Notch信号通路与多发性骨髓瘤发病机制的关系

 Notch信号通路调控机体正常组织器官形态发生、细胞凋亡和增殖等生理过程,是造血微环境调节造血细胞增殖与分化的重要信号通路。多发性骨髓瘤(MM)的发生、发展与骨髓微环境密切相关,有多种信号通路参与。新近研究发现Notch信号通路参与包括MM在内的多种肿瘤的发生发展,且是影响肿瘤侵袭、耐药的关键因素,为多发性骨髓瘤治疗的新靶点。     

抑制Notch和PI3K/Akt信号通路对食管腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的 探讨Notch和PI3K/Akt两条信号通路对人食管腺癌细胞OE33增殖、侵袭及迁移能力的影响及两条信号通路之间的联系。方法 应用Notch信号通路阻滞剂DAPT和PI3K/Akt信号通路阻滞剂LY294002分别单独和联合处理OE33细胞,设置对照组;Western blot和实时定量PCR法检测OE33细胞中NICD、Hes1、p-Akt、PTEN蛋白和mRNA的表达变化;CCK-8法检测细胞的增殖抑制率;划痕实验用于检测细胞迁移能力的变化;Transwell细胞侵袭实验用于检测细胞的侵袭能力变化。结果 Notch1通路阻滞剂DAPT能减低Notch1通路相关蛋白NICD和Hes1的表达,并能提高p-Akt蛋白的表达;PI3K/Akt路阻滞剂LY294002不仅使p-Akt的蛋白表达水平减低,还能降低Hes1的蛋白表达水平,同时使NICD的蛋白和Hes1的mRNA表达水平增高。DAPT和LY294002联合处理组的NICD、Hes1、p-Akt的蛋白表达均较空白对照组和单药处理组降低,同时细胞的增殖、迁移和转移能力亦明显减弱。各处理组中PTEN的蛋白和mRNA表达水平较对照组均有一定程度的升高。结论 Notch和PI3K/Akt两条信号通路在食管腺癌细胞OE33中可能存在串话, 同时抑制这两种信号通路能有效的抑制OE33的增殖、侵袭及迁移。     

Notch1信号通路调控乳腺癌肿瘤细胞放疗敏感性的机制研究

摘　要：［目的］ 探讨抑制Notch1信号通路对乳腺癌肿瘤细胞放疗敏感性的影响及机制。［方法］ Western blot检测人乳腺癌MCF-7细胞中加入5、10、20μmol/L的Notch1信号通路抑制剂γ分泌酶抑制剂(γ-secretase inhibitor,GSI)后Notch1、Hes1蛋白表达;克隆形成实验检测细胞经GSI和照射处理后增殖情况;后续实验分为对照组、GSI组和GSI+8Gy组,48h后CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Ki67、Cleaved caspase3蛋白表达。［结果］ 随着GSI的浓度增高,Notch1和Hes1蛋白表达随之降低(P<0.05),且呈剂量依赖性关系。GSI与照射同时处理细胞较单纯用照射有较高的增敏比。GSI组和GSI+8Gy组细胞吸光值均显著性低于对照组(P<0.05),而GSI+8Gy组吸光值显著性低于GSI组(P<0.05),除对照组,GSI组和GSI+8Gy组随着处理时间的延长均明显降低(P<0.05),呈时间依赖性关系。GSI组和GSI+8Gy组细胞凋亡率均显著性高于对照组,GSI+8Gy组细胞凋亡率显著性高于GSI组(P<0.01)。GSI组和GSI+8Gy组Ki67蛋白表达显著性低于对照组(P<0.05),Cleaved caspase3蛋白表达显著性高于对照组(P<0.05),GSI+8Gy组Ki67蛋白表达显著性低于GSI组,Cleaved caspase3蛋白表达显著性高于GSI组(P<0.05)。［结论］ 抑制Notch1信号通路可增强乳腺癌的放疗敏感性。     

姜黄素调控Notch信号通路对肺癌干细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究姜黄素对肺癌干细胞增殖及凋亡的影响。方法:利用免疫磁珠标记肺癌表面标记物乙醛脱氢酶1(ALDH1),从肺癌A549细胞系中分离肺癌干细胞;MTT实验检测姜黄素对肺癌干细胞增殖的影响;流式细胞仪检测姜黄素对肺癌干细胞凋亡的影响;Western blot检测Notch1和Hes1蛋白的表达情况;抑制剂γ-分泌酶抑制Notch信号通路研究对肺癌干细胞增殖及凋亡的影响。结果:利用免疫磁珠分选法分选出肺癌细胞系A549中ALDH1+肺癌干细胞。MTT检测结果显示,姜黄素能够呈浓度依赖性的抑制肺癌干细胞的增殖;经姜黄素处理后的肺癌干细胞,与对照组相比,凋亡率明显升高,Notch1和Hes1蛋白的表达明显下降。经γ-分泌酶抑制剂处理肺癌干细胞后,实验结果显示,γ-分泌酶抑制剂通过下调Notch1和Hes1蛋白的表达调控Notch信号通路抑制肺癌干细胞的增殖,诱导其凋亡。结论:姜黄素抑制肺癌干细胞的增殖,诱导其凋亡与Notch信号通路有关。     

siRNA沉默STMN1基因抑制肺癌细胞增殖与侵袭的机制探讨

目的:观察下调肺癌细胞中STMN1基因的表达对癌细胞增殖、侵袭及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:以人正常肺细胞MRC-5作为对照,通过Western bloting检测人肺癌A549、SPC-A1和H322细胞中STMN1的蛋白表达;STMN1的siRNA转染A549细胞为实验组,另设空白组和阴性组,转染48 h后,Western bloting检测转染效果;CCK8法及Transwell小室分别检测细胞的增殖及侵袭能力;Western bloting检测增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶（p-AKT）的蛋白表达。结果:STMN1在肺癌A549、SPC-A1和H322细胞中的蛋白表达均显著高于在MRC-5细胞中的表达（P<0.05）,选择A549细胞为研究对象。转染STMN1 siRNA的A549细胞STMN1的蛋白表达显著低于空白组（P<0.05）。与空白组比较,实验组细胞增殖及侵袭能力均显著降低,PCNA、MMP-2、PI3K、p-AKT蛋白表达均显著降低（P<0.05）。结论:siRNA沉默STMN1的表达通过下调PI3K/AKT信号通路降低肺癌细胞增殖及侵袭能力。     

GK-IT1抑制JAK信号通路对胃癌细胞增殖和侵袭迁移的影响

目的 研究长链非编码RNA GK内含子转录本1(GK-IT1)通过Janus激酶(JAK)信号通路对胃癌细胞生物学活性的影响。方法 UALCAN平台分析胃癌组织中GK-IT1的表达。通过实时定量PCR(qPCR)评估GK-IT1在人胃癌细胞中的表达。BSG-823细胞进行GK-IT1干扰片段si-GK-IT转染或si-GK-IT转染与JAK2信号通路激活剂Coumermycin A1两者联合处理,分为阴性对照组、si-GK-IT1组和si-GK-IT1+JAK2组。通过CCK-8、划痕和Transwell实验评估细胞增殖、迁移和侵袭情况。qPCR或Western blot检测B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(CCP3)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)的表达。结果 GK-IT1在胃癌组织中表达上调,且与肿瘤分期和分级有关(P<0.05)。与胃黏膜上皮细胞RGM-1相比,胃癌细胞中GK-IT1表达水平更高(P<0.05)。与阴性对照组相比,si-GK-IT1组细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱;si-GK-IT1+J...     

Notch信号通路介导EMT与肿瘤侵袭转移的研究进展

摘 要：Notch信号通路是一个在进化过程中高度保守的信号通路,它广泛参与细胞的增殖、分化及凋亡过程,在肿瘤的发生发展,侵袭与转移过程中发挥着重要作用。上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT)与恶性肿瘤的局部浸润和远处转移密切相关,研究证明介导EMT在此过程中的细胞内信号途径主要有以下几种,分别是：PI3K/AKT途径、TGF-β信号途径、Wnt信号通路、Hedgehog通路、IL-6/STAT3通路、Notch信号通路等。全文就Notch信号通路介导EMT在肿瘤侵袭转移中的作用及其分子机制的研究进展作一综述。     

Notch信号通路调控肿瘤细胞凋亡机制研究进展

Notch信号通路在许多肿瘤细胞中异常表达,因其高表达相关性,表现为原癌或抑癌基因作用。当肿瘤细胞因外部刺激或细胞内信号影响Notch信号表达后,Notch信号通过与其他细胞信号通路的“串扰”,或直接调控凋亡蛋白,从而促进或抑制肿瘤细胞凋亡。本文综述了Notch信号通路促进和抑制肿瘤细胞凋亡及其作用机制,通过Notch信号通路在各种凋亡途径中的不同作用机制,为Notch信号通路抗肿瘤治疗提供理论支持。     

PRMT7通过调控Notch信号转导通路抑制膀胱癌细胞增殖和迁移

背景与目的：膀胱癌是常见的泌尿系统恶性肿瘤之一,蛋白质精氨酸甲基转移酶7(proteinarginine methyltransferase 7,PRMT7)在消化道肿瘤中的作用已有研究报道,但在膀胱癌中的生物学作用及机制尚未明确,本文旨在探究PRMT7对人膀胱癌细胞增殖和迁移能力的影响及其可能的作用机制。方法：体外培养人膀胱癌细胞系5637、T24、RT112、UM-UC-3和输尿管上皮永生化细胞系SV-HUC-1,采用蛋白质印迹法（Western blot）检测PRMT7的表达情况。采用RNA干扰技术沉默PRMT7基因的表达,设立阴性对照组（si-NC）及实验组（siPRMT7#1、siPRMT7#2）,采用质粒转染法过表达PRMT7基因,设立阴性对照组（p-PCMV3）及实验组（p-PRMT7）。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）及Western blot验证PRMT7的转染效率,采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,...     

PIM1基因通过调控STAT3信号通路蛋白表达对食管癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨原癌基因PIM1通过调控信号转导子与激活子3(STAT3)信号通路对食管癌KYSE150细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响.方法:分别以PIM1 siRNA和siRNA Control转染KYSE150细胞,命名为PIM1-siRNA组和NC组,同时设置空白对照Control组.采用实时荧光定量PCR(qRT-...     

慢病毒介导的Notch1基因沉默抑制软骨肉瘤SW1353细胞的增殖和侵袭

目的:探讨慢病毒介导的Notch1基因沉默对软骨肉瘤SW1353细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制。方法:将SW1353细胞分为对照组（未感染）、空载体组（LV-NC-shRNA慢病毒感染）和沉默组（LV-Notch1-shRNA慢病毒感染），RT-PCR和Western blot检测慢病毒的感染效果，MTT法和克隆形成实验检测各组细胞的增殖活力，Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力，Western blot检测PCNA、MMP-2和p-AKT蛋白的表达。结果:LV-Notch1-shRNA慢病毒感染使SW1353细胞中Notch1 mRNA和Notch1、PCNA、MMP-2、p-AKT蛋白的表达均明显降低（P<0.05），显著抑制了SW1353细胞的增殖和侵袭能力（P<0.05）。结论:Notch1基因沉默可抑制软骨肉瘤SW1353细胞增殖和侵袭，其作用机制可能与下调PCNA、MMP-2和p-AKT蛋白表达有关。     

牛蒡子苷元调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的：探究牛蒡子苷元（ARC）通过调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌（OSCC）HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其机制。方法：使用不同质量浓度的ARC处理人HSC-3细胞,CCK-8法检测ARC对细胞增殖活力的影响,以选择适宜的药物浓度。将HSC-3细胞分为对照组、ARC-L组（10 mg/L ARC）、ARC-M组（20 mg/L ARC）、ARC-H组（40 mg/L ARC）和ARC-H+Jagged1/FC组（40 mg/L ARC+1.2μg/mL Jagged1/FC）。采用EdU法检测细胞增殖能力,划痕愈合实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞的迁移、侵袭能力及细胞周期和细胞凋亡率,WB法检测增殖（c-Myc、cyclin D1）、凋亡（BAX、Bcl-2、survivin）、EMT(E-cadherin、vimentin、Snail)及Notch/Hes-1通路（Notch 1、Hes-1、NICD）相关蛋白的表达水平。结果：与0 mg/L相比,10～80 mg/L的ARC均能显著降低HSC-3细胞增殖活力（均P<0.05）。与...     

PTEN基因通过Akt-mTOR对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨PTEN基因通过Akt-mTOR对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响。方法:人乳腺癌MDA-MB-231细胞随机分为两组:pcDNA3.0组与pcDNA3.0-PTEN组,分别转染pcDNA3.0质粒、pcDNA3.0-PTEN质粒2 μg,转染48 h收集细胞。采用CCK-8法检测细胞存活率,双染法检测细胞凋亡,Western-blot检测细胞蛋白表达。结果:pcDNA3.0-PTEN组的细胞存活率低于pcDNA3.0组,对比差异有统计学意义(P＜0.05)。与pcDNA3.0组对比,pcDNA3.0-PTEN组的细胞凋亡率显著上升,对比差异有统计学意义(P＜0.05)。pcDNA3.0-PTEN组的PTEN蛋白表达量高于pcDNA3.0组,Akt、mTOR蛋白表达量低于pcDNA3.0组,对比差异有统计学意义(P＜0.05)。结论:PTEN基因过表达可通过抑制Akt-mTOR信号通路,提高乳腺癌细胞凋亡指数,降低细胞增殖活性,从而发挥抑癌作用。     

miR-124通过调节Jagged1/Notch信号通路影响肾细胞癌OS-RC-2细胞的恶性生物学行为

目的：探讨miR-124通过调节Jagged1(JAG1)/Notch信号通路对肾细胞癌(RCC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法：收集2018年6月至2021年10月在武汉市第三医院治疗的38例RCC患者的RCC组织和癌旁组织标本,并体外培养RCC细胞(Caki-2、A498、ACHN、786-O、OS-RC-2)和人正常肾细胞(293T),采用免疫组织化学法、qPCR和WB法检测miR-124和JAG1蛋白在RCC组织和细胞中的表达水平。选择miR-124表达与293T细胞差异最大的OS-RC-2细胞进行转染,按转染物不同分为Control组、NC mimic组、miR-124 mimic组、miR-124 mimic+pcDNA组和miR-124 mimic+pc-JAG1组。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-124与JAG1的关系;q PCR法检测miR-124、JAG1 mRNA表达;免疫组化法分析JAG1蛋白表达;WB法检测JAG1、凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3、BAX和Bcl2)和Notch信号通路相关蛋白(NICD、HES1和HES5)的表...