应用特异性抗六钩蚴单克隆抗体免疫荧光试验鉴别细粒棘球绦虫卵

本文报道了用特异性抗细粒棘球绦虫六钩蚴单克隆抗体鉴别细粒棘球绦虫卵和其他几种带绦虫卵的试验结果。试验用的抗细粒棘球绦虫六钩蚴单克隆抗体(EG06.4E5 mab),系以细粒棘球绦虫卵经相继用人工消化液处理和超声提取物免疫BALB/c鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞融合的杂交瘤产生的。分别对细粒棘球绦虫卵和其他几种带绦虫卵进行了间接免疫荧光试验(IFAT)。免疫荧光试验经用蔡氏显微镜观察,显示4E5 mab对细粒棘球绦虫六钩蚴有特异     

绵羊CTLA-4胞外区对细粒棘球蚴EG95抗原的免疫佐剂作用

目的探索绵羊细胞毒性T细胞相关抗原-4(cytotoxic Tlymphocyte-associated antigen4,CTLA-4)胞外区靶向提呈羊细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)EG95抗原的可行性。方法用RT-PCR扩增CTLA-4胞外区编码序列,插入原核表达载体pET-30a获得融合表达载体pET-IgV;根据蛋白质二级结构分析结果 ,用PCR扩增EG95亲水区编码序列,将串联的3拷贝EG95编码序列分别插入表达载体pGEX-6P-1和pET-IgV,诱导重组大肠杆菌表达并纯化重组蛋白;用相同剂量的GST-3EG95、IgV-3EG95包涵体或可溶性蛋白免疫小鼠,比较EG95抗体的应答水平。结果用RT-PCR扩增得绵羊CTLA-4胞外编码区,IPTG诱导的重组大肠杆菌表达预期的约63kDa GST-3EG95和60kDa IgV-3EG95融合蛋白,两者均能被EG95抗血清识别;经两次免疫后,IgV-3EG95免疫组的EG95抗体水平显著高于GST-3EG95免疫组,可溶性蛋白的免疫效果优于包涵体。结论绵羊CTLA-4胞外区可作为分子佐剂促进细粒棘球蚴EG95抗原的抗体应答水平。     

新疆株细粒棘球绦虫不同发育阶段95抗原基因克隆及序列分析

目的研究细粒棘球绦虫95抗原(Eg95)基因在新疆株细粒棘球绦虫不同发育阶段的表达及其基因序列差异。方法根据Eg95基因序列设计引物,用PCR方法分别从新疆株细粒棘球绦虫3个不同发育阶段(原头蚴、六钩蚴和成虫)所构建的cDNA文库中克隆获得Eg95目的基因,将其克隆至pUCm-T载体、测序并进行序列分析。结果从3个不同发育阶段的新疆株细粒棘球绦虫cDNA文库中均克隆出Eg95基因,其基因片段长度为402bp,同源性比对分析(BLAST)结果表明,所克隆的新疆株Eg95基因与GenBank中的Eg95基因序列一致。结论Eg95基因在新疆株细粒棘球绦虫不同发育阶段均有表达,其基因序列无差异。     

青海省达日县棘球蚴病流行病学调查

目的 分析青海省果洛藏族自治州达日县棘球蚴病的流行分布现状,为制定预防控制措施提供科学依据。 方法 于2007年8～9月对达日县6个乡各2～3个自然村的3周岁以上常驻牧民分别用B超、间接红细胞凝集试验（IHA）和间接ELISA法（重组Ag B和Em 18抗原）检查两型棘球蚴病患病和感染情况。并调查当地啮齿类动物、牦牛、绵羊和野犬的感染情况,对采集的棘球绦虫和棘球蚴用PCR-RFLP方法进行虫种鉴定,并确定其基因型。收集牧民的家犬粪便,用双抗体夹心法检测粪抗原阳性率。 结果 共调查牧民1 723人,B超查出棘球蚴病患者236例（占13.7%）,其中囊型和泡型棘球蚴病患病率分别为5.5%（95/1 723）和8.2%（141/1 723）。男、女性棘球蚴病患病率分别为11.6%和16.0%（χ ²=7.0,P＜0.05）。家犬粪抗原阳性率为11.3%（31/275）。剖检9只无主犬,其中5只棘球绦虫感染阳性,对检获的虫体经PCR-RFLP鉴定,1只犬感染细粒棘球绦虫,基因型为G1,4只犬感染多房棘球绦虫。牦牛、绵羊的细粒棘球蚴感染率分别为26.4%（14/53）和5/16,对从牦牛、绵羊检获的细粒棘球蚴经PCR-RFLP鉴定,基因型均为G1。捕获高原鼠兔239只,石渠棘球绦虫感染率为11.3%（27/239）。 结论 达日县存在细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫和石渠棘球绦虫的分布,泡型和囊型棘球蚴病在人群中严重流行,犬是细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫主要传染源。     

细粒棘球绦虫:一种用来评估保护性抗原来源和抗体在免疫应答中作用的中间宿主鼠模型

作者以BALB/cJ小鼠模型,测定细粒棘球绦虫生活史的哪个发育阶段最具有潜在的保护性抗原。上述小鼠分别用不同的非六钩蚴粗抗原免疫(每鼠免疫的抗原总量为50μg蛋白)或相当量的六钩蚴抗原粗提液免疫。抗原均按1:1与不完全佐剂(Span-Tween-Marcal,STM)混合,初次免疫时小     

细粒棘球绦虫水通道蛋白9的多肽特征及免疫定位研究

目的 研制细粒棘球绦虫水通道蛋白9 (EgAQP9)的特异性多肽抗体,并用于检测其在棘球蚴囊壁、生发细胞及原头蚴中的组织分布情况。 方法 根据EgAQP9特异氨基酸序列设计合成B细胞抗原多肽,再用合成的多肽偶联KLH作为免疫原注射免疫新西兰兔以制备多克隆抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测多肽抗体滴度,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定多肽抗体免疫活性,免疫荧光实验分析EgAQP9的亚细胞定位,免疫组化实验分析EgAQP9组织定位。 结果 免疫新西兰兔成功制备出多肽抗体;间接ELISA检测其多肽抗体效价高达1∶256 000;Western blot结果显示多肽抗体能够特异识别细粒棘球绦虫中36 kDa处的条带,与EgAQP9预测的相对分子量大小相符;免疫荧光实验结果显示EgAQP9分布于棘球蚴生发细胞的胞质、胞膜中;免疫组化实验显示该蛋白主要分布在原头蚴表面及棘球蚴囊泡生发层。结论 本研究以制备的EgAQP9兔源多克隆抗体定位了AQP9在棘球蚴生发细胞、原头蚴及棘球蚴囊壁中的分布状况。     

4种免疫原对棘球绦虫继发性感染的预防效果

由于猪带绦虫和细粒棘球绦虫间存在大量的共同抗原〔1～ 3〕,为寻找可能的免疫原制备细粒棘球绦虫疫苗 ,我们将 4种猪带绦虫和细粒棘球绦虫抗原进行了初步免疫预防的动物实验 ,现将结果报告如下1　材料与方法1 1　免疫原制备　Ｅ ｇＣＦ免疫原 :细粒棘球蚴囊液采绵羊肝脏 ,离心     

免疫组化法检测EgM蛋白免疫犬的肠系膜淋巴结抗体靶位点的探索

目的检测EgM蛋白免疫后的犬肠系膜淋巴结和感染细粒棘球绦虫后的犬肠系膜淋巴结上的IgG和特异性IgG抗体。方法用免疫组织化学方法检测仅EgM免疫犬肠系膜淋巴结、EgM蛋白免疫后感染原头蚴的犬肠系膜淋巴结、感染细粒棘球绦虫(原头蚴)的犬肠系膜淋巴结上的IgG。用细粒棘球绦虫虫体分泌表达的重组蛋白EgM制备的高免特异性抗体可引起免疫犬的特异性抗体反应。结果在EgM免疫犬和感染原头蚴的犬的肠系膜淋巴结检测出IgG。结论用EgM蛋白免疫犬后可以在其肠系膜淋巴结产生特异性抗体。     

粪抗原检测法诊断犬细粒棘球绦虫感染的研究 Ⅰ.用细粒棘球绦虫成虫虫体抗原—抗体系统检测粪抗原方法的建立

用细粒棘球绦虫成虫虫体抗原及其免疫家兔血清ＩｇＧ建立了用于检测家犬粪抗原诊断细粒棘球绦虫成虫感染的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ方法。对用离子交换层析、ＳＰＡ亲和层析、抗兔ＩｇＧ抗体亲和层析和细粒棘球绦虫成虫虫体抗原亲和层析等四种方法纯化的抗体进行了比较，以抗原亲和层析法纯化的抗体免疫活性最高，用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测抗原的终点在标本缓冲液中为２．５ｎｇ／ｍｌ，在健康家犬粪便悬液的上清中为５ｎｇ／ｍｌ。检测１１只人工感染细粒棘球绦虫成虫的家犬粪便标本，粪抗原阳性率达１００％。     

粪抗原检测法诊断犬细粒棘球绦虫感染的研究：Ⅰ.用细粒棘球绦虫成虫 …

用细粒棘球绦虫成虫虫体抗原及其免疫家兔血清ＩｇＧ建立了用于检测家犬粪抗原诊断细粒棘球绦虫成虫感染的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ方法。对用离子交换层析，ＳＰＡ亲和层析，抗兔ＩｇＧ抗体亲和层析和细粒棘球线条绦虫成虫虫体抗原亲和层析等四种方法纯化的抗体进行了比较，以抗原亲和层析化纯化的抗体免疫活性最高，用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测抗原的终点在标本缓冲液中为２．５ｎｇ／ｍｌ，在健康家犬粪便悬液的上清中为５ｎｇ／ｍｌ     

肾棘球蚴病8例

棘球蚴病是牧区常见的地方病。人是中间宿主 ,如果误食犬细粒棘球绦虫卵 ,即在十二指肠孵化成六钩蚴 ,穿过肠黏膜潜入门静脉 ,寄生于肝脏。六钩蚴也可穿过门静脉 ,寄生于肺脏。人的棘球蚴病多发于肝、肺 ,仅有极少量的六钩蚴随动脉血流进入全身其他脏器 。新疆伊犁州新华医院1987～2002年 ,共治疗棘球蚴病524例 ,其中肾棘球蚴病8例 ,报告如下。     

原发性脾棘球蚴病1例报道

棘球蚴病由细粒棘球绦虫或多房棘球绦虫引起。人是其中间宿主。当误食虫卵后，六钩蚴经肠壁随血循环侵入组织，主要是肺和肝。孤立的原发性脾棘球蚴病很罕见。继发性的脾棘球蚴病主要是自发的或者手术引起的肝棘球蚴囊的破裂导致原头节向脾播散。这里介绍第一例用超声介导的细针诊断技术诊断的原发性脾棘球蚴病。     

粪抗原检测法诊断犬细粒棘球绦虫感染的研究Ⅱ.粪抗原检测的敏感性、特异性及实验感染犬排出粪抗原的动态观察

用细粒棘球绦虫成虫虫体抗原及其抗体建立的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ滴定成虫抗原的结果Ａ４５０值与抗原含量呈指数曲线关系,高度相关（ｒ＝０．９８）。实验感染家犬粪抗原含量在２．５－８．０μｇ／ｍｌ之间,因此本法在检测粪抗原中具有足够的敏感性。家犬泡状带绦虫的感染引起的交叉反应是影响本法特异性的主要问题。选择最适的抗体包被浓度可消除交叉反应。用细粒棘球蚴原头节感染家犬后,粪抗原呈低滴度阳性,至２１天后迅速升高。实验感染泡状带绦虫的家犬观察５０天粪抗原均在临界水平之下。作者推荐本法可用于家犬细粒棘球绦虫成虫感染的诊断。     

棘球蚴病和囊尾蚴病病人血清的血清交叉反应

用病理学检查证实为细粒棘球蚴病或猪囊尾蚴病病人的血清,按Kagan等的方法进行间接血凝试验(IHA),将血清从1:32到1:4,096作倍比稀释,用作棘球蚴病IHA试验的抗原为绵羊棘球蚴囊液,用于囊尾蚴病IHA试验的抗原为脱脂的人绦虫链体浸液。     

细粒棘球绦虫蚴囊在绵羊的免疫血清内早期发育的体外试验

本文报告了感染细粒棘球蚴的绵羊血清,在体外条件下影响六钩蚴和蚴囊发育的结果。自绵羊颈静脉无菌采血,分别从2只未感染的1岁的隆尼(Romney)母羊、8只在不同时期感染过细粒棘球蚴的隆尼羔羊及7     

一种细粒棘球绦虫抗原基因克隆的表达及诊断价值分析

棘球蚴病(CHD)的诊断主要依靠免疫学方法,但由于使用的抗原为棘球蚴囊液粗抗原,因此交叉反应较多。用重组的细粒棘球绦虫抗原作代替抗原是一项重要的改进。本文作者分离了一种编码细粒棘球绦虫抗原的cDNA序列,并对其潜在的诊断价值进行了分析。     

宿主感染细粒棘球蚴免疫反应的研究进展

棘球绦虫的中绦期寄生于人体和动物 ,可导致棘球蚴病(也称为包虫病 )。由细粒棘球蚴绦虫 (Echinococcus granulosus,E.g.)所致的包虫病称为囊型包虫病 ,它是一种严重危害人畜健康的人兽共患寄生虫病。棘球蚴在宿主体内发育缓慢 ,人往往在感染数月甚至数年后因出现临床症状而被发现。细粒棘球蚴感染激发宿主产生免疫应答的机制较为复杂。细粒棘球蚴抗原成分多且可在特定的生活史阶段 (期 )表达特定的抗原 ,产生不同的特异性免疫应答 [1 ]。机体感染 E.g.后的初期 ,尤其是以前曾有过接触的患者对免疫杀伤作用较为明显 ,而一旦包囊在宿主体内…     

2010年内蒙古通辽市科尔沁区宠物犬细粒棘球绦虫感染现状调查

内蒙古自治区是棘球蚴病的流行区,在城镇对宠物犬的细粒棘球绦虫感染的检测诊断,对人群棘球蚴病的预防、监测和控制效果的评价具有重要意义.2010年,作者应用细粒棘球绦虫成虫虫体抗原-抗体系统建立的双抗体夹心酶联免疫吸附测定(EUSA)方法,对城镇宠物犬进行检测,现将结果报道如下.     

细粒棘球蚴原头节虫体和排泄分泌抗原抗体系统检测犬粪抗原的比较研究

用细 粒棘球蚴原头节虫体及排泄分泌抗原－抗体系统进行交叉酶联免疫吸附试验的实验结果显示;成虫虫体抗原和原头节虫体抗原呈现交叉反应,表明这两个发育阶段的虫体抗原具有主要的共同抗原组分;原头节排泄分泌抗原的免疫抗原是原头节的期特异性抗原,与其相应抗体具有较高的亲合力。检测犬粪标本的结果感染细粒棘球绦虫的犬粪抗原是一种广谱抗原。两种抗原－抗体系统均可成功地用于粪抗原的检测。     

次氯酸钠作为一种棘球绦虫的杀卵剂

作者观察了次氯酸钠在体外对棘球绦虫卵及六钩蚴的作用。从剖杀犬的肠内检获的细粒棘球绦虫节片放少量水压片后取得虫卵,移至1.5ml的反应管内,沉淀后弃去上清液。用市售次氯酸钠(3.75％水溶液)或实