难治性癫痫大鼠脑内多药耐药相关蛋白1表达的研究

目的 研究杏仁核电刺激点燃的难治性癫痫大鼠脑内多药耐药相关蛋白1（multidrug resistant-associated protein 1 MRP1）表达的情况.方法 建立杏仁核电刺激点燃的难治性癫痫大鼠模型,用免疫组织化学及免疫蛋白印记（western blot）的方法,分析比较MRP1蛋白在癫痫模型组与正常对照组的表达.结果 药物难治性癫痫大鼠组脑内多药耐药相关蛋白的表达显著高于正常对照组（P〈0.01）.在癫痫大鼠脑内广泛分布的MRP1免疫阳性细胞主要为毛细血管内皮细胞和星形胶质细胞.结论 癫痫大鼠脑内高表达的MRP1参与了难治性癫痫的耐药机制.     

多药耐药相关蛋白-1在难治性颞叶癫痫患者脑组织中的表达及丙磺舒的干预作用

目的 观察难治性颞叶癫痫患者脑组织中多药耐药相关蛋白1( MRPl)及应用MRP1拮抗剂丙磺舒干预后的表达,探讨MRP1与难治性颞叶癫痫多药耐药的关系.方法 应用免疫组化检测难治性颞叶癫痫患者脑组织实验组和对照组MRP1的表达情况,同时应用免疫蛋白印记(Western blot)方法检测实验组、丙磺舒干预组和对照组MRP1的表达.结果 免疫组化结果显示MRP1在难治性颞叶癫痫患者脑组织中表达增强,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05).Western blot结果显示丙磺舒干预组MRP1蛋白水平较实验组明显较少,差异有显著性(P＜0.05).结论 脑内高表达的MRP1参与难治性颞叶癫痫的耐药机制,丙磺舒可以降低脑组织内MRP1的表达.     

β-arrestin1参与MK-801治疗帕金森病异动症的研究

目的 探讨MK-801缓解帕金森病(PD)异动症的治疗机制。方法 建立PD运动并发症大鼠模型,25只大鼠随机分为3组：异动症(LID)组10只、MK-801处理组10只、PD组5只,另设假手术组5只为对照组。观察MK-801治疗左旋多巴诱导的异动症大鼠模型的行为学变化,并采用免疫组织化学方法和Western blot印迹法检测大鼠纹状体区β-arrestin1的表达情况。结果 MK-801处理后,LID大鼠模型异常不自主运动评分降低和剂峰旋转行为减弱。免疫组织化学结果显示LID组损伤侧β-arrestin1阳性细胞指数[(2.95±0.44) ×104]明显较未损伤侧[(3.78 ±0.37)×104]降低,差异有统计学意义(t =5.415,P＜0.05)。Western blot结果显示,PD模型组损毁侧与未损毁侧纹状体区β-arrestin1含量比值为81.02％ ±2.23％;LID组(64.88％±3.10％)蛋白表达量进一步减少,与PD组比较,差异有统计学意义(t=9.47,P＜0.01);而MK-801组蛋白表达量增高至89.26％±1.90％,与LID组相比,差异有统计学意义(t=14.82,P＜0.01)。结论 MK-801能缓解LID大鼠的行为学变化,其机制可能与β-arrestin1表达增多抑制了谷氨酸受体的过度活化有关。     

大鼠癫(癎)持续状态后海马内X-连锁凋亡抑制蛋白及其负性调控因子的表达

目的 研究大鼠癫(癎)持续状态(SE)后海马组织中X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)及其负性调控因子Smac、HtrA2、XAF1的表达变化.方法 建立氯化锂-匹罗卡品致(癎)大鼠SE模型,应用免疫组织化学染色和Western blot方法检测大鼠SE后各时点海马CA3区XIAP、Smac、HtrA2、XAF1及半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3蛋白的表达.结果 SE后大鼠海马CA3区XIAP蛋白呈弥散性分布于整个神经元内,SE后2 h(0.5503±0.0172)起逐渐增高(t=115.87),8 h(0.6221±0.0238)达高峰(t=136.69).与对照组(0.1507±0.0165)比较,差异有统计学意义(P<0.01).Same、HtrA2及XAF1蛋白在对照组弱表达,在SE后呈弥散性分布于整个神经元内.2～72 h增高.海马CA3区caspase-3活性蛋白在对照组呈阴性,在SE后4～72 h明显增高.Western blot发现,SE组各时间点XIAP蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),Smac、HtrA2及caspese-3蛋白在对照组很少表达,在SE后2～72 h增高(P<0.01).结论 XIAP及其负性调控因子Smac、HtrA2、XAF1涉及了SE后神经元凋亡的调节,参与了SE后神经元损伤.     

药物难治性癫痫大鼠脑内Bax和Bcl-2表达的研究

目的研究杏仁核电刺激点燃的药物难治性癫痫大鼠脑内凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的情况。方法建立杏仁核电刺激点燃的难治性癫痫大鼠模型,通过药物筛选用出耐药大鼠和药物敏感大鼠,采用免疫组织化学及免疫蛋白印记（western blot）的方法,分析比较Bax和Bcl-2在耐药组与药物敏感组的表达。结果药物难治性癫痫大鼠组脑内Bax蛋白的表达显著高于药物敏感组（P〈0.01）,而Bcl-2蛋白的表达显著低于药物敏感组（P〈0.01）。结论癫痫大鼠脑内凋亡相关蛋白可能参与了难治性癫痫的耐药机制。     

红藻氨酸诱导癫痫大鼠前脑CX32的表达及辛醇干预的影响

目的 观察红藻氨酸(kainic acid,KA)诱导癫痫大鼠前脑缝隙连接蛋白32(connexin 32,CX32)的表达及辛醇干预的影响.方法 用免疫荧光法检测癫痫发作后各时间点大鼠皮质及海马CX32阳性细胞表达.同时观察致痫前给予辛醇干预对大鼠皮质及海马CX32阳性细胞表达的影响.结果 KA致痫组大鼠皮层及海马CX32阳性细胞在各时程明显高于正常对照组(P<0.05),并且随时程延长呈增加趋势,7d达高峰,在海马中的变化比皮层明显,但无统计学意义(P>0.05).辛醇干预组大鼠皮层及海马CX32阳性细胞在各相应时程明显低于KA致痫组(P<0.01).结论 CX32组成缝隙连接(gap junction,GJ)在癫痫的发生发展过程中起重要作用,辛醇可以减少癫痫大鼠CX32表达,降低癫痫敏感性,实现脑保护作用.     

PTPRT在难治性癫痫患者及匹罗卡品致痫大鼠脑组织中的表达

目的 研究难治性癫痫患者及皮罗卡品致痫大鼠脑组织中PTPRT的表达,以探讨难治性癫痫可能的发病机制.方法 用免疫组织化学、免疫荧光、Western blot法检测PTPRT在难治性癫痫患者及癫痫发作后6h及1、7、14、30、60 d的匹罗卡品致痫大鼠脑组织中的表达,并分别与无癫痫发作的人以及大鼠的脑组织比较.结果 在人颞叶皮质中,PTPRT主要在对照组和病例组的神经元有表达,PTPRT在难治性癫痫患者(0.277 ±0.048)脑组织中比对照组(0.171±0.025)显著升高(t=9.586,P＜0.05).在大鼠颞叶脑组织中,对照组和实验组的PTPRT主要在神经元中表达.PTPRT在实验组颞叶中的表达与对照组相比,在癫痫发作后24 h内不断升高,7d和14 d后表达水平则下降,30 d和60 d后表达又升高(A比值:对照组0.443±0.039,6 h 0.840±0.032,24 h 1.113 ±0.064,7d 0.564±0.039,14 d 0.570±0.029,30 d 0.899±0.034,60 d 1.011±0.074,F=256.427,P＜0.05).结论 通过对PTPRT在癫痫动物模型和癫痫患者颞叶脑组织表达规律的研究,结合PTPRT的功能我们推测PTPRT可能通过突触重构以及苔藓纤维出芽参与了神经网络的重构,从而导致了难治性癫痫的发生.     

脑缺血对大鼠皮层及海马铜蓝蛋白表达的影响

目的 探讨脑缺血对大鼠皮层及海马中铜蓝蛋白(Ceruloplasmin,Cp)表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠60只,随机分为脑缺血1、3、7、28 d组和假手术对照组,每组各12只.实验组结扎双侧颈总动脉造成大鼠脑缺血,假手术对照组仅分离出双侧颈总动脉但不结扎.采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测皮层及海马组织中Cp mRNA的表达,免疫组织化学观察皮层及海马组织中Cp的表达.结果 大鼠皮层和海马均表达Cp mRNA.皮层和海马Cp mRNA的表达随缺血时间的延长逐渐降低,缺血1、3、7、28 d组表达均低于假手术组(P＜0.01).脑组织脉络丛细胞、室管膜细胞、皮层和海马的星形胶质细胞、血管内皮细胞均表达Cp;而皮层和海马的锥体细胞和颗粒细胞均不表达Cp.缺血1 d组皮层及海马Cp表达与对照组差异不显著(P＞0.05);缺血3 d组皮层和海马Cp表达低于假手术组(P＜0.05);缺血第7、28 d组Cp表达减少极为显著(P＜0.01).脑缺血大鼠皮层和海马中铁含量与Cp的表达呈负相关,相关系数分别为-0.831(P＜0.01)和-0.809(P＜0.01).结论 脑缺血可诱导大鼠皮层及海马中Cp表达降低.脑缺血后Cp表达减少可能参与了脑缺血引起的铁含量升高及神经元铁沉积的过程.     

细胞外信号调节激酶信号通路对癫痫大鼠海马内HIF-1α表达的调控作用

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路是否参与调节癫痫大鼠海马内低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达. 方法 208只21d龄SD大鼠按随机数字表法分为癫痫持续状态(SE)组(96只)、对照组(96只)和PD98059组(16只),SE组腹腔注射戊四氮(PTZ)溶液制作SE模型,对照组注射等剂量生理盐水,造模后0.5、1、1.5、6、12、24h采用RT-PCR、Western blotting分别检测2组大鼠海马内HIF-1α、ERK1/2 mRNA和蛋白的表达;PD98059组大鼠腹腔注射PD98059,10min后腹腔注射PTZ溶液制作SE模型,造模成功后1h采用RT-PCR检测大鼠海马内HIF-1α、ERK1/2mRNA的表达,造模成功后1.5 h采用Western blotting检测其相应蛋白的表达. 结果 与对照组比较,SE组大鼠海马内HIF-1α、ERK1/2 mRNA及其蛋白的表达明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);其中ERK1/2 mRNA的表达高峰(1.112±0.126)在SE后1h,蛋白的表达高峰(1.127±0.155)在SE后1.5 h;而HIF-1α mRNA的表达高峰(0.589±0.090)在SE后1.5 h,蛋白的表达高峰(0.230±0.052)在SE后6h.与SE组相比,PD98059组大鼠海马内HIF-1αmRNA、ERK1/2 mRNA和蛋白的表达均降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).SE组大鼠中,T-ERK 1/2与HIF-1αmRNA的表达呈正相关(r=0.688,P=0.000). 结论 戊四氮诱导发育期大鼠SE后ERK信号通路被激活,参与了海马内HIF-1α的表达调控.     

慢性脑缺血信号转导和转录激活因子-1的表达

目的 探讨慢性脑缺血大脑皮质及海马STAT-1的变化.方法 采用免疫组织化学和激光共聚焦方法观察慢性脑缺血大鼠脑中STAT-1蛋白表达变化.结果 STAT-1免疫反应阳性细胞在正常和假手术大鼠脑内发现有少量表达;缺血30d组,STAT-1蛋白阳性细胞分布于皮层及海马,细胞数量明显多于非缺血组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 STAT-1可能参与慢性脑缺血大鼠神经细胞死亡的诱导.     

锂-毛果芸香碱致痫大鼠早期大脑NG2和O4表达及意义

目的探讨氯化锂-毛果芸香碱(匹罗卡品)致疒0 间大鼠早期大脑少突胶质前体细胞变化及意义.方法对雄性成年SD大鼠先后腹腔注射氯化锂、毛果芸香碱,制成癫癎持续状态动物模型;用免疫荧光组织化学法检测癎性发作后早期大鼠大脑皮质和海马CA1区NG2和O4阳性细胞数量.结果和对照组相比,除癫癎后1 d组外其余各组大鼠脑皮质内NG2和O4阳性细胞都有明显的增加;癫癎后1 d组海马CA1区的阳性细胞数明显减少;癫癎后7 d组皮质和海马CA1区NG2和O4阳性细胞数最多.结论氯化锂-毛果芸香碱致癎大鼠早期大脑NG2和O4表达增加,少突胶质前体细胞增多,并且和观测时间相关.     

氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠脑髓鞘转录因子的表达及其意义

目的探讨氯化锂-匹罗卡品致     

癫痫大鼠模型中小胶质细胞激活的脑区特点

目的 探讨小胶质细胞在癫痫中的激活特点及其在癫痫中的作用。方法 将12只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠随机分为对照组和癫痫组,每组各6只; 癫痫组采用氯化锂-匹鲁卡品腹腔注射的方法造模,对照组给予等量生理盐水; 癫痫发作4 d后取大鼠脑组织,采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)和免疫组化的方法研究各组电离钙结合适配器分子-1(Ionized calcium binding adaptor molecule 1,Iba1)+小胶质细胞的表达情况。结果 与对照组大鼠模型相比,癫痫组大鼠丘脑皮层环路Iba1的表达增加,小胶质细胞的激活程度增加,且小胶质细胞特异性地在梨状皮质、丘脑室旁核、丘脑外侧背核,腹外侧部分以及腹内侧丘脑核增生。结论 癫痫发作后小胶质细胞的激活和增生存在着明显的脑区选择性,抑制丘脑皮层环路小胶质细胞的激活有望成为癫痫治疗的靶点。     

锂-匹罗卡品致癫大鼠早期大脑皮质MyT1 mRNA表达变化

目的 探讨氟化锂-匹罗卡品致癫大鼠脑髓鞘转录因子1基因表达变化及其意义。方法 以氯化锂、匹罗卡品对雄性成年SD大鼠先后腹腔注射，制成癫痫持续状态动物模型；采用5′末端标记地高辛的寡核苷酸探针荧光原位核酸分子杂交检测癫性发作后早期大鼠大脑皮质MyT1 mRNA阳性细胞数量。结果 与对照组相比，癫痫后1d组大鼠脑皮质MyT1 mRNA阳性细胞数减少（P＜0.05）；其他各组大鼠脑皮质MyT1 mRNA阳性细胞数都有明显的增加，其中癫痫后7d和14d组MyT1mRNA阳性细胞数都有非常显著的增加（P＜0.05，P＜0.01）。结论 氯化锂-匹罗卡品致癫大鼠早期大脑MyT1 mRNA表达增加，并有时程性变化，提示与早期脑损伤修复有关。     

柴胡疏肝汤对戊四氮致痫大鼠海马及额叶皮质c-fos表达的影响

目的 观察柴胡疏肝汤对戊四氮致痫大鼠海马及额叶皮质c-fos表达的影响.方法 选取经戊四氮诱导制作的癫痫模型大鼠48只,按随机数字表法分成6组:癫痫模型组、德巴金组、定痫丸组、柴胡疏肝汤低剂量组、柴胡疏肝汤中剂量组和柴胡疏肝汤高剂量组,每组各8只;另设正常对照组8只.正常对照组和癫痫模型组常规饲养,其他各组给予药物德巴金,定痫丸,低、中、高剂量柴胡疏肝汤处理,均连续灌胃治疗5周.免疫组化染色检测各组大鼠海马及额叶皮质c-fos的表达情况.结果 戊四氮致痫后大鼠海马及额叶皮质c-fos表达明显增强,而应用中、高剂量的柴胡疏肝汤,德巴金和定痫丸治疗后,大鼠海马及额叶皮质c-fos表达均明显减弱,与癫痫模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05),而柴胡疏肝汤低剂量组大鼠海马及额叶皮质c-fos表达无明显减弱.结论 柴胡疏肝汤的抗癫痫作用机制可能与其含有柴胡皂甙及其他多种有效的抗癫痫成份多靶点干预海马及额叶皮质c-fos表达水平有关.

Abstract：

Objective To observe the effect of chaihushugantang on the expression of c-fos in the hippocampus and frontal lobe cortex of pentylenetetrazole (PTZ)-induced epileptic rats. Methods Forty-eight PTZ-induced epileptic rats were randomly divided into 6 groups: epileptic model group,Valproate treatment group, Dingxianwan treatment group, and lower-dose, medium-dose and high-dose chaihushugantang treatment groups (n=8). Normal control group was also employed (n=8). The epileptic rats in the normal control group and epileptic model group were fed normally. Rats of the treatment groups were performed intragastric administration of medicines (Valproate, Dingxianwan and chaihushugantang) for 5 weeks in succession respectively. The expression of c-fos in the hippocampus and frontal lobe cortex of all the rats was observed. Results The expression of c-fos in the hippocampus and frontal lobe cortex of rats in the epileptic model group was significantly increased, while the c-fos expression in the hippocampus and the frontal lobe cortex of rats in the medium-dose and high-dose chaihushugantang treatment groups and Valproate treatment group and Dingxianwan treatment group was significantly decreased as compared with that in epileptic model group (P<0.05). But the c-fos expression in the hippocampus and the frontal lobe cortex of rats in the low-dose chaihushugantang treatment group showed no obvious decrease. Conclusion Chaihushugantang has good antiepileptic effect, might through affecting the c-fos expression in the epileptic rats. The antiepileptic mechanism of chaihushugantang can be related to saikosaponins and other antiepileptic constituents in it.     

迷走神经、躯体神经与运动皮质电刺激对戊四氮点燃大鼠惊厥行为的影响

目的 探讨迷走神经、躯体神经(坐骨神经、三叉神经)与运动皮质电刺激对戊四氮点燃大鼠惊厥行为的影响是否存在差异.方法 分别剥离大鼠迷走神经、坐骨神经(三叉神经不予以剥离)和建立运动皮质电刺激模型,给予上述4种电刺激后腹腔注射戊四氮50 mg/kg,观察大鼠行为学的变化.结果 对照组在注射戊四氮后9只大鼠(9/10)出现Racine分级Ⅳ～Ⅴ级惊厥发作,迷走神经、坐骨神经、三叉神经刺激后大鼠惊厥发作均不同程度减轻(Ⅰ～Ⅲ级发作大鼠分别为5、6、5只),但给运动皮质电刺激后大鼠无惊厥行为.当实验鼠的皮质、海马出现病理改变(实验鼠已成为癫(癎)模型)时,再给同剂量戊四氮点燃时,相同参数的运动皮质电刺激则不能抑制大鼠的惊厥行为,反而出现Ⅳ～Ⅴ级发作(10/10).结论 在生理性状态下4种电刺激方法在行为学上均可不同程度抑制戊四氮诱发的惊厥发作,以皮质电刺激效果最好,然而当鼠脑内的癫(癎)灶形成且处于病理状态下时此种效果消失.     

雌激素影响海人酸杏仁核点燃大鼠癫(癎)发作机制的初步探讨

目的:探讨雌激素(E)和姜黄素(C)影响癫发作的机制。方法:用E和C单独及联用连续处理去势雌性大鼠5d,第6天以海人酸(KA)杏仁核点燃法制备癫大鼠模型,观察大鼠癫发作的行为学表现,用免疫组化方法检测海马组织c-Jun蛋白的表达。结果:E加C组(EC KA组)大鼠癫重度发作的严重程度较E组(E KA组)明显减轻(P<0.05)。E KA组海马中c-Jun蛋白表达最多,C组(C KA组)及对照组(KA组)均表达较少且没有任何差异;EC KA组海马的CA1区c-Jun蛋白表达较E KA组明显减少(P<0.05)。结论:C能一定程度上减轻E引起的癫发作加重,它可能通过抑制c-Jun/核转录因子激活蛋白-1(activate-protein1,AP-1)活性,使E作用的AP-1通路受阻,从而减轻了E的促神经元兴奋作用。     

幕上胶质瘤致癫相关因素分析

目的探讨幕上胶质瘤致癫相关因素。方法回顾性分析175例幕上胶质瘤病人的临床资料,其中伴发癫51例(29.1%);并对肿瘤部位、影像学特点、侵犯皮质及病理类型等致癫相关因素进行统计分析。结果额叶胶质瘤癫发生率明显高于其他部位胶质瘤(P0.01),少枝胶质细胞瘤及低级别星形细胞瘤易于发生癫(P0.017),肿瘤侵犯皮质病人癫发生率明显高于未侵犯皮质者(P=0.01)。结论幕上胶质瘤伴发癫与肿瘤所在部位、病理类型及侵犯皮质相关。对于此类病人不仅需手术切除肿瘤,还应控制癫发作,减少并发症,提高生存质量。     

甘珀酸对癫痫大鼠前脑connexin-32和GFAP表达研究

目的研究大鼠在脑室埋管注射甘珀酸(CBX)预处理后戊四氮导致癫痫发作时前脑内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和连接蛋白-32(Cx32)表达及其相互关系. 方法动物分为生理盐水(NS)对照组(NS组)、CBX预处理对照组(CBX组)、戊四氮(PTZ)致痫组(PTZ组)、CBX预处理后再PTZ致痫组(CBX PTZ组),应用免疫荧光组织化学双重标记显示GFAP和Cx32在前脑的表达及其相互关系.结果 CBX PTZ组的大鼠癫痫发作的行为表现比PTZ组显著加重,星形胶质细胞GFAP的表达也比PTZ组明显升高,值得注意的是CBX组的星形胶质细胞GFAP的表达比NS组明显升高.Cx32在PTZ引起的癫痫大鼠的大脑皮层、海马和杏仁核内是增加的,而CBX预处理后的癫痫模型中Cx32却降低了.在Cx32与GFAP双标的切片上发现,Cx32与GFAP阳性的星形胶质细胞非常接近,在CBX预处理后的癫痫模型中GFAP阳性的星形胶质细胞显著增加的同时Cx32却明显降低. 结论在整体动物CBX预处理可以导致癫痫发作增强,这可能与星形胶质细胞增生及其Cx32表达降低有关.     

NDRG2通过Hes1参与癫痫发作后海马齿状回的神经发生

目的 探讨N-Myc下游调节基因2(N-Myc downstream regulated gene 2,NDRG2)与癫痫发作后海马齿状回神经发生的关系。方法 C57BL/6小鼠20只,随机分为癫痫组和对照组,每组又分为癫痫造模后1和7 d两个时间点,每个时间点5只,通过蛋白免疫印迹检测癫痫后海马齿状回NDRG2蛋白相对表达水平和mRNA相对表达水平变化; 使用双皮质素(DCX)染色标记未成熟神经元,神经巢蛋白(Nestin)标记神经干细胞,神经核蛋白(NeuN)标记成熟神经元,观察NDRG2对海马齿状回神经干细胞增殖影响; 采用RT-PCR检测发状分裂相关增强子1(hairy and enhancer of split 1,Hes 1)、NDRG2 mRNA相对表达表达水平,并分析两者之间的相关性; 观察NDRG2参与癫痫发作后神经发生的可能机制。结果 癫痫组与对照组比较,DCX、Nestin、NeuN、Hes1、NDRG2蛋白相对表达水平在1和7 d这2个时间点有显著性增高,并随时间逐渐递增。结论 癫痫发作后海马NDRG2蛋白相对表达水平增高,与癫痫发作后海马齿状回的神经细胞增值时间具有一致性和相关性,NDRG2可能参与癫痫发作后海马齿状回的神经发生过程; 同时发现海马NDRG2表达增加和Hes1分子表达增加具有相关性,故推测NDRG2可能通过Hes1参与癫痫发作后海马齿状回的神经发生。