含银异种脱细胞真皮基质的实验研究

目的了解含银异种脱细胞真皮基质(Xeno-ADM)的多项生物学性状,观察其移植效果。方法制备单纯xeno-ADM,再用2 g／L硝酸银浸泡,制成含银xeno-ADM。检测两种xeno-ADM对笔者单位烧伤患者创面常见菌的抑菌效果,并进行组织学观察;测量含银xeno-ADM的Ag+含量。在27只家兔背部制作全层皮肤缺损创面,分为A、B、C组,每组9只。A组移植自体刃厚皮,B组移植单纯xeno-ADM+自体刃厚皮,C组移植含银xeno-ADM+自体刃厚皮。术后2、4、6周取移植部位皮肤标本作形态学观察,并计算创面收缩率;术后2周计算移植皮片(未)成活率,并检测各组家兔淋巴细胞增殖活性。结果(1)含银xeno-ADM对创面常见菌的抑菌效果明显优于单纯xeno-ADM (P<0．05)。两种xeno-ADM中的表皮已完全除去,胶原纤维粗细均匀、排列规则、无明显变性,真皮中无细胞及细胞碎片。含银xeno-ADM的Ag+含量为(2．7±0．7)mg／g。(2)术后6周,A组家兔移植皮片呈暗红色,挛缩明显,易破溃,胶原纤维排列紊乱;B、C组移植皮片颜色接近周围正常皮肤,光滑无瘢痕,质地良好,胶原纤维排列有序,表皮-真皮连接结构和基底细胞桥粒、半桥粒结构以及基底膜重建明显。术后2、4、6周,A组家兔创面收缩率均明显高于B、C组(P<0．05);B、C两组创面收缩率相似(P>0．05)。术后2周,C组皮片完全成活率为91．7％,显著高于A组(77．8％)及B组(80．6％);3组家兔淋巴细胞增殖活性相似(P>0．05)。结论含银xeno-ADM脱除了基质中有免疫原性的细胞成分,保留了组织的基本结构和完整的胶原纤维支架,且具有较好的局部抗菌效果,不失为一种良好的真皮替代物。     

异种脱细胞真皮基质抗原性的实验研究

目的　观察不同方法制备的异种脱细胞真皮基质 (Xeno -ADM )埋植物的抗原性差异。　方法　将猪断层中厚皮片采用胰蛋白酶 +tritonX 10 0等处理 ,制成Xeno -ADM ,分为戊二醛交联的Xeno ADM1组、网状交联的Xeno ADM2 组、未交联的Xeno ADM3 组、动物先用Xeno ADM蛋白致敏后再移植交联的Xeno ADM4组和未交联的异体兔Allo ADM对照组。分别将移植物埋植于 5组共计 2 5只日本白兔的耳部和背部皮下 ,术后 2～ 32周检测兔血清抗ADMs抗体效价 ,并观察移植物大体和组织学变化。　结果　Xeno ADM4埋植物组血清抗Xeno ADM蛋白抗体效价最高 ;排除致敏因素的影响 ,Xeno ADM各组血清抗体滴度依次为 :Xeno ADM3 组 >Xeno ADM2 组 >Xeno ADM1组 (P<0 .0 5～ 0 .0 0 1) ;在Allo ADM组中 ,有 4 0 %的血清样本呈现出抗Allo ADM蛋白抗体阳性。组织学上 ,Xeno ADM移植部位有激烈而持久的炎症反应 ,明显强于Allo ADM异体埋植对照组 ;ADM被降解吸收的程度依次为 :Xeno ADM3 >Xeno ADM2 >Xeno ADM4>Xeno ADM1>Allo ADM (P <0 .0 5～ 0 .0 0 1) ,在交联型ADM组易产生异物巨细胞反应。　结论　Xeno ADM的免疫原性强于Allo ADM ,诱导宿主产生IgG限制的免疫反应 ;大张变性的ADM埋植物能降低抗原 抗体反应 ,减缓炎症免疫反应导致的ADM     

异种或同种异体脱细胞真皮基质移植后免疫细胞分型的研究

目的　比较异种脱细胞真皮基质 (Xeno ADM)与同种异体脱细胞真皮基质 (Allo ADM)移植物免疫学反应的差异。　方法　选用健康小猪和健康自愿者的中厚皮 ,分别制成Xeno ADM和Aoll ADM后 ,与深度烧伤患者的断层超薄自体皮 (UTS)重叠 ,即时覆盖其切痂创面 ,相应设为Xeno组(2 6例 )和Aoll组 (10例 )。于另 8例深度烧伤患者切痂创面上移植单纯断层自体中厚皮 (TTS) ,设为对照组。采用免疫组化方法 ,于移植术后进行组织学观察 ,并检测外周血和移植物内免疫细胞分型情况。　结果　与对照组比较 :(1)移植术后 ,Xeno组和Allo组外周血免疫细胞分型情况无明显改变(P >0 .0 5 )。 (2 )Xeno组移植物局部长期存在炎症 免疫反应 ,其中 80 %以上为CD3+ CD4 + 和CD4 5RO+ 细胞 ,CD8+ 细胞、Vs8C+ 浆细胞、CD5 7+ 的自然杀伤细胞 (NK)相对较少 ;另可见嗜酸性粒细胞和CD6 8+ CD4 + 异物巨细胞反应 ,在发生排异反应前的Xeno ADM中尤为明显 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。Allo组仅在移植早期 (术后 8周以内 )有中度炎症 免疫反应。　结论　人体对脱细胞真皮基质的特异性免疫反应 ,可能是在单核 巨噬细胞参与下、以CD4 + T淋巴细胞介导的细胞免疫为主要表现 ;辅助性T细胞和巨噬细胞构成的异物巨细胞可能在其中起重要作用     

细胞因子对异种脱细胞真皮基质免疫调节作用的临床研究

目的　探讨烧伤患者接受异种 /异体脱细胞真皮基质 (xeno /allo ADM )移植后全身和局部多种细胞因子与移植物近期转归的关系。　方法　在大面积烧伤患者的四肢切痂创面上 ,移植xeno ADM (12例 ,19块 )或allo ADM(15例 ,18块 ) ,其上覆盖自体超薄断层皮片 ,并以 6例单纯移植自体中厚断层皮片 (auto TTS)的烧伤患者为对照。移植物成活后 4～ 8周 ,收集局部组织标本、血清和xeno ADM排斥后的创面渗出液 ,采用免疫组织化学染色与酶联免疫吸附法 (ELISA) ,检测白细胞介素 (IL) 1β、IL 4、IL 6、肿瘤坏死因子α(TNF α)和γ型干扰素 (IFN γ)的含量。　结果　免疫组织化学染色结果显示 ,移植物内IL 1β、IL 4、IL 6、TNF α和IFN γ的阳性细胞密度或着色强度相比较 ,xeno ADM >allo ADM >auto TTS (P <0 .0 5 )。ELISA检测结果显示 ,xeno ADM被排斥后创面渗出液中IL 4、IL 6、TNF α和IFN γ水平明显高于自体血清 ,但其血清IL 4与IFN γ水平分别低于和高于未排斥时。xeno ADM移植后血清中IL 4、IFN γ水平明显高于allo ADM和auto TTS(P <0 .0 5～ 0 .0 1)。　结论　xeno ADM移植后可在局部检测到高水平的IL 1β、IL 4、IL 6、IFN γ ,可能与细胞杀伤和细胞因子介导的免疫放大作用有关。这些细胞因子的动态变     

细胞粘附分子与异种移植排斥反应

排斥反应是导致异种移植失败的主要原因。在异种移植排斥中，移植物血管内皮细胞活化是关键，而细胞粘附分子的表达与内皮细胞的活化以及白细胞趋化均关系密切，更成为异种移植排斥反应中不可获缺的重要环节。本文综述了细胞粘附分子的生物学特点、在异种移植排斥反应中的诱导和表达及其在治疗中的研究进展。     

脱细胞异种真皮基质作为修复材料大有可为

无论平时还是战时 ,总会有因烧伤、创伤或战伤遗留的创面 ,因此创面的修复就成为医疗救治永恒的主题 ,也是医疗领域最古老的课题之一。千百年来国内外医者围绕“如何促进创面愈合”不断做着有益的探索 ,认识到创面的存在对机体的危害 ,理解了创面愈合是一个复杂的细胞生物学过程 ,绝不能期望单靠某一种“灵丹妙药”或某一类高科技产品涵盖各种创面达到快速而理想的修复 ,常常需要根据形成创面的原因、深度、部位、伤后不同时间以及全身情况等多因素综合分析 ,采用不同手段实施创面的修复。伴随科学技术的进步 ,可供创面治疗药物的增多 ,自体…     

异种脱细胞真皮基质的制作和临床应用观察

目的　降低异种 (猪 )真皮组织的抗原性 ,探讨在临床复合移植的可行性。　方法　健康小猪中厚皮 ,半数经戊二醛交联后采用胰蛋白酶和TritonX 10 0等脱细胞处理 ,制成未交联(sADM0 )和交联型 (sADM1)网状脱细胞真皮基质 ,通过动物实验和临床应用 ,观察 2种sADM组织学变化和移植效果。　结果　 (1)兔皮下埋植sADM0 宿主细胞侵入迅速 ,炎症反应和组织降解明显 ,而sADM1炎症反应轻 ,皮片降解和收缩不明显 ;(2 ) 10例烧伤患者Ⅲ度创面和 1例胸部瘢痕切除后 ,以自体薄中厚皮 (ATS)和自体刃厚皮或超薄皮 (UTS)为对照 ,进行sADM UTS复合移植 ,19块复合皮平均成活率为 78.9% ,与ATS组无显著差异。其中sADM0 UTS组早期炎症反应和创面收缩明显 ,外观效果与UTS组相当 ;在sADM1 UTS组 ,早期炎症反应和创面收缩较轻 ,外观平整 ,触软 ,与ATS组移植效果相当 ,但有 3例患者的 6块创面在术后平均 (12 .8± 6 .9)周时 ,出现表皮破溃、sADM1外露和组织学严重的异物巨噬细胞反应。　结论　临床用交联型sADM作复合皮的真皮替代物 ,能减缓早期免疫反应 ,提高UTS移植效果 ,但仍不可避免迟发性异种排异反应。     

细胞粘附分子与异种移植排斥反应

排斥反应是导致异种移植失败的主要原因。在异种移植排斥中,移植物血管内皮细胞活化是关键,而细胞粘附分子的表达与内皮细胞的活化以及白细胞趋化均关系密切,更成为异种移植排斥反应中不可获缺的重要环节。本文综述了细胞粘附分子的生物学特点、在异种移植排斥反应中的诱导和表达及其在治疗中的研究进展。     

异种(猪)脱细胞真皮基质与自体皮复合移植的临床应用

目的：观察基底良好的深度创面用异种（猪）脱细胞真皮基质与自体皮复合移植的临床疗效。方法：2000年1月-2002年2月用异种（猪）真皮基质与自体薄片复合移植（二步法）修复基底良好的深度创面52例。结果：37例（71.1%）植皮完全成活，15例（28.9%）植皮95%以上成活，无一例补植皮。随访3-6个月复合移植皮肤颜色、质地基本接近于正常皮肤，瘢痕增生不明显。结论：异种（猪）真皮基质可推广应用于修复基底良好的深度创面的复合移植。     

异种(猪)脱细胞真皮基质在瘢痕整形中的应用

目的 探讨异种(猪)脱细胞真皮基质在切除瘢痕后做为真皮替代物的临床作用.方法 采用DR脱细胞猪皮和大张自体刃厚皮复合移植(一步法和二步法)覆盖切除瘢痕后的创面.结果 对47例瘢痕患者中的22例进行异种(猪)脱细胞真皮基质移植7 d左右,再植大张自体刃厚皮的二步法复合移植,其中在脂肪层上复合移植成活率(88.3±3.7)%,在深筋膜层上复合移植成活率为(89.7±3.4)%.25例采用异种(猪)脱细胞真皮基质+自体刃厚皮同时复合移植的一步法,在脂肪层上复合移植成活率(92.5±4.1)%,在深筋膜层上复合移植成活率为(93.2±5.2)%.复合移植成活后,创面颜包淡红,表面平坦光滑,柔韧性好.最长随访时间90 d,复合区皮肤近似正常,皮肤结实、光滑、平整,可捏起,仅见移植边缘有少许轻微瘢痕增生,功能好.结论 一步法复合移植比二步法成活率高,且脂肪层上的复合移植皮比深筋膜上的复合移植皮肤弹性较好,也更柔软、丰满,两者在功能上则无区别.异种(猪)脱细胞真皮基质是覆盖瘢痕切除后创面的较理想的真皮替代物.     

无细胞异种真皮基质动物移植实验和临床应用观察

目的为降低异种(猪)真皮组织的抗原性,探讨其临床复合移植的可行性。方法健康小猪中厚皮,半数经戊二醛交联,采用胰蛋白酶和TritonX-100等处理,分别制成未交联(sADM0)和交联型(sADM1)网状脱细胞真皮基质,通过动物实验和临床应用,观察二种sADM移植效果和组织学变化情况。结果(1)兔皮下埋植sADM0早期自体组织细胞侵入迅速,炎症反应重,皮片降解和收缩明显,8周后外观和组织学均难辨别,而sADM1早期组织相容性较差,炎性反应轻,皮片降解和收缩均不明显,至30周时,其外观和组织学结构仍较完整。(2)10例烧伤患者Ⅲ度创面和1例胸部瘢痕切除后,以自体薄中厚皮(TTS)和自体刃厚皮或超薄皮(OTS)为对照,进行sADM+OTS复合移植,19块复合皮平均成活率为78.9%,与TTS组无显著差异。其中sADM0+OTS组早期炎症反应和创面收缩明显,外观效果与OTS组相当;在sADM1+OTS组,早期炎症反应和创面收缩较轻,外观平整,触软,与TTS组相当,但其中有3例患者的6块创面在术后13～20周时,复合皮出现破溃、sADM1外露及组织学异物巨噬细胞等排异反应。结论临床用交联型sADM作复合皮的真皮替代物,...     

脱细胞真皮移植部位血管细胞粘附分子-1的表达

目的 探讨血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)在脱细胞真皮移植部位的动态变化和作用.方法 建立猪试验模型,采用同种/异种脱细胞真皮基质,与猪自体薄皮片复合移植于猪创面,猪自体皮移植组作对照组,分别在移植后3、6、9、12、15、30天时相点取得移植组织标本.流式细胞仪(FCM)检测VCAM-1的表达变化.结果 移植术后3天各组VCAM-1表达无明显差别;对照组6天表达明显高于实验组(p＜0.05);9天～12天异种、异体脱细胞真皮基质组与自体皮移植组对照VCAM-1均高表达,具有显著差异性(p＜0.05～0.01);术后30天各组VCAM-1表达显著低于3天时相点(p＜0.01).结论 同种和异种真皮基质移植部位VCAM-1表达高峰迟滞于自体皮移植;VCAM-1表达可能与脱细胞真皮活化、血管再生有关,值得进一步研究.     

脱细胞真皮基质治疗伴高位盲瘘的复杂性肛瘘疗效观察(附39例报告)

目的探讨高位盲瘘的微创治疗方法,研究脱细胞真皮基质在高位盲瘘治疗中的应用价值。方法 39例高位盲瘘患者,手术分2期进行,经括约肌或括约肌间肛瘘合并高位盲瘘Ⅰ期齿线下瘘管切开、内口挂线并高位盲瘘旷置引流,括约肌上肛瘘切开内口并高位盲瘘旷置引流;Ⅱ期高位盲瘘脱细胞真皮基质填塞治疗。观察Ⅱ期手术时间、术中出血、术后疼痛、住院总天数、住院总费用及复发率等临床及相关指标。结果 39例患者中有26例获得Ⅰ期治愈,13例患者治疗失败,改行肛瘘切开挂线术后痊愈。高位盲瘘脱细胞真皮填塞术手术治愈率66.7%。括约肌上并发高位盲瘘治愈2例,治愈率100%,经括约肌并发高位盲瘘治愈6例,治愈率50%,括约肌间并发高位盲瘘治愈18例,治愈率72%。结论应用脱细胞真皮基质材料治疗高位盲瘘具有损伤小、愈合时间短、肛门失禁率低、外形保留好等优势,值得进一步推广。     

生物补片人工阴道成形术治疗先天性无阴道

目的探讨生物补片人工阴道成形术治疗先天性无阴道的疗效。方法2010年3月～2013年3月,行生物补片人工阴道成形术治疗21例先天性无阴道,于直肠及尿道膀胱间隙人工造穴,百得塞补片置入造穴腔,并指导患者定期更换模具。结果21例手术均获成功,术后8周人工阴道即完全黏膜化,阴道壁柔软、红润,阴道深度〉8cm,宽度〉3横指。随访9～18个月,有性生活患者（14例）性生活满意。结论生物补片人工阴道成形术是治疗先天性无阴道的可行方法。     

一种新的脱细胞阴茎海绵体基质的制备方法

目的探索一种新的脱细胞阴茎海绵体基质的制备方法。方法取健康壮年兔完整阴茎海绵体组织，以Triton-X100与NH3·H2O（氨水）联合提取法进行脱细胞处理。标本作HE染色，组织学观察分析脱细胞效果。结果脱细胞处理25天后，成功获得脱细胞海绵体基质。所得基质外观良好。HE染色观察无细胞存在，弹力纤维排列规整，间隙较大，结构无破坏。结论利用Triton-X100与NH3·H2O联合提取法可成功制备完整无细胞阴茎海绵体基质。     

应用软组织充填材料隆鼻术

目的探寻一种不仅外形美观逼真,手感也可以达到柔软自然效果的隆鼻材料和方法。方法应用膨体聚四氟乙烯和脱细胞真皮基质等软组织补片作为软组织充填材料进行隆鼻手术。结果本组158例患者,术后随访鼻外形均良好,手感自然,无免疫排斥反应、假体外露、假体活动等情况发生。结论膨体聚四氟乙烯（ePTFE）和脱细胞真皮基质（ADM）等软组织补片在隆鼻整形中操作方便,外形美观自然,手感可以以假乱真。手术不仅可以有效地增加鼻背的高度,而且也可以有效地延长鼻子的长度,抬高鼻尖。     

体外构建携带PDGF-BB和IGF-1缓释微粒的脱细胞人工真皮

目的探讨体外构建携带并持续释放血小板源生长因子(PDGF-BB)和胰岛素样生长因子(IGF-1)的脱细胞人工真皮的可行性。方法体外合成含PDGF-BB和IGF-1生长因子的可降解微球,并与脱细胞人工真皮联结,Elisa方法检测人工真皮中生长因子释放情况;通过携带生长因子的人工真皮与真皮成纤维细胞的共培养,采用细胞计数及WST-8比色法,观察成纤维细胞的增殖速率与细胞活力。结果携带生长因子的人工真皮与真皮成纤维细胞共培养组与对照组细胞倍增时间分别为(2.01±0.38)d和(7.27±1.16)d,共培养组细胞倍增时间明显缩短(P<0.05,n=5);体外培养7d、14d、21d时,共培养组及对照组细胞活力无统计学差异(P>0.05,n=5)。结论本实验成功制备了能持续释放PDGF-BB和IGF-1生长因子并加速体外培养的成纤维细胞增殖的人工真皮,为加速创面修复的研究提供实验依据。     

Evaluation of a Xenogeneic Acellular Collagen Matrix as a Small-Diameter Vascular Graft in Dogs-Preliminary Observations

Autogenous veins are the materials of choice for arterial reconstruction. In the absence of autogenous material, prosthetic materials are used. However, vascular prostheses of less than 0.4 cm in diameter have low long-term patency. This study was designed to determine if cells would infiltrate an engineered xenogeneic biomaterial used as a smalldiameter arterial graft in dogs and, if so, to determine the phenotype of the infiltrating cells. Nine acellular xenogeneic grafts (0.4 cm in diameter, 5 cm long), composed of porcine collagen derived from the submucosa of the small intestine and type I bovine collagen, were implanted as end-to-end interposition grafts in femoral arteries of five male mongrel dogs (total of nine grafts). All dogs received daily aspirin (325 mg). Patency of implanted grafts was monitored weekly by Duplex ultrasonography. After 9 weeks, or earlier in case of blood flow reduction by at least 75%, grafts were explanted and prepared for light or electron microscopy to evaluate cellularization. Eight of nine grafts remained patent up to 9 weeks. At explant, diameters were 0.31 &#45 0.02 cm at the midgraft, and 0.14 &#45 0.01 and 0.19 &#45 0.01 cm at the proximal and distal anastomoses. At explant, cells of mesenchymal origin (endothelial cells, smooth muscle cells, myofibroblasts) were embedded in the extracellular matrix of the graft scaffold. Minimal evidence of cellular inflammatory reaction and no aneurysmal dilatation or thrombus formation was detected. Variable degrees of hyperplasia were present at proximal and distal anastomoses. This preliminary study demonstrates that a collagen-based xenogeneic biomaterial provides a scaffold for cellularization when used for arterial reconstruction in dogs.