聚合酶链反应监测人巨细胞病毒感染

应用ＰＣＲ技术对疑为先天性ＨＣＭＶ感染的患儿及其母亲血、尿标本分别进行了ＨＣＭＶ－ＤＮＡ检测。开展了稳定的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ检测方法。患儿及其母亲尿标本经基因扩增后均测到１５１ｂｐＨＣＭＶ－ＤＮＡ片段，考虑患儿为先天性ＨＣＭＶ感染。     

聚合酶链反应检测新生儿巨细胞病毒

聚合酶链反应检测新生儿巨细胞病毒肇庆市第一医院（５２６０２０）蔡定邦，郭亮，李誉成，张传顺，陈享，陈伟红巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染后引起巨细胞包涵体病（ＣＩＤ），致全身多个器官损害并出现临床症状，使受损器官组织内出现巨细胞包涵体改变，多见于小婴儿。人巨...     

应用聚合酶链反应技术产前诊断人巨细胞病毒感染及其追踪监测结果

对４５例血人巨细胞病毒阳性的孕妇，在孕８－２６孕周取绒毛或羊水用聚合酶链反应技术进行检测。结果显示，绒毛检测组２７例，ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性１３例，占４８．１４％，对照组３０例，３例阳性，占１０．００％；羊水检测组１８例，ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性８例，占４４．４４％，对照组３０例，２例阳性，占６．６６％。     

聚合酶链反应用于人巨细胞病毒B基因编码区段的体外扩增

A nucleic acid amplification procedure, the polymerase chain reaction (PCR), has been used to amplify the human cytomegalovirus (HCMV) B gene code region, and its glycoprotein 52 kd antigenic domain. The primers used in the PCR assay were based on a conserved region of the HCMV B gene sequence. By using primer 1 (5'-AAAGAATTCATGGAATCCAGGATCTG-3', upstream nucleotides 157 to 2877), primer 2 (5'-AAAGAATTCATGAACGTGAAGGAATCG-3', upstream nucleotides 1846 to 2877), and primer 4(5'-ATAAAGCTTAATCAGACGTTCTCTTCTTC-3', downstream nucleotides 157 to 2877 and 1846 to 2877), the HCMV B gene code region sequence and its glycoprotein 52 kd antigenic domain sequence were amplified from the recombinant plasmid pBH1 DNA containing the HCMV B gene. Amplification cycles consisted of denaturation at 92 degrees C for 1 min, annealing at 55 degrees C for 1 min, and extension at 72 degrees C for 1.5 min. The cycles were carried out 30 times in three different water baths, respectively. After the last extension, 10 microliter of each reaction mixture was removed and subjected to electrophoresis on 1.2% agarose gel. Ten microgram of PCR products were obtained from 0.2 microgram of template DNA after the 30 times cycles, and were enough for being used in the restriction site analysis and the construction of clones.     

聚合酶链反应检测人巨细胞病毒感染的研究近况

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaclion,PCR)已广泛用于人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)感染的诊断、预测HCMV病的发生、HCMV的免疫学研究,监测抗病毒治疗     

应用聚合酶链反应标记高活性DNA探针

聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)或称体外基因倍增技术,是一种在体外选择性地扩增特定DNA序列的新方法。它利用一对位于待扩增DNA序列两侧的取向相对的DNA引物,在DNA聚介酶的介导下,经过多次变性、退火和延伸过程的重复性循环,大量合成靶DNA序列。     

荧光定量聚合酶链反应与免疫印迹法检测人巨细胞病毒

目的比较荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）与免疫印迹法（IBT）检测人巨细胞病毒效果。方法分别应用FQ-PCR和IBT检测疑似人巨细胞病毒（HCMV）感染小儿和成人各42例尿HCMV DNA和血清HCMV IgM。结果 42例疑似人巨细胞病毒感染小儿尿HCMV DNA阳性检出率为57.14%,血HCMV IgM阳性检出率为35.71%。前者的诊断阳性率高于后者,差异有统计学意义（χ^2=3.88,P〈0.05）;42例成人尿HCMV DNA阳性检出率为14.29%,血HCMV IgM阳性检出率为71.43%。后者的诊断阳性率显著高于前者,差异有统计学意义（χ^2=28,P〈0.005）;84例患者尿HCMV DNA阳性检出率38.10%,血HCMV IgM阳性检出率48.81%。2种方法检测HCMV活动性感染的差异无统计学意义（χ^2=1.96,P〉0.1）。结论 FQ-PCR检测HCMV DNA是早期诊断小儿HCMV感染的有效的方法;免疫印迹法检测血清HCMV IgM水平对于判断成人HCMV活动性感染具有一定意义;做人群HCMV普查时,免疫印迹法有较好的应用价值。     

应用聚合酶链反应快速诊断巨细胞病毒感染

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测学龄前儿童尿标本中的巨细胞病毒（ＨＣＭＶ），并和常规细胞培养（ＣＣＣ）、早期抗原检测（ＤＥＡ）两法进行了比较。结果表明，１０５份尿标本中有４１份ＣＣＣ出现ＨＣＭＶ特征性细胞病变（ＣＰＥ），其中３８份标本ＰＣＲ检测为阳性，敏感性为９２．７％，其余６４份ＣＣＣ阴性，有６份ＰＣＲ检测阳性，特异性为９０．６％，与ＤＥＡ相比，ＰＣＲ检测的特异性和敏感性分别为９３．６％，９５．     

用聚合酶链反应检测宫颈癌组织中人巨细胞病毒DNA相关序列

为建立检测人巨细胞病毒感染的ＰＣＲ方法并探讨ＨＣＭＶ与宫颈癌的关系，从石蜡包埋和活检宫颈癌组织中提取ＤＮＡ，用聚合酶链反应体外扩增ＨＣＭＶＥｃｏＲＩＤ片段上一段长１５２ｂｐ的核酸序列，再用地高辛末端转移标记法标记和扩增片段互补的ＨＣＭＶ寡核苷酸探讨，用该探针证实扩增片段的特异性。     

人bcl-2基因反义cDNA探针的制备和地高辛标记

制备地高辛标记的人ｂｃｌ－２基因的反义链ｃＤＮＡ探针。方法：首先从Ｕ９３７细胞总ＲＮＡ经逆转录－聚合酶链反应得到ｂｃｌ－２特异的ｃＤＮＡ片段，然后以此为模板利用ＤＩＧ－１１－ｄＵＴＰ作另一轮非对称ＰＣＲ扩增。结果：合成了灵敏、特异的ＤＩＧ－标记的ｂｃｌ－２反义单链ｃＤＮＡ探针。结论：本文报道的方法是制备ＤＩＧ－标记的单链反义ｃＤＮＡ探针的一个有效手段。     

用聚合酶链反应技术检测流产和死胎组织的巨细胞病毒与弓…

作者通过人巨细胞病毒分离、套式聚合酶链反应限制酶切分析、弓形虫分离及一次性ＰＣＲ，对不明原因的流产，死胎组织进行ＨＣＭＶ与弓形虫检测。结果发现，２８份流产，死胎组织中，１例死胎肺组织ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，但病毒分离性；１例胎儿心、肺、脑、肝、肾、眼组织弓形虫ＤＮＡ阳性，其脑、肺眼、肝组织经动物接种后，在小白鼠腹水中找到弓形虫洋养体，但心、肾结果阴性。结果提示：临床上有些不明原因的流产，死胎可能是由于     

聚合酶链反应和原位杂交检测畸胎组织巨细胞病毒DNA

聚合酶链反应和原位杂交检测畸胎组织巨细胞病毒ＤＮＡ左丽郭辉玉为进一步探讨巨细胞病毒（ＣＭＶ）与胎儿畸形相关性及其致畸机制，我们采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和原位杂交检测了畸胎组织巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＤＮＡ。一、对象和方法１．标本来源：１０例畸胎由贵州省...     

应用聚合酶链反应快速诊断巨细胞病毒感染

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测学龄前儿童尿标本中的巨细胞病毒（ＨＣＭＶ），并和常规细胞培养（ＣＣＣ）、早期抗原检测（ＤＥＡ）两法进行了比较。结果表明，１０５份尿标本中有４１份ＣＣＣ出现ＨＣＭＶ特征性细胞病变（ＣＰＥ），其中３８份标本ＰＣＲ检测为阳性，敏感性为９２．７％；其余６４份ＣＣＣ阴性，有６份ＰＣＲ检测阳性，特异性为９０．６％。与ＤＥＡ相比，ＰＣＲ检测的特异性和敏感性分别为９３．６％，９５．２％；提示ＰＣＲ检测临床标本中ＨＣＭＶ，不仅敏感特异，而且与ＣＣＣ，ＤＥＡ两法相比快速简便。     

用聚合酶链反应检测宫颈癌组织中人巨细胞病毒DNA相关序列

为建立检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的ＰＣＲ方法并探讨ＨＣＭＶ与宫颈癌的关系，从石蜡包埋和活检宫颈癌组织中提取ＤＮＡ，用聚合酶链反应体外扩增ＨＣＭＶＥｃｏＲＩＤ片段上一段长１５２ｂｐ的核酸序列，再用地高辛末端转移酶标记法标记和扩增片段互补的ＨＣＭＶ寡核苷酸探针，用该探针证实扩增片段的特异性。检测宫颈癌标本４３例，阳性率为２５．６％（１１／４３），正常宫颈组织８例，阳性率为０。宫颈癌标本阳性率高于正常宫颈标本，提示ＨＣＭＶ与宫颈癌的发生有关。     

用聚合酶链反应法检测172例孕妇尿中巨细胞病毒－DNA

本文对１７２例孕妇的尿用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）进行巨细胞病毒－ＤＮＡ检测（ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓＨＣＭＶ－ＤＮＡ），结果显示非正常孕妇（以前有自然流产、死胎、畸胎、不育症等）１２１人尿中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者４３例，阳性率为３５．５％，而５１例正常孕妇中阳性者仅２例，阳性率为３．９％，表明活动性人巨细胞病毒感染是非正常孕妇的重要原因之一。２０例孕妇尿中ＮＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者用干扰素、转移因子等治疗后，１４例转阴。用ＰＣＲ法检测活动性人巨细胞病毒感染是一个比较准确、敏感、快速的方法，并是保证优生优育的重要手段之一。     

用双重PCR检测人巨细胞病毒DNA

选取HCMV IEV基因区为扩增的靶序列,合成两对引物,其中一对巢居于另一对之间。扩增片段分别为721 bP和167bp。单次PCR扩增灵敏度达0.5～1.0fg,双重扩增可提高灵敏度10～100倍。用HSV-1,HSV-2,CoxB组1～6型病毒培养物作模板,无非特异扩增。14例疑为CMV感染患儿尿标本经PCR测定,12例检出HCMV DNA,其中11例病毒分离阳性。PCR快速,可靠,比病毒分离简便易行,对临床HCMV感染的诊断有重要意义。     

用聚合酶链反应法检测172例孕妇尿中巨细胞病毒－DNA

本文对１７２例孕妇的尿用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）进行巨细胞病毒－ＤＮＡ检测（ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓＨＣＭＶ－ＤＮＡ），结果显示非正常孕妇（以前有自然流产、死胎、畸胎、不育症等）１２１人尿中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者４３例，阳性率为３５．５％，而５１例正常孕妇中阳性者仅２例，阳性率为３．９％，表明活动性人巨细胞病毒感染是非正常孕妇的重要原因之一。２０例孕妇尿中ＮＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者用干扰素、转移因子等治疗后，１４例转阴。用ＰＣＲ法检测活动性人巨细胞病毒感染是一个比较准确、敏感、快速的方法，并是保证优生优育的重要手段之一。     

用PCR技术标记双链DNA探针

利用ＰＣＲ技术制备生物素或地高辛标记的ＤＮＡ探针，经原位杂交试验及敏感性和特异性检测，均取得满意效果，ＰＣＲ标记法具有经济，快速，简易和标记量大等优点，实践中发现Ｂｉｏ／Ｄｉｇ－１１－ＵＴＰ的质量，ｄＴＴＰ和Ｄ－１１－ｄＵＴＰ的比例及起始ＤＮＡ模板浓度是标记成败的关键。     

聚合酶链反应在临床巨细胞病毒感染检测中的应用和研究

本文用聚合酶链反应(PCR)技术检测76份患儿尿标本中巨细胞病毒(CMV)DNA,其中32份尿标本做了病毒分离,另44例同时做血清CMV IgM抗体检测。结果PCR和病毒分离阳性符合率为100％,与CMV IgM抗体检出率无显著差异(P>0.05)。证明PCR方法具有特异性高、敏感性好、操作简便、检测周期短等优点,适用于临床进行CMV感染的快速诊断。