白花丹素对黑素瘤A375细胞体外增殖及凋亡的影响

目的: 评价白花丹素对黑素瘤细胞体外增殖及凋亡的影响.方法: 体外培养黑素瘤细胞A375细胞株,应用不同浓度的白花丹素进行处理,培养24 h后,MTT法测定对细胞增殖的影响;用流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot检测bcl-2的表达.结果: 浓度为1～13 μmol/L的白花丹素能显著抑制A375细胞株的增殖,且随浓度增加抑制作用递增;白花丹素作用24 h的半数抑制浓度约为10 μmol/L;当浓度为2.5 μmol/L、5.0 μmol/L和10.0 μmol/L作用24 h,细胞的凋亡率分别为8.52%±0.96%、14.83%±1.34%和19.56%±1.85%,与空白对照组(4.58%±0.46%)比较差异有统计学意义(P<0.05);细胞内bcl-2蛋白表达量随药物浓度升高而递减,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论: 白花丹素体外能抑制黑素瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡及下调黑素瘤细胞bcl-2蛋白的表达.     

白藜芦醇对A375人黑素瘤细胞株血管紧张素Ⅱ及其受体表达的影响

目的 探讨白藜芦醇对人恶性黑素瘤细胞血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)2L其特异性受体-血管紧张素Ⅱ受体1(AT1R)表达的影响.方法 放免法检测白藜芦醇对人恶黑细胞株A375细胞培养上清液中AngⅡ表达水平的影响,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及Western印迹法检测白藜芦醇对A375细胞AT1R表达的影响.结果 100μmol/L白藜芦醇作用24h后,人恶性黑素瘤细胞株A375细胞培养上清液中AngⅡ表达水平较对照组差异无统计学意义(P>0.05);100μmol/L白藜芦醇作用24h后,AT1R在A375细胞mRNA及蛋白水平的表达较对照组明显降低,差异有显著性(P<0.05).结论 白藜芦醇参与对恶性黑素瘤局部肾素-血管紧张素系统的调控.其调控机制不是通过其血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)效应,而是通过抑制AT1R的表达来实现的.     

蛇葡萄素通过核转录因子-κB通路调控黑色素瘤A375细胞周期和凋亡

目的 研究蛇葡萄素对A375黑色素瘤细胞增殖,细胞周期和凋亡作用,并探讨其潜在机制。方法 利用八肽胆囊收缩素(CCK-8)实验测定细胞活性;用Hoechst33258染色、流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;相关蛋白的表达利用蛋白质印迹法(WB)检测。结果 经不同浓度蛇葡萄素(0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)处理48 h后,人黑色素瘤A375细胞增殖明显减弱;蛇葡萄素能显著抑制黑色素瘤A375细胞核转录因子-κB(NF-κB)通路的活化;蛇葡萄素以浓度依赖的方式通过下调B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达,下调Bax蛋白和Cleavedcaspase-3蛋白的表达,促进人黑素瘤A375细胞凋亡;Hoechst33258染色法显示蛇葡萄素诱导的A375细胞凋亡的形态学变化;蛇葡萄素能下调细胞周期调控蛋白Cyclin D1和CDK4的表达,将A375细胞周期阻滞于G₀/G₁期;但NF-κB通路活化剂佛波醇脂(PMA)处理A375细胞后抑制了蛇葡萄素对A375细胞NF-κB信号通路,细胞增殖与凋亡,细胞周期...     

维A酸CD437和阿维A抑制人黑素瘤A375细胞的比较

目的探讨合成的维A酸CD437与阿维A对体外培养的人黑素瘤A375细胞的增殖抑制、凋亡诱导、周期阻滞作用及对Bax/bcl-2蛋白表达的影响。方法MTT法测定CD437及阿维A对人黑素瘤A375细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测两种药物诱导细胞凋亡及周期阻滞;细胞爬片SABC免疫细胞化学分析两种药物对细胞Bax/bcl-2蛋白表达的影响。结果干预24h后,10-5mol/L维A酸CD437和阿维A对人黑素瘤A375细胞的增殖抑制率(PIR)和凋亡率分别为58.6%和43.25%,28.03%和17.13%(P<0.05),CD437促A375细胞G0/G1期阻滞,而阿维A无此作用;两药均上调A375细胞Bax蛋白表达和下调bcl-2蛋白表达,但CD437组与阿维A组差异无显著性。结论与阿维A相比较,CD437更有效抑制人黑素瘤A375细胞的增殖及更明显的凋亡诱导和G0/G1期阻滞作用;在辅助治疗黑素瘤方面,CD437比阿维A可能更具潜力。     

丹皮酚对人黑素瘤A375和M14细胞系增殖与凋亡的影响

目的:确定丹皮酚对体外培养人黑素瘤A375和M14细胞增殖与凋亡的影响。方法:利用CCK8检测黑素瘤A375和M14细胞的增殖抑制率;以流式细胞仪检测细胞周期变化、Annexin-V/PI法观察细胞凋亡的变化;用Hoechst33258染色法观察细胞凋亡的形态变化。结果:细胞周期显示丹皮酚处理过的A375和M14细胞G2/M期比例均高于对照组。以0 mmol/L、1.25 mmol/L、2.5 mmol/L、5 mmol/L丹皮酚作用24 h后,A375细胞的早期凋亡率分别为3.11%±0.53%,13.74%±1.73%,25.95%±0.57%和46.44%±0.81%;M14细胞的早期凋亡率分别为1.00%±0.08%,2.00%±0.01%,2.99%±0.29%和14.73%±0.94%,呈剂量依赖性诱导A375和M14细胞凋亡。经5 mmol/L丹皮酚作用后Hoechst33258染色示凋亡细胞形态改变。结论:丹皮酚对黑素瘤A375和M14细胞均具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。     

槲皮素对人黑素瘤A375细胞增生和凋亡的影响

目的探讨槲皮素对体外培养人黑素瘤A375细胞增生和凋亡的影响。方法 CCK8法检测0、20、40、80、160μmol/L浓度槲皮素作用于A375细胞24、48和72 h后细胞增生水平。用0、20、40、80、160μmol/L浓度槲皮素作用24 h后,以Annexin-V/PI法观察A375细胞凋亡,分别测定Caspase 3、Caspase 8和Caspase 9的活性,并以蛋白印迹法(Western blot)检测p53,Bax及Bcl-2的基因蛋白水平。结果与空白对照组比较,20、40、80、160μmol/L槲皮素作用24、48和72 h后均对A375细胞的增生有抑制作用,且有时间、浓度依赖性。0、20、40、80、160μmol/L槲皮素在作用24 h时,A375细胞早期凋亡率由(3.02±0.49)%分别上升至(11.20±1.68)%、(12.44±1.68)%、(24.55±0.58)%和(47.68±0.79)%,各组与对照组相比差异均有统计学意义(P0.05或0.01),80、160μmol/L作用组的Caspase 3,Caspase8,Caspase 9活性升高,且与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05或0.01)。p53及Bax的蛋白水平随药物浓度的增加而升高,Bcl-2的蛋白水平随药物浓度增加而降低。结论槲皮素对黑素瘤A375细胞具有抑制增生和诱导凋亡的作用,其作用机制可能与调节p53及Bcl-2/Bax基因有关。     

抑癌基因DKK3对皮肤恶性黑素瘤细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的 探讨DKK3 在人皮肤恶性黑素瘤细胞及组织中的表达及其对黑素瘤细胞A375增殖与凋亡的影响。方法 通过反转录（RT）？PCR及实时定量PCR分析DKK3 mRNA在人恶性黑素瘤细胞系HM、A375、WM451、WM35、SK？MEL？1、Hs？695T和MDA？MB？435s及38例原发性黑素瘤、4例转移性黑素瘤和20例色素痣组织中的相对表达。分别转染恶性黑素瘤A375细胞pcDNA3.1（＋）？Flag？DKK3 质粒（实验组）和pcDNA3.1（＋）？Flag？Vector 质粒（对照组），RT？PCR 验证 DKK3 的过表达；通过CCK8法和平板克隆实验分析 DKK3 对A375细胞增殖的影响，流式细胞仪分析 DKK3对A375细胞凋亡的影响，Western印迹检测A375细胞周期和凋亡相关蛋白的表达。结果 DKK3 mRNA 在WM35细胞系表达下调，HM、A375、WM451、SK？MEL？1和Hs？695T细胞系表达缺失，MDA？MB？435s细胞高表达。与色素痣相比，DKK3 mRNA在人恶性黑素瘤组织表达降低（P 〈 0.001）。与对照组A375细胞相比 （100%），实验组A375细胞克隆形成效率明显受到抑制（23.22% ± 3.55%）；同时转染后24、48、72 h细胞活性受到明显抑制（均P 〈 0.05）。流式细胞仪检测发现，与对照组A375细胞（G1期，25.38% ± 2.92%）相比，实验组A375细胞明显阻滞于G1期（48.68% ± 3.92%，P 〈 0.001），细胞凋亡率明显升高（P 〈 0.001）。与对照组A375细胞相比，实验组周期凋亡相关蛋白p21、Bax、活化的parp和 活化的Caspase？3表达升高，细胞周期蛋白D1和Bcl2表达降低（均P 〈 0.001）。结论 DKK3在人皮肤恶性黑素瘤组织中表达下调，可能作为潜在的抑癌基因参与皮肤恶性黑素瘤的进展。     

2-甲氧基雌二醇对恶性黑素瘤B16细胞株增殖与凋亡的影响北大核心CSCD

目的 探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对小鼠恶性黑素瘤B16细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其机制.方法 选用小鼠B16细胞进行体外培养,实验分为阴性对照组和药物处理组,药物处理组加入2-ME,使其终浓度分别为5、10、20、40 μmol/L,阴性对照组不加2-ME.作用不同时间后,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;根据磺酰罗丹明B方法测得的各组A490值绘制生长曲线;采用磺酰罗丹明B法检测黑素瘤细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;逆转录PCR和实时PCR法分析凋亡诱导基因（gadd45b）及原癌基因（c-myc）的表达情况.结果 重复测量的方差分析显示,5、10、20、40 μmol/L的2-ME作用于黑素瘤细胞不同时间后对其增殖的抑制作用差异有统计学意义（F=1170.94,P＜ 0.01）;上述浓度的2-ME作用24、48、72 h对黑素瘤细胞增殖的抑制作用差异亦有统计学意义（F=1843.04,P＜ 0.01）;药物浓度和培养时间存在交互作用（F=272.79,P＜ 0.01）.10、20、40μmol/L 2-ME作用48 h后,B16细胞的凋亡率分别上升至（4.13±1.12）％、（11.25±2.38）％、（19.46±2.9）％,与阴性对照组[（0.23±0.5）％]相比,差异均有统计学意义（P＜0.01）;细胞出现G0/G1期阻滞,对照组细胞、10、20、40 μmol/L 2-ME处理组细胞G0/G1期比例分别为（44.1±3.4）％、（59.5±5.6）％、（63.4±8.2）％、（70.8±4.4）％,且随着浓度的增加,G0/G1期细胞明显增加,各处理组及对照组间比较,G0/G1期细胞比例差异有统计学意义（F=13.56,P＜ 0.05）.与阴性对照组相比,20 μmol/L和40 μmol/L 2-ME作用24 h可升高gadd45b的表达（均P＜ 0.01）,10、20、40μmol/L 2-ME均可降低c-myc基因的表达,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 2-ME在体外能够抑制小鼠恶性黑素瘤B16细胞的增殖,能够使c-myc基因的表达降低,使gadd45b基因的表达升高.     

白藜芦醇和全反式维A酸对人黑素瘤细胞株A375 LSD-1表达的影响

目的: 确定白藜芦醇(resveratrol,Res)和全反式维A酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)对人黑素瘤细胞株A375赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶 1(LSD-1)基因表达的影响.方法: MTT比色法检测Res和ATRA对A375细胞增殖的抑制;倒置显微镜观察A375细胞形态的变化;RT-PCR方法检测LSD-1的mRNA的表达.结果: Res和ATRA均能抑制A375细胞的增殖.100 μmol/L Res及25.0 μmol/L ATRA均能显著减少人恶性黑素瘤细胞株A375中LSD-1的mRNA的表达, 与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),但对LSD-1的下调作用无显著差异(P＞0.05).结论: 抑制黑色素瘤细胞LSD-1的表达,可能是Res和ATRA抗肿瘤的途径之一.     

白藜芦醇对黑素瘤细胞周期的影响

目的:研究白藜芦醇对黑素瘤细胞周期的影响并探讨其作用的分子机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测白藜芦醇对人黑素瘤A375细胞株增殖的影响;碘化丙啶(PI)单标流式细胞术测定白藜芦醇对A375细胞周期的影响:免疫印迹法(Western-blot)检测白藜芦醇对A375细胞周期素(cyclin)D1及p21蛋白表达的影响.结果:白藜芦醇对A375细胞具有明显抑制作用,其抑制增殖作用呈量效及时效关系;白藜芦醇处理组A375细胞周期明显发生改变,细胞周期被阻滞于G1期;白藜芦醇明显下调A375细胞周期素D1的表达,同时上调p21蛋白的表达水平.结论:白藜芦醇可通过调控细胞周期进程抑制黑素瘤细胞增殖,其调控细胞周期的机制与调节细胞周期素D1/p21的表达有关.     

西达本胺对恶性黑素瘤细胞系A375的体外抗增殖作用

目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂西达本胺对体外培养的皮肤恶性黑素瘤细胞株A375细胞的抗癌作用。方法 用不同浓度的西达本胺和曲古抑菌素A处理A375细胞,以噻唑蓝法检测西达本胺和曲古抑菌素A对A375细胞体外增殖的影响;Annexin V-EGFP/PI双荧光活染-流式细胞测量法检测细胞凋亡率;DNA倍体分析检测细胞周期。结果 西达本胺和曲古抑菌素A可明显抑制A375细胞增殖,西达本胺在5 ~ 500 μmol/L浓度范围内呈量效关系,其中50 ~ 500 μmol/L浓度范围内在作用0 ~ 120 h时间内呈时效关系。曲古抑菌素A在0.1 ~ 1 μmol/L浓度范围内呈量效关系,其中在0.25 ~ 1 μmol/L浓度范围内作用0 ~ 120 h呈时效关系。西达本胺和曲古抑菌素A作用A375细胞48 h的IC50分别为250和0.7 μmol/L。西达本胺（62.5,125,250 μmol/L）作用48 h后诱导A375细胞的凋亡率分别为80.27% ± 3.06%、79.53% ± 5.70%、83.13% ± 6.90%,曲古抑菌素A（0.175,0.35,0.7 μmol/L）作用48 h后诱导A375细胞的凋亡率分别为16.27% ± 2.46%、28.83% ± 2.55%、83.40% ± 8.65%,显著高于空白对照组（10.43% ± 0.96%）（P < 0.01）。西达本胺（62.5,125,250 μmol/L）作用48 h后诱导A375细胞发生G0/G1期阻滞,G0/G1期细胞比例分别为76.30% ± 6.06%、82.79% ± 0.74%、88.91% ± 5.29%,与空白对照组（38.73% ± 3.36%）比较,差异有统计学意义（P < 0.01）;曲古抑菌素A（0.35,0.7 μmol/L）作用48 h后诱导A375细胞发生G2/M期阻滞,G2/M期细胞比例分别为25.15% ± 2.71%、58.71% ± 3.45%,与空白对照组（15.73% ± 0.23%）比较,差异有统计学意义（P < 0.01）。结论 西达本胺和曲古抑菌素A在体外能诱导A375细胞发生周期阻滞,促使细胞凋亡,抑制细胞生长。     

血管紧张素Ⅱ在A375细胞株的表达及其对血管新生的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）在恶性黑素瘤（恶黑）细胞的表达情况及AngⅡ对A375血管新生的影响。 方法 放免法检测人恶黑细胞株A375及人正常黑素细胞培养上清液中AngⅡ的表达水平,体外小管形成实验检测AngⅡ对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）体外小管形成的影响,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测A375细胞分别在AngⅡ及AngⅡ受体1（AT1R）特异性拮抗剂洛沙坦作用前后血管内皮细胞生长因子（VEGF）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达。结果 A375细胞株培养上清液中AngⅡ表达水平为（37.29 ± 0.27） pmol/L,较正常人黑素细胞（21.58 ± 0.32 pmol/L）明显增高,差异有统计学意义（P < 0.05）。AngⅡ能明显诱导HUVEC管状结构的形成,1 μmol/L AngⅡ处理后,二维基质胶中HUVEC形成完整的管状结构,其面积明显高于对照组,为对照组（2.5 ± 0.3）倍,差异有统计学意义（P < 0.05）。AngⅡ处理后,VEGF及bFGF在A375细胞mRNA及蛋白水平的表达较处理前明显增高,1 μmol/L洛沙坦作用后则正好相反,差异有统计学意义（P < 0.05）。结论 A375细胞株存在着AngⅡ的超表达,AngⅡ能明显促进其血管新生,可能是局部肾素-血管紧张素系统影响恶黑肿瘤发生的机制之一。     

HINT1对人黑素瘤细胞A375增殖和凋亡的影响

目的 探讨HINTl基因对人黑素瘤细胞A375增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 应用构建的peDNA.3.1/mye-His(-)A-HINTl真核表达载体,建立稳定转染且能高表达HINTI的A375细胞模型.用M1rr法检测细胞增殖活性变化,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率,TUNEL法检测细胞凋亡.分光光度法检测Caspase 3,Caspase 8及Caspase 9的相对活性.Western印迹法检测bcl-2、bax、细胞色素C及p53的表达.结果 与空载体-A375及未转染A375细胞相比,HINT1-A375细胞生长速度明显减慢(P<0.05);Gl期细胞增多(73.17%±3.99%,F=25.65,P<0.05),S期细胞减少(16.75%±1.62%.F=75.48,P<0.01),细胞出现明显的晚期凋亡(23.57%±9.58%,F=11.71,P<0.01). TUNEL法显示凋亡阳性细胞百分比(12%±1%)显著增高(F=358.02,P<0.01);Caspase 9(0.45±0.03,F=135.62,P<0.01)和Caspase 3表达(0.46±0.04,F=90.28,P<0.01)升高.凋亡相关蛋白bax、细胞色素C及p53表达增加,bel-2表达降低.结论 高表达H1NT1可抑制A375细胞的增殖,促进其凋亡,细胞周期出现G_1期阻滞,提示HINT1可能是人黑素瘤的抑癌基因.     

白藜芦醇对中波紫外线照射的人角质形成细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:探讨白藜芦醇对中波紫外线（UVB）照射后人原代角质形成细胞（HEK）凋亡和细胞周期的影响。方法:0、25、50、100、150和200 μmol/L白藜芦醇处理人原代角质形成细胞12 h,分别采用CCK-8、BrdU和LDH法检测白藜芦醇对细胞增殖活性和死亡的影响。分别采用50 mJ/cm 2 UVB...     

载芬维A铵脂质体体外对恶性黑素瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的 探讨载芬维A铵脂质体（4-HPR-L）对A375及B16F10黑素瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 采用薄膜-超声分散法制备载4-HPR-L。体外分别培养A375及B16F10黑素瘤细胞,分为3组,空白对照组仅加入细胞和新鲜培养基,4-HPR组和4-HPR-L组分别加入同浓度4-HPR和4-HPR-L。细胞增殖抑制实验（CCK-8法）检测各组细胞增殖情况;Hoechst33258染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡情况;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;通过激光共聚焦显微镜观察4-HPR-L入胞情况。采用SPSS22.0软件进行统计分析,多组间数据比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验。结果 4-HPR与4-HPR-L对A375和B16F10的增殖抑制作用均表现出浓度依赖,0.1、1、15、30、50、70 mg/L 4-HPR和4-HPR-L处理A375和B16F10细胞48 h后,4-HPR组A375细胞存活率分别为（94.3 ± 1.4）%、（91.7 ± 2.5）%、（84.4 ± 2.5%）、（78.8 ± 2.1）%、（59.0 ± 1.1）%、（42.8 ± 2.0）%,4-HPR-L组分别为（86.0 ± 0.2）%、（76.5 ± 0.6）%、（60.9 ± 1.5）%、（49.0 ± 0.5）%、（32.9 ± 0.2）%、（18.9 ± 0.5）%,同浓度两组间比较,t值分别为8.019、8.298、11.455、19.978、33.672、16.314,均P < 0.01;4-HPR组B16F10细胞存活率分别是（95.4 ± 1.9）%、（90.5 ± 2.6）%、（77.0 ± 0.8%）、（64.4 ± 3.5）%、（59.1 ± 2.9）%、（49.9 ± 1.9）%,4-HPR-L组分别是（88.4 ± 2.0）%、（80.9 ± 3.4）%、（60.9 ± 2.2）%、（51.5 ± 2.9）%、（41.1 ± 1.2）%、（33.5 ± 2.4）%,同浓度两组间比较,均P < 0.05。相同浓度下,4-HPR同浓度组A375和B16F10细胞存活率均高于4-HPR-L组。Hoechst33258染色显示,对照组、4-HPR组细胞无明显变化,而4-HPR-L组细胞体积变小,细胞质浓缩,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。流式细胞仪检测显示,4-HPR-L组A375和B16F10细胞凋亡率均显著高于4-HPR组,均P < 0.01。细胞划痕实验显示,4-HPR-L较4-HPR能更好地抑制细胞移行,显著降低划痕的愈合程度。激光共聚焦显微镜观察显示,C6脂质体入胞迅速。结论 4-HPR-L能更好地进入A375细胞、B16F10细胞,且能有效抑制A375、B16F10细胞的增殖和迁移,并诱导其凋亡。     

依维莫司和AR-A014418联合使用促进黑素瘤细胞A375的凋亡

目的 探讨同时抑制mTORC1激酶和GSK-3β激酶活性对黑素瘤细胞4EBP1的磷酸化、帽子依赖翻译、细胞存活和凋亡的影响。 方法 分别采用二甲基亚砜（DMSO组）、5 nmol/L 依维莫司（依维莫司组）、10 μmol/L AR-A014418（AR-A014418组）、5 nmol/L 依维莫司联合10 μmol/L AR-A014418（联合处理组）处理A375细胞,Western印迹法检测4EBP1的磷酸化和生存素蛋白的表达,m7GTP pull-down实验检测eIF4E和eIF4G的相互作用,CCK8法和流式细胞仪分别检测A375细胞的增殖和凋亡。 结果 依维莫司和AR-A014418对4EBP1磷酸化和生存素蛋白表达均有一定的抑制作用,两组p4EBP1-65分别为0.74 ± 0.05和0.62 ± 0.06,生存素蛋白分别为0.71 ± 0.06和0.58 ± 0.07,与DMSO组（分别为1.00 ± 0.07和1.00 ± 0.06）相比,均P < 0.001,且联合处理组对4EBP1磷酸化（0.14 ± 0.04）和生存素蛋白表达（0.09 ± 0.05）的抑制更为显著。m7GTP pull-down实验显示,依维莫司组（0.72 ± 0.04）、AR-A014418组（0.67 ± 0.05）、联合处理组（0.12 ± 0.05）eIF4G相对值均低于DMSO组（1.00 ± 0.06）,而4EBP1相对值均高于DMSO组（分别为1.98 ± 0.16、2.32 ± 0.17、7.58 ± 0.25、1.00 ± 0.08）,且联合处理组eIF4G降低和4EBP1增加最为显著。培养24 h时,与DMSO组相比,依维莫司、AR-A014418、依维莫司联合AR-A014418均对A375细胞增殖有抑制作用（后3组抑制率分别为18.5% ± 1.3%、19.8% ± 1.8%、61.2% ± 2.1%）,且联合处理组的抑制作用最为显著;培养48 h时,依维莫司和AR-A014418对A375细胞增殖的抑制显示相同的趋势,且其抑制作用随时间的延长而增强。流式细胞仪检测显示,依维莫司和AR-A014418单独处理A375细胞24 h对其凋亡有一定的促进作用（凋亡率分别为14.28% ± 2.18%、14.57% ± 2.35%）,联合处理时细胞凋亡更为显著,凋亡率为55.18% ± 6.27%。 结论 联合使用依维莫司和AR-A014418显著抑制A375细胞中4EBP1的磷酸化,进而抑制eIF4F蛋白复合物的形成,从而抑制帽子依赖的翻译,促进黑素瘤细胞的凋亡。     

西罗莫司体外诱导Colo-16细胞凋亡的研究

目的 研究西罗莫司对体外培养的皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16细胞凋亡的影响。方法 用不同浓度的西罗莫司处理Colo-16细胞,以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测西罗莫司对Colo-16细胞体外增殖的影响;AnnexinV-FITC和PI双染检测Colo-16细胞凋亡率;Hoechst33258荧光染色法观察凋亡细胞的形态学变化;半定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）测定Bcl-2、Bax mRNA的表达。结果 不同浓度的西罗莫司对Colo-16细胞体外增殖均具有抑制作用,这种抑制作用与西罗莫司的作用时间和剂量呈明显的依赖关系（P < 0.05）。西罗莫司显著增加Colo-16细胞的早期凋亡,西罗莫司（50,100,150, 200 nmol/L）作用48 h后诱导Colo-16细胞的早期凋亡率分别为7.26% ± 0.26%、8.34% ± 0.19%、9.86% ± 0.14%、11.92% ± 0.15%,与对照组1.53% ± 0.09%比较,差异有统计学意义（P < 0.05）,且Colo-16细胞早期凋亡率与西罗莫司浓度呈剂量依赖关系（r = 0.955,P = 0.000）。荧光染色可见细胞核染色质凝聚、边集、核裂解的形态学改变;Bcl-2 mRNA表达显著下调而Bax mRNA的表达显著增强。结论 西罗莫司在体外能诱导Colo-16细胞凋亡,其发生机制可能与其调节Bcl-2、Bax等凋亡调控基因的表达有关。     

丹皮酚对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨丹皮酚对体外培养人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。 方法 CCK8法检测0.5,1,2,4,8 mmol/L丹皮酚作用24,48 和72 h后A375细胞增殖水平。用0、1.25、2.5和5 mmol/L浓度丹皮酚作用24 h后,以Annexin-Ⅴ/PI法观察A375细胞凋亡的变化、分别测定caspase 3,caspase 8和caspase 9的活性,并以Western印迹检测p53,NF-κB及相关蛋白水平的变化。 结果 与空白对照组比较,0.5,1,2,4,8 mmol/L丹皮酚作用24,48 和72 h后均对A375细胞的增殖有抑制作用,且与时间、浓度呈依赖性。1.25、2.5、5 mmol/L丹皮酚在作用24 h时,A375细胞早期凋亡率由对照组的（3.11 ± 0.53）%分别上升至（13.74 ± 1.73）%、（25.95 ± 0.57）%、（46.44 ± 0.81）%,各组与对照组间差异均有统计学意义（P < 0.05或 < 0.01）。2.5 mmol/L和5 mmol/L作用组的caspase 3,caspase 8,caspase 9活性升高,且与对照组间比较,差异均有统计学意义（P < 0.05或< 0.01）。p53及Bax的蛋白水平随药物浓度的增加而升高,NF-κB、bcl-2、bcl-XL的蛋白水平随药物浓度增加而降低。 结论 丹皮酚对黑素瘤A375细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。可通过细胞内和细胞外两条途径发挥促凋亡作用,其机制可能与调节p53及NF-κB基因有关。