地黄多糖干预对低剂量X线照射小鼠生精细胞P53和bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨地黄多糖干预对低剂量X线照射损伤小鼠生精细胞中p53和bcl-2蛋白水平表达的影响。方法选择70只雄性昆明小鼠(5~6周龄;体重22±2g),随机分为:单纯照射组(1~3组),给药照射组(4~9组)和正常对照组(10组)。所有小鼠自照射前5d开始每天灌胃一次,分别给予0.2mL生理盐水灌胃(1~3组和10组)和地黄多糖(溶于0.2mL生理盐水)200mg/Kg(4~6组)、800mg/Kg(7~9组),共24次。照射组自第6天起采用X线每天一次全身照射,共15次;单次照射剂量分别为0.025、0.075、0.100Gy,剂量率为0.025Gy/min。所有小鼠在末次照射结束后48小时内脱颈法处死摘取睾丸,经Bouin氏液固定24h后石蜡包埋、切片。采用HE染色观察睾丸生精小管形态结构,免疫组织化学法检测生精细胞中P53及bcl-2蛋白的表达水平。结果随着单次低剂量X线照射剂量增加,HE染色可见照射组小鼠睾丸生精小管各级生精细胞数目逐渐减少,结构排列出现不同程度的紊乱;免疫组织化学可见生精细胞中p53蛋白表达水平逐渐增加,而bcl-2蛋白表达水平则逐渐下降。给予200mg/Kg及800mg/Kg地黄多糖灌胃能下调生精细胞中p53蛋白和上调bcl-2蛋白表达水平,但后者对p53及bcl-2蛋白表达水平调节作用更明显,两者具有显著统计学意义(P0.05)。结论地黄多糖对低剂量X线全身照射小鼠的损伤生殖功能有一定保护作用,其抗辐射作用机制部分可能与下调生精细胞中p53蛋白、上调bcl-2蛋白表达水平有关。     

多次低剂量X线照射对小鼠睾丸重量及血清性激素水平影响

目的探讨多次低剂量X线全身照射对小鼠睾丸重量及血清性激素水平影响.方法采用0、0.025、0.075及0.1Gy X线多次照射小鼠,电子天平测定小鼠体重、睾丸重量,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)及黄体生成素(LH).结果0.025 Gy组睾丸重量及睾/体比值较对照组无明显差异(P>0.05),0.075、0.1Gy 组睾丸重量及睾/体比值均明显低于正常对照组(P<0.05);各剂量照射组小鼠血清T及LH较对照组无明显差异(P>0.05),0.025、0.075Gy照射组小鼠血清FSH较对照组无明显差异(P>0.05),0.1 Gy照射组小鼠血清FSH与对照组相比较具有显著统计学差异(P<0.05).结论多次低剂量X线照射可使小鼠睾丸重量及睾/体比值下降,且具有剂量效应,对血清T及LH无明显影响,一定剂量X线照射可升高血清FSH水平.     

多次低剂量X线照射对小鼠精子DNA完整性影响

目的探讨多次低剂量X线照射对小鼠精子DNA完整性的影响.方法采用0、0.025、0.075及0.100Gy X线多次照射小鼠,单细胞凝胶电泳技术(SCGE)对小鼠精子DNA完整性进行分析.结果随着单次照射剂量的增大,小鼠精子DNA的损伤级别增高;0.025、0.075及0.100 Gy照射组小鼠精子DNA Olive尾距、精子DNA彗星尾长及精子DNA尾部DNA含量百分率分别与对照组比较差异具有显著统计学意义(P<0.05),且随着单次照射剂量的增大差异越明显.结论多次低剂量X线全身照射小鼠可影响精子DNA完整性,且随着单次照射剂量增加,损伤加重.     

Zfx在小鼠睾丸生精细胞中的表达

目的:了解Zfx基因在各级生精细胞中的表达情况。方法:本试验采集6、8、17日龄和成年小鼠睾丸,采用组合酶消化法制备单细胞悬液,BSA铺设密度梯度法分离生精细胞,运用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)及Western印迹法(WB)方法检测Zfx基因的表达。结果:组合酶消化法制备单细胞悬液、BSA铺设密度梯度法可获得纯度>85%的各级生精细胞;Zfx基因在原始A型精原细胞、A型精原细胞、B型精原细胞中表达水平低,前细线期精母细胞、粗线期精母细胞、圆形精子细胞中表达量高,长形精子、成熟精子不表达。结论:Zfx基因在各级生精细胞中呈现阶段性表达,可能是参与调控生精细胞减数分裂的重要转录因子。     

睾丸生精过程中的细胞凋亡及影响因素

随着分子生物学研究的不断深入,生殖细胞凋亡研究正日益引起人们的重视。通过改变基因的表达,可人为地调节生殖细胞的凋亡,这对于了解临床上睾丸疾病的本质及如何控制、预防以及诊疗这些疾病均具有非常重要的意义。本文就近年来生殖细胞凋亡及其影响因素的研究进展做一...     

高功率微波辐照后大鼠睾丸生精细胞Bcl-2和C-myc蛋白表达改变

目的: 检测高功率微波(HPM)与细胞凋亡相关蛋白Bc1 2和C myc的关系。　方法: 健康成年雄性SD大鼠 125只,随机分为 25组,每组 5只。以S波段平均功率密度分别为 10、20mW/cm2的HPM辐照实验组大鼠 5、10min,分别于照后 6、24、48、72、120h取睾丸组织,应用免疫组化SP法检测Bc1 2和C myc蛋白表达改变。对照组不经HPM辐照。　结果: HPM辐照后, 24h组Bc1 2和C myc蛋白表达升高, 20mW/cm2组两者升高较 10mW/cm2组升高明显,差别有显著性(P<0. 01),正常对照组无表达。　结论: HPM辐照大鼠后 24h,促进Bc1 2和C myc蛋白的活化和表达,可能是HPM诱导凋亡的机制之一。     

人类睾丸精原细胞瘤组织中P53基因突变和Rb基因蛋白产物表达…

采用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹和ＤＮＡ聚合酶链反应－单股构造多态性分析法和１７例人睾丸精原细胞瘤组织标本的抗癌基因Ｒｂ表达的蛋白产物和Ｐ５３基因外显子５～８的突变进行检测，发现有３例标本的Ｒｂ基因表达的蛋白产物缺失，有４例标本的Ｐ５３基因有点突变，对照的正常人睾丸组织和视网膜组织均呈Ｒｂ基因蛋白产物表达阳性，对照的正常人睾丸组织中未发现Ｐ５３基因突变。本结果提示人睾丸精原细胞瘤的发生与抗癌基因Ｒｂ蛋白产物     

冷冻保存未成熟睾丸组织移植后生精细胞的生长发育木

目的采用睾丸组织移植模型,探讨通过简单易行的冷冻保存程序保存未成熟睾丸组织,并使冷冻后的组织恢复生精过程的可能性,为该动物模型应用在保存雄性生殖细胞、帮助癌症患者保存生殖能力以及保存濒危物种等方面提供进一步的实验依据。方法用DMEM培养基加入二甲基亚砜配制冷冻保存液,将新生1～2d昆明小鼠睾丸组织按分步冷冻的方法进行冷冻,最终放入-80℃超低温冰箱中保存起来。2周后取出冻存的睾丸组织,移植到雄性去势免疫缺陷小鼠背部皮下,分别于移植后4周、5周和8周取材,制作HE染色切片,观察移植物中生精小管结构和生精细胞的组成,并与新鲜移植的睾丸组织进行对比分析。结果采用实验中的冷冻程序保存的新生小鼠睾丸组织,在冷冻保存一段时间后再移植,其表现与新鲜睾丸组织移植相同,其中末成熟的生精细胞可以在受体中继续生长发育,并完成整个生精过程,发育成为精子。结论本实验中所采用的睾丸组织冷冻保存方法具有不需特殊设备、简便易行、适用范围广泛等优点,适用于多种场合中生精细胞的冷冻保存。     

糖尿病对小鼠睾丸组织中PCNA表达的影响

为研究糖尿病对睾丸生殖细胞DNA合成的影响，应用免疫组化ABC法检测增殖细胞核抗原（proliferation cell nuleus antigen PCNA)在睾丸组织的表达。结果显示免疫阳性细胞包括精原细胞和初级精母细胞，少数支持细胞和肌样细胞胞核也有着色。PCNA阳性率随糖尿病病程进展呈明显下降趋势，而且每年龄段糖尿病组PCNA阳性率均明显低于相应正常对照组。由此得出结论，糖尿病对PCNA在睾丸组织中表达起抑制作用，且与糖尿病病程呈正相关，即糖尿病时生精过程受到明显抑制，这种抑制作用可能与糖尿病所导致的雄性生殖能力下降有关。     

单次热应激处理对小鼠睾丸生精细胞的影响

目的:探讨单次热应激对小鼠睾丸生精功能可复性研究。方法:C57雄性小鼠36只,随机按1、7、14 d各分为对照组(n=6)和热应激组(n=6)。热应激组和对照组小鼠下腹部分别在43℃和25℃水浴中干预15 min,于处理后1、7、14 d取材。计算睾丸器官指数,HE染色观察睾丸组织结构变化,免疫组化染色检测早幼粒白血病锌指蛋白(PLZF)和联会复合体蛋白3(SCP-3)在睾丸组织中的定位及表达,Western印迹检测PLZF蛋白表达水平。结果:热应激组小鼠睾丸器官指数明显低于对照组(P0.01)。HE染色可见,热应激组与对照组相比,热应激后第1天生精细胞排列松散,散落在生精小管中;第7天生精小管萎缩,排列疏松,生精细胞明显减少;第14天生精小管排列较为紧密,生精细胞数量增加,生精细胞层数增多。与对照组相比第1、7天热应激组SCP-3标记的精母细胞明显减少,第14天精母细胞数量开始恢复。Western印迹检测结果显示,PLZF蛋白在热应激处理后1 d表达量显著降低(0.19±0.02 vs 0.64±0.03,P0.01),第7、14天又迅速增加(0.77±0.02、0.77±0.02),且显著高于对照组(P0.01)。结论:小鼠睾丸热应激处理后可致生精功能发生障碍,随着时间的推移,这种损伤具有可复性。     

姜黄素对受X线辐射损伤雄性大鼠睾丸组织保护作用的研究

目的探讨姜黄素（CUR）对大鼠睾丸受X线辐射损伤的保护作用。方法选取雄性SD大鼠60只,体重160～180g,随机分为4组。B组（单纯辐射组）、C组（辐射＋溶剂对照组）及D组（辐射＋CUR组）大鼠进行剂量为2.0Gy X射线一次性全身照射,对照组（A组）不进行照射。C组大鼠于辐射开始1h后给予腹腔注射二甲基亚砜;D组于辐射开始1h后给予腹腔注射姜黄素溶液。照射1周后将所有大鼠处死。采用TUNEL法检测生殖细胞凋亡;检测睾丸组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（GSHPx）活性及丙二醛（MDA）含量。结果 B组及C组SOD和GSHPx活性明显降低,MDA含量明显升高,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）。而CUR能有效升高SOD和GSHPx活性并降低MDA含量（P〈0.01）。B组及C组睾丸脏器系数明显低于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。CUR能有效增加睾丸脏器系数（P〈0.01）。B组及C组凋亡指数明显高于A组（P〈0.01）,而CUR可以使凋亡指数显著下降（P〈0.01）。结论本实验为CUR作为治疗睾丸辐射损伤的有效物质提供了组织学及生化依据,为临床预防和治疗睾丸辐射损伤提供了理论依据。     

Vitamin E ameliorates aflatoxin-induced biochemical changes in the testis of mice

Aim: To assess the effect of aflatoxin on biochemical changes in the testis of mice and the possibility of amelioration by vitamin E treatment. Methods: Adult male albino mice were orally administered with 25 or 50 μg of aflatoxin/animal/day ( 750 or 1500 μg/kg body weight) for 45 days. The testis was isolated and processed for biochemical analysis. Results: There was a significant, dose-dependem reduction in DNA, RNA, protein, sialic acid contents and the activities of succinic dehydrogenase, adenosine triphosphatase and alkaline phosphatase in the testis of aflatoxintreated mice as compared to the vehicle control. However, the acid phosphatase activity was significantly increased in the aflatoxin-treated mice. Vitamin E (2 rag/animal/day) treatmem significantly ameliorated the aflatoxin-induced changes, except the acid and alkaline phosphatase activities in the high dose group. Conclusion: Vitamin E treatment ameliorates the aflatoxin-induced changes in the testis of mice.     

地黄多糖干预对多次低剂量X线照射小鼠血清性激素水平的影响

目的探讨地黄多糖(RPS)干预对多次X线照射后小鼠血清性激素水平的影响。方法选择雄性昆明小鼠70只[5~6周龄,体重(22±2)g)],随机分为A组(单纯照射组,21只)、B组(照射+200mg/kg RPS灌胃组,21只)、C组(照射+800mg/kg RPS灌胃组,21只)、D组(对照组7只);再将A、B、C组分别随机分为3组,每组7只。所有小鼠在照射前5d开始每天灌胃1次,其中A组及D组给予0.2 mL生理盐水灌胃,B组及C组分别给予200 mg/kg、800 mg/kgRPS溶于0.2mL生理盐水灌胃,共灌胃20次;A、B、C组采用低剂量X线每天1次全身照射,共15次;单次照射剂量分别为0.025Gy、0.075Gy、0.100Gy,剂量率为0.025Gy/min。所有小鼠在末次照射结束后48h内在麻醉通过下腔静脉采血,脱颈法处死小鼠、摘取睾丸并称重;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平。结果随着X线照射剂量的增加,小鼠睾丸重量及睾体比值逐渐降低(P0.05);给予不同剂量RPS灌胃可以增加0.1Gy照射后小鼠的睾体比值,差异有统计学意义(P0.05);血清FSH在0.1Gy单纯照射组(A组)较对照组(D组)明显增高[(22.54±7.19)U/L vs.(31.61±6.07)U/L](P0.05),而LH、T的变化在A组和D组中差异均无统计学意义(P0.05);给予不同剂量(200mg/kg及800mg/kg)RPS灌胃干预后,不同低剂量X线照对小鼠血清性激素水平均未产生明显影响。结论多次低剂量X线全身照射在大剂量时可引起小鼠血清FSH水平和睾体比值改变,RPS干预对多次低剂量X线全身照射小鼠引起的生殖内分泌功能损伤有一定保护作用。     

Regulatory influence of germ cells on sertoli cell function in the pre-pubertal rat after acute irradiation of the testis

While germ cell regulation of Sertoli cells has been extensively explored in adult rats in vivo, in contrast, very little is known about germ cell influence on Sertoli cell function at the time when spermatogenesis begins and develops. In the present study various Sertoli cell parameters (number, testicular androgen binding protein (ABP) and testin, serum inhibin-B and, indirectly, follicle-stimulating hormone (FSH)) were investigated after the exposure of 19-day-old rats to a low dose of 3 Grays of gamma-rays. Differentiated spermatogonia were the primary testicular targets of the gamma-rays, which resulted in progressive maturation depletion, sequentially and reversibly affecting all germ cell classes. Testicular weight declined to a nadir when pachytene spermatocytes and spermatids were depleted from the seminiferous epithelium and complete or near complete recovery of spermatogenesis and testicular weight was observed at the end of the experiment. Blood levels of FSH and ABP were normal during the first 11 days after irradiation, when spermatogonia and early spermatocytes were depleted. While the number of Sertoli cells was not significantly affected by the irradiation, from days 11-66 after gamma-irradiation, ABP production declined and FSH levels increased when pachytene spermatocytes and spermatids were depleted and the recovery of these parameters was only observed when spermatogenesis was fully restored. Comparison of the pattern of change in serum levels of inhibin-B and testicular levels of testin and of germ cell numbers strongly suggest a relationship between the disappearance of spermatocytes and spermatids from the seminiferous epithelium and the decrease in levels of inhibin-B and increase in levels of testin from 7 to 36 days post-irradiation. Levels of testin and inhibin-B were restored before spermatogenesis had totally returned to normal. In conclusion, this in vivo study shows that pre-pubertal Sertoli cell function is under the complex control of various germ cell classes. This control presents clear differences when compared with that previously observed in adult animals and depends on the Sertoli cell parameter of interest, as well as on the germ cell type.     

不同方式修复猪Ⅲ度烧伤阴囊对生精细胞凋亡及bcl-2蛋白表达的影响

目的 观察不同方式修复猪Ⅲ度烧伤阴囊对睾丸生精功能的影响. 方法 将20只雄性贵州小型香猪按随机数字表法分为正常对照组、自然愈合组、皮瓣修复组、植皮修复组,每组为5只.正常对照组不致伤,将后3组猪阴囊制成Ⅲ度烧伤.自然愈合组创面不行特殊处理,任其自行愈合;皮瓣修复组取腹股沟皮瓣修复创面;植皮修复组取下腹部全厚皮修复创面.观察后3组猪伤后即刻及伤(术)后3个月阴囊外观;伤(术)后3个月,取后3组猪双侧睾丸标本,原位末端标记法检测生精细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测bcl-2蛋白表达.同法观察或检测正常对照组猪以上指标.对数据行单因素方差分析及LSD检验. 结果 (1)正常对照组猪阴囊皮肤有皱褶,具备收缩功能.其余3组猪阴囊烧伤后即刻呈皮革样改变,质硬.伤(术)后3个月,自然愈合组创面呈瘢痕愈合,睾丸被挤入腹股沟区;皮瓣修复组重建阴囊皮肤较厚,睾丸位于皮瓣内;植皮修复组重建阴囊皮肤薄,睾丸位于阴囊内.(2)正常对照组各级生精细胞排列规则,少量精母细胞和精子细胞凋亡;自然愈合组、皮瓣修复组、植皮修复组生精上皮变薄,大部分生精细胞凋亡,以精原细胞和精母细胞为主.自然愈合组、皮瓣修复组、植皮修复组、正常对照组生精细胞凋亡指数分别为(46.3±3.3)％、(40.9±3.5)％、(20.6±2.3)％、(7.5±1.9)％,组间比较差异有统计学意义(F =405.65,P＜0.01).前3组组间两两比较,差异均有统计学意义(P值均小于0.01).(3)自然愈合组、皮瓣修复组、植皮修复组、正常对照组的bcl-2蛋白表达水平分别为(52±5)％、(53±4)％、(64±5)％、(75±5)％,组间比较差异有统计学意义(F=56.63,P＜0.01).自然愈合组与皮瓣修复组该指标水平相近(P=0.66),均显著低于植皮修复组(P值均小于0.01). 结论 无论瘢痕化愈合还是用皮瓣移植或者植皮方式修复猪阴囊Ⅲ度烧伤创面,对生精功能均有抑制作用,其中植皮修复造成的影响相对较小.     

电磁脉冲辐射对小鼠生精细胞超微结构的改变

目的　探讨电磁脉冲辐射对小鼠生精细胞超微结构的改变。　方法　二级昆明雄性小鼠 1 3 8只 ,随机分为辐射组和对照组。辐射组小鼠分别接受 8× 1 0 3V/m、2×1 0 4 V/m、6× 1 0 4 V/m电磁脉冲 5次重复全身照射 ,于照射后 6h和 1、3、7、1 4、2 8、90 d观察生精细胞超微结构的改变。　结果　电磁脉冲照射后 6h～ 2 8d,精原细胞、精母细胞和精子细胞均出现核膜间隙增宽、线粒体肿胀或灶性空化、内质网扩张 ,而精原细胞还出现异染色质凝集或边移 ,核膜局灶性溶解 ,糖原颗粒减少 ;精子细胞高度水肿、核膜膨出或灶性溶解、线粒体高度肿胀、内质网显著扩张 ;精子头部形态异常、染色质浓缩不良、顶体形态结构异常等。　结论　电磁脉冲照射可引起小鼠各级生精细胞超微结构的明显损伤 ,精原细胞、精子细胞和精子是电磁脉冲辐射最敏感的靶细胞     

Differential expression of TLRs and AKAP3 in cigarette smoked mice testis

Toll‐like receptors (TLRs) are expressed in Sertoli cells and Leydig cells and can initiate testicular innate immune responses. The A‐kinase anchor protein 3 (AKAP3), a family of scaffolding protein, was reported to be expressed only in testis and plays important regulatory roles during spermatogenesis. Our present study aimed to investigate the differential expression of TLRs family and AKAP3 in cigarette smoked Kunming mice testis. To check the effect of cigarette smoke, mice were randomly divided (n = 5 each) and exposed to cigarette smoke (2 hr/day with 10 cigarettes) for six consecutive days followed by one exposure‐free day. The exposure lasted for zero (control), 1, 3, 5 and 7 months respectively. The IHC results showed that expression of AKAP3 protein is mainly located in sperm cells and the mean density of which was significantly lower than that of control mice. Real‐time PCR results showed that expression of AKAP3 was significantly increased at early CS exposure (1 month) and then returned to normal in subsequent months. TLR2‐7, TLR13, Myd88 and Traf6 mRNA expression are much lower compared to control, especially after 3‐month cigarette smoke exposure, the time of which is almost consistent with sperm cycle. The present study suggests that TLR signal pathway and AKAP3 may play roles in spermatogenesis.     

Different phenotypes generated by changes in bcl-2 and p53 expression in breast cancer

We have identified by immunohistochemistry/ immunocytochemistry the expression of bcl-2 molecule in 55 primary breast carcinomas and in 30 corresponding axillary lymph nodes metastases, together with a set of molecules known as prognostic factors: estrogen receptors, progesterone receptors, and p53 protein. Our results demonstrated a significant correlation (p < 0.05) between bcl-2 and hormonal receptors expression in tumors, but not in axillary metastases (p < 0.1), a significant inverse correlation between bcl-2 and p53 expression in primary tumors (p < 0.02), but a significant direct correlation in axillary metastases (p < 0.02). The bcl-2+/p53- phenotype, associated with normal breast epithelium, is present in 79.17% primary tumors, but only in 15.38% axillary lymph nodes metastases. A larger number of lymph nodes metastases expressed a bcl-2+/ p53+ more aggressive phenotype compared with primary tumors (58.82% versus 48.39%). This shows that changes in the expression of bcl-2, p53, estrogen and progesterone receptors can lead to an increased cellular aggressiveness and thus to an increased tumoral invasive and metastasizing potential.     

精子发生阻滞不育患者睾丸雌激素受体α的表达

目的:探讨雌激素受体α(ERα)在睾丸的表达与精子发生阻滞的关系。方法:用HE染色技术检查120例不育症患者睾丸活检标本,其中精子发生阻滞患者标本应用免疫组化法检查ERα的表达,并以10例健康人睾丸组织作为对照。结果:120例标本中符合精子发生阻滞病理诊断标准者有31例(占25.8%)。正常健康人睾丸组织中,ERα在睾丸支持细胞、类肌细胞和间质细胞的细胞核内表达,生精上皮细胞不表达;而在精子发生阻滞的睾丸组织中,ERα也在睾丸支持细胞、类肌细胞和间质细胞的细胞核内表达,但表达较弱,生精上皮细胞不表达。两者表达强度存在显著性差异(P<0.05)。结论:雄激素与雌激素通过各自的受体发挥协调作用而共同促进精子发生。精子发生阻滞可能与包括雄激素受体、ERα及热休克蛋白90在内的一系列复杂的细胞信号转导障碍有关。     

趋化素样因子超家族在小鼠睾丸中的基因发育表达调控和蛋白表达定位

目的研究CKLFSF2小鼠同源序列cklfsf26基因在睾丸组织发育中的表达和定位,为其功能研究做出提示。方法利用RT-PCR方法检测cklfsf26基因在不同周龄小鼠睾丸组织中的表达情况；制备cklfsf2b多克隆抗体,利用免疫组织化学方法,检测cklfsf2b蛋白在小鼠睾丸组织中的表达定位。结果cklfsf2bmRNA在出生后第2周内出现,表达量逐渐增加,在成年前即达高峰并持续表达。cklfsf2b蛋白特异性的表达于睾丸Leydig细胞和Sertoli细胞,阳性信号均位于胞质内。结论cklfsf2b基因存在发育的表达调控,随着睾丸发育的日趋成熟,表达量逐渐增加：在Leydig细胞和Sertoli细胞的特异性表达表明其在睾酮合成和精子发生中均可能发挥作用,但其具体功能还需深入研究。