碱性成纤维细胞生长因子缓释微球对软骨细胞作用的实验研究

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）缓释微球对软骨细胞增殖和细胞外基质合成的影响。方法酶消化法从兔肩、膝关节获取软骨细胞,将bFGF微球加入软骨细胞培养液中,流式细胞仪观察细胞增殖情况。同时检测各组DNA总量及糖胺多糖总量。结果流式细胞仪检测显示培养2d后,bFGF组的G2/M＋S期百分数最高,4、8d后,bFGF微球组G2/M＋S期百分数最高。DNA总量对照组、bFGF组和bFGF微球组分别为（2.82±0.24）、（4.80±0.32）、（6.85±0.35）μg;糖胺多糖总量对照组、bFGF和bFGF微球组分别为（14.21±0.92）、（26.44±1.22）、（34.25±1.84）μg。结论bFGF促进了软骨细胞增殖,bFGF微球通过较长时间持续释放活性bFGF,明显促进了软骨细胞增殖与分化。     

扶正抑瘤方含药血清对PC-3细胞作用的实验研究

目的：通过体外细胞实验,探讨扶正抑瘤方有效治疗前列腺癌的作用机理。方法：以人前列腺癌PC-3细胞为模型,观察扶正抑瘤方高、中、低剂量（9.58、19.17、38.33 g/kg）及不同浓度含药血清对PC-3细胞形态、细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。结果：扶正抑瘤方含药血清处理后,PC-3细胞可发现不同程度的细胞皱缩,染色质凝集,或细胞核固缩碎裂;MTT实验表明含药血清能明显抑制PC-3细胞增殖,且剂量越高细胞增殖抑制率越高,20%高剂量含药血清组抑制率约50%;流式细胞仪检测发现,含药血清组处理后48 h,各组在非凋亡细胞二倍体峰（G1）之前均出现大小不等的凋亡细胞峰,凋亡率均显著高于空白血清组,而且G0/G1期细胞比例增加,S期及G2/M期细胞比例下降。结论：扶正抑瘤方含药血清能抑制PC-3细胞增殖,且呈剂量、浓度依赖性,其抗肿瘤活性可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

含关木通血清对人肾小管上皮细胞增殖周期的影响

目的 了解含关木通血清对人肾小管上皮细胞增殖周期的影响. 方法 以体外培养的人类肾小管近端上皮细胞系（HK－2）为研究对象,用低、中、高剂量关木通灌胃家兔后,制备不同浓度含药血清,分别作用于人肾小管上皮细胞,并与空白血清比较,采用流式细胞仪检测细胞增殖周期的变化. 结果 对照组与关木通低剂量组细胞增殖周期分布正常,含低剂量关木通血清组细胞的G₀/G₁期未见明显阻滞;含关木通中、高剂量血清组细胞的G0/G1期发生明显阻滞. 结论 中、高剂量关木通的肾毒性机制与细胞周期阻滞有一定的关系.     

蟾酥注射液诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的观察蟾酥注射液对人肝癌细胞凋亡的诱导作用。方法选择不同浓度蟾酥注射液分别与人肝癌BEL-7404细胞共同孵育24、48h,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期变化：琼脂糖凝胶电泳测定DNA Ladder；均与空白组做对照。结果流式细胞仪检测可见,各实验组细胞_1G、S期下降,G_2/M期升高,产生凋亡峰(sub-G_1期)；孵育48h,可见DNA Ladder出现。结论蟾酥注射液可以诱导人肝癌细胞BEL-7404凋亡。     

姜黄素对软骨细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：通过建立H2O2诱导软骨细胞损伤模型,观察姜黄素对软骨细胞的保护作用。方法体外培养SD大鼠关节软骨细胞,随机分为对照组、模型组（H2O2）、姜黄素低中高剂量剂量组（20、40、80μmol／L）。姜黄素与软骨细胞培养48 h后,加入H2O2,24 h后收集细胞,MTT和流式细胞仪测定细胞增殖能力,测定细胞超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）含量,Real－Time PCR和Western blot法检测细胞Nrf2 mRNA及其蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组软骨细胞存活率降低,具有分裂象的S期和G2／M期细胞明显减少;SOD、CAT含量降低,MDA含量增加,Nrf2 mRNA及其蛋白表达水平下调。经姜黄素预先处理,软骨细胞存活率升高,细胞增殖能力恢复,SOD、CAT含量升高,MDA含量降低,Nrf2 mRNA及其蛋白表达水平升高。随浓度升高变化更明显。结论姜黄素对软骨细胞氧化应激损伤有保护作用,可通过增强Nrf2表达实现。     

复元胶囊对硝普钠诱导的软骨细胞凋亡与细胞周期作用的实验研究

目的:研究复元胶囊含药血清对硝普钠(SNP)诱导的软骨细胞凋亡与细胞周期的作用。方法:雄性3周龄SD大鼠,用于分离培养软骨细胞;雄性成年SD大鼠,用于制备含药血清。将第2代的软骨细胞进行分组实验。透射电镜观察软骨细胞凋亡的超微结构,流式细胞仪检测细胞周期百分率及细胞凋亡率,硝酸还原酶法检测培养液中NO含量。结果:复元胶囊含药血清可使SNP诱导的软骨细胞处于G0/G1期的百分比减少,S期及G2/M期的百分比增加(P<0.05,P<0.01);可使细胞凋亡率显著降低(P<0.05或P<0.01),培养上清中NO含量显著降低(P<0.05)。结论:复元胶囊含药血清能显著降低SNP诱导的软骨细胞凋亡率,促进细胞增殖,并降低培养液中NO的含量,这可能是复元胶囊防治骨性关节炎的作用机制之一。     

白细胞介素10对人系膜细胞增殖的调节

目的 观察白细胞介素10(IL—10)对体外培养的人肾小球系膜细胞(HMC)增殖影响。方法 分别应用^3H—胸腺嘧啶(^3H—TdR)和四甲基偶氮唑蓝(MTT)掺入法及流式细胞仪测定HMC增殖和细胞周期的变化。结果 血清可诱导系膜细胞明显增殖；IL—10则能呈剂量依赖性地抑制血清诱导的系膜细胞增殖，25ng／ml IL—10对系膜细胞增殖的抑制率接近70％；流式细胞仪分析表明IL—10可显减少S期和G2／M期细胞数。结论 IL—10通过下调血清诱导的人系膜细胞G0／G1期进入S期和G2／M期，从而达到抑制细胞增殖的目的，提示IL—10在增殖性肾小球肾炎中可能发挥重要的调节作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对兔甲状软骨细胞的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对免甲状软骨细胞的影响，探索软骨细胞体外扩增方法，为软骨组织工程提供理论依据。方法 分离鬼甲状软骨细胞，分4组培养，每组用含不同成分的培养基一第1组：只用DMEM培养基；第2组：DMEM培养基 10％小牛血清；第3组：DMEM培养基加bFGF(10ng/m1)；第4组：DMEM培养基 10％小牛血清 bFGF(10ng/m1)。采用软骨细胞计数观察各组细胞增殖情况。结果 在培养基成分相同时，补充bFGF组比未补充组细胞数目明显增多，即第3组多于第1组，第4组多于第2组。结论 bFGF能够促进单层培养中兔甲状软骨细胞的增殖，在软骨组织工程细胞增殖阶段，可能成为软骨细胞体外大量扩增的主要生长因子之一。     

骨舒汤对骨性关节炎中血清NO和血液流变学的影响

目的:研究骨舒汤对骨性关节炎中血清一氧化氮(NO)和血液流变学的影响。方法:随机选择健康大耳白兔72只均分成6组,即空白(10mL生理盐水)、模型(10mL生理盐水)、壮骨关节丸(10mL,浓度:0.7g.mL-1)和骨舒汤高、中、低剂量(20、10、5mL,浓度:0.7g.mL-1)组。采用改良的Hulth法复制模型。ig给药,每天1次,连续8周。观察兔血清、软骨NO含量和血液流变学指标,电镜下观察兔膝关节切片。结果:模型组兔血清、软骨NO含量及血液流变学指标显著高于空白组(P<0.05)。骨舒汤高剂量组兔血清、软骨NO含量及血液流变学指标均较模型组显著下降(P<0.05)。切片可见,模型组兔骨切片可见坏死软骨细胞,排列紊乱,潮线不完整;骨舒汤高剂量组兔关节软骨面光滑、软骨细胞柱状排列,潮线完整。结论:高剂量骨舒汤可降低模型兔膝骨性关节炎血清和软骨中NO含量,同时降低血液流变学指标,调节血液功能,从而起到保护关节软骨的作用。     

组织工程化软骨形成的细胞浓度选择

目的探讨兔组织工程化软骨形成的合适细胞浓度。方法分离培养兔关节软骨细胞,体外扩增后以1,2,4,6,8,10×107/ml 6种不同浓度种植到PLGA支架上。在体外培养软骨细胞支架复合物,4周终止培养,进行HE、Masson组织学染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色。结果体外培养的软骨组织,与正常软骨组织有相似的组织学特性,形成软骨组织适宜细胞浓度为4×107/ml。结论体外形成兔软骨组织的适宜细胞接种浓度为4×107/ml。     

肝素和碱性成纤维细胞生长因子对软骨细胞体外培养的作用研究

目的探讨肝素与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对兔软骨细胞的增殖影响及其协同作用。方法体外培养3周龄的新西兰大白兔的原代关节软骨细胞。将第二代软骨细胞加入不同浓度的肝素、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及肝素 bFGF联合应用,于48及72小时分别进行MTT检测软骨细胞的成活数。结果bFGF浓度在10ng／ml时即可显著促进软骨细胞增殖,当浓度增至50ng／ml,其促进作用达到最大值;单纯使用肝素并不促进软骨细胞增殖,当联用bFGF,bFGF浓度为50ng／ml、肝素浓度为1250ng／ml时协同作用最明显。结论bFGF可明显促进软骨细胞增殖,单用肝素对细胞增殖无明显影响,与bFGF联用时呈现协同效应,具有增强bFGF促软骨细胞增殖作用。     

益节健片对体外软骨细胞影响实验研究

目的探讨益节健片对关节炎兔软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法从兔关节中获取软骨细胞;通过检测不同浓度中培养软骨细胞的四氮唑蓝（MTT）值,使用不同的样品浓度;分别对凋亡软骨细胞进行干预培养;采用形态学观察等方法评价样品对软骨细胞凋亡状态的影响。结果益节健片在低浓度下（0．40mg／ml）对兔软骨细胞无直接促进增殖作用,在〉0．40mg／ml时,会对免软骨细胞有一定抑制作用（P〈0．05或P〈0．01）;益节健片不能缓解硝普钠对兔软骨细胞的损伤作用（P〈0．01）。结论益节健片对关节实验性骨关节炎软骨退变无直接保护作用。     

胰岛素样生长因子Ⅱ对软骨细胞基质金属蛋白酶1基因表达调节的机制

目的：研究胰岛素样生长因子Ⅱ（ IGFⅡ）对软骨细胞基质金属蛋白酶1（ MMP-1）基因表达调节的机制。方法采用体外新生大鼠股骨髁软骨细胞培养,同时加入不同剂量白介素-1β（ IL-1β）,使用酶联免疫吸附技术检测体外培养的关节软骨细胞上清液24h、48h、72h中基因蛋白MMP-1mRNA的表达情况,并加入IGFⅡ干预,观察IGFⅡ的效果。结果 IL-1β可增加关节软骨细胞MMP-1基因蛋白的分泌,加入IGFⅡ干预后可减少关节软骨细胞MMP-1基因蛋白的分泌。结论 IGFⅡ具有显著促进关节软骨细胞增殖的效果。     

马钱子碱对体外培养的人软骨细胞增殖的影响

目的观察中药马钱子的提取物马钱子碱(strychnine)对体外培养的人软骨细胞增殖的影响。方法提取、分离人软骨细胞,用甲苯胺蓝染色确定软骨细胞的存在,将第2代软骨细胞以5×104个细胞的密度分别接种于高、中、低剂量组、对照组及硝普钠组,48h后用MTT比色法检测软骨细胞增殖。结果马钱子碱高、低剂量组软骨细胞的增殖率均低于对照组(P<0.05),中剂量组的增殖率高于对照组(P<0.05),并且中、低剂量组能够拮抗一氧化氮对人软骨细胞增殖的抑制作用,其中,中剂量组的作用最强。结论马钱子碱在一定浓度范围内能够有效促进人软骨细胞的增殖。     

葛根总黄酮对高糖致血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制

目的观察葛根总黄酮对高糖致脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和细胞周期的影响,探讨葛根总黄酮保护高糖致HUVEC损伤的作用机制。方法采用MTT法观察不同浓度葡萄糖对HUVEC增殖的影响,并观察不同浓度葛根总黄酮对高糖环境下HUVEC增殖及用流式细胞仪检测细胞周期的变化,并测定细胞上清液中SOD活性、NO和ICAM-1的含量。结果30 mmol.L-1葡萄糖可明显抑制HUVEC的增殖反应;降低S期细胞的百分率,增加G0/G1期细胞百分率;并降低HUVEC上清液中SOD活性和NO的含量、升高ICAM-1的含量。葛根总黄酮干预后,随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞百分率递减,而S期细胞百分率递增;并可提高细胞上清液中NO水平和SOD活性,降低ICAM-1水平,与30 mmol.L-1葡萄糖比较(P<0.05)。结论葛根总黄酮对高糖致HUVEC损伤具有一定的保护作用,该作用的产生可能与其抑制高浓度葡萄糖作用下HU-VEC的增殖,促使细胞由G0/G1进入S期,使DNA合成增加,使细胞上清液中SOD活性和NO含量增加,而ICAM-1的含量降低等有关。葛根总黄酮对防治糖尿病血管病变的发生发展具有积极的意义。     

Cigarette smoke toxicants alter growth and survival of cultured mammalian cells.

Our purpose was to determine the effects of six cigarette toxicants (pyridine, nicotine, 2-ethylpyridine, 3-ethylpyridine, p-cresol, and pyrazine) on three types of cultured mammalian cells (human umbilical vein endothelial cells [HUVECs], human microvascular endothelial cells [HMVECs], and NIH 3T3 cells) using a cell proliferation/survival assay. Synchronized cells were cultured in proliferation or survival medium containing various doses (10(-18)M-10(-2)M) of the tested chemicals. After 48 h, cells were counted using a hemacytometer. The no observable adverse effect level (NOAEL), lowest observable adverse effect level (LOAEL), and the efficacy were determined for each compound in the cell proliferation and survival assays. Pyridine and p-cresol did not show significant effects with any cell types, except at high doses. Derivitization of the pyridine ring altered its potency, especially when an ethyl group or nitrogen was added. In survival medium, nicotine stimulated proliferation of all three cell types at doses found in smoker's serum (10(-8)M-10(-7)M). For HUVEC and HMVEC, 2-ethylpyridine, 3-ethylpyridine, and pyrazine inhibited proliferation in proliferation medium and induced cell death in survival medium at attomolar and femtomolar doses. All chemicals, except pyridine and pyrazine, stimulated NIH 3T3 cell proliferation at low doses and induced cell death at high doses. LOAELs and efficacies revealed that endothelial cells from a developing organ (umbilical cord) were more sensitive to these chemicals than endothelial cells from an adult organ (lung). 3-Ethylpyridine and pyrazine, which induced cell death at low doses, are added to consumer products and should be subjected to further toxicological testing.