热休克蛋白70在大鼠牙髓炎中的免疫组化研究

目的　研究内毒素 (LPS)诱导大鼠牙髓炎模型中诱导型热休克蛋白 (HSP) 70在不同时间动态表达及定位情况 ;推测其在牙髓炎发生、发展中的意义。方法　通过对LPS诱导的大鼠磨牙实验性牙髓炎组织进行连续切片 ,同时行超敏免疫组化分析。结果　 1d组、3d组HSP70在成纤维细胞、血管壁及内皮细胞中均呈强阳性表达 ,成牙本质细胞呈中度阳性表达 ,随后表达逐渐减弱 ,至 2周修复期为弱阳性表达。 2周以后 ,成牙本质细胞 ,前期牙本质细胞层仍有阳性表达。 3周、4周以后 ,成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞、修复性牙本质呈弱阳性表达。 5周以后 ,牙髓组织变性、坏死 ,呈均质弱阳性染色。结论　HSP70在牙髓炎早期能够保护牙髓细胞 ,限制炎症发展 ,在损伤晚期则可能参与牙齿矿化修复过程。     

碱性成纤维细胞生长因子和骨形成蛋白2在牙源性细胞分化中的表达及意义

目的研究人牙髓细胞(DPCs)和牙周韧带细胞(PDLCs)矿化过程中碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)和骨形成蛋白2(BMP2)的表达变化,以及FGF2和BMP2在牙髓牙周损伤修复动物模型中的分布,探讨FGF和BMP信号通路在DPCs和PDLCs向成牙本质/成骨样细胞分化及牙髓牙周组织损伤修复中的调控作用。方法酶消化法分离培养DPCs和PDLCs,取诱导前及矿化诱导14d的DPCs和PDLCs,实时荧光定量反转录聚合酶链反应检测FGF2和BMP2的表达变化并进行统计学分析。建立大鼠牙髓牙周联合损伤动物模型,HE染色观察4周后牙髓牙本质复合体及牙周组织修复情况,免疫荧光检测FGF2和BMP2在新生牙髓及牙周组织的表达和分布。结果 DPCs和PDLCs经矿化诱导,FGF2mRNA表达下调,BMP2mRNA表达上调,与对照组间差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光示FGF2在新生的牙周韧带组织强表达,在新生牙髓及正常牙髓牙周组织弱表达,BMP2蛋白在损伤处的新生牙髓及牙周韧带组织细胞浆强表达,FGF2和BMP2在正常牙髓及牙周韧带组织均无表达。结论 FGF2和BMP2在DPCs和PDLCs体外成牙本质/成骨分化中可能具备独立的生物学功能,在体内牙齿损伤修复过程中可能存在协同调控作用。     

成牙本质细胞表达相关蛋白作用的研究进展

成牙本质细胞分泌的蛋白质、基质、生长因子等在牙齿发育和牙髓损伤修复中都起着重要的调节作用。牙本质基质蛋白(DMP1)、牙本质涎蛋白(DSP)、牙本质磷蛋白(DPP)、巢蛋白、clock蛋白、骨黏附蛋白聚糖(OSAD)等在牙本质形成、矿化及牙本质修复等过程中发挥着各自的作用。此外,其中某些蛋白对常染色体隐性低血磷性佝偻病、非矿化组织疾病发病机制的研究具有重要意义。本文就成牙本质细胞表达相关蛋白在牙发育及损伤修复中的作用机制做一综述。     

修复性牙本质形成的大鼠模型

目的：建立修复性牙本质形成的动物实验模型,观察修复性牙本质形成的组织开矿学特征。方法：在Ｗｉｓｔａｒ大鼠第一磨牙近中面制备窝洞,分别观察３、１５、３０ｄ,标本切片,ＨＥ染色,显微镜下观察。结果：术后３ｄ未见修复性牙本质形成。１５ｄ后可见修复性牙本工可见骨样牙本质。窝洞下原代成牙本质细胞由新分化的成牙本质细胞样细胞取代。３０ｄ后,修复性牙本质明显增加。新分化的成牙本质细胞样细胞发生极化。结论：大鼠模     

Calbindin-D28k与肌动蛋白在大鼠切牙成牙本质细胞的分布

目的 探讨Calbindin-D28k与肌动蛋白在大鼠下颌切牙成牙本质细胞中分布的相关性及其意义。方法 用免疫组化方法分别检测Calbindin-D28k与肌动蛋白在大鼠下颌切牙成牙本质细胞中的表达并观察比较。结果 大鼠下颌切牙唇侧区域的冠方2／3成牙本质细胞Calbindin-D28k与肌动蛋白表达均为阳性，且都集中于成牙本质细胞突；根尖区和舌侧成牙本质细胞均为阴性。结论 Calbindin-D28k与肌动蛋白在大鼠下颌切牙成牙本质细胞中的分布具有一致性，与牙本质的形成密切相关。     

Runx 2在第三期牙本质形成过程中的分布及其意义

目的:研究Runx 2在牙髓炎症修复中的作用,探讨活髓保存的新途径.方法:建立大鼠第三期牙本质形成动物模型,用免疫组织化学染色方法研究Runx 2的表达变化及其意义.结果:Runx 2于牙髓损伤早期阶段表达于穿髓点下方细胞群;修复性牙本质形成初期于牙髓根尖部强表达,修复性牙本质形成中期表达减弱,而修复性牙本质形成末期表达为阴性.结论:Runx 2在牙髓损伤修复过程中的表达具有明显的时空特异性.     

Calbindin-D28k与肌动蛋白在人健康及龋坏牙齿中的分布

目的 探讨calbindin—D28k与肌动蛋白在健康和龋坏人恒牙中的分布相关性及意义。方法 用免疫组化方法分别检测calbindin—D28k与肌动蛋白在正常、中龋和深龋人牙中的表达并观察比较。结果 正常组Calbindin—D28k在前期牙本质远髓2／3区域染色阳性，肌动蛋白在成牙本质细胞及住于矿化牙本质中的细胞突呈阳性；中龋组位于前期牙本质中的成牙本质细胞突Calbindin—D28k与肌动蛋白均呈强阳性，Calbindin—D28k在病损区前期牙本质全层呈阳性且较正常组明显增强；深龋组Calbindin—D28k染色部位主要位于成牙本质细胞核。结论 在第三期牙本质形成活跃的成牙本质细胞中Calbindin—D28k与肌动蛋白的分布变化具有一致性，均与牙本质基质的分泌有关。     

牙髓组织损伤修复的机制

牙髓组织具有修复潜能，其损伤修复机制目前尚不搞清楚。本文从细胞学和分子学水平对牙髓损修复的机理进行了回顾。     

热休克蛋白及其在牙髓中的生物学意义

热休克蛋白是普遍存在于生物体细胞中的一个蛋白质家族,能够保护和促进细胞从各种刺激中自身修复。在正常及应激条件下,热休克蛋白主要涉及细胞内在机制如蛋白质折叠、转运、稳定和分泌的过程,同时也参与其他重要的细胞功能如信号传导、细胞的繁殖、分化等。本文介绍了热休克蛋白基本概念,热休克蛋白家族的组成及各家族蛋白的生物学功能,热休克蛋白在人类牙髓中的表达及其在牙髓修复中的意义。     

Osterix在小鼠牙本质生成和修复过程中的表达

目的通过免疫组织化学方法观察小鼠牙本质生成过程中Osterix(Osx)的表达变化,探索其功能及意义。方法取小鼠不同年龄段及建立修复性牙本质模型的下颌骨,石蜡包埋切片后分别进行HE染色和免疫组织化学染色。结果在钟状期晚期,Osx在牙尖处成牙本质细胞核内表达。小鼠出生后3 d,Osx在牙冠的全部成牙本质细胞核内高表达。2周龄小鼠,冠部成牙本质细胞核内几乎不表达Osx,磨牙根部成牙本质细胞核内Osx高表达。牙尖磨损建模7 d后,Osx在成牙本质细胞核内表达升高,14 d时表达量下降。结论 Osx在促进成牙本质生成和修复过程中发挥作用。     

大鼠内毒素脂多糖刺激性牙髓炎中免疫反应细胞的动态变化

目的研究牙髓在内毒素脂多糖刺激过程中的防御反应机制.方法通过已建立的大鼠内毒素脂多糖刺激性牙髓炎模型,利用3种单克隆抗体(ED1、ED2、OX6)和免疫组化手段,观察内毒素脂多糖感染性牙髓中巨噬细胞、Ia抗原表达细胞的动态变化.结果牙髓中组织细胞(ED2 细胞)在早期感受内毒素脂多糖(LPS)入侵的同时,与Ia抗原表达细胞(OX6 细胞)和来自于血中的巨噬细胞一起参与了抵抗外来抗原刺激的防御反应.Ia抗原表达细胞在LPS刺激后3d增加至最多,以后逐渐下降.以来源于血中的巨噬细胞为主的ED1 细胞,在整个炎症过程中均可见大量浸润,细胞体积由小变大,形态由纺锤形,树枝状等变成圆形或椭圆形.结论内毒素脂多糖入侵牙髓后,牙髓中的组织细胞动员Ia抗原表达细胞和巨噬细胞,开展以非特异性免疫为基础的抗原特异性免疫反应.     

Fas/FasL在牙髓炎症过程中的分布及意义

目的：观察Fas/FasL基因及其蛋白在正常牙髓和炎症牙髓中的表达和分布，探讨其在牙髓炎症过程中的作用机制。方法：采用免疫组织化学染色及原位杂交方法。结果：正常牙髓组织中Fas表达量不高，FasL呈阴性表达，而在牙髓炎症过程中两者均有阳性表达，且其组织细胞的分布与TUNEL法的结果相似。结论：牙髓炎症过程中的细胞凋亡可能是通过Fas介导的LPS等一些因素可能使牙髓组织细胞膜上的Fas和FasL的表达量增加，从而通过其介导的信号转导途径引起细胞凋亡。     

人Notch-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

目的 构建及鉴定人Notch-1基因的RNA干扰（RNAi）慢病毒载体,寻找最佳RNAi慢病毒载体。方法 针对人Notch-1基因序列,按照RNAi序列设计原则,设计3段RNAi靶点序列（shRNA1~3）,通过限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切、T4 DNA连接酶连接,将Notch-1基因序列插入慢病毒载体pLenOR-THM,构建pLenOR-THM-Notch-1重组载体。质粒转化感受态DH5α细菌,筛选阳性克隆,经KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切及测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒四质粒系统共转染293T细胞,进行慢病毒包装并测定病毒滴度,观察感染效率。各组病毒载体转染ACC-M细胞后,运用定量逆转录聚合酶链反应和Western blot检测Notch-1基因mRNA和蛋白的表达水平。结果 成功构建慢病毒载体pLenOR-THM-Notch-1,四质粒共转染293T细胞后可见大量绿色荧光;浓缩后的病毒滴度为5.8×108 TU·mL-1;以复感染系数为1时感染293T细胞,感染效率在90％以上。QRT-PCR和Western blot检测结果表明,pLenOR-Notch-1-shRNA3组受抑制程度最高。结论 成功构建了人Notch-1 RNAi慢病毒载体。     

碱性磷酸酶在第三期牙本质形成过程中的分布及意义

目的：观察碱性磷酸酶在第三期牙本质形成过程中的分布,探讨其在牙髓损伤修复过程中的作用及意义。方法：建立大鼠第三期牙本质形成动物模型,用免疫组织化学染色方法研究大鼠第三期牙本质形成过程中碱性磷酸酶的表达变化。结果：碱性磷酸酶于牙髓损伤早期阶段表达于穿髓点下方细胞群;随着修复性牙本质的形成其表达逐渐减弱直至消失。结论：碱性磷酸酶在牙髓损伤的早期阶段发挥着重要作用。     

Toll样受体4在大鼠炎症牙髓表达的免疫组化研究

目的研究内毒素(LPS)诱导大鼠牙髓炎模型中Toll样受体4(TLR4)的表达特点,以探讨TLR4在牙髓炎症中的可能作用,推测它在牙髓炎发生发展中的意义。方法通过对LPS诱导的大鼠磨牙牙髓炎组织切片,同时采用免疫组化方法检测大鼠牙髓炎中TLR4的表达情况。结果 1 d组:成牙本质细胞呈中度阳性表达,牙髓成纤维细胞为中度至强阳性表达;3⁷ d组:成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞阳性表达减弱;2周组:坏死区扩大呈均质弱阳性表达,成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞及内皮细胞减少,呈阳性,修复牙本质呈弱阳性表达;3周组:大部分坏死牙髓组织呈均质弱阳性表达。结论 TLR4在大鼠牙髓炎发生、发展呈动态表达,TLR4可能参与调节牙髓炎发生、发展及修复过程。     

Toll样受体4在大鼠实验性牙髓炎和根尖周炎中的表达

目的:建立大鼠实验性牙髓炎及根尖周炎模型,了解TLR4在大鼠牙髓和根尖周组织的表达情况。方法:采用单纯髓腔开放法建立大鼠实验性牙髓炎及根尖周炎模型,进行组织学及X线片观察。免疫组化检测TLR4在牙髓炎中的表达,RT-PCR检测TLR4在根尖周炎中的表达。结果:组织学及X线观察证实成功复制大鼠牙髓炎及根尖周炎模型,免疫组化结果表明大鼠正常牙髓组织成牙本质细胞层TLR4阳性表达,牙髓内部血管内皮细胞亦见表达,牙髓成纤维细胞未见表达。炎症牙髓组织TLR4表达较正常组增强。RT-PCR检测发现正常和炎症根尖周组织均有TLR4mRNA表达,炎症组表达较正常组增强。结论:TLR4在牙髓组织和根尖周组织均有表达并参与了牙髓根尖周炎症的发生和发展。     

血红素氧合酶-1在大鼠牙髓炎中表达的实验研究

目的:研究血红素氧合酶-1(HemeOxygenase-1,HO-1)在大鼠实验性牙髓炎不同时间点的表达及定位情况,探讨HO-1在牙髓炎发生发展过程中的可能作用。方法:单纯开放法建立大鼠牙髓炎模型,采用HE染色和免疫组织化学染色观察单纯开髓1天,3天,6天,9天后牙髓组织病理学改变和HO-1的表达情况。结果:HO-1在大鼠正常牙髓组织的成牙本质细胞及成纤维细胞中有弱阳性表达,在牙髓炎1天组成牙本质细胞和成纤维细胞中呈阳性表达,在血管内皮细胞中有弱阳性表达,其余时间点牙髓组织呈现阴性表达。结论:HO-1主要是在牙髓炎早期被诱导表达,参与抗炎反应,保护组织细胞。     

MMP-2��TIMP-2�ڸ����԰����������еı�Ｐ����

目的 探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)在复发性阿弗他溃疡(RAU)中的表达及意义.方法 选取2007年1月至2010年1月中国医科大学口腔医学院综合急诊科收治的36例RAU患者,按照临床诊断分为3组,其中A组(轻型溃疡)19例、B组(疱疹样溃疡)11例、C组(重型溃疡)6例.再选择5例口腔黏膜正常者作为对照.采用免疫组化和RT-PCR方法分别检测各组对象口腔黏膜组织中MMP-2和TIMP-2的表达.结果 MMP-2、TIMP-2在各组对象口腔黏膜组织中均有表达,其表达的强度不同.MMP-2、TIMP-2在溃疡中的表达比正常黏膜显著增高(P＜0.05).MMP-2在重型溃疡中的表达明显高于轻型和疱疹样溃疡(P＜0.05);轻型和疱疹样溃疡中的表达差异无统计学意义(P＞0.05);TIMP-2在轻型、疱疹样、重型溃疡中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MMP-2和TIMP-2在RAU中均表达增强,其二者的失衡可能参与发病过程且与病损的深度有关.