p38MAPK和RGS16对大鼠胶质瘤C6细胞凋亡和细胞周期的影响

目的 探讨p38MAPK和RGS16对大鼠胶质瘤C6细胞的生物学特性的影响。方法 利用脂质体介导法将p38MAPK和RGS16基因分别或共转染导入C6细胞中；用p38MAPK抑制剂SB-202190处理处于对数生长期的转染和未转染p38MAPK的C6细胞，24-36h后在倒置显微镜下观察细胞形态变化和贴壁情况；免疫细胞化学法检测转染前后p38MAPK和RGS16蛋白的表达情况；流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞是否有凋亡发生。结果 转染pCMV5-p38和/或pCMV5-RGS16质粒36h后30%细胞贴壁性降低。突起收缩，细胞变圆；p38MAPK和RGS16蛋白均表达阳性；转染pC-MV5-p38组出现33.8%的凋亡峰，细胞周期结果显示G1期细胞百分数增加17%，而S期细胞百分数减少14%；转染pC-MV5-RGS16组无凋亡发生，细胞周期结果显示G1期细胞百分数减少10%，而S期细胞百分数增加14%；共转染pCMV5-P38和pCMV5-RGS16组未出现的凋亡峰，细胞周期细胞显示G1期和S期细胞百分数变化与未处理组之间没有明显差别；但共转染p38MAPK和RGS16组出现的凋亡峰，细胞周期结果显示G1期和S期细胞百分数变化与转染pCMV5-p38组之间很接近；SB-202190处理的未转染组细胞周期结果显示G1期细胞百分数减少18%，而S期细胞百分数增加18%；SB-202190能对抗pCMV5-p38对C6细胞周期的影响。结论 p38MAPK可以抑制大鼠胶质瘤C6细胞周期运行和诱导其凋亡；RGS16和SB202190有拮抗p38MAPK作用，并且可以促进C6细胞增殖。     

雷公藤诱导皮肤T细胞淋巴瘤Hut102的凋亡及机制

目的探讨雷公藤内酯醇（TP）诱导皮肤T细胞淋巴瘤Hut102细胞株的凋亡及机制。方法采用MTT法检测Hut102细胞的增殖抑制率,Annexin v-FITC/PI双染流式细胞术检测Hut102细胞的凋亡率,Western印迹法检测Hut102细胞中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、caspase-3、热休克蛋白27（Hsp27）的表达。结果雷公藤内酯醇可诱导Hut102细胞凋亡（P〈0.01）,磷酸化p38MAPK、caspase-3被激活,同时抑制Hsp27的表达。用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预后,雷公藤内酯醇诱导Hut102细胞凋亡率下降,磷酸化p38的表达降低,caspase-3激活被抑制,Hsp27的表达增加。结论雷公藤内酯醇可诱导Hut102细胞凋亡,该作用可被p38MAPK特异性抑制剂SB203580显著抑制,提示雷公藤内酯醇可能通过激活p38MAPK信号通路使部分Hut102细胞产生凋亡。     

莱菔硫烷诱导p38磷酸化从而抑制前列腺癌细胞表达COX-2

目的探讨莱菔硫烷（SFN）是否经p38信号通路抑制前列腺癌细胞PC-3环氧化酶（COX）-2表达。方法体外培养PC-3细胞,与5～20μ MSFN孵育24h,RT-PCR和Western blot检测分别检测COX-2mRNA和蛋白的表达。提取细胞总蛋白,Western blot检测p38的磷酸化情况。最后用SB202190以及p38激活剂茴香霉素与SFN处理过的PC-3细胞共同孵育,观察COX-2蛋白的表达情况。结果 5～20μM SNF处理后,COX-2 mRNA随SNF浓度的递增而表达量逐渐降低。Western blot进一步证实COX-2蛋白水平也随之降低。不同浓度的SFN处理24h后,能显著诱导PC-3细胞p38磷酸化,SB202190处理后COX-2表达明显增高,茴香霉素处理能再次降低细胞内COX-2蛋白的水平。结论 SFN能在基因和蛋白水平抑制前列腺癌细胞系PC-3表达COX-2,其机制可能与降低COX-2表达可能与p38磷酸化有关。     

p38丝裂原活化蛋白激酶与c-Jun-N末端激酶信号通路反向调控血管紧张素Ⅱ诱导的人足细胞凋亡

目的:研究不同亚型的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),即p38MAPK、细胞外信号调节激酶(ERK)和cJun-N末端激酶(JNK)在血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)诱导的培养人体足细胞凋亡中的作用.方法:体外培养条件下,分别用ANGⅡ(10-8mol/L)或ANGⅡ与不同的MAPK抑制剂(SB02190、Pl98059、SP600125)处理人体足细胞;应用H-33342和碘化丙啶双染色形态学方法和DNA片段测定法检测细胞凋亡;应用Western印迹检测ANCⅡ刺激的MAPK活性改变.结果:ANGⅡ诱导足细胞凋亡呈时间和剂量依赖性;ANGⅡ刺激p38MAPK,而抑制JNK活性;p38MAPK抑制剂(SB202190)抑制ANGⅡ诱导的足细胞凋亡和p38MAPK活性;SP600125抑制JNK活性而促进了ANGⅡ诱导的足细胞凋亡.结论:ANGⅡ通过激活p38MAPK和抑制JNK活性诱导人体足细胞凋亡.     

晚期氧化蛋白产物调节人肾小管上皮细胞自噬的研究

目的 探讨晚期氧化蛋白产物(AOPPs)对人肾小管上皮细胞(HK-2)自噬的影响.方法 AOPPs刺激HK-2细胞,采用RT-qPCR和Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1和p62的表达;Western blot检测p38 MAPK通路的激活;加入p38 MAPK抑制剂(SB203580)与AOPPs共处理,观察自噬的改变,加入自噬诱导剂雷帕霉素与AOPPs共处理,并用RT-qPCR和Western blot检测细胞周期抑制蛋白p27的表达,用BCA法检测细胞总蛋白,观察细胞肥大的改变.结果 AOPPs下调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1,上调p62的表达,并激活p38 MAPK通路;与AOPPs单独处理组相比,SB203580与AOPPs共处理组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin升高而p62降低;雷帕霉素与AOPPs共处理组p27的表达和细胞总蛋白下调.结论 AOPPs通过激活p38 MAPK通路抑制HK-2细胞自噬,自噬抑制参与HK-2细胞肥大.     

p38 MAPK信号通路介导晚期氧化蛋白产物诱导的肾小管上皮细胞间充质转分化

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号途径是否介导晚期氧化蛋白产物（AOPP）诱导肾小管上皮细胞间充 质转分化（EMT）。方法用次氯酸氧化牛血清白蛋白（BSA）制备的AOPP-BSA刺激体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2 细 胞）,用Western blotting检测细胞p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK的表达;用p38 MAPK磷酸化抑制剂SB203580预处理细胞, 并予AOPP-BSA刺激,用Western blotting和实时荧光定量PCR分别检测EMT标志性蛋白E-cadherin、vimentin和内质网应激标 志性蛋白GRP78和mRNA表达;用内质网应激（ERS）阻断剂salubrinal预处理细胞,并予AOPP-BSA刺激,用Western blotting 检测细胞p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK的表达。结果AOPP-BSA能使细胞p38 MAPK磷酸化;用SB203580抑制p38 MAPK 磷酸化可显著抑制AOPP-BSA下调的E-cadherin 和上调的vimentin 和GRP78 的表达;用salubrinal 抑制ERS 可有效地抑制 AOPP-BSA诱导的p38 MAPK磷酸化。结论p38 MAPK信号途径可能参与了AOPPs诱导肾小管上皮细胞发生EMT的过程,且 p38 MAPK受ERS调控。     

高迁移率族蛋白 B1活化 p38 MAPK 对人支气管上皮细胞胸腺基质淋巴生成素表达的影响

目的：探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对人支气管上皮细胞（HBE）胸腺基质淋巴生成素（TSLP）表达的影响及机制。方法应用实时荧光定量PCR和ELISA分别检测HMGB1刺激HBE后TSLP基因表达及蛋白释放水平;用Western blot和ELISA分别检测p38 MAPK抑制剂SB202190干预HBE后磷酸化ATF－2蛋白（ p－ATF－2）表达及TSLP释放水平。结果（1）HMGB1以浓度依赖形式增加HBE TSLP的表达;（2）相对于HMGB12000 ng／mL的干预,SB202190抑制剂可明显减少活化的HBE p－ATF－2蛋白的表达（ P＜0.01）及其TSLP的释放（ P＜0.01）。结论 HMGB1可活化p38 MAPK通路增加HBE TSLP的表达,可能以此参与哮喘的发病过程。     

阻断p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞活性及c-myc蛋白表达的影响

目的：研究 p38MAPK对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞（HSC）活性及 c-myc蛋白表达的影响,探讨影响酒精性肝纤维化的相关机制。方法用不同浓度的p38特异性阻断剂SB203580干预乙醛刺激的大鼠HSC,显微镜下观察细胞形态变化,MTT法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,SABC法检测 c-myc蛋白表达。结果（1）乙醛刺激后的 HSC体积增大,增殖迅速,但随着加入 SB203580的药物浓度增大,细胞增殖变缓,体积变小,变形的细胞增多。（2）p38阻断剂 SB203580可抑制乙醛刺激的 HSC增殖,且高药物浓度组抑制效果更明显。（3）随着阻断剂浓度增高,G0及 G1期细胞增加,S期细胞逐渐减少,同时 c-myc蛋白表达阳性率减少。结论阻断 p38MAPK通路活性能抑制乙醛刺激的大鼠 HSC增殖,可能与下调 c-myc蛋白表达,阻止细胞由 G0/G1期进入 S期的DNA合成有关。     

来氟米特活性代谢产物A771726对高糖诱导足细胞凋亡的抑制作用

目的 观察来氟米特活性代谢产物A771726对高糖诱导足细胞凋亡的影响,探讨来氟米特对足细胞损伤的保护作用及可能的机制.方法 条件永生的人肾小球足细胞系分为正常糖组、高糖组、甘露醇高渗对照组、高糖+SB202190[p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路特异性抑制剂]组及高糖+A771726(来氟米特活性代谢产物)组.Western印迹法检测足细胞p38MAPK及磷酸化p38MAPK(p-p38)活性;流式细胞仪检测足细胞凋亡率.结果 (1)高糖刺激足细胞激活p38MAPK信号通路,p-p38蛋白表达明显增加,正常糖组和高渗对照组仅有少量p38活化;SB202190组及A771726组p-p38蛋白表达量较高糖组明显下降.(2)流式细胞仪检测到高糖刺激足细胞24 h后可见细胞凋亡增加,48 h凋亡最为明显,为(18.6±0.7)%,显著高于正常糖及高渗对照组;SB202190组及A771726组足细胞凋亡率较高糖组分别下降26%和17%,差异有统计学意义.结论 来氟米特活性代谢产物A771726能够减少高糖所致的足细胞凋亡,机制可能与其抑制p38MAPK活化相关.

Abstract：

Objective To explore the therapeutic effects of leflunomide metabolite A771726 on high glucose-induced podocyte injury and understand its mechanism.Methods The conditionally immortal human glomeroular podocytes were divided into nomal glucose group (NG) ,high glucose group (HG),mannitol group (MA),high glucose with SB202190 (a p38MAPK inhibitor) group and high glucose with active leflunomide metabolite A771726 group.The levels of p38MAPK and p-p38 protein were determined by Western blot.And the rate of podocyte apoptosis was evaluated by flow cytometry.Results (1) Podocytes with high glucose could activate the p38MAPK signaling pathway.The p-p38 protein expression was significantly elevated.Little activation of the pathways was observed in Groups NG and MA.As compared to HG,the p-p38 protein expression was significantly lowered in SB202190 and A771726 groups.(2) Apoptosis increased in podocytes with high glucose after 24 h.The apoptotic rate of group HG was the most dramatic at 48 h(18.6 ±0.7)%.It was significantly higher than those of Groups NG and MA.The group of high glucose with SB202190 and high glucose with active leflunomide metabolite A771726 could reduce the podocyte apoptosis by 26% and 17% respectively versus the HG group.And the difference was statistically significant.Conclusion Leflunomide can inhibit high glucose-induced podocyte apoptosis.And this effect may be involved in its inhibition of activation of p38MAPK.     

丝裂原活化蛋白激酶在力达霉素抑制鼠骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡中的作用

目的: 研究力达霉素(LDM)对鼠骨髓瘤细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs) 信号传导通路的影响及MAPKs在LDM抑制鼠骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡中的作用,为LDM治疗人多发性骨髓瘤的研究提供依据。方法: 选取处于对数生长期鼠骨髓瘤细胞株SP2/0,随机分为空白对照组、4种不同浓度LDM组,采用Western blotting 方法检测各组细胞48 h后MAPK家族的三个主要成员c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)和p38 MAPK的表达水平。选取处于对数生长期SP2/0,随机分为对照组、LDM组、SP600125组(JNK抑制剂)、SB203580组(p38抑制剂)、U0126组(ERK抑制剂)、LDM+SP600125组、LDM+SB203580组和LDM+U0126组,采用MTS法和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和凋亡情况。结果: 细胞培养48 h后,不同浓度LDM组JNK、ERK和p38 MAPK的表达水平高于空白对照组（P<0.05）;各抑制剂组细胞增殖率和细胞凋亡率与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),即对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用均不明显;但LDM+SP600125组、LDM +SB203580组LDM对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用均降低（P<0.05）,而LDM+U0126组LDM对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用则增强（P<0.05）。结论: LDM能够通过激活JNK、p38 MAPK抑制鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞增殖,诱导其凋亡。     

p38在榄香烯致鼠胶质瘤C6细胞周期阻滞中的作用

目的探讨莪术提取物——榄香烯对神经胶质瘤细胞的细胞周期的影响及相关机制。方法采用流式细胞分析、免疫印迹等方法分别检测榄香烯对大鼠胶质瘤细胞的细胞周期的影响和p38蛋白表达的变化,并观察p38抑制剂和其显性失活突变体对榄香烯作用的影响。结果经榄香烯40、60及80μg/ml处理后,细胞周期结果显示G0／G1期细胞百分数依次增加11％、16．95％、19．57％,且榄香烯可明显上调磷酸化p38蛋白表达,呈时间、剂量依赖性。SB203580及转染DN—p38能抑制p38的激活,阻断榄香烯的作用。结论榄香烯能诱导胶质瘤细胞的G0／G1期的阻滞,上调磷酸化p38蛋白质表达可能是榄香烯诱导C6细胞周期阻滞的机制。     

p38MAPK在沙土鼠脑缺血再灌注海马神经元损伤中的作用

目的　探讨p38MAPK在沙土鼠脑缺血再灌注损伤海马神经元中的作用。方法　采用沙土鼠双侧颈动脉阻断前脑缺血模型 ,随机分成假手术组 (sham组 )、缺血再灌注组 (IR组 )、对照组 (control组 )、SB2 0 2 190组及P7935 0组 ,后 3组分别侧脑室注射 1%DMSO、p38MAPK特异性抑制剂SB2 0 2 190和激动剂P7935 0。每组根据再灌注时间不同再分为 1天、3天和 5天 3个亚组 ,每亚组 6只动物。在预定时间点行开阔法行为学检查 ,显微镜下计数海马CA1、CA3区存活神经元数目 ,TUNEL法检测CA1区凋亡细胞。结果　SB2 0 2 190可以显著减少沙土鼠再灌注 3天、5天的探索活动 ,增加存活海马神经元数目 ,减少CA1区神经元的凋亡 (P <0 .0 5 ,vsIR组 ) ;而P7935 0可以显著增加沙土鼠再灌注 1天、3天、5天的探索活动 ,减少海马CA1、CA3区存活神经元数量 ,增加海马CA1区神经元的凋亡 (P <0 .0 5 ,vsIR组 )。结论　抑制p38MAPK的激活可以减轻脑缺血再灌注引起的海马神经元损伤。     

血管紧张素Ⅱ通过p38丝裂原蛋白激酶信号通路诱导巨噬细胞骨调素基因的上调表达

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激巨噬细胞骨调素(OPN)基因表达的模式变化,及p38丝裂原蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在AngⅡ上调表达骨调素中的作用。方法 用反转录聚合酶反应(RT-PCR)测定AngⅡ体外刺激RAW264.7细胞骨调素基因表达及p38MAPK特异抑制剂SB202190的影响;用Western印迹测定Ang Ⅱ(1 μmol/L)诱导RAW264.7细胞p38MAPK及其转录因子-激活转录因子2(ATF2)表达的时间模式及SB202190对AngⅡ(1 μmol/L)诱导RAW264.7细胞p38MAPK磷酸化表达的影响。结果 (1)AngⅡ(1 μmol/L)诱导RAW264.7细胞骨调素基因表达呈时间依赖性,3 h骨调素表达略有升高,6、12、24 h骨调素分别升高0.9、2.3及2.4倍(P<0.01);而24 h阴性对照无明显变化,说明骨调素的表达呈诱导分泌性。(2)AngⅡ诱导RAW264.7细胞骨调素基因表达呈剂量依赖性,AngⅡ(1 μmol/L)孵育12 h即可诱导骨调素显著表达,升高2.6倍(P<0.01)。(3)SB202190(5 μmoL/L)在AngⅡ(1 μmol/L)刺激前30 min加入培养基抑制作用最明显,共同孵育12 h,抑制率达到61.7％(P<0.01);而同时和刺激后120 min加入SB202190(5 μmol/L),抑制作用不明显,抑制率分别为20.9％和20.1％。(4)不同浓度SB202190 1、5、10 μmol/L在AngⅡ(1μmol/L)刺激前30 min加入培养基,共同孵育12 h,其抑     

苦参碱对K562细胞增殖及凋亡相关分子表达的影响

目的 研究苦参碱对人白血病细胞K562增殖、凋亡的影响及其机制。方法 苦参碱（0.2mg/ml）作用于K562细胞,每日计数白细胞、计算抑制率;流式细胞分析仪检测苦参碱对K562细胞周期的改变及凋亡的影响;电子显微镜观察凋亡细胞形态;Western blot检测BCL－6及增列细胞核抗原（PCNA）表达情况。结果 苦参碱对K562细胞有明显的抑制作用,用药72h的细胞增殖抑制率达69％;用药5d后,G1期细胞明显增多,高达58.5%,68％的细胞发生凋亡。电子显微镜可观察到苦参碱诱导的早、中、晚期K562凋亡细胞;BCL－6表达增强,PCNA表达下降。结论 苦参碱能显著抑制K562细胞增殖、促进其凋亡,其机制可能与细胞增殖周期受阻及PCNA表达下降、BCL－6表达增加有关。     

右美托咪定对抗化学性低氧引起神经细胞的损伤及其机制

目的探讨α2肾上腺素能受体激动剂右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)是否通过抑制p38MAPK通路保护PC12细胞对抗化学性低氧引起的损伤。方法应用化学性低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞以建立化学性低氧损伤神经细胞模型。采用Western blot法测定p38MAPK蛋白的表达水平,CCK-8比色法检测细胞存活率,Hoechst 33258核染色法观察细胞凋亡的形态学及数量改变,罗丹明123染色荧光显微镜照相测定线粒体膜电位(MMP)。结果在60～180 min的时间范围内,600μmol/L CoCl2处理PC12细胞后明显地促进磷酸化p38MAPK表达;在120 min,p38MAPK表达量达到高峰;400μmol/L Dex不仅能保护PC12细胞对抗CoCl2引起的细胞毒性、致凋亡作用及MMP损伤作用,还能抑制CoCl2对p38MAPK表达的上调作用;p38MAPK抑制剂SB203580能模拟Dex的抗化学性低氧损伤的神经保护作用,使细胞存活率升高,凋亡细胞数量减少及MMP升高。结论 Dex能保护神经细胞对抗化学性缺氧引起的损伤,抑制p38MAPK通路可能是其作用机制之一。     

survivin反义寡核苷酸诱导人肝癌细胞凋亡的相关信号转导途径

目的 利用人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,探讨survivin基因诱导肝癌细胞凋亡的相关信号转导途径。方法 采用脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染人肝癌细胞株SMMC-7721细胞。采用Western印迹及原位杂交检测细胞内survivin蛋白及mRNA的表达。采用流式细胞仪及TUNEL染色检测细胞凋亡的变化。采用western印迹,免疫沉淀,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及激酶活性检测方法测定细胞内丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)及半胱氨蛋白水解酶3表达及活性的变化,观察p38MAPK与半胱氨蛋白水解酶3活性变化之间的关系。结果 脂质体介导转染survivin反义寡核苷酸后,SMMC-7721肝癌细胞内survivin蛋白及mRNA表达可分别被下调84.6%及69.7%。凋亡细胞比率由转染前的0.70%增加至31.51%。转染后细胞内p38MAPK及半胱氨蛋白水解酶3表达无明显变化。但其活性显著升高,其中p38MAPK活性升高发生于半胱氨蛋白水解酶3活性升高之前。结论 转染survivin反义寡核苷酸可以有效诱导肝癌细胞发生凋亡,其诱导肝癌细胞凋亡的信号通过顺序激活p38MAPK-半胱氨蛋白水解酶3信号途径传导。