的增高和作用时间的增长,Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强.结论 姜黄素可能是通过诱导caspase-3表达活性增高,上调促凋亡基因Bax及下调抗凋亡基因Bcl-2的表达,诱导Eca-109发生凋亡.     

肾透明细胞癌的CT表现

目的 探讨肾透明细胞癌的CT表现及鉴别诊断;方法 回顾分析经手术病理证实的各种亚型肾细胞癌的CT表现;结果 196例肾细胞癌病人中有156例透明细胞癌,发病率为79%,肿瘤平均直径为3.5cm,肾透明细胞癌的共同CT表现：平时呈均匀或不均匀高低不等混杂密度,增强扫描皮髓质期肿瘤呈不均匀明显强化;结论 肾透明细胞癌多为富血供,有特征性CT表现,可与其他亚型肾细胞癌相鉴别;     

姜黄素对膀胱癌EJ细胞的作用研究

目的:观察姜黄素对膀胱癌系细胞EJ的体外作用,并探讨其可能的作用机制.方法:应用光镜形态学,MTT法、流式细胞仪和免疫细胞化学法观察了5、10、20 mg/L姜黄素在体外对膀胱癌EJ细胞的生长抑制和诱导凋亡作用,以及对细胞DNA含量,对NF-κB、Cyclin D1表达的影响.结果:所有浓度组姜黄素均对膀胱癌EJ细胞有明显的生长抑制作用,抑制率≥(27.5±3.1)%(P＜0.05).10 mg/L以上浓度均可出现显著的诱导调亡作用,凋亡率≥4.6%±1.8%(P＜0.05),下调NF-κΒ(表达率≤35.8%±4.2%,P＜0.05),下调Cyclin D1的表达(表达率≤29.7%±3.2%,P＜0.05).姜黄素导致的细胞周期阻滞以G1期为主,使S期细胞比例显著减少(P＜0.05).结论:姜黄素对膀胱癌细胞系EJ有明显的生长抑制和诱导凋亡作用,其作用机制与其影响细胞周期和下调NF-κB、Cyclin D1的表达相关,显示了姜黄素用于治疗膀胱癌的可能性.     

姜黄素对直肠癌细胞放疗增敏作用的研究

目的:探讨姜黄素(curcumin)对人直肠癌细胞放射增敏作用。方法:体外实验:将HR8348细胞,分成四组:对照组(给予DMSO液);姜黄素组(给予2.5μM姜黄素);照射组(单纯X线照射);联合组(给予2.5μM姜黄素,联合X线照射)。分别采用MTT和流式细胞仪检测细胞的生长抑制情况和凋亡情况;体内实验:建立裸鼠移植肿瘤模型,单独及联合应用姜黄素和放射处理裸鼠移植瘤,通过观察肿瘤生长变化及瘤体凋亡情况并进行统计分析。结果:姜黄素对人直肠癌HR8348细胞增殖有明显的抑制作用,明显提高放射对裸鼠移植瘤的杀伤作用。结论:姜黄素对人直肠癌HR8348细胞有放射增敏作用,姜黄素在直肠癌治疗中可能成为一种有希望的放射增敏剂。     

姜黄素对Raji细胞体外抗癌作用的实验研究

目的研究姜黄素对Raji细胞体外抗癌作用及其机制,对比研究其对RaIi细胞和人单个核细胞的细胞毒性。方法用MTT法检测姜黄素对Raji细胞及人单个核细胞增殖的影响,Annexin—V／PI双标流式术、缺口末端标记法检测姜黄素对Raji细胞及人单个核细胞凋亡的影响,PI单标流式细胞术测定姜黄素对Raji细胞DNA含量分布的影响。结果(1)姜黄素对Raji细胞具有明显的增殖抑制作用。(2)姜黄素可以时间和剂量依赖性方式诱导Raji细胞凋亡。(3)姜黄素组Raji细胞周期发生变化,细胞周期被阻滞于G0／G1和G2／M期,S期比例减少。(4)姜黄素对人单个核细胞无明显抑制增殖和诱导凋亡作用。结论姜黄素能够调控Raji细胞的细胞周期并诱导其凋亡,从而抑制Raji细胞增殖;姜黄素对人单个核细胞无明显细胞毒作用,而选择性作用于肿瘤细胞。     

丹参酮IIA对肾癌786-O细胞生长抑制作用及其分子机制

目的 研究丹参酮IIA对肾癌细胞生长抑制作用及其分子机制.方法 MTT法检测丹参酮IIA对肾癌细胞活力影响;流式细胞分析检测丹参酮IIA对肾癌细胞周期阻滞;免疫印迹检测细胞周期阻滞相关靶蛋白蛋白表达水平;激光共聚焦观察核仁蛋白Nucleophosmin (NPM)/B23定位的变化.结果 丹参酮能够呈浓度依赖方式显著抑制肾癌细胞生长活力(P＜0.05);细胞周期分析表明丹参酮IIA处理的肾癌细胞阻滞在S期;免疫印迹结果证明丹参酮IIA处理肾癌细胞,cyclin A,p53及其下游基因p21显著上调;激光共聚焦结果表明在丹参酮IIA作用下,NPM蛋白定位从核仁移位到核浆.结论 丹参酮IIA作用786-O细胞导致细胞周期S阻滞,其机制可能与NPM移位促使其相互作用靶蛋白p53和p21蛋白水平上调有关.     

姜黄素在体外对人大肠癌细胞株生长和凋亡的影响

目的：本实验通过姜黄素在体外对大肠癌CX-1细胞株的抗肿瘤作用研究，探讨姜黄素抗大肠癌的作用机理及其分子机制。实验方法：采用细胞生长抑制试验检测不同浓度姜黄素对大肠癌CX-1细胞的生长抑制作用，设立实验组和对照组。光镜下观察对照组和实验组CX-1细胞的生长情况、形态学改变及凋亡过程；透射电镜技术观察对照组和试验组CX-1细胞的超微结构，特别是观察试验组细胞的凋亡结构；通过流式细胞仪测定一定浓度姜黄素处理CX-1细胞不同时间的凋亡率，并与对照组细胞的凋亡率比较，已显示姜黄素作用时间与凋亡率二者之间的关系；免疫组化常规SABC法检测一定浓度姜黄素作用前后CX-1细胞内抑制凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白bax蛋白含量的变化情况。结论：①在体外，姜黄素能抑制人大肠癌CX-1并诱导产生凋亡，其机制与细胞内的抑凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白bax的蛋白含量密切相关。②姜黄素对人大肠癌CX-1细胞具有明显的细胞毒作用。③姜黄素在大肠癌治疗中可能成为一种有希望的凋亡诱导剂。     

姜黄素对人肾癌Caki-2细胞生长和凋亡的影响及其机制

目的:观察姜黄素对体外培养的人肾癌Caki-2细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用,并探讨其可能的作用机制。方法:应用不同浓度的姜黄素分别作用于人肾癌Caki-2细胞12、24、36、48、72、96 h,采用MTT法评价姜黄素对Caki-2细胞的生长抑制作用;应用不同浓度的姜黄素分别作用于人肾癌Caki-2细胞36、48、72、96 h,采用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒评价姜黄素对Caki-2细胞的凋亡诱导作用;Western blot检测姜黄素对Caki-2细胞H-Ras、p-Raf-B、p-MEK1/2、p-ERK1/2、ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,β-actin作为内参蛋白。结果:不同浓度的姜黄素能显著抑制Caki-2细胞生长,36、48、72、96 h呈剂量、时间依赖关系;不同浓度的姜黄素能显著诱导Caki-2细胞凋亡,48、72、96 h呈剂量、时间依赖关系;姜黄素作用后,Caki-2细胞中H-Ras、p-Raf-B、p-MEK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达显著增加,ERK1/2、β-actin蛋白表达与空白组相比无统计学差异。结论:姜黄素对体外培养的人肾癌Caki-2细胞有显著的生长抑制作用,其机制可能与通过抑制H-Ras蛋白表达、直接或间接下调ERK信号通路蛋白表达相关;同时,姜黄素对Caki-2细胞有显著的凋亡诱导作用,其机制可能与上调促凋亡蛋白Bax表达、下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达相关。     

温郁金提取物对食管癌TE-1细胞增殖的抑制作用

目的 研究温郁金提取物对食管癌TE-1细胞增殖的抑制作用。方法 采用超临界CO2萃取法提取温郁金成分。将TE-1细胞贴壁后分成4组：1组加入100 μL含0.1%DMSO的RMPI-1640 培养基,作为对照组;另外3组分别加入浓度为25、50、100 mg/L温郁金提取物完全培养液各100 μL,分别作为温郁金低、中、高剂量组。培养48 h后采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组TE-1细胞生长抑制率。应用基因芯片技术检测各组TE 1细胞基因表达谱的变化。对差异表达基因进行基因本体(gene ontology, GO)功能分类。结果 与对照组比较,温郁金各剂量组生长抑制率均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。温郁金各剂量组TE-1细胞生长抑制率随着剂量升高而增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过基因芯片筛选出温郁金提取物作用前后88个基因表达水平发生改变且有统计学意义,包括22个基因表达下调,66个基因表达上调。基因GO分类提示差异表达基因主要涉及信号传导(6个)、细胞周期(8个)、凋亡(14个)或分化调节(10个)等。结论 温郁金提取物对人食管癌TE-1细胞生长有抑制作用,其抗肿瘤作用可能与调控多层次的基因表达改变有关。     

二脱甲氧基姜黄素对胰腺癌Panc-1细胞抑制作用的体外实验研究

目的:研究二脱甲氧基姜黄素对人胰腺癌细胞Panc-1的体外抑制作用。方法:提取二脱甲氧基姜黄素;将不同浓度二脱甲氧基姜黄素作用于人胰腺癌细胞Panc-1,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测胰腺癌细胞的增殖活性;采用荧光染料吖啶橙观察二脱甲氧基姜黄素诱导胰腺癌细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪分析二脱甲氧基姜黄素诱导胰腺癌细胞的凋亡率。结果:二脱甲氧基姜黄素对Panc-1细胞具有增殖抑制作用,且具有浓度依赖效应,姜黄素<二脱甲氧基姜黄素,统计表明有组间差异(P<0.05);二脱甲氧基姜黄素能诱导人胰腺癌细胞Panc-1凋亡。结论:二脱甲氧基姜黄素能明显抑制人胰腺癌细胞Panc-1的体外增殖。可为临床治疗胰腺癌药物研究提供一种新的方法。     

天南星多糖对人肾癌细胞系GRC-1增殖及凋亡作用的影响

目的:探讨天南星多糖(ARPS)对人肾癌细胞系GRC-1的增殖、凋亡及Wnt/β-连接素(β-catenin)信号通路的影响。方法:采用RPMI-1640培养液常规培养获对数生长期的GRC-1细胞后,给予0,20,50,100,200 mg·L~(-1)ARPS处理,0 mg·L~(-1)ARPS组为空白组,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各浓度ARPS处理24,48,72和96 h的增殖抑制率,分别采用AnnexinFITC/PI双染法和PI单染法检测各浓度处理48 h后的细胞凋亡率和细胞周期情况,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各浓度处理48 h后Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin及下游靶分子原癌基因(C-myc),细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白水平。结果:与空白组比较,在20~200 mg·L~(-1),ARPS对GRC-1细胞的增殖有明显抑制效果,细胞增殖抑制率随ARPS作用时间的延长和质量浓度的增加而升高,总体上抑制效应呈剂量和时间依赖的方式,以上差异均有统计学意义(P0.05),50~200 mg·L~(-1)ARPS的早期凋亡率及20~200 mg·L~(-1)ARPS的晚期凋亡率和总凋亡率均升高(P0.05),20,50,100,200 mg·L~(-1)ARPS组的G_0期/G_1期高于空白组,S期,G2期/M期及β-catenin,C-myc和Cyclin D1蛋白水平均低于0 mg·L~(-1)ARPS(P0.05),20~200 mg·L~(-1)各质量浓度间的以上指标的差异均有统计学意义(P0.05)。结论:ARPS对人肾癌细胞系GRC-1的增殖有一定抑制作用,同时可诱导细胞凋亡和G_0/G_1期阻滞并可抑制Wnt/β-catenin通路激活。     

二脱甲氧基姜黄素对体外培养宫颈癌Hela细胞Caspase-8的影响

目的:观察二脱甲氧基姜黄素对体外培养人宫颈癌Hela细胞Caspase-8的作用。方法:MTT法检测二脱甲氧基姜黄素对体外培养人宫颈癌细胞Hela的抑制作用;分光光度计检测其对Caspase-8酶活性的影响;免疫组化法检测其对人宫颈癌细胞Hela Caspase-8蛋白表达的影响。结果:二脱甲氧基姜黄素对人宫颈癌细胞Hela有明显的抑制作用(P0.001),且呈剂量关系,与姜黄素有显著差异(P0.001);二脱甲氧基姜黄素能增强Caspase-8酶活性,增强Caspase-8蛋白的表达。结论:二脱甲氧基姜黄素能激活Caspase-8蛋白活性,这可能也是其体外抑制宫颈癌细胞Hela生长的机理之一。     

40种香豆素类化合物对人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402细胞生长抑制活性的筛选

目的:寻找中药中抗肿瘤活性化合物和先导化合物,为开发新药奠定基础。方法:采用人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402体外培养法,鉴定受试的40种香豆素类化合物对其生长的抑制作用。结果:伞形花内酯刘寄奴酸酯、木桔素、环氧酸橙皮油素、酸橙皮油素、前胡酮、芸香苦素、牛防风素和异香柑内酯对人胃癌细胞株BGC细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;伞形花内酯刘寄奴酸酯、异虎耳草素、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人肝癌细胞株BEL-7402细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系。结论:香豆素类化合物是潜在的抗肿瘤药物。