利福平通过促进自噬保护帕金森病模型细胞损伤

目的: 探讨利福平对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)多聚体水平的影响及其与细胞自噬的关系。方法: 用不同浓度鱼藤酮、利福平、自噬抑制剂氯喹和自噬促进剂雷帕霉素处理SH-SY5Y细胞,MTT法检测细胞存活率,筛选最佳实验浓度;蛋白质印迹法检测氯喹和雷帕霉素处理后不同时间点细胞内Beclin-1表达水平,确定最佳作用时间;蛋白质印迹法检测鱼藤酮、氯喹和雷帕霉素处理后Beclin-1和α-syn多聚体的表达;将SH-SY5Y细胞分为对照组、鱼藤酮组、利福平+鱼藤酮组和利福平组,流式细胞术检测4组细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测α-syn多聚体及自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62的表达;在上述分组基础上,蛋白质印迹法检测氯喹和雷帕霉素预处理后各组细胞α-syn多聚体的表达。结果： 利福平浓度为150 μmol/L时细胞存活率最高;氯喹、雷帕霉素调节自噬的最佳处理条件分别为10 μmol/L(1 h)、10 nmol/L(2 h);与对照组相比,鱼藤酮、氯喹均能显著增加细胞内α-syn多聚体表达(P均＜0.01),降低Beclin-1表达(P均＜0.05),雷帕霉素能显著提高Beclin-1表达(P＜0.01);与对照组比较,鱼藤酮组细胞凋亡率明显上升(P＜0.05),p62和α-syn多聚体表达增加,Beclin-1和LC3-Ⅱ/Ⅰ表达明显降低(P均＜0.01);与鱼藤酮组相比,利福平+鱼藤酮组细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),p62和α-syn多聚体表达明显减少,Beclin-1和LC3-Ⅱ/Ⅰ表达明显升高(P均＜0.01);与利福平+鱼藤酮组比较,氯喹预处理后α-syn多聚体表达明显增加(P＜0.01)。 结论： 利福平能减少鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元凋亡,可能通过促进细胞自噬降低α-syn多聚体表达。     

赖氨藤黄酸对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的: 研究赖氨藤黄酸(GAL)对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响并探讨其作用机制,为GAL 抗乳腺癌的临床研究和应用提供理论依据。方法: 选取处于对数生长期的MCF-7细胞,并随机分为空白对照组、不同剂量 (0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00 μmol·L^-1)GAL组和不同剂量(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00μmol·L^-1)藤黄酸组,采用MTT法检测各组MCF-7细胞48 h增殖活性。选取对数生长期的MCF-7细胞,2 μmol·L^-1 GAL作用MCF-7细胞不同时间(0、6、12、24、36、48和60 h),采用MTT法检测作用不同时间后各组MCF-7细胞增殖活性。流式细胞术和Hoechst 33258染色检测各组MCF-7细胞24 h时凋亡情况,采用Western blotting 法检测各组MCF-7细胞24 h时凋亡相关蛋白的表达水平。结果: 细胞培养24 h 后,不同剂量GAL组MCF-7细胞存活率低于空白对照组(P<0.05),随剂量增加和作用时间延长细胞存活率下降(P<0.05)。流式细胞术和Hoechst 33258染色,与空白对照组比较,不同剂量GAL组MCF-7细胞凋亡率明显升高(P<0.05),且呈剂量依赖性。Western blotting检测,与空白对照组比较,不同剂量GAL组细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达水平明显降低 (P<0.05),而caspase-3切割片段蛋白的表达水平明显高于对照组 (P<0.05)。结论: GAL 通过抑制SIRT1蛋白表达水平和上调caspase-3切割片段蛋白的表达水平诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡。     

Evn-50对人乳腺癌MCF-7耐三苯氧胺细胞株生长和凋亡的影响

目的:通过研究黄荆子的乙酸乙酯提取物Evn-50在体外对人乳腺癌MCF-7和耐三苯氧胺细胞株(MCF-7/TAM-R)的生长和凋亡的影响,探索Evn-50在逆转乳腺癌耐药中的作用及其可能机制。方法:构建MCF-7/TAM-R细胞系,分别用DMSO、5μmol/L TAM、5μmol/L TAM+50μg/ml Evn-50和50μg/ml Evn-50处理细胞。然后,采用MTT法测定细胞存活率,PI单染流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期分布情况,免疫蛋白印记法观察Evn-50和TAM单独或联合作用时的机制。结果:Evn-50单药或与TAM联合均可以降低人乳腺癌MCF-7和三苯氧胺耐药细胞株MCF-7/TAM-R的存活率,两药联合作用更为明显,同单用TAM组相比差异有统计学意义(P<0.01)。Evn-50单药或与TAM联合应用对两株细胞的凋亡均有明显影响,且随着作用时间的延长细胞凋亡逐渐增多,其中以72 h时细胞凋亡率和G2期细胞比例最为明显(P<0.01)。TAM和Evn-50联合处理无论是对MCF-7细胞还是对三苯氧胺耐药细胞MCF-7/TAM-R,均能明显下调p-AKT(Ser473)和p-MAPK44/42(Thr202/Tyr204)蛋白水平。结论:Evn-50能够抑制MCF-7和MCF-7/TAM-R细胞株的生长并诱导细胞凋亡,尤其在Evn-50与TAM联合处理时更为明显。其作用机制可能与AKT和MAPK信号通路的下调相关,但需要进一步研究证实。     

KRT81在乳腺癌组织中的表达及其调控AKT/mTOR通路影响糖代谢抑制乳腺癌细胞增殖的作用

目的：探究KRT81在乳腺癌组织中的表达及其调控AKT/mTOR通路影响糖代谢抑制乳腺癌细胞增殖的作用。方法：收集100例乳腺癌病人的病理切片,免疫组织化学检测KRT81在乳腺癌中的表达,分析KRT81表达量与临床病理特征相关性。同时在MCF-7细胞中分别转染过表达质粒、对照质粒、对照敲低质粒、敲低质粒,记作oeKRT81组、NC组、Control组及si-KRT81组。通过集落克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测凋亡细胞,蛋白印迹实验检测AKT/mTOR通路相关蛋白和细胞凋亡相关蛋白的表达。结果：免疫组织化学检测结果显示,KRT81蛋白在癌组织中阳性表达明显低于癌旁正常组织(P<0.01)。KRT81表达水平与Her2、TNM分期、远处转移和组织分级相关(P<0.05～P<0.01)。细胞集落克隆形成实验结果显示,oeKRT81组MCF-7细胞集落克隆数明显低于NC组,siKRT81组MCF-7细胞集落克隆数明显高于Control组(P<0.01)。流式细胞术结果显示,与NC组相比,oeKRT81组MCF-7细胞凋亡率明显增加(P<0.01);与Co...     

异氟醚对Aβ25-35诱导大鼠PC12细胞自噬和凋亡的影响

目的：探讨吸入麻醉药异氟醚对β淀粉样蛋白（Aβ）25-35诱导的大鼠PC12细胞自噬和凋亡的影响,阐明其可能的作用机制。方法：将PC12细胞随机分为正常对照组（C组）、10   μmol•L-1Aβ25-35 处理组（Aβ组）、2%异氟醚处理组（Iso组）和2%异氟醚与10   μmol•L-1Aβ25-35联合处理组（Iso+Aβ组）。各组PC12细胞药物处理6 h后应用透射电镜观察自噬体,Western blotting法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62和自噬信号调控基因p-mTOR、Beclin-1表达;药物处理24 h后应用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞存活率,Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3表达。结果：与C组比较,Aβ组PC12细胞中可见大量的自噬体,LC3-Ⅱ、Beclin-1和caspase-3表达量升高（P<0.05）,p62、p-mTOR和Bcl-2表达量降低（P<0.05）,细胞存活率降低（P<0.05）;Iso组PCI2细胞未见自噬体,LC3-Ⅱ
表达量降低（P<0.05）,p62、p-mTOR和caspase-3表达量升高（P<0.05）,细胞存活率降低（P<0.05）;与Aβ组比较,Iso+Aβ组PC12细胞仅见少量自噬体,LC3-Ⅱ表达量降低（P<0.05）,p62、p-mTOR、Beclin-1和caspase-3表达量升高（P<0.05）,细胞存活率降低（P<0.05）,Bcl-2表达无明显变化（P>0.05）。结论：异氟醚能够抑制Aβ25-35诱导大鼠PC12细胞自噬的活化,促进凋亡蛋白的表达,其作用机制与激活自噬信号调控基因mTOR、抑制Beclin-1的表达有关。     

shRNA SIRT3基因对乳腺癌细胞 MCF-7侵袭能力的影响及机制研究

目的：探讨shRNA SIRT3基因对乳腺癌细胞MCF-7侵袭能力的影响及机制。方法：以人乳腺癌细胞系MCF-7细胞为实验对象。按照处理方法将乳腺癌MCF-7细胞分成3组,即空白对照组(不转染慢病毒的乳腺癌MCF-7细胞组)、阴性对照组(乳腺癌MCF-7细胞转染无序序列慢病毒载体)和shRNA干扰组(乳腺癌MCF-7细胞转染shRNA SIRT3序列慢病毒载体)。采用实时荧光定量PCR和Western blotting等方法检测SIRT3和凋亡相关因子caspase-3、caspase-9的表达水平;采用Transwell试剂盒检测细胞的侵袭能力。结果：shRNA干扰组SIRT3 mRNA相对表达量均明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),caspase-3 mRNA、caspase-9 mRNA相对表达量均明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01)。Western-blotting检测结果显示,shRNA干扰组SIRT3蛋白相对表达量均明显低于阴性对照组和空白对照组,caspase-3、caspase-9蛋白相对表达量均明显高于阴性对照组和空白对照组(P<...     

黄芪解毒汤诱导乳腺癌细胞凋亡及对β-catenin、C-myc基因表达影响的研究

目的 探讨黄芪解毒汤体外干预人乳腺癌细胞MCF-7凋亡及对β-catenin、C-myc基因表达的影响,及该方抑制乳腺癌复发转移的可能机制.方法 培养MCF-7细胞并将其分为黄芪解毒汤组、阿霉素组及空白对照组.以黄芪解毒汤浓缩液、阿霉素液及细胞培养液分别干预各组MCF-7细胞24 h后,以流式细胞仪检测其对MCF-7乳腺癌细胞凋亡的影响,实时荧光定量PCR检测其对β-catenin,C-myc基因表达的影响.结果 与空白对照组比较,黄芪解毒汤组、阿霉素组可明显诱导MCF-7细胞的凋亡(P<0.01);黄芪解毒汤组及阿霉素组β-catenin、C-myc表达量明显低于空白对照组(P<0.01).结论黄芪解毒可诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡,显著降低β-catenin、C-myc基因表达,该结果为黄芪解毒汤在乳腺癌术后治疗中的应用提供实验依据.     

RNPC1基因对乳腺癌细胞MCF-7阿霉素药物敏感性的影响

目的：研究RNPC1对乳腺癌细胞MCF-7阿霉素药物敏感性的影响。方法：在MCF-7细胞中使用慢病毒转染法,设敲除（shRNPC1）组和过表达RNPC1组、敲除对照（SCR）组和过表达对照（NC）组。用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组MCF-7细胞中RNPC1的mRNA和蛋白水平。以不同浓度的阿霉素处理各组MCF-7细胞,CCK-8法检测各组细胞生长抑制率。阿霉素处理各组MCF-7细胞后, 用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中调亡相关蛋白的表达。结果：shRNPC1组RNPC1 mRNA和蛋白相对表达量均低于SCR组,过表达RNPC1组RNPC1 mRNA及蛋白相对表达量均高于NC组（P<0.05）。阿霉素处理各组MCF-7细胞后,shRNPC1组IC50明显于低于SCR组（P<0.05）,过表达组IC50明显高于NC组（P<0.05）。阿霉素处理各组MCF-7细胞24 h后,发现shRNPC1组凋亡率明显高于SCR组;过表达RNPC1组凋亡率显著低于NC组（P<0.05）。阿霉素处理各组MCF-7细胞24 h后,shRNPC1组抑凋亡蛋白BCL-XL、BCL-2的表达低于SCR组,促凋亡蛋白BIM和BID的表达高于SCR组;过表达RNPC1组抑凋亡蛋白BCL-CL、BCL-2的表达高于NC组,促凋亡蛋白BIM和BID的表达低于NC组。结论：RNPC1能降低乳腺癌细胞MCF-7对阿霉素的敏感性,其机制与抗细胞凋亡有关。     

桃红四物汤促进自噬抑制氧糖剥夺诱导的心肌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨桃红四物汤(TST)对氧糖剥夺(OGD)诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护作用。 方法 将H9C2心肌细胞分为5组(n=3)：对照组、OGD模型组、OGD +TST含药血清处理组、OGD +TST含药血清+雷帕霉素处理组、OGD +TST含药血清+氯奎处理组。四唑盐(MTT)比色法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹法(western blot)检测自噬相关蛋白(LC3、p62)和凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)的表达。结果 与对照组相比,OGD模型组细胞活力显著下降(P<0.05),细胞凋亡显著增多(P<0.05),LC3II/LC3I比值和促凋亡蛋白Bax显著增多,p62和抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少。与OGD模型组相比,OGD +TST含药血清处理组的细胞活力显著升高(P<0.05),细胞凋亡明显减少(P<0.05),LC3II/LC3I比值、Bcl-2表达增多,p62和Bax蛋白表达减少。与OGD +TST含药血清处理组相比,OGD +TST含药血清+雷帕霉素处理组的细胞活力进一步升高(P<0.05),细胞凋亡比例进一步减少(P<0.05),LC3II/LC3I比值、Bcl-2表达进一步增多,p62和Bax蛋白表达进一步减少;而氯奎处理桃红四物汤治疗组的细胞活力下降(P<0.05),凋亡细胞比例升高(P<0.05),LC3II/LC3I比值、Bcl-2表达减少,p62和Bax蛋白表达增多。结论 桃红四物汤促进氧糖剥夺H9C2心肌细胞自噬,抑制心肌细胞凋亡,对心肌缺血起保护作用。     

他莫昔芬与辛伐他汀对人乳腺癌细胞MCF-7的协同效应及机制

目的 探究他莫昔芬(TAM) 与辛伐他汀(SIV) 对人乳腺癌细胞株(MCF-7)的增殖抑制作用及其潜在的作用机制.方法 MTT检测TAM、SIV单独以及联合使用对MCF-7细胞株的增殖抑制作用,计算TAM与SIV单独作用时IC50值以及联合使用时对细胞作用的联合指数(CI),评价两药之间的相互作用.荧光显微镜下观察并拍摄各组中的细胞凋亡形态学变化.流式细胞术检测TAM组、SIV组、TAM+SIV组药物处理后的MCF-7细胞凋亡情况.Western blot法检测各组细胞Bcl-2、Bax的表达情况.结果 MTT法表明,TAM与SIV单药对MCF-7有增殖抑制作用,联合作用时抑制更为明显,且呈协同作用;荧光显微镜及流式细胞术显示TAM与SIV单药对MCF-7有诱导凋亡作用,联合时作用增强;Western blot 法表明TAM+SIV组中Bcl-2表达量较细胞对照组及TAM组、SIV组下降而Bax 表达量增加且更加明显.结论 TAM与SIV联合使用时可显著抑制MCF-7细胞株的增殖,同时可明显诱导MCF-7细胞株凋亡,提示两药联合使用时,乳腺癌患者可能有更好的获益.     

3种主要短链脂肪酸减轻5-氟尿嘧啶诱发的THP-1细胞炎症反应

目的:研究3种主要短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)即乙酸钠、丙酸钠和丁酸钠,对5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)诱发人单核巨噬THP-1细胞炎症反应的影响及其可能机制.方法:将THP-1细胞分为5组:对照组,细胞未经任何处理;5-FU组,2.5 mmol/L ...     

饥饿对Beclin-1依赖的Ana-1细胞自噬和凋亡的影响

目的：研究饥饿对Ana-1细胞自噬和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法：体外培养Ana-1细胞,将细胞分为对照组（饥饿0h）和饥饿3、6、9、12、24h组（饥饿组）,观察饥饿对细胞自噬与凋亡的影响;将Ana-1细胞分为空白对照组、饥饿组、3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、3-MA联合饥饿组,孵育24 h,采用Western blotting法检测各组细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及Beclin-1蛋白表达水平和凋亡相关蛋白Caspase-3蛋白水平,采用倒置显微镜观察饥饿6、12和24 h组细胞形态表现。结果：与对照组比较,饥饿6、12和24h组Ana-1细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,饥饿3、6、9、12和24 h组Ana-1细胞中Beclin-1蛋白表达水平均明显升高（P<0.05或P<0.01）,饥饿3、6、9、12和24 h组Ana-1细胞中Caspase-3水平明显降低（P<0.01）,呈时间依赖性;倒置显微镜下观察,与对照组比较,不同时间饥饿组细胞形态发生改变,细胞皱缩、出现碎片,随着时间的延长,细胞变化更加明显。与饥饿组比较,3-MA联合饥饿组Ana-1细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin-1蛋白表达水平及Caspase-3蛋白水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论：饥饿可诱导Beclin-1依赖的Ana-1细胞自噬并引起细胞凋亡。     

自噬对口腔鳞状细胞癌CAL-27和KB细胞放疗敏感性的影响及其机制

目的：利用自噬抑制剂联合放射疗法作用于口腔鳞状细胞癌CAL-27和KB细胞,探讨自噬对口腔癌放射治疗敏感性的影响及其作用机制。方法：选择人口腔鳞状细胞癌CAL-27和KB细胞,分为对照组、氯喹（CQ）组、3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、放射组（IR组）及联合放射组（CQ+IR组和3-MA+IR组）。应用MTT法检测细胞生存率,采用免疫荧光法激光共聚焦显微镜观察CAL-27细胞自噬水平（即LC3Ⅱ免疫荧光强度）,Western blotting法检测自噬相关蛋白LC3和beclin-1表达水平,AnnexinV/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：与IR组比较,联合放射组细胞生存率明显降低（P < 0.05）。IR组细胞自噬水平明显高于对照组、CQ组、3-MA组和联合放射组（P < 0.05）。IR 组LC3和beclin-1蛋白表达水平明显高于对照组和联合放射组（P < 0.05）。与对照组比较,IR组和联合放射组细胞凋亡率明显升高（P < 0.05）;与IR组比较,联合放射组细胞凋亡率也明显升高（P < 0.05）。结论：放射疗法可以诱导口腔鳞状细胞癌细胞自噬水平升高。自噬抑制剂可以通过对口腔鳞状细胞癌细胞的增殖抑制及促凋亡作用,提高其对放射治疗的敏感性。     

左归丸对磷酰胺氮芥体外诱导损伤颗粒细胞自噬与凋亡的影响

目的探讨磷酰胺氮芥(phosphoramide mustard,PM)诱导卵巢颗粒细胞损伤的机制及左归丸含药血清对受损颗粒细胞自噬与凋亡的影响。方法制备左归丸含药血清,体外培养原代大鼠卵巢颗粒细胞,待细胞生长至底壁的75%-80%时随机分为4组:①对照组(Control);②模型组(M);③左归丸含药血清组(10%ZGW);④模型+左归丸含药血清组(M+10%ZGW)、以PM处理②④组24 h建立化疗源性颗粒细胞损伤模型后,①②组中加入10%正常大鼠血清,③④组中加入10%左归丸含药血清,37℃,5%CO2条件下培养24 h。流式细胞术检测各组颗粒细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢自噬启动因子Beclin-1、微管结合蛋白轻链3(LC3B)、自噬受体蛋白P62、凋亡蛋白Bax、Caspase3的表达。结果与对照组相比:模型组细胞凋亡率明显上升,Beclin-1、LC3B、Bax及Caspase3蛋白表达量增高,P62蛋白表达量下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。10%左归丸含药血清可显著降低模型组颗粒细胞凋亡率,下调受损颗粒细胞中Beclin-1、LC3B、Bax及Caspase3蛋白的表达,上调受损颗粒细胞中P62蛋白的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 PM诱导了卵巢颗粒细胞损伤,促进了颗粒细胞凋亡,激活了颗粒细胞自噬/溶酶体降解途径;10%左归丸含药血清可降低化疗损伤性颗粒细胞凋亡率,与自噬相关蛋白的表达相关。     

前列腺素 E1减轻大鼠肺撞击伤后肺泡细胞凋亡?

目的：探讨前列腺素 E1(PGE1)对肺撞击伤后肺泡细胞凋亡的影响。方法雄性 SD大鼠分为正常对照组、伤后对照组和伤后 PGE1处理组。致伤后24 h 检测动脉氧分压、肺系数,TUNEL 染色检测肺泡细胞凋亡的整体情况。以蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测自噬相关蛋白及自噬调节蛋白 NIX 的表达情况。结果伤后24 h 肺组织可见明显结构破坏及肺水肿。与正常对照组相比,伤后对照组动脉氧分压降低(P <0.05),肺泡细胞凋亡指数增加(P <0.05),同时肺组织自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及自噬调节蛋白 NIX 表达增加(P <0.05)。伤后 PGE1处理组动脉氧分压低于正常对照组(P <0.05),但较伤后对照组显著改善(P <0.05);肺泡细胞凋亡指数高于正常对照组,但显著低于伤后对照组(P <0.05);肺组织自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及自噬调节蛋白 NIX 的表达虽然较正常对照组增加(P <0.05),但显著低于伤后对照组(P <0.05)。结论PGE1减轻大鼠肺撞击伤后肺泡细胞凋亡,此作用可能是通过抑制 NIX 介导的细胞自噬,以及肺泡细胞自噬性凋亡实现。     

丹参多糖促进自噬抑制脂多糖诱导心肌细胞凋亡的实验研究

目的探讨丹参多糖(SMP)调控脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞凋亡的作用机制。方法不同浓度(0、0.5、1、2mg/mL)SMP预处理SD大鼠心肌细胞12h后,1μg/mL LPS刺激大鼠心肌细胞24h,以LPS单独处理构建心肌细胞损伤模型,对照组加入等量生理盐水,四唑盐比色法(MTT)观察心肌细胞存活率,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,免疫印迹(Western blot)检测各组心肌细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1及凋亡相关蛋白Bax、Caspase3表达量;SMP联合自噬抑制剂氯喹(CQ)或自噬激活剂雷帕霉素靶蛋白抑制剂(Torin1)处理LPS处理的大鼠心肌细胞24h,MTT观察细胞存活率,流式细胞仪(FACS)检测细胞凋亡率,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1及凋亡相关蛋白Bax、Caspase3表达量。结果与对照组比较,LPS处理24h后,心肌细胞活力显著下降[(43.57±1.07)%比(100.03±2.12)%,P<0.01],凋亡细胞率升高[(30.34±3.13)%比(4.02±0.13)%,P<0.01],凋亡相关蛋白Bax、cleaved-Caspase3表达量增多,自噬相关蛋白Beclin1和LC3II表达量增多。与LPS组比较,1、2mg/mL SMP预处理组心肌细胞存活率显著增加[(69.72±2.15)%、(89.65±3.23)%比(43.57±1.07)%,P<0.05,P<0.01],凋亡率显著降低[(19.18±1.34)%、(12.28±1.05)%比(30.34±3.13)%,P<0.05,P<0.01],凋亡相关蛋白Bax和Cleaved-Caspase3表达量减少,自噬相关蛋白Beclin1和LC3II蛋白表达增加。与SMP处理组比较,CQ抑制细胞活力[(60.01±1.99)%比(79.42±4.23)%,P<0.05],增加细胞凋亡率[(35.63±2.45)%比(20.13±1.65)%,P<0.05],促进Bax、Cleaved-Caspase3和LC3II蛋白表达,抑制Beclin1蛋白表达;Torin1上调细胞活力[(85.63±1.08)%比(79.42±4.23)%,P<0.05],减少细胞凋亡率[(9.78±0.74)%比(20.13±1.65)%,P<0.05],促进LC3-II、Beclin1蛋白表达,抑制Bax、cleaved-Caspase3蛋白表达。结论SMP能促进自噬抑制LPS诱导的心肌细胞凋亡。     

抑制DNA-PKcs对放射治疗后食管鳞癌细胞系EC109自噬蛋白表达和增殖的影响

目的 研究抑制DNA-PKcs对放射照射(X-Ray)后食管鳞癌细胞EC109自噬蛋白表达和增殖的影响.方法 用NU7441抑制DNA-PKcs;放射照射处理食管鳞癌细胞EC109;实验共分为4组(对照组、NU7441组、X-Ray组、X-Ray+ NU7441组).蛋白免疫印迹(Western blot)法检测自噬蛋白Beclin-1及LC3B的表达;流式细胞术检测凋亡;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况.结果 p-DNA-PKcs在NU7441处理食管鳞癌细胞EC109后表达降低,X-Ray照射后表达升高.与未处理细胞(对照组)相比,X-Ray+NU7441组Beclin-1及LC3B均表达升高,与X-Ray组相比,X-Ray+NU7441组Beclin-1表达升高.与对照组相比,X-Ray组及X-Ray+NU7441组凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).与X-Ray组相比,X-Ray+ NU7441组细胞凋亡率明显增加.M T T 结果显示,与对照组相比,X-Ray组及X-Ray+ NU7441组增殖明显被抑制,差异有统计学意义(P<0.05).结论 NU7441抑制EC109细胞DNA-PKcs蛋白表达后,可促进肿瘤细胞自噬蛋白Beclin-1和LC3B表达,促进凋亡、抑制细胞增殖.