毛囊干细胞的体外研究

毛囊是皮肤的重要附属器官,其生长具有周期性.这与其中存在的毛囊干细胞的功能密不可分.毛囊干细胞具有强大的增殖潜能及多向分化能力,可以分化成毛囊及表皮的多种细胞.它不仅对维持毛发的周期性生长有重要作用,同时也是表皮及皮肤附属器官再生的重要细胞来源.目前对成人毛囊干细胞的定位还没有明确的结论,多数的在体研究认为它可能存在于毛囊膨出部(立毛肌插入点附近)和外根鞘的最外层,其特点是体积小,分化程度低,具有慢周期性,特异性表达β1整合素和角蛋白19型(Keratin 19,K19).     

毛囊细胞移植法诱导毛囊的初步研究

目的 构建一个可靠有效的移植毛囊细胞诱导毛发发育的模型,以治疗脱发.方法 取自愿捐献的成人头皮标本,联用显微分离与免疫磁珠法获得人毛囊干细胞;消化法获得毛乳头细胞.培养后混合植入裸鼠皮下,观察毛囊形成情况.结果 在裸鼠的皮肤切片中可以看到较为完整的毛囊结构形成.结论 毛囊细胞移植法可以在体内诱导出毛囊样结构,为将来治疗脱发奠定了基础.

Abstract：

Objective To establish a convenient and reliable method for inducing hair regeneration by follicular cell implantation for the treatment of alopecia. Methods The human hair follicle stem cells were separated and purified by micromanipulation and magnetic cell sorting, and human scalp dermal papilla cells were isolated by enzyme digestion. The two cells were mixed and implanted subcutaneously in nude mice to observe the regeneration of the hair follicles. Results Formation of intact hair follicle-like structures was observed in the skin sections of the recipient nude mice. Conclusion Follicular cell implantation can induce hair follicle-like structures in nude mice, which provides a means for efficient hair regeneration for treatment of hair loss.     

毛囊干细胞定位和体外向表皮分化

目的研究毛囊干细胞在毛发不同生长周期中定位和体外向表皮分化能力。方法采用免疫荧光染色检测皮肤组织中K19表达;分离毛囊干细胞并体外培养,以成纤维细胞为底物,采用气-液界面立体培养,形态学观察毛囊干细胞体外向表皮分化能力。结果K19阳性细胞主要定位于毛囊外根鞘。生长期毛发中,K19阳性细胞主要位于毛囊外根鞘膨突处和下部毛球部;退行期和静止期毛发中K19阳性细胞则沿毛囊外根鞘处连续分布,并在新的生长周期开始再次分开为两处。体外采用真皮类似物立体培养外根鞘细胞,获得具有多层表皮结构的皮肤类似物。结论毛囊干细胞主要定位于毛囊外根鞘,并随毛囊周期性生长有所迁移,体外具有形成表皮结构的能力。     

毛囊干细胞的研究进展

毛囊干细胞在毛囊的形态发生和毛发的周期生长起着重要的作用。毛囊干细胞具有干细胞的一般特征，并定位于毛囊隆突部。它具有自己特定的表面标志物、调节基因以及传导通路。     

螺内酯对体外培养的人毛囊影响的实验研究

目的：观察螺内酯（spironllactone）对体外培养的人毛囊生长的影响。方法：建立人毛囊体外培养模型，加入不同浓度的螺内酯，通过目镜测微尺测量毛囊的长度，利用^3H-胸腺嘧啶核苷酸（^3H-TdR）掺入法检测毛囊DNA合成率。结果：螺内酯各浓度组毛囊生长长度与空白对照组相比无明显差异（P〉0．05）。^3H-TdR掺入法检测与长度检测结果一致。结论：螺内酯对体外培养的人毛囊的生长无促进和抑制作用。     

重建毛囊的组织学研究

目的：观察毛囊真皮鞘成分和上皮成分细胞间的相互作用和相互影响。方法：采用细胞三维培养技术将分段毛囊上皮细胞分别与毛乳头细胞、真皮鞘细胞及真皮成纤维细胞进行器官型培养来重建表皮和毛囊。结果：在真皮成纤维细胞凝胶上培养的毛囊间表皮细胞、上段、下段和球部细胞重建出了表皮，而上段细胞形成的表皮最厚，球部细胞形成的表皮最薄；在毛囊真皮鞘细胞胶原凝胶上时上段和下段细胞重建出了毛囊结构。结论：首次成功地证明毛囊     

大鼠触须毛囊上段再生的体外培养

观察大鼠触须毛囊上段组织的体外培养,筛选最优培养液,为毛乳头体外再生奠定基础。将大鼠触须毛囊上段组织分别培养于 Williams E无血清培养液、含5%胎牛血清(FCS)的MEM培养液、Williams E无血清培养液+20 ng/mL EGF+10 ng/mL IGF-1、含5%FCS MEM培养液+20 ng/mL表皮生长因子(EGF)+10 ng/mL胰岛素生长因子1(IGF-1)、5%FCS MEM培养液+20 ng/mL EGF+10 ng/mL IGF-1+10-7 mmol/L双氢睾酮(DHT)、Williams E无血清培养液+20ng/mL EGF+10 ng/mL IGF-1+10-7 mmol/L DHT共计6种不同培养液中。 在37 ℃,5%CO₂培养箱中培养,隔日换液,在光学显微镜下观察其生长情况,并统计毛囊再生个数。相关标本制备石蜡切片,标本酶标免疫组化检测,观察α平滑肌动蛋白(α-SMA)在毛囊新生组织中的表达情况。结果显示5%FCS MEM+10－7 mmol/L DHT+10 ng/mL IGF-1+20 ng/mL EGF培养液是比较适合大鼠触须毛囊上段的体外培养液。该培养液中,毛囊上段组织体外再生率较高,结果可靠,可以作为研究毛囊体外再生的良好平台。     

毛囊隆突细胞

毛囊具有不断更新的功能,提示毛囊中存在干细胞。由于周期漫长的细胞集中存在于隆突部位,所以隆突细胞被认为是表皮组织的干细胞。现已成功证实隆突细胞具有干细胞的一系列特性:高增殖能力、多向分化能力等。基于技术的飞速发展,人们对隆突细胞的表面标志、分离技术以及基因表达都有了较深刻的认识。     

毛囊干细胞的研究进展

毛囊干细胞在毛囊的形态发生和毛发的周期生长起着重要的作用。毛囊干细胞具有干细胞的一般特征,并定位于毛囊隆突部。它具有自己特定的表面标志物、调节基因以及传导通路。     

以兔毛囊干细胞与尿道黏膜干细胞为种子细胞构建组织工程尿道的比较

目的比较兔毛囊干细胞与尿道黏膜干细胞的表型及生物学特性,探索毛囊干细胞作为组织工程尿道种子细胞的可行性。方法体外分离、培养兔毛囊干细胞和尿道黏膜干细胞,并使用流式细胞仪分选富集直径<10μm、integrin-α6+/CD71-的干细胞。计算两种干细胞的最大扩增倍数和克隆形成能力,使用流式细胞仪检测两种干细胞K19、p63、β1-in-tegrin的阳性表达率。将富集毛囊干细胞和尿道黏膜干细胞接种在尿道支架上,构建组织工程尿道,应用组织学、荧光染色法观察体外构建的组织工程尿道的情况。结果兔毛囊干细胞与尿道黏膜干细胞的最大扩增倍数分别为(6.1±0.8)×104倍、(7.1±1.1)×103倍,克隆形成率分别为(10.1±1.3)%、(4.3±1.1)%。K19、p63、β1-integrin在毛囊干细胞中阳性表达率分别为(90.53±6.77)%、(93.31±5.57)%、(91.17±6.98)%,在尿道黏膜干细胞中阳性表达率分别为(88.50±4.95)%、(91.63±5.86)%、(93.35±6.28)%。毛囊干细胞与尿道黏膜干细胞在支架上都能形成复层上皮样结构,AE1/AE3染色阳性。结论兔毛囊干细胞与尿道黏膜干细胞都可以作为种子细胞构建组织工程尿道;在种子细胞获取方面,毛囊干细胞优于尿道黏膜干细胞。     

Future application of hair follicle stem cells: capable in differentiation into sweat gland cells

Background Sweat glands (SGs) can not regenerate after complete destruction in the severe skin injury,so it is important to find a ideal stem cell source in order to regenerate functional SGs.Hair foll...     

Constructing skin-equivalents using hair follicle stem cells

Objective： To establish the method of constructing skin-equivalents （SE） using hair follicle stem cells （HFSC）. Methods： K19 positive cells derived from hair were cultivated using serum-free medium KGM and seeded on dermal equivalents （DE）. After the culture between the air-liquid interface for 14 days, SE were harvested and used for evaluation. Results： K19 positive cells chosen as HFSC were located in bulge of out root sheet in hair follicle. Cultivated HFSC could build a fully developed, multi-layered epidermis on the basis of DE, resembling the skin structure. Conclusion： HFSC located in out root sheet can differentiate into kerafinocyte in vitro and be used for SE construction.     

人毛囊干细胞的分离培养鉴定与生物学特性的初步研究

目的 探讨人毛囊干细胞分离获取的方法 及其相关生物学特性,作为组织工程研究的种子细胞的可行性.方法 整形美容手术中废弃的人头皮组织,通过单细胞培养法和组织块培养法获得人毛囊干细胞,体外传代培养及生物学特性研究：细胞形态学观察,细胞生长曲线测定,免疫组化染色鉴定与流式细胞仪检测其细胞表型,将HFSCs进行成骨,成脂肪,成软骨多向分化诱导检测.结果 HFSCs生长旺盛,呈成纤维细胞样生长,多角形或梭形;免疫组化染色显示K19表达阳性,流式细胞仪检测显示：K15,K19,CD200和整合素β1为阳性,CD31,CD45,HLA-DR为阴性;成骨诱导von Kossa染色显示钙化基质沉积表达;成脂肪诱导油红-O染色阳性,胞浆内见脂滴形成;成软骨诱导细胞聚集成小团块,Alcian Blue染色显示硫酸蛋白聚糖表达阳性.结论 HFSCs体外生长能力旺盛,高表达干细胞相关抗原,具有向软骨,骨,脂肪多向分化潜能.     

毛囊来源的表皮干细胞在不同培养条件下细胞生长情况的比较及效果评价

目的：探讨毛囊来源的表皮干细胞(ESCs)培养条件,阐明成纤维细胞在ESCs培养中的作用。方法：以拔出的毛发为细胞来源,通过细胞培养的方式,比较在无包被、鼠尾胶原包被、Ⅳ型胶原包被和3T3成纤维细胞作为饲养层细胞条件下细胞生长情况。并通过RT-PCR和免疫荧光等方法对培养出的细胞进行细胞角蛋白(CK)15的检测。结果：在无包被、鼠尾胶原包被、Ⅳ型胶原包被和3T3成纤维细胞作为饲养层细胞条件下,以3T3成纤维细胞作为饲养层对细胞的生长最为有利;同时,对不同毛囊节段（毛球、中间节段、隆突和峡部）的培养表明,毛囊隆突部位的细胞增殖能力最强。RT-PCR及免疫荧光结果表明,应用此种方法从毛囊中分离培养的细胞表达表皮干细胞的特异性标志CK15。结论：以3T3成纤维细胞作为饲养层细胞,可以从拔出毛发根部的隆突部位培养出ESCs,此培养条件对细胞的生长最为有利。     

利用中性蛋白酶消化法扩增毛囊干细胞的实验研究

目的完善毛囊干细胞的体外培养扩增体系。方法接种毛囊干细胞于滋养层细胞上,利用中性蛋白酶分离毛囊干细胞和滋养层细胞传代,进行鉴定并计算扩增数目。结果经中性蛋白酶传代后,毛囊干细胞生长良好,可连续培养至15代;第12代(P12)毛囊干细胞免疫细胞化学检测均表达K15、β1-整合素及p63,原代(P0)至P12毛囊干细胞均表达K15 mRNA。以P10计算,细胞数量为1.2×1036,约250 m2,满足构建的需要。结论通过滋养层接种毛囊干细胞结合中性蛋白酶消化法传代,可大量扩增毛囊干细胞。     

体外共培养条件下毛囊神经嵴干细胞促进神经束膜细胞迁移和增殖

目的 探索体外培养神经束膜细胞的有效方案,并初步研究毛囊神经嵴干细胞(hfNCSC)对神经束膜细胞的激活作用.方法 采用"限时消化-差速贴壁-化学药物"方法对大鼠坐骨神经束膜细胞进行培养和纯化,同时培养大鼠触须垫hfNCSC,并对细胞进行免疫细胞化学染色鉴定.借助Transwell小室建立hfNCSC与神经束膜细胞的共...     

无血清K-SFM培养条件下大鼠毛囊Bulge细胞生物学特性的研究

目的研究无血清K-SFM培养条件下,大鼠毛囊Bulge细胞的生物学特性.方法分离大鼠毛囊Bulge细胞,分别置于无血清的K-SFM培养基(实验组)及有血清DMEM/F12培养基(对照组)的培养条件下培养.比较Bulge细胞在两种培养体系中的生长增殖和K19的表达状况.结果无血清培养的Bulge细胞在克隆形成率及K19的表达率均明显高于对照组(P＜0.05).结论体外培养和扩增大鼠毛囊Bulge细胞,无血清的K-SFM培养基较有血清DMEM/F12培养基更有利于Bulge细胞的扩增和表型的维持.